Embed Size (px)
Citation preview
Vargas Díaz Ersi José
Comprobación de transmisibilidad en un foco de leishmaniasis visceral en el Estado Falcón,
Venezuela
Universidad de Los Andes-Núcleo Universitario Rafael Rangel-Trujillo-Postgrado en Protozoología.
2005. p. 69
Venezuela
Disponible en:
http://bdigital.ula.ve/RediCiencia/busquedas/DocumentoRedi.jsp?file=35388&type=ArchivoDocumento
&view=pdf&docu=28341&col=5
¿Cómo citar?
UNIVERSIDAD DE LOS ANDES
NÚCLEO UNIVERSITARIO "RAFAEL RANGEL"
DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA Y QUÍMICA
CENTRO DE INVESTIGACIONES PARASITOLÓGICAS
"JOSÉ WITREMUNDO TORREALBA"
MAESTRÍA EN PROTOZOOLOGIA
Trujillo -Venezuela
COMPROBACIÓN DE TRANSMISIBILIDAD EN UN FOCO DE LEISHMANIASIS
VISCERAL EN EL ESTADO FALCÓN, VENEZUELA
TRUJILLO, MARZO 2005
1 SERBIULA
~o ~e~res Cordero.
Autor: Ersi J. Vargas Dfaz
DIGITALIZADA http://tesis.ula. vP
UNIVERSIDAD DE LOS ANDES
NÚCLEO UNIVERSITARIO "RAFAEL RANGEL"
DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA Y QUÍMICA
CENTRO DE INVESTIGACIONES PARASITOLÓGICAS
"JOSÉ WITREMUNDO TORREALBA"
POSTGRADO EN PROTOZOOLOGÍA
Trujillo - Venezuela
COMPROBACIÓN DE TRANSMISIBILIDAD EN UN FOCO DE LEISHMANIASIS
VISCERAL EN EL ESTADO FALCÓN, VENEZUELA
Autora: Ersi J. Vargas Dfaz
TUTOR: Prof. José Yancarlos Y épez
ASESOR: Dr. Néstor Añez
TRUJILLO, MARZO 2005
1 ~JE;RTB)TI\DJ&~ 1 Tulio F ebres Cordero
--------
DIGITALIZADA ~-t, ·• )lttp:lltesis.ula.ve Witr&&.$'
Trabajo Especial de grado presentado como requisito parcial para optar al título
de Magíster Scientiae en Protozoología de la ilustre Universidad de Los Andes.
TRUJILLO, MARZO 2005
¡¡
CRÉDITOS
TRABAJO REALIZADO EN LA UNIDAD DE MEDICINA TROPICAL Y
PARASITOLOGIA "JOSÉ VICENTE SCORZA", DEL ÁREA CIENCIAS DE LA
SALUD, DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL EXPERIMENTAL "FRANCISCO DE
MIRANDA", BAJO LA TUTOR(A DEL PROF. J. YANCARLOS YÉPEZ; Y EN EL
GRUPO DE INVESTIGACIONES PARASITOLÓGICAS "JOSÉ FRANCISCO
TORREALBA" FACULTAD DE CIENCIAS, UNIVERSIDAD DE LOS ANDES.
BAJO LA ASESOR(A DEL DR. NÉSTOR ÁÑEZ.
FINANCIADO POR EL CENTRO DE INVESTIGACIONES BIOMÉDICAS,
ADSCRITO AL DECANATO DE INVESTIGACIÓN DE LA UNEFM Y
COFINANCIADO POR EL CEP- ULA.
BANCO DE REFERENCIAS: BIBLIOTECA DE INVESTIGACIÓN Y
POSTGRADO "DR. JOSÉ VICENTE SCORZA" NURR- ULA, BIBLIOTECA DEL
ÁREA CIENCIAS DE LA SALUD- UNEFM, BIBLIOTECA DEL INSTITUTO
NACIONAL DE HIGIENE "RAFAÉL RANGEL", BIBLIOTECA DEL INSTITUTO
DE MEDICINA TROPICAL, BIECIA-ULA, BIBLIOTECA DEL ÁREA CIENCIAS
DELAUNEFM.
¡¡¡
AGRADECIMIENTO
A los habitantes de Los Pozones por su participación en el presente estudio
y por su receptividad.
Al personal de la UNIMETROPA-UNEFM, por su incondicional cooperación
y compañía en el trabajo de campo y de laboratorio, por animarme en los
momentos difíciles.
A todo el personal del grupo de Investigaciones Parasitológicas "José
Francisco Torrealba", por su invalorable apoyo, colaboración y amistad sincera,
sin ustedes hubiese sido imposible la culminación de este trabajo.
Al personal de enfermería, laboratorio y trabajo social del Hospital de Mene
Mauroa, por su valiosa colaboración y asistencia.
Al personal de la Biblioteca de Investigación y Postgrado "Dr. José Vicente
Scorza" NURR- ULA.
iv
COMPROBACION DE TRANSMISIBILIDAD EN UN FOCO DE LEISHMANIASIS
VISCERAL EN EL ESTADO FALCÓN, VENEZUELA
Ersi Vargas Díaz
RESUMEN
El estado Falcón está ubicado en el foco occidental de leishmaniasis visceral (LV)
de Venezuela, donde han sido señalados casos de esta entidad nosológica en
varios municipios desde 1949. En el presente trabajo se decidió realizar un
estudio con el propósito de detectar la transmisión de LV en el caserío rural Los
Pezones, ubicado al occidente del Estado Falcón. La metodología consistió en la
valoración clínica periódica y permanente de las poblaciones humana y canina
residenciadas en la zona, junto con la evaluación serológica seriada por medio de
técnicas que incluyeron el ensayo inmunoenzimático (ELISA), la prueba de
lnmunofluorescencia Indirecta (IFI) y el Test de Aglutinación Directa (TAO),
además de pruebas moleculares realizadas en muestras de suero de los
habitantes del área y de los perros autóctonos que habitaban el peridomicilio. De
la misma manera, fueron introducidos perros centinelas, los cuales fueron
estudiados parasicológica y molecularmente. Para el catastro entomológico fueron
realizadas capturas de flebotominos, utilizando el método de aspiración directa
en refugios naturales, además de colectas en trampa de Shannon usando luz
fluorescente. Asismismo, fueron realizados PCR con "primers" específicos de la
region telomérica de Leishmania donovani en los tractos digestivos de los
flebotominos capturados para detectar infección natural por medios moleculares.
Los resultados permitieron precisar que el 12,7% (14/110) de los habitantes
presentó manifestaciones clínicas sugestivas de LV con una seroprevalencia
general de 22,7% (25/110). Durante el primer muestreo fue evidenciada una sero
positividad inicial de 17,3% (19/110); en el segundo muestreo un 7,3% (3/41) de
seroconversión y en el tercer muestreo serológico un índice de seroconversión de
14,3% (3/21). Las pruebas moleculares confirmaron el diagnóstico de once (11)
nuevos casos de LV en Los Pozones y detectaron que el 14,5% (16/110) de los
individuos muestreados presentaron infecciones sin manifestaciones clínicas
aparentes (SMCA). Con respecto a los perros, se determinó una prevalencia de
50% (12/24) de leishmaniasis canina, un 100% (3/3) de seroconversión y 16,6%
(4/24) de perros con infección sin signos clínicos aparentes (SSCA). El estudio
entomológico permitió la identificación de dos especies antropofílicas en simpatría
Lutzomyia evansi predominando (62,7%) sobre Lutzomyia longipalpis (37,3%),
detectándose por métodos moleculares (PCR) una infección natural del 1,95%
(20/1 020) en pool de Lu. evansi capturadas en refugio natural. Todos estos
hallazgos comprueban la existencia de transmisión activa en este nuevo foco de
LV del Estado Falcón y pone de manifiesto el marcado sub-registro de esta
protozoosis en el territorio venezolano y especialmente en la semi- árido
falconiano.
PALABRAS CLAVES: leishmaniasis visceral, transmisión activa, prevalencia,
seroconversión, infección inaparente, Estado Falcón, Venezuela.
V
CONTENIDO
Portada
Créditos a las 1 nstituciones
Agradecimiento
Resumen
1.- Introducción
2.- Objetivos
3.- Hipótesis
4.- Metodología
iN DICE
4.1.- Ubicación y descripción del área de estudio
4.2.- Estudio de la población humana:
4.2.1 Población y Muestra
4.2.2 Valoración clínica
4.2.3 Despistaje Serológico
4.2.4 Despistaje Molecular
4.3.- Estudio de la población canina:
4.3.1 Encuesta Canina
4.3.2 Despistaje Serológico
4.3.3 Despistaje Parasitológico
4.3.3.1 Punción de Médula ósea
4.3.3.2 Punción de Ganglio Linfático
4.3.3.3 Biopsia Hepática
4.3.3.4 Biopsia Esplénica
4.3.4 Tinción de las Láminas
4.3.5 Despistaje Molecular
4.4.- Estudio de la Flebotomofauna
4.4.1 Tipos de Capturas
4.4.2 Despistaje Molecular
4.5 Análisis Estadístico de los Datos
5.- Resultados
PAG
¡¡
iv
V
1
6
7
7
7
9
9
11
11
12
12
12
13
13
13
14
14
14
14
15
16
16
16
17
18
5.1 Aspectos Demográficos de la Población Humana 18
5.2 Detección de Individuos con Manifestaciones Clínicas 18
5.3 Estimación de la Seroprevalencia, Incidencia y Seroconversión a Leishmania
del complejo donovani 20
5.4 Detección de Infecciones lnaparentes a Leishmania del complejo donovani
por medio de pruebas moleculares
5.5 Aspectos Demográficos de la Población Canina
5.6 Incidencia, Prevalencia, Seroconversión e
Leishmania en perros
5. 7 Estudio Entomológico
5.8 Detección de Infección Natural en los Flebotominos
6.- Discusión
7.- Conclusiones
8.- Referencias Bibliográficas
Infección
23
28
lnaparente de
28
33
33
36
45
46
1. - INTRODUCCIÓN
La leishmaniasis visceral (LV) se encuentra distribuida en 47 países de
cuatro continentes, con 200 millones de personas expuestas al riesgo y un reporte
de 100.000 casos anualmente a nivel mundial. En el Continente Americano esta
protozoosis es endémica en 8 países, donde se estima una incidencia anual de
aproximadamente 16 x 103 casos y una población con riesgo de infectarse en el
orden de 1,5 x 106 personas, siendo los países con mayor prevalencia Brasil,
Colombia y Venezuela (Ashford y col, 1992; WHO, 2000; TDR, 2002).
En Venezuela, el primer caso de leishmaniasis visceral fue señalado por
Martínez & Pons (1941) procedente de Las Mercedes en el Estado Guárico. Este
correspondió a un adulto, de sexo masculino, de 28 años de edad con un
síndrome febril prolongado, anemia y hepato-esplenomegalia, cuyo diagnóstico
inicialmente fue confundido con malaria, pero al realizarle punción esplénica,
hepática y de médula ósea y biopsia de piel se confirmó la presencia de
Leishmania.
En relación con los reservorios, el primer caso de leishmaniasis canina en
Venezuela fue estudiado en 1955 por Medina y col (1960) en un perro de la raza
Doberman, de dos años de edad, nacido y criado en El Sebucán- Estado Miranda,
no obstante realizaba visitas ocasionales a Macuto- Distrito Federal. El perro
presentó signos clínicos evidentes de la enfermedad, comprobándole la infección
por Leishmania post-mortem al observar amastigotos intra y extracelulares en
frotis coloreados con Giemsa, realizados con muestras de nódulos cutáneos,
hígado, bazo y ganglios mesentéricos. Es importante mencionar que Bartola &
Potenza (1950) hicieron referencia de un caso humano en la misma localidad,
además Mirza (1953) encontró varias especies de flebótomos en Los Chorros, una
urbanización cercana a El Sebucán, lugares donde pudo haberse infectado la
mascota.
1
Torrealba (1970), realizó uno de los más importantes estudios sobre esta
endemia en el territorio nacional, evaluando 56 casos casi todos comprobados
parasitológicamente, además de examinar 2.276 perros, comprobando 52 (2,28%)
positivos parasitológicamente. El autor opina que en el medio rural venezolano
existen muchas causas que pueden producir signos clínicos de LV, constituyendo
factores de interferencia en la valoración clínica, siendo necesario el empleo de
métodos inmunológicos y luego los parasitológicos para la confirmación del
diagnóstico. Refiere que hasta la fecha se habían señalado 174 casos, los cuales
estaban ampliamente distribuidos en todo el país, en base a ésto se replanteó la
distribución de esta parasitosis en tres focos endémicos: un foco Central que
incluye el Noreste de Guárico, Cojedes, Aragua y Carabobo; un foco Oriental
ubicado en el Este del Estado Guárico, Norte de Anzoátegui, y Sureste de Sucre; y
un foco Occidental que comprende el Noreste de Portuguesa, Sureste de Lara,
Norte de Trujillo y Este de Zulia; concentrándose más del 50% de la casuística en
el foco Central.
Según los registros oficiales del Ministerio de Sanidad y Asistencia Social
(MSAS), desde 1955 hasta 1991 se han reportado más de 500 casos de LV, los
cuales se concentran en 3 focos principales basándose en la procedencia y la
distribución geográfica de los transmisores (Feciangeli, 1991}, y apoya lo
planteado por Romero (1968) y Torrealba (1970) sobre la existencia de un foco
Central que comprende los Estados Aragua, Carabobo, Guárico, Cojedes y
Yaracuy; un foco Occidental que incluye los Estados Falcón, Lara, Portuguesa,
Trujillo y Zulia, y un foco Oriental donde se encuentran los Estados Nueva
Esparta, Sucre Anzoátegui y Monagas. De igual forma Feciangeli (1991) señala
que existe un sub-registro de la enfermedad, la cual puede ser hasta 3 veces
mayor que la prevalencia oficialmente registrada. Más recientemente, Bofante
Garrido & Barroeta (2002) mencionan que el Ministerio de Salud y Desarrollo
Social (MSDS) hasta esa fecha había registrado un poco más de 800 casos de
esta entidad nosológica ampliamente distribuida por todo el territorio nacional,
siendo los Estados más afectados Anzoátegui, Nueva esparta, Lara, Aragua,
2
Sucre, Trujillo, Guárico, Falcón, Carabobo y Bolívar. Además los autores refieren
que la mayoría de los casos de LV en el Estado Lara se trataban de niños
menores de 8 años de edad y procedentes de varias localidades del Municipio
Urdaneta, al Norte de Lara, el cual limita con los Municipios Unión y Federación
del Estado Falcón.
En lo que se refiere al Estado Falcón, el primer caso fue señalado por
Bemerqui & Soto (1959). El caso fue un paciente masculino de 28 años de edad,
procedente de Pueblo Nuevo de la Sierra, al Sur del Estado, cuyo diagnóstico se
confirmó al observar amastigotes en un frotis de médula ósea, también se le tomó
muestra de bazo por laparotomía que fue cultiva en medio NNN y a los 8 días
crecieron abundantes flagelados de Leishmania; el paciente recibió tratamiento
con antimoniales mostrando inicialmente mejoría clínica, sin embargo falleció
repentinamente. En cuanto a los vectores Pifano & Ortiz (1952) realizaron un
estudio en el Municipio Mene Mauroa del Estado Falcón y reportaron la presencia
de Lutzomyia longipalpis (Lutz & Neiva, 1912) y Lutzomyia evansi (Núñez
Tovar, 1924); ambas especies flebotominas actualmente incriminadas como
transmisores de LV.
Durante aproximadamente cuatro décadas, existió un largo silencio
epidemiológico en lo que respecta al estudio de esta dolencia en el Estado Falcón;
hasta recientemente cuando Yépez y col (1995) diagnosticaron dos nuevos casos
en niños procedentes del caserío Morrocoy en el Municipio Unión, al sureste del
Estado. A partir de entonces se lleva a cabo una serie de estudios sera
epidemiológicos en poblaciones humanas, caninas y flebotominas de la zona.
Haciendo uso de tres pruebas serológicas (TAD, IFI y ELISA), encontraron un
27,7% (10/36) de sero-positividad en las personas muestreadas. En lo que
respecta a la población canina estudiada, se detectó un 38% (5/13) de sero
reactividad para Leishmania infantum. De igual modo se practicaron capturas de
flebotominos por aspiración directa en refugios naturales y en los corrales de
animales a las 7:00 am, mientras que en el peridomicilio se utilizó trampa de
3
Shannon con luz fluorescente, desde las 19:00 hasta las 21:00 y se colocaron
trampas de papel aceitado en sitios estratégicos, logrando identificar las siguientes
especies flebotominas: Lu. evansi, Lu. panamensis, Lu. atroclavata y /u.
venezuelensis (Yépez y col, 1995).
Este mismo año Monzart & Moron (1995) realizaron un trabajo en las
comunidades de Monterrey, Trompilla! y La Carretera del Municipio Unión zona
donde se habían reportado casos humanos de LV; las autoras evaluaron 30 perros
domésticos, detectando 16,6% de seropositividad por la técnica de ELISA,
comprobando la infección en 3,3% de la muestra estudiada por métodos
parasitológicos directos.
Durante el quinquenio 1995-2000 según datos oficiales del Ministerio de
Salud y Desarrollo Social (MSDS), se notificaron 242 casos de LV en 12 estados
del territorio nacional, con una tasa de incidencia nacional de 0,2 casos por
100.000 habitantes al año. De los cuales, en el estado Falcón solo se reportaron 2
(0,8%) casos en el año 1999 y un caso (0,4%) en el 2000, los tres fueron niños
menores de 15 años de edad, para una incidencia en el quinquenio de O, 1 casos
por 100.000 habitantes; lo cual sugeriría el carácter esporádico de la LV en esta
entidad federal (Zerpa y col, 2003; Valcárcel, 2002).
No obstante, Cordero y col (1998) realizaron un arqueo de las historias
clínicas del Hospital Universitario de Coro durante el período 1990-1996, y
encontraron un total de siete (7) casos de LV comprobados parasitológicamente,
distribuidos según su procedencia en cuatro (4) del municipio Unión, dos (2) del
municipio Federación y uno (1) del municipio Sucre, todos ubicados al Sur del
Estado Falcón, cuya prevalencia fue tres casos en el lapso 1990-1995,
notificándose un repunte de cuatro (4) casos en 1996. Además al revisar las
historias clínicas del Hospital "Antonio María Pineda" de Barquisimeto durante el
lapso 1993-1996 hallaron otros dos (2) casos diagnosticados y tratados en ese
centro asistencial, pero procedentes del Municipio Unión- Estado Falcón.
4
Motivados por estos hallazgos, Cordero y col (1998) llevaron a cabo un estudio en
la Parroquia Vegas del Tuy del Municipio Unión, donde evaluaron serológicamente
a 114 individuos encontrando 28,07% (32/114) sera-reactivos a Leishmania.
Además realizaron capturas de flebotominos e identificaron a Lu. evansi entre
otras especies.
Como se puede observar existe un evidente sub-registro en la casuística
oficial del MSDS, lo cual demuestra que la realidad de este grave problema de
salud pública está pasando desapercibido en el Estado.
Posteriormente, Vargas-Díaz y Pernalete (2001) continuaron estos estudios
en dos caseríos limítrofes entre los Estados Falcón- Lara, donde después de
aplicar un censo de las poblaciones humanas y caninas, seleccionaron una
muestra representativa de ambas poblaciones, las cuales fueron evaluadas clínica
y serológicamente con las tres técnicas inmuno-diagnósticas antes mencionadas,
reportando un 21,13% (15/71) de sero-reactividad para L. infantum en los
humanos, siendo los menores de 15 años el grupo etario más afectado, es
importante aclarar que no se evidenciaron signos ni síntomas en la evaluaciones
clínicas realizadas. De igual modo se evaluaron 18 perros (Canis familiaris)
resultando 12/18 (66,6%) positivos por la técnica de formolgelificación, 16/18
(89%) sero- positivos a L. infantum por TAO, IFI y ELISA, no obstante ninguno de
los caninos estudiados presentó signos clínicos de leishmaniasis visceral. Además
se llevaron a cabo capturas de flebotominos, predominando Lu. evansi y Lu.
panamensis, entre otras especies.
Posteriormente, Zerpa y col (2003) en un estudio epidemiológico realizado
en varios estados del territorio nacional, llevaron a cabo un despistaje serológico
en perros domésticos de aquellas localidades donde se han notificado casos
humanos de LV durante el quinquenio 1995-2000; utilizaron la técnica de ELISA
con promastigotes de L. donovani, sepa MHOM/IN/80/008 y el antígeno
5
recombinante rK39, de los 5 perros muestreados en el estado Falcón se detectó
un 20% (1/5) de seropositividad.
Yépez (2003) refiere que desde el año 2001 está estudiando otro caso
pediátrico de la entidad nosológica procedente del caserío La Palma en el
Municipio Buchivacoa al occidente del territorio falconiano. Luego en el 2002 se le
notificó la presencia de un niño 10 años de edad, de sexo masculino, con
síndrome febril prolongado, hepatomegalia, desnutrición leve y anemia,
residenciado en el caserío Los Pozones del Municipio Buchivacoa, cuyo
diagnóstico parasitológico y tratamiento se realizó en el Estado Zulia,
demostrándose la existencia de un marcado sub-registro en la prevalencia de LV
en el Estado Falcón.
Recientemente, Vargas-Díaz y Yépez (2004) hicieron una revisión de la
prevalencia de LV para el estado Falcón desde 1990- 2003, reportando un total de
15 casos, procediendo de los municipios Unión, Federación, Buchivacoa y Sucre;
correspondiendo el 13,3% (2/15) de los casos al municipio Buchivacoa ubicado al
occidente del estado.
Lo antes mencionado, son razones que justifican llevar a cabo un estudio
epidemiológico integral en Los Pozones, con el propósito de determinar la
existencia de transmisión y conocer la prevalencia real de LV en este nuevo foco
endémico del Estado Falcón.
2.- OBJETIVO GENERAL:
Determinar la transmisión de leishmaniasis visceral en el caserío "Los
Pozones" del Estado Falcón.
6
2.1.- OBJETIVOS ESPECÍFICOS:
• Determinar la prevalencia real de LV e infección por Leishmania de
complejo donovani en la población humana y canina residenciada
en el caserío "Los Pezones" del Municipio Buchivacoa- Estado
Falcón.
• Identificar la fauna flebotomina existente en la mencionada
comunidad del Estado Falcón.
• Detectar infección natural en el insecto transmisor.
3.- HIPÓTESIS:
La presencia de factores de riesgo de transmisión de Leishmania en el
área de estudio permite la detección de la infección en ausencia de signos
clínicos.
4.- METODOLOGÍA.
4.1.- UBICACIÓN Y DESCRIPCIÓN DEL ÁREA EN ESTUDIO: El presente
estudio se realizó en el caserío "Los Pezones" ubicado en la parroquia Bariro del
Municipio Buchivacoa, al Oeste del Estado Falcón, con las siguientes coordenadas
geográficas: 10°40'55" Latitud Norte y 70°51'30" Longitud Oeste, y una
localización UTM: 1181241, se encuentra una altura de 354 msnm. Detalles son
mostrados en el gráfico N° 1 .
La zona de vida corresponde a un monte espinoso tropical, con suelo Aridosols
erosionado cubierto con tuna (Opuntia caracasana). La vegetación predominante
son cactáceas columnares del género Opuntia, en asociación con grandes
arbustos como el Yaba (Cercidium praecox), Cují yaque (Prosopis juliflora),
rabo de zorro (Aristida venezuelae) y árboles de los géneros Pithecolobium y
7
GRÁFICO N° 1
MAPA DEL ESTADO FALCÓN
MAR CARIBE
DE
I M •• .t. •• • •• · . -"-' ····· ··--...! XiómEttr;s
13 Los Pozones.
Fu ente: http :1/\fi/VIJW .a-vene7uela . com/mapas/map/htm 1/via les/fa lconv. htm 1
8
Capparis. La temperatura media anual es de 28,5° C, con una humedad relativa
de 71%, precipitación media anual de 311 mm, se caracteriza por un período de
lluvia durante los meses Agosto a Noviembre, mientras que los demás meses del
año permanece en estación seca. La zona tiene un potencial de evapo
transpiración de 1708 mm. (Ewel y col, 1976; FUDECO, 1995; GPS, 2003).
Es importante mencionar que la mayoría (16) de las viviendas del caserío
están ubicadas en el entorno cercano al domicilio del caso índice de LV y con una
distancia de separación entre sí de 1 O metros aproximadamente, mientras que las
siete (7) viviendas restantes se encuentran dispersas aproximadamente a 1 OOmt
de distancia entre sí y con respecto al domicilio del caso (Gráfico N° 2). Estas
viviendas se caracterizan por estar construidas paredes de bahareque, techo de
zinc y piso de tierra, constan de uno o dos ambientes, los cuales fungen de
dormitorios para todo el núcleo familiar, el fogón se ubica al lado de la vivienda, no
cuentan con energía eléctrica ni adecuada disposición de excretas, el agua para el
consumo la obtienen de una fuente natural estancada
4.2 ESTUDIO DE LA POBLACIÓN HUMANA:
4.2.1 POBLACIÓN Y MUESTRA: Partiendo de la notificación del caso
índice de LV procedente de Los Pozones, el cual fue comprobado
parasitológicamente y tratado a mediados del año 2002, se decidió realizar el
presente trabajo. El tamaño de la Población Humana quedó constituido por el
total de habitantes del caserío (140 individuos), lo cual se determinó por medio
de encuestas domiciliarias, utilizando la carpeta familiar como instrumento para
recolectar la información, por medio de las técnicas de entrevista dirigida y
observación estructurada. Mientras que la muestra estudiada, la conformaron
todos aquellos individuos residenciados en el peridomicilio cercano, entorno
lejano que desearon participar en este estudio, previo consentimiento firmado; y
el caso índice previamente tratado (11 O habitantes).
9
GRÁFICO N° 2
UBICACIÓN DE LAS VIVIENDAS RESPECTO AL CASO ÍNDICE DE
LEISHMANIASIS VISCERAL. LOS POZONES- EDO. FALCÓN. VENEZUELA.
2002-2004
~ 3 I§JJJ
mil Peridomicilio Cercano m! Entorno lejano
10
4.2.2 VALORACIÓN CLÍNICA: Previa convocatoria de la población por parte
de los líderes de la comunidad en acuerdo con el equipo de trabajo, se les
explicó a los asistentes las características del presente estudio y a todos los
habitantes de la localidad que aceptaron participar, se les solicitó firmar
consentimiento o el de sus representados. El protocolo seguido indicó la
realización de un examen clínico integral mensualmente hasta el final del
estudio.
4.2.3 DESPISTAJE SEROLÓGICO: A 11 O individuos se les extrajo 5cc de
sangre por venopunción periférica, las cuales fueron colocados en tubos
Vacutainer®, rotulados y trasladados en cava con hielo a la Unidad de Medicina
Tropical y Parasitología "J. V. Scorza" (UNIMETROPA) de la Universidad
Nacional Experimental "Francisco de Miranda"(UNEFM), donde fueron
centrifugadas durante 1 O minutos, separándose los sueros con pipeta Pasteur,
los cuales fueron almacenados en viales plásticos y congelados a -20° C hasta
su traslado a Investigaciones Parasitológicas "J. F. Torrealba" de la Universidad
de Los Andes (ULA) Mérida, donde se realizaron las pruebas inmune
diagnósticas recomendadas por la OMS, (OPS/OMS, 2002, TDR, 2002), las
mismas incluyeron Aglutinación Directa (TAO) tratadas con 2-beta
mercaptoetanol, lnmunofluorescencia Indirecta (IFI) y Ensayo lnmunoenzimático
(ELISA), siguiendo el protocolo de trabajo previamente estandarizado y adaptado
para la detección de anticuerpos anti-Leishmania circulantes en el suero, se
utilizaron los respectivos sueros controles positivo, negativo y blanco. En cuanto
a la preparación de antígenos para estas pruebas serológicas fueron realizadas
con promastigotos de cultivos de Leishmania donovani (MHOM/Et/67/HU3).
Estos procedimientos fueron detallados por Añez (2002); Áñez y col (2003). Se
consideró serorreactivo al individuo con al menos las tres pruebas positivas,
estableciéndose como punto de corte la dilución 1:64 para TAO e IFI, y para
ELISA 1:100 con una densidad óptica (DO) mayor de 0,4 según los criterios
planteados en Áñez (2002); Áñez y col (2003).
11
Esta metodología se repitió cada 6 ± 2 meses a los individuos que
aceptaron permanecer en el estudio durante 20 meses, para un total de tres
muestreos consecutivos, con el propósito de determinar la existencia de
seroconversión en quienes resultaron seronegativos en el muestreo anterior. Se
estableció como criterio diagnóstico de seroconversión la transformación en los
títulos de anticuerpos circulantes anti-Leishmania desde diluciones iniciales
menores de 1 :32 del mismo individuo o en comparación con el control negativo, a
títulos sobre el nivel 1:64 en el caso de TAO e IFI, y cuando la dilución del suero
fue reactiva sobre 1:100 para la prueba ELISA (Áñezycol, 2003).
4.2.4 DESPISTAJE MOLECULAR: Para llevar a cabo el despistaje
molecular se realizó la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) e hibridación a
67 sueros tomados en el primer muestreo, 21 sueros en el segundo muestreo y 22
sueros en el tercero, con los respectivos controles negativo, positivo y agua. Con
la finalidad de detectar Leishmania o parte de su genoma, se utilizaron "primers"
5'-CCCCGTCCTGTTGGAG-3' constituidos por una secuencia telomérica de 62 pb
de Leishmania donovani esperándose obtener un producto o "smear"
aproximadamente desde 1 00 pb hasta muy alto peso molecular, ya que amplifica
una región en bloque que se autoamplifica en los diferentes ciclos. Este PCR tiene
una alta especificidad para Leishmania del complejo donovani, así como una
altísima sensibilidad siendo capaz de obtener una fuerte señal hasta con 1
fentograma de DNA. En lo que respecta a la corrida de electroforesis se utilizó un
gel de agarosa al 1% y se coloreó con bromuro de etidio; los geles fueron
transferidos a membranas de nylon para su posterior hibridación, siguiendo los
procedimientos detallados por Chiurillo y col, 2001.
4.3 ESTUDIO DE LA POBLACIÓN CANINA:
4.3.1 ENCUESTA CANINA: Simultáneamente con la aplicación de las
encuestas domiciliarias humanas, se realizó el censo canino según el modelo de
Torrealba (1970), para determinar el total de perros existentes en la localidad. La
12
muestra canina quedó constituida por aquellos perros cuyos dueños autorizaron
formar parte del estudio, y por dos perros centinelas nacidos y criados en el
bioterio de la UNIMETROPA, previamente examinados clínica, serológica y
molecularmente, para establecer una negatividad a la infección.
4.3.2 DESPISTAJE SEROLÓGICO: A la muestra canina se les tomó 6cc de
sangre periférica por venopunción de la pata trasera y se siguió el mismo
protocolo de traslado hasta la UNIMETROPA y procesamiento serológico para
Leishmania estandarizados en lnvest. Parasit. "J. F. Torrealba" de la ULA. Los
perros autóctonos y centinela que resultaron seronegativos, se les hizo un
seguimiento serológico cada 6 ± 2 meses, por 20 meses, con el propósito de
detectar seroconversión y seroprevalencia según los criterios detallados por Áñez
(2002); Áñez y col, (2003).
4.3.3 DESPISTAJE PARASITOLÓGICO:
4.3.3.1 PUNCIÓN DE MÉDULA ÓSEA (MO): Después de un año de
seguimiento clínico y serológico de un (1) perro centinela y uno (1) perro de la
localidad, fueron llevados al quirófano del Programa de Veterinaria de la UNEFM,
donde bajo anestesia general se les realizó una incisión en sentido céfalo-caudal
de aproximadamente 5cm de longitud sobre piel, celular subcutáneo y planos
musculares hasta acceder al borde tibia! anterior de la pata trasera derecha,
donde se introdujo un trocar N° 14 conectado a una jeringa de 1 Occ, y se procedió
a aspirar una muestra de MO siguiendo la metodología explicada por Sandoval &
Agüera, (1988) y OMS, (1996). De manera simultánea, mientras los cirujanos
veterinarios suturaban la incisión previamente realizada en la pata trasera de cada
perro; se procedió a realizar 5 frotis, los cuales fueron fijados con metano! y solo
uno fue coloreado para su posterior despistaje parasitológico; mientras que los
frotis restantes se guardaron a temperatura ambiente, hasta ser utilizados para el
despistaje molecular.
13
4.3.3.2 PUNCIÓN DE GANGLIO LINFÁTICO: Se localizó el ganglio
poplíteo de cada perro (1 centinela y 1 autóctono) por palpación, y previa asepsia
de la zona con alcohol al 70% se introdujo una aguja calibre 21 montada en una
jeringa de 6cc y se realizó la aspiración del ganglio respectivamente (OMS, 1996).
Con la muestra obtenida se hicieron 5 extendidos fijados con metanol, de los
cuales uno se coloreó para el estudio parasitológico y los demás frotis se
destinaron para pruebas moleculares.
4.3.3.3 BIOPSIA HEPÁTICA: Tanto a un (1) perro centinela como a uno (1)
autóctono de Los Pozones, bajo anestesia general en decúbito lateral izquierdo,
se les realizó una incisión en la línea medio-abdominal, caudal al apéndice
xifoides, en dirección dorso-craneal, hacia la izquierda a cielo abierto hasta
alcanzar el lóbulo hepático izquierdo, entonces se realizo una biopsia de 2 cm2
(Berg, 1978). La muestra obtenida fue destinada para la realización de 5 frotis, La
fijación, coloración, estudio parasitológico y molecular de los frotis, siguió el
protocolo de trabajo anteriormente explicado para médula ósea. En cuanto se
tomó la biopsia se procedió hemostasia mientras se tomaba la muestra del
siguiente órgano.
4.3.3.4 BIOPSIA ESPLÉNICA: Se colocó a cada perro en decúbito lateral
derecho y se prolongó la incisión abdominal por debajo del último espacio
intercostal izquierdo y se procedió a tomar una biopsia esplénica de 1 cm2
aproximadamente de cada perro (Sandoval & Agüera, 1988), y se siguió el
procedimiento antes mencionado para la biopsia hepática, posterior a la
realización de la hemostasia se suturaron los planos quirúrgicamente incididos y
se administró una sobredosis de anestesia por vía endovenosa a cada canino para
su sacrificio.
4.3.4 TINCIÓN DE LAS LÁMINAS: Todos los frotis realizados con
muestras de órgano tanto del perro centinela como de la localidad, se rotularon y
dejaron secar a temperatura ambiente, luego fueron fijadas con Metano! durante 5
14
minutos y solamente una lámina de cada órgano fue coloreada con Giemsa diluido
1:10 con agua de chorro durante 20 minutos. Posteriormente, se lavaron con agua
corriente y se dejaron secar con el ambiente, hasta su posterior observación bajo
el microscopio de luz con objetivo de inmersión (100X). Mientras que los cuatro
frotis restantes de cada órgano se guardaron a temperatura ambiente, hasta su
uso en el despistaje molecular.
4.3.5 DESPISTAJE MOLECULAR: Se realizó la reacción en cadena de la
polimerasa (PCR) con secuencia telomérica e hibridación a un (1) frotis de hígado,
bazo, médula ósea y ganglio de cada perro; además se utilizaron como controles
negativos (1) frotis hecho con los mismos órganos de hámster sanos. Para el
control positivo se preparó una mezcla con frotis de hámster sanos más cultivo de
Leishmania donovani (MHOM/Et/67/HU3), adicionalmente se colocó una
muestra de cultivo y agua. Con un bisturí estéril se procedió a raspar cada uno de
los frotis, el producto de la raspadura se colocó en tubos Eppendorf y fue
resuspendido en 100 f..ll de buffer de lisis. La suspensión se incubó con 2 tJg/ml de
proteinasa K por 15 minutos a 60 °C, luego en baño de María a 95 oc por 15
minutos y se centrifugó por 6 minutos a 14.000 rpm. Se procedió hacer la
extracción con fenal- cloroformo- isoamílico 25:25:1, la muestra se precipitó con 3
volúmenes de etanol 100% por 12 horas, se centrifugó, se descartó el
sobrenadante y el precipitado se lavó con alcohol 70%, se centrifugó nuevamente
y el sobrenadante se disolvió en 50f..ll. Para la realización del PCR se utilizó un
volumen de 5 f..ll de cada muestra, además de buffer 10X 2, 5f..ll, 3f..ll MgCI2 (25
mM), 0,5f..ll dNTPs (10 mM), la enzima y agua bidestilada estéril, el "primer
forward" usado fue 5'-CCCCGTCCTGTTGGAG-3' (20 tJM) constituidos por una
secuencia telomérica de 62 pb, rnientras que el "primer reverso" fue 5'
ACGGTGTACTGGTGTACTGG-3' (20 tJM), seguido por una secuencia de 62 pb y
repeticiones octaméricas y completar la reacción a 25 f..ll con agua destilada
autoclavada. La amplificación se realizó 94°C por un (1) minuto, 63°C por un (1)
minuto y 72°C por un (1) minuto, todos por 35 ciclos y 94°C durante un (1) minuto,
63°C por un (1) minuto y 72°C durante un (1) minuto y 72°C por cinco (5) minutos
15
para la extensión. Los productos fueron detectados mediante corrida
electroforética en gel de agarasa al 1 %; el cual se coloreó con bromuro de etidio.
El DNA se transfirió a una membrana nylon por capilaridad, luego se colocó en luz
ultravioleta, se secó y se guardó hasta la hibridación según Chiurillo y col, (2001;
Áñez (2002).
4.4 ESTUDIO DE LA FLEBOTOMOFAUNA:
4.4.1 TIPOS DE CAPTURAS: En el área de estudio se realizaron un total
de 15 capturas, de las cuales 1 O fueron bimensuales, por medio de aspiración
directa con un capturador de vidrio en refugios naturales, mientras que en el
peridomicilio se efectuaron 5 capturas usando trampa de Shannon con luz
fluorescente, desde las 19:00 hasta las 21 :00; cada 4 meses, cuando lo
permitieron las condiciones climático-ambientales. Los ejemplares capturados
fueron colocados en jaulas cubiertas con poliéster, los cuales fueron rotulados y
trasladados a la UNIMETROPA en cava de anime con alta humedad para su
disección e identificación, a través de las claves taxonómicas de Forattini (1973) y
de Young & Duncan (1994).
4.4.2 DESPISTAJE MOLECULAR: Se disecó el tracto digestivo de 25
hembras de Lutzomyia evansi capturadas en refugio natural. Se hicieron 5
"pools" cada uno contenía 5 tubos digestivos que fueron colocados en viales con
100 !JI de agua bidestilada y autoclavada, los cuales fueron crío- preservados a -
20 oc hasta su uso para PCR, con "primers" de secuencia telomérica, el control
positivo quedó constituido por un pool de 5 tractos digestivos de Lu. ovallesi de
colonia más cultivo de L. donovani (MHOM/Et/67/HU3), el control negativo fue un
pool de 5 tractos digestivos de Lu. ovallesi de colonia de flebotominos del
laboratorio de la Facultad de Ciencias, Departamento de Biología- ULA Mérida.
Todos los pools fueron centrifugados por 6 minutos a 5000 rpm y cada "pellet" se
procesó con 100 !JI de buffer de lisis y 2 !JI de proteinasa K (20 mg/ml) por 15
minutos a 60 °C, luego se colocó en baño de María a 95 oc por 30 minutos. Para
16
la realización del PCR se utilizó un volumen de 5 ~1 de cada muestra y se
centrifugó por 6 minutos a 14.000 rpm. Se procedió hacer la extracción con fenal
cloroformo- isoamílico 25:25:1, la muestra se precipitó con 3 volúmenes de etanol
100% por 12 horas, se centrifugó, se descartó el sobrenadante y el precipitado se
lavó con alcohol 70%, se centrifugó nuevamente y el sobrenadante se disolvió en
50~1. Para la realización del PCR se utilizó un volumen de 5 ¡JI de cada muestra,
además de buffer 10X 2, 5~1, 3~1 MgCb (25 mM), 0,5~1 dNTPs (10 mM), la enzima
y agua bidestilada estéril, el "primer forward" usado fue 5'
CCCCGTCCTGTTGGAG-3' (20 ~M) constituidos por una secuencia telomérica de
62 pb, mientras que el "primer reverso" fue 5'-ACGGTGTACTGGTGTACTGG-3'
(20 ~M), seguido por una secuencia de 62 pb y repeticiones octaméricas y
completar la reacción a 25 ~1 con agua destilada autoclavada. La amplificación se
realizó 94°C por un (1) minuto, 63°C por un (1) minuto y 72°C por un (1) minuto,
todos por 35 ciclos y 94°C durante un (1) minuto, 63°C por un (1) minuto y 72°C
durante un (1) minuto y 72°C por cinco (5) minutos para la extensión. Los
productos fueron detectados mediante corrida electroforética en gel de agarasa al
1 %; el cual se coloreó con bromuro de etidio. El DNA se transfirió a una
membrana nylon por capilaridad, luego se colocó en luz ultravioleta, se secó y se
guardó hasta la hibridación según Chiurillo y col, (2001; Áñez (2002).
4.5 ANÁLISIS ESTADÍSTICO DE LOS DATOS: Los datos fueron analizados
utilizando estadística descriptiva no paramétrica, a través de las medidas de
frecuencias relativas, de tendencia central y de dispersión; para la elaboración de
las tablas y gráficos se usó el programa Microsoft Excel2000.
17
5.- RESULTADOS
5.1 ASPECTOS DEMOGRÁFICOS DE LA POBLACIÓN HUMANA: Después de
realizar el censo domiciliario, se determinó que el caserío "Los Pozones" está
constituido por 140 habitantes, hay un leve predominio del sexo masculino 57,1%
(80) sobre el femenino 42,9% (60), siendo el 75% de la población menor de 30
años, con un rango de edad 1 mes hasta 88 años. Detalles en la tabla N° 1.
La muestra del estudio quedó constituida 110 (78,5%) personas, conformada por
78 residenciados en el peridomicilio cercano al caso y 31 en el entorno lejano y el
caso índice; cuya relación de sexo masculino: femenino fue 1,2:1 (52,7% y 47,3%)
respectivamente. La edad promedio de los individuos muestreados fue 23 años ±
5 DE con un rango 5 meses-88 años de edad. Detalles en la tabla N° 2.
Es importante mencionar que la mayoría de los habitantes refirieron no
haber vivido fuera de la zona, que conocen y son picados frecuentemente por
flebotominos principalmente durante los meses lluviosos. De igual manera,
negaron conocer a los Triatominos, además no se han reportado casos de
infección por Tripanosoma cruzi en el área.
5.2 DETECCIÓN DE INDIVIDUOS CON MANIFESTACIONES CLÍNICAS:
Durante el período Julio 2002 a Marzo 2004, fueron valorados desde el punto de
vista clínico un total de 11 O humanos residenciados en Los Pozones,
encontrándose que el 12,7% (14/110) presentó manifestaciones clínicas tales
como hepatomegalia (3,6%), esplenomegalia (0,9%), desnutrición (0,9%) y
múltiples signos (7,3%}, perteneciendo el 8,2% (8/110) al sexo femenino y 4,5%
(5/110) al masculino. El 93% (13/14) de los individuos con signología eran
menores de 11 años de edad, con una relación de sexo femenino: masculino a
razón de 2:1, mostrando predilección por el sexo femenino en 64,3% (9/14) de los
casos, mientras que solo el 35,7% (5/14) de los varones mostró signos clínicos.
Todos los individuos
18
TABLA N° 1
DISTRIBUCIÓN DE LA POBLACIÓN, SEGÚN EDAD Y SEXO. LOS
POZONES- FALCÓN, VENEZUELA 2002-2004
Censo Grupo Poblacional Etario
Sexo Total (años) M (%) F (%)
0-14 26 (46,4) 30 (53,6) 56
15-29 29 (59,2) 20 (40,8) 49
30-44 16 (66,7) 8 (33,3) 24
45-59 3 (37,5) 5 (62,5) 8
60-74 2 (100) o (O) 2
75-89 o (O) 1 (100) 1
Total 76 (54,3) 64 (45,7) 140
19
examinados habitaban en el peridomicilio cercano al caso; ver los detalles en la
tabla 3.
5.3 ESTIMACIÓN DE LA SEROPREVALENCIA, INCIDENCIA Y
SEROCONVERSIÓN: Los tres despistajes serológicos realizados en Los Pozones
permitieron detectar una seroprevalencia general a Leishmania del complejo
donovani de 22,7% (25/110), se observó una relación mujer: hombre de 1:1,3 de
los cuales 56% (14/25) correspondieron al sexo femenino y 44% (11/25) al sexo
masculino. La edad promedio de los individuos seropositivos fue 23 años, con un
rango de 1 a 59 años; la mayoría (84%) de los individuos seropositivos se
concentraron en los grupos etarios de 1 a 39 años. Detalles en la tabla 4.
En el primer muestreo serológico realizado en 11 O habitantes de la zona en
estudio se detectó una seropositividad inicial a Leishmania donovani de 17,3%
(19/110), correspondiendo 53% (10/19) al sexo femenino y 47% (9/19) al
masculino, cuya edad promedio fue 24 años, con un rango entre 4 y 58 años.
El segundo muestreo que se realizó 6 ± 2 meses después, donde se
reevaluaron serológicamente 40 individuos más el caso; se excluyeron los 19 que
resultaron seropositivos anteriormente, además de 31 residentes lejanos y 19 de
entorno cercano al caso que decidieron retirarse del estudio, se determinó una
incidencia de 3 individuos reactivos, para un 7,3% (3/41) de seroconversión.
20
TABLA N° 2
DISTRIBUCIÓN DE LA POBLACIÓN Y MUESTRA HUMANA, SEGÚN EDAD, SEXO Y DOMICILIO EN LA LOCALIDAD
LOS POZONES- FALCÓN. VENEZUELA.
2002-2004
Grupo Censo Individuos Evaluados Peridomicilio Entorno Lejano Etario Poblacional Cercano
Sexo Sexo (años) No % NO % M F M F
0-14 56 40 39 27,9 15 15 4 5
15-29 49 35 43 30,7 17 16 6 4
30-44 24 17,14 17 12,1 5 5 6 1
45-59 8 5,71 8 5,7 3 2 o 3
60-74 2 1,42 2 1,4 1 o 1 o
75-89 1 0,71 1 0,7 o o o 1
Total(%) 140 100% 110 78,5% 41 38 17 14
(37,27) (34,54) (15,45) (12,72)
21
Edad
(años)
0-9
10-19
20-29
30-39
40-89
Total(%)
TABLA N° 3
VALORACIÓN CLÍNICA DE LOS INDIVIDUOS DE LOS POZONES- FALCÓN, VENEZUELA DURANTE EL
PERÍODO 2002- 2004, SEGÚN EDAD Y SEXO.
Signos Clínicos de los Individuos Estudiados y Residenciados en el Peridomicilio Cercano
Población Hepatomegalia Esplenomegalia Desnutrición Múltiples Sexo Total lndiv.
Estudiada NO % NO % NO % No % M % F % NO %
19 4 21 1 5,3 6 31,6 4 (21) 7 (36,8) 11/19 57,9
36 2 5,6 1 {2,8) 1 {2,8) 2/36 5,6
25 0/25 o
11 9,1 1 {9, 1) 1/11 9,1
19 0/19 o
110 4/110 3,6 1/110 0,9 1/11 o 0,9 8/110 7,3 5 (4,5) 9 {8,2) 14/11 o 12,7
22
Después de 6 ± 2 meses, se llevó a cabo el tercer muestreo serológico, en
el cual se reevaluaron 21 humanos residenciados en el peridomicilio cercano y el
caso, detectándose igualmente una incidencia de 3 personas seroreactivas,
ascendiendo el índice de seroconversión a 14,3% (3/21). Siendo lo más relevante
de tercer muestreo, que el 100% (3/3) de los individuos seroconvertidos son
menores de 19 años de edad, que refieren haber vivido siempre en el domicilio de
caso, ya que son hermanas del mismo y el 66,6% (2/3) presentaron múltiples
signos clínicos de la protozoosis, además de déficit antropométrico en peso y talla.
Ver detalles en la tabla N° 5.
5.4 DETECCIÓN DE INFECCIONES INAPARENTES POR MEDIO DE
PRUEBAS MOLECULARES: La realización de PCR de las muestras de suero
obtenidas de los 11 O humanos que participaron en el estudio, permitió detectar 28
(25,5%) individuos con fuerte señal de amplificación del DNA parasitario. De estos
el 43% (12/28) presentaron hepatomegalia, esplenomegalia, desnutrición o
múltiple signología. El 57% (16/28) de los humanos PCR positivo resultaron clínica
y serológicamente negativos, lo cual revela la existencia de infecciones
asintomáticas, sin respuesta inmunológica, que solo se detectaron por PCR e
Hibridación. Ver detalles en tabla N° 6).
Las pruebas moleculares fueron de gran importancia para confirmar el
diagnóstico de once ( 11) nuevos casos de LV en Los Pozones, así como para
detectar que el 14,5% (16/110) de los individuos muestreados presentaron
infecciones sin manifestaciones clínicas aparentes, detalles en la figura N° 1.
23
TABLA N°4
INDIVIDUOS SEROPOSITIVOS POR EDAD Y SEXO DE LOS POZONES
FALCÓN, VENEZUELA DURANTE EL PERÍODO 2002- 2004.
Edad Población Individuos Seropositivos Total (%)
(años) Estudiada Masculino Femenino
0-9 19 1 4 5/19 (26,3%)
10-19 36 3 5 8/36 (22,2%)
20-29 25 3 2 5/25 (20%)
30-39 11 1 2 3/11 (27,3%)
40-89 19 3 1 4/19 (21 '1%)
Total (%) 110 11 14 25/110 (22,7%)
24
TABLA N° 5
INDIVIDUOS SERO- CONVERTIDOS EN LOS TRES MUESTREOS, SEGÚN EDAD Y SEXO.
LOS POZONES- EDO. FALCÓN, VENEZUELA. 2002-2004.
Primer Muestreo Segundo Muestreo Tercer Muestreo Sexo Sexo Sexo Total
M F M F M F Humanos Estudiados 58 52 24 17 10 11 172
Seropositivos 9 10 2 1 o 3 25
X Edad± DE 23,9 ± 29,4 24 ± 23,3 45 ± 10 5 o 8,3±4 23 ± 39,2
(Rango) (8- 43) (4- 58) (35- 56) (0-9) (4-19) (4-58)
Total 19/110 3/41 3/21 25/172
Seroconversión (17,3%) (7,3%) (14,3%) (14,5%)
25
TABLA N° 6
INTERRELACIÓN DE LAS PRUEBAS DIAGNÓSTICAS REALIZADAS A LOS HUMANOS DE LOS POZONES
EDO. FALCÓN, VENEZUELA. 2002- 2004
Serología
Individuos PCR Positivos Total (%)
Positiva Negativa
Positiva 3 9 12 (42,9) Clínica
Negativa o 16 16 (57,1)
Total(%) 3 (10,7) 25 (89,3) 28 (100)
26
FIGURA N° 1
PCR E HIBRIDACIÓN DE INDIVIDUOS CON INFECCIÓN INAPARENTE A
Leishmania DEL COMPLEJO donovani
N° 3, 1 O, 14, 15 y 20: son sueros de los habitantes de Los Pozones que resultaron clínica y serológicamente
negativos.
27
5.5 ASPECTOS DEMOGRÁFICOS DE LA POBLACIÓN CANINA: Después de
aplicar la encuesta canina según el modelo Torrealba (1970), se determinó que
Los Pozones tiene una población de 38 perros, 18 machos y 20 hembras, con una
edad promedio de 2,8 años. Se trabajó con una muestra de 23 perros autóctonos
y un (1) perro centinela. Los 24 perros estudiados presentaron una edad promedio
de 2,3 años, con un rango entre 6 meses a 4 años. La razón en cuanto a sexo
hembra: macho fue 1 (52% y 48%) respectivamente. Ver detalles en el gráfico 3.
5.6 INCIDENCIA, PREVALENCIA, SEROCONVERSIÓN E INFECCIÓN
INAPARENTE DE Leishmania EN PERROS: En el primer muestreo se evaluaron
23 perros de la localidad y el centinela llevados a la zona de estudio, pero solo se
pudo reevaluar un centinela y 2 de los perros autóctonos que resultaron
seronegativos en el primer muestreo, porque los demás murieron antes de ser
remuestreados. El 78,3% (18/23) de los perros locales presentaron emaciación,
alopecia, visceromegalias, pilo-erección, alteraciones ungueales; de los cuales el
22,2% (4/18) presentaron lesiones cutáneas localizadas en diferentes lugares del
cuerpo, en cuyos frotis se observaron amastigotos de Leishmania sp.,
confirmándose el diagnóstico parasitológico en estos 4 perros.
Por medio de las pruebas serológicas se detectaron 13 perros locales
reactivos en el primer muestreo, determinándose una seroprevalencia de 54,2%
(13/24) y todos ellos presentaron signos de la protozoosis; de los cuales 61,5%
(8/13) son hembras con una edad promedio de 2,5 ± 3,4 y un rango de 4 meses a
3 años, mientras que el 38,5% (5/13) son machos, cuya edad promedio fue 2, 7 ±
2,3 años con un rango entre 1 y 5 años.
Cuando se realizó el segundo muestreo se reevaluaron 2 perros de la
localidad, los cuales se seroconvirtieron y presentaron signos clínicos, resultando
uno de ellos positivo en las pruebas parasitológica y molecular.
28
Además el perro centinela se seroconvirtió, detectándose una incidencia de
3 perros seropositivos en el segundo muestreo y 100% (3/3) de seroconversión.
En el tercer muestreo se reevaluó al centinela evidenciándose el aumento de los
títulos de anticuerpo y se le confirmó la protozoosis por clínica, parasitología y
PCR.
A los 24 sueros caninos se les realizó el ensayo de PCR de secuencia
telomérica e hibridación, se encontró que 16,7% (4/24) mostraron una señal fuerte
de amplificación del DNA de Leishmania donovani; de los cuales 80% (3/4)
además presentaron clínica, parasitológica y serológicamente positivos, es
importante mencionar que un perro (20%) presentó infección inaparente detectada
solo con las pruebas moleculares. De esta manera, se determinó una prevalencia
de 50% (12/24) de leishmaniasis canina, un 100% (3/3) de seroconversión y
16,6% (4/24) de perros con infección inaparente.
En cuanto a los frotis de diversos órganos se evidenció que la médula ósea,
bazo y ganglio del centinela resultaron positivos por PCR, hibridación y
parasitológicamente; igual ocurrió con los frotis de hígado y médula ósea del perro
autóctono. Ver detalles en tabla N° 7 y 8.
29
GRÁFICO N° 3
POBLACIÓN Y MUESTRA CANINA. LOS POZONES- FALCÓN. VENEZUELA.
2002-2004
Los Pozones
1 o Población Canina O Perros Estudiados 1
30
TABLA N° 7
DISTRIBUCIÓN DE LOS PERROS ESTUDIADOS SEGÚN LAS PRUEBAS DIAGNÓSTICAS, EDAD Y SEXO.
LOS POZONES- FALCÓN, VENEZUELA. 2002- 2004
Primer Muestreo Segundo Muestreo Tercer Muestreo Sexo Sexo Sexo
M F M F M F Perros Estudiados 13 11 2 1 o 1
Seropositivos 5 8 2 1 o 1
Clínica Positiva 12 6 2 o o 1
Parasitología(+) 4 o 1 o o 1
PCR (+) 1 1 1 o o 1
Edad (X± O E) (2,7 ±2,3) (2,5 ± 3,4) (4 ± 0,5) (0,5) o (1 ,5)
Rango (Seropositivos) 1-5 0-3 3-4 0-1 1-2
31
TABLA N° 8
EVIDENCIAS DE INFECCIÓN POR Leishmania EN PERROS AUTÓCTONO Y CENTINELA. LOS POZONES
FALCÓN, VENEZUELA.
2002-2004.
Pruebas Realizadas N° PositivosiT otal (%)
Serológicas 1er Muestreo 1/2 (50%)
Serológicas 2do Muestreo 2/2 (1 00%)
Serológicas 3er Muestreo 1/1 (100%)
PCR, Hibridación y Frotis coloreados con Giemsa:
Médula Osea 2/2 (100%)
Bazo
Hígado
Ganglio linfático
1/2 (50%) centinela
1/2 (50%) autóctono
1/2 (50%) centinela
Signología Clínica Positiva:
Primer muestreo 1/2 (50%)
Segundo muestreo
Tercer muestreo
1/2 (50%)
2/2 (100%)
32
5. 7 ESTUDIO ENTOMOLÓGICO: Durante 20 meses de estudio en Los
Pozones se colectaron un total de 1626 flebótomos, de los cuales, 947 (58,2%)
ejemplares se capturaron en refugios naturales y 679 (41,8%) con Trampa de
Shannon, identificándose a dos especies antropofílicas y en simpatría, Lutzomyia
evansi como especie predominante (62,7%) sobre Lutzomyia longipalpis
(37,3%), con una relación hembra: macho de 1,7: 0,6 es decir, 63% (1023/1626)
hembras flebotominas por ambos métodos de capturas y 37% (60311626) machos.
En cuanto a las capturas realizadas en refugio natural, se identificaron 608
ejemplares de Lutzomyia evansi con una razón hembra: macho de 1,8: 0,6
(64,3% hembras: 35,7% machos) y 339 de Lutzomyia longipalpis con similar
relación de sexo femenino: masculino de 1,6: 0,6 (61 ,4% hembras y 38,6%
machos). Mientras que con trampa de Shannon se identificaron 412 ejemplares de
Lu. evansi de los cuales 63,1% fueron hembras y 36,9% machos; además se
capturaron 267 ejemplares de Lu. longipalpis con una relación hembra: macho
de 1,6: 0,6 (164 hembras: 103 machos). Detalles en tabla N° 9.
5.8 DETECCIÓN DE INFECCIÓN NATURAL EN LOS FLEBOTOMINOS: Se
realizó PCR de secuencia telomérica e hibridación a los tubos digestivos de 25
hembras de Lu. evansi capturadas en refugios naturales en el más reciente
período de lluvia (Diciembre 2003), de los cinco pool con 5 tractos digestivos cada
uno, el 80% (4/5) mostró una fuerte señal de amplificación de DNA de L.
donovani en ambas pruebas moleculares. Detalles en figura 2.
33
TABLA N° 9
CATASTRO DE ESPECIES FLEBOTOMINAS, SEGÚN MÉTODO DE CAPTURA Y SEXO. LOS POZONES
EDO. FALCÓN, VENEZUELA.
2002-2004.
Refugio Natural Trampa de Shannon
F % M % Total F % M % Total % Lu. evansi 391 (24) 217 (13,3) 608 (37,4) 260 (16) 152 (9,3) 412 (25,3)
Lu. /ongipa/pis 208 (12,8) 131 (8, 1) 339 (20,8) 164 (10,1) 103 (6,3) 267 (16,4)
Total 599 (36,8) 348 (21 ,4) 947 (58,2) 424 (26,1) 255 (15,6) 679 (41,8)
Fuente: datos propios
34
FIGURA N° 2
PCR E HIBRIDACIÓN EN TRACTOS DIGESTIVOS DE Lutzomyia evansi
N° 1, 2. 3 y 4: Tractos digestivos de Lu. evansi capturadas en el campo.
N° 5: Flebotomos control negativo
N° 6: Flebotomos control positivo
N° 7 Control negativo de la reacción.
35
6.- DISCUSIÓN
La LV en Venezuela es de carácter focal, se presenta en forma esporádica o
en pequeños brotes epidémicos, se caracteriza por un sub-registro que puede ser
hasta 3 veces mayor que la prevalencia oficialmente registrada (Feliciangeli, 1991;
Evans y col, 1992). La comunidad de Los Pezones es una población rural semi
xerófila cuya zona de vida y características climático-ambientales similares a las
descritas por Pifano & Romero (1964; 1973) en el foco ubicado en la Isla de
Margarita, Badaró y col (1986) en Jacobina al noreste de Brasil, Corredor y col
(1989) en la comunidad rural El Callejón del Departamento Cundinamarca
Colombia, Zerpa y col 2000 en varias localidades rurales de la Isla de Margarita,
González y col (2002) en El Rincón-estado Anzoátegui, Vargas-Díaz & Pernalete
(2001) en El Limón al norte del estado Lara.
La prevalencia real de la entidad nosológica para el área estudiada fue de
0,086 x 100.000 habitantes (8,6%), además se determinó que la prevalencia
estada! fue 3,3 x 100.000 habitantes durante el período 1995-2004; lo cual ubica a
Falcón en el primer lugar de prevalencia nacional, contrastando con lo referido por
Zerpa y col (2003) quienes colocan a la entidad federal en el noveno lugar de
prevalencia a nivel nacional durante el lapso 1995-2000, después de los estados
Nueva Esparta, Anzoátegui, Lara, Sucre, Aragua, Trujillo, Guárico y Bolívar. Es
importante resaltar que estos hallazgos dejan de manifiesto el gran sub-registro
existente en los datos oficiales del MSDS.
El62% (49/79) de individuos residenciados en el peridomicilio cercano al casos
índice se les detectó infección por Leishmania del complejo donovani, a través
de las pruebas diagnósticas antes mencionadas; mientras que ninguno de los
humanos del entorno lejano presento signos, serología o pruebas moleculares que
dieran evidencias de la infección, lo cual concuerda con los hallazgos de Zulueta y
col (1999) quienes en un estudio realizado en la Isla de Margarita, demostraron
que las personas que viven en contacto cercano con los casos de LV presentaron
36
mayor porcentaje (10,2%) de infección que los habitantes más alejados (3%) y
coincide con lo referido por Evans y col (1992) que el riesgo de infección se
incrementa 3 veces en las viviendas y lugares cercanos a los casos previos de LV.
De igual manera, en el presente estudio se encontró que de los 49 humanos
infectados del peridomicilio cercano, ocho (16,3%) son familiares del caso y
habitan en la misma vivienda; similares hallazgos fueron reportados por Costa y
col (2002) en Teresina en el noreste Brasileño y por Zerpa y col (2002) en la Isla
de Margarita. Por el contrario Zerpa y col (2003), mencionan que en Venezuela no
se habían reportado varios casos de LV en una misma vivienda.
La evaluación nutricional señaló déficit antropométrico, dado por peso bajo
para la edad y para la talla en 45,5% (5111) de los nuevos casos, similares
hallazgos reportaron Badaró y col (1986 b) en Jacobina-Brasil quienes realizaron
evaluación nutricionat a 22 casos de LV, encontrando que el 23% eran
antropométricamente normales y el 77% de los niños antes de desarrollar la
enfermedad, presentaron diversos grados de desnutrición evidenciado por déficit
antropométricos en peso/edad, concluyendo que los niños menores de 2 años
tienen de 1 a 1 O veces más riesgo de infectarse, y si los infantes desnutridos ya
están infectado tiene de 1 a 4 veces mayor probabilidad de desarrollar LV. De
igual manera, Cerf y col (1987) refiere que tos niños con desnutrición moderada o
grave están expuesto a 12 veces más riesgos de desarrollar la enfermedad que
los niños bien nutridos y 8,7 veces más que los niños con desnutrición leve. Por
otro lado, en Los Pozones el 2,6% de las personas con infección inaparentes
presentaron desnutrición; coincidiendo con Dye y Wittiams (1993) quienes refieren
que la desnutrición es uno de los factores de riesgo y predisponentes para LV.
Posteriormente, Caldas y col (2001, 2002) reportaron entre 0,2% y 3,7% de
desnutrición en los infectados asintomáticos estudiados en el municipio de
Raposa-MA-Brasit.
También se determinó que el63,6% (7/11) de los casos, son niños menores de
4 años y el 90,9% (10/11) son menores de 14 años, siendo semejante a la
37
distribución etaria de LV en el territorio nacional, que durante el lapso 1995-2000
fue de 67,7% en niños menores de 4 años y el 80,6% fueron pacientes menores
de 14 años de edad (Zerpa y col, 2003); y coinciden con Badaró y col (1986 b) y
Caldas y col (2002) quienes afirma que los niños menores de 1 o 2 años tienen
más riesgo de infectarse que los mayores de 2 años.
En Los Pezones se detectó que la relación entre individuos infectados
asintomáticos con respecto a los casos clínicos fue de 38:11; hallazgos parecidos
se han reportado en el Mediterráneo (Pampiglione y col, 1975) en Etiopía (Aií &
Ashford, 1993) en Brasil (Badaró y col, 1986 a, b; Evans y col, 1992) en Venezuela
(Torrealba, 1970; Aguilar y col, 1992; Ferrer y col, 1995; Delgado y col, 1998;
Cordero y col 1997). Además se observó que el índice de infecciones
asintomáticas aumentó a medida que aumentó la edad, de 17,5% en menores de
14 años hasta 82,5% en mayores de 15 años de edad, similar a lo ocurrido en el
municipio Raposa-MA- Brasil (Caldas y col, 2001 y 2002); en El Callejón
Colombia (Corredor y col, 1989); en focos venezolanos tales como: Los
Magallanes-estado Carabobo (Ferrer y col, 1995); en El Limón- estado Lara
(Vargas-Díaz & Pemalete, 2001) y en la isla de Margarita Zerpa y col (2002)
revelando la existencia de una elevada frecuencia de infecciones subclínicas con
poco o ningún potencial para desarrollar la entidad nosológica en adultos
saludables.
En este trabajo se demostró una seroprevalencia inicial de 17,3% (19/110) en
los humanos estudiados, luego en el segundo muestreo se evidenció una
incidencia de 3 individuos con positividad serológica, los cuales fueron
seronegativos anteriormente, revelando un 7,3% (3/41) de seroconversión. En el
tercer muestreo igualmente se determinó una incidencia de 3 personas sera
reactivas, incrementándose el fenómeno de seroconversión humana a 14,3%
(3/21 ); consiguiendo una seroprevalencia general de 22,7% (25/11 O) durante los
20 meses del estudio. Es importante mencionar, que el 40% (10/25) de los
individuos seropositivos son menores 19 años de edad y el 84% (21/25) menores
38
de 39 años, comprobándose que la infección afecta principalmente a la población
infantil y económicamente activa; coincidiendo con Corredor y col (1989) quienes
notificaron índices de infección de 31% en menores de 9 años, 57% en el grupo
etario 1 0- 19 años y 66% en los mayores de 20 años de edad en Colombia;
también Ferrer y col (1995) detectaron que el 58% de los sera-positivos del Barrio
Los Magallanes del estado Carabobo en Venezuela eran niños menores de 20
años. Así mismo, Caldas y col (2001, 2002) hallaron una seroprevalencia inicial de
13,5% y luego de 6±1 mes evidenciaron un 28% de seroconversión, obteniendo
una prevalencia final igual a 34,4%, afirmando que el riesgo de infección aumenta
en niños mayores de 2 años de edad.
Como se mencionó anteriormente en el área de estudio, se encontró un 22,7%
de seroprevalencia humana, de los cuales 88% (22/25) fueron asintomáticos; de
manera parecida, Yépez y col (1995) en Falcón detectaron un 27,7% (10/36) de
seropositividad y 80% de los individuos no presentaron ningún signo o síntoma. En
el mismo estado, Cordero y col (1997) consiguieron 28,07% de sera- reactividad;
el siguiente año, Aguilar y col (1998) evidenciaron un 17,8% de seroprevalencia y
la mayoría de los individuos permanecieron asintomáticos u oligosintomáticos;
también Vargas-Díaz & Pemalete (2001) comprobaron 21,13% (15/71) de sero
reactividad. Mientras que Delgado y col (1998) y Zerpa y col (2002) reportaron
seroprevalencia muy bajas (1 ,05% y 0,6%) en habitantes asintomáticos de los
focos central y oriental respectivamente, utilizando como única prueba serológica
E LISA.
Con el propósito de detectar infecciones por Leishmania del complejo
donovani y de corroborar nuevos casos de la dolencia, se procesaron 11 O PCR
con sus respectivas hibridaciones, donde se incluyeron los 25 seropositivos, 84
seronegativos y el caso índice. Obteniéndose un 25,5% (28/110) de PCR
positivos, correspondiendo el 57% (16/28) a individuos que resultaron clínica y
serológicamente negativos durante los tres muestreos; análogamente Costa y col
(2002) al identificar el DNA del parásito demostraron la existencia de portadores
39
asintomáticos de L. chagasi; hallazgos similares fueron previamente reportados
en Kenya (Schaefer y col, 1995), Francia (LeFichoux y col, 1999) y en Brasil
(Otero y col, 2000); lo cual evidencia que pueden existir frecuentemente
infecciones sin signos clínicos y en ausencia de seroconversión detectables, que
solo son reveladas mediante pruebas moleculares.
Los hallazgos del presente estudio además indican que aunque las personas
permanezcan en contacto directo y frecuente con los flebotominos, no siempre
pueden desarrollar la típica respuesta humoral contra la infección por Leishmania
(Áñez y col, 2003), coincidiendo con Valenzuela y col (2001) en que algunos
componentes de la saliva de flebótomos no infectados inducen protección
inmunitaria para subsecuentes picaduras infectadas. No obstante, debe
considerarse la posibilidad que estas personas haber sido infectadas
recientemente y por lo tanto las pruebas serológicas utilizadas no fueron capaces
de detectar ninguna señal de la respuesta inmune, siendo reveladas al amplificar
el DNA del parásito, confirmando lo referido por Áñez y col (2003).
La escasa cantidad (11%) de individuos sera-reactivos con PCR e hibridación
positivos posiblemente se deban al poco tiempo que tiene circulando el DNA del
parásito en el torrente sanguíneo de los individuos recién seroconvertidos tal como
lo refieren Costa y col (2002) y Áñez y col (2003).
En lo que respecta al rol del perro en la epidemiología del kala-azar en el
Mediterráneo y de la LV en el Neotrópico, varios autores coinciden en que este
animal es el principal reservorio doméstico y fuente de infección para los
transmisores (Chagas y col, 1937 y 1938; Ponde y col, 1942; Deane y Deane,
1954a y 1954b; Pifano 1969; Lainson & Shaw, 1971, 1978; Coutinho y col, 1985;
Corredor y col, 1989); también en Venezuela se ha confirmado la presencia de
perros naturalmente infectados en áreas endémicas de LV, y su importancia como
reservorio de la protozoosis (Medina y col, 1960; Amarar y col, 1961; Torrealba y
col, 1961; Pifano y col, 1962; Torrealba, 1970; Pifano & Romero, 1973; Rodríguez
40
y col, 1976; Moreno, 1982; Moreno y col, 1990; Yépez y col, 1995; Monzart &
Moron, 1995; Aguilar y col, 1996; Delgado y col, 1998; Guevara y col, 1999;
Zulueta y col, 1999; Zerpa y col, 2000; Briceño & Perales, 2001; Zerpa y col, 2003;
Vargas-Díaz y col, 2004). Los habitantes de Los Pezones refirieron que los perros
suelen acompañar a su amos en labores agrícolas y de caza en los ambientes
silvestres durante el día, donde posiblemente entran en contacto con reservorios
silvestres e insectos transmisores y adquieren la infección; posteriormente en las
noches permanecen dentro del domicilio humano, facilitando la transmisión de la
infección a los habitantes; siendo éste uno de los factores de riesgo mencionados
por Caldas y col (2002).
En el presente estudio se determinó una prevalencia de leishmaniasis canina
de 50% (12/24), los cuales resultaron positivos clínica, serológica, molecular y/o
parasitológicamente; análogamente se demostró un 16,7% de infecciones
inaparentes, constituyéndose una relación de infección canina con signos clínicos
versus infección inaparente de 6: 2 (50% vs 16,7%), parecida a la relación 45, 4%
vs 24,4% respectivamente, reportada en la región nor-occidental de Grecia por
Papadopoulou y col (2005).
También se detectó un 66,7% (16/24) de seropositividad canina, similar al 44%
de perros seropositivos reportados por Corredor y col (1989); al 38% en el
municipio Unión del estado Falcón (Yépez y col, 1995); al 89% de sero-reactividad
en perros del municipio Urdaneta del estado Lara (Vargas-Díaz y col, 2004); al
83% detectado por Zulueta y col (1999); hasta 56% en el Estado Nueva Esparta
(Zerpa y col, 2000); al 73% en la región centro occidental de Brasil (Cortada y col,
2004); hasta de 50% en el Occidente de Venezuela (Rojas y col, 2004). Por el
contrario, en varios estudios se encontraron menores índices de seropositividad
canina en los diferentes focos del territorio nacional (Amara! y col, 1961; Torrealba,
1970; Rodríguez y cols, 1976; Moreno, 1982; Aguilar y col, 1995; Delgado y col,
1998; Briceño & Perales, 2001; Zerpa y col, 2003).
41
Es importante mencionar que se demostró un 100% (3/3) de seroconversión
después de un tiempo promedio de 6 ± 2 meses; en dos perros autóctonos y en un
centinela que inicialmente resultaron clínica, serológica y molecularmente
negativos coincidiendo con los hallazgos de Herrer y col (1971, 1973); Corredor y
col (1989) y Áñez y col (2003).
Las pruebas moleculares son de gran utilidad debido a su sensibilidad y
especificidad para la identificación de especies y sub-especies, las cuales
pudieron detectar parásitos humanos (Rodríguez y col, 1994) y vectores (Barrios y
col, 1994) también en estudios taxonómicos (Dujardin y col, 1993). En el presente
estudio, la identificación del DNA del parásito en los sueros de los perros tuvo gran
relevancia para confirmar los perros afectados por la protozoosis, ratificar la
seroconversión y revelar las infecciones caninas inaparentes, tal como lo refieren
Ashford y col (1995); Barrios y col (1998); Guevara y col (1999); Zerpa y col
(2000); Barrios y col (2000); Silva y col (2001); Costa y col (2002); Áñez y col
(2003), Rojas y col (2004). De igual manera, se realizaron PCR e hibridación a las
muestras de hígado, médula ósea, bazo y ganglios linfáticos de un perro
autóctono y del centinela, confirmándose la positividad en aquellos órganos cuyos
frotis se observaron amastigotos de Leishmania, conforme a los hallazgos de
Reale y col (1999), Zerpa y col (2000), Ozbel y col (2000).
En lo que respecta al estudio entomológico, se logró identificar en simpatría a
las dos especies antropofílicas incriminadas como transmisoras de LV, lo cual
coincide con los hallazgos de Pífano y col (1962) en un foco del estado
Portuguesa, Moreno (1982) y Oviedo & Moreno (1995) en varias localidades del
estado Trujillo, Aguilar y col (1998) que el 72,9% de los flebotominos capturados
fue Lu. evansi y el 25,8% fue Lu. longipalpis. Posteriormente, Feliciangelli y col
(1999) por diversos métodos de captura también encontraron a Lu. evansi
(86,36%) en simpatría, aunque predominando en abundancia sobre Lu.
longipalpis (10,60%) en la localidad de Guayabita, un viejo foco de LV en el
estado Aragua. También Zulueta y col (1999) entre las diferentes especies
42
colectadas, halló a Lu. longipalpis y a Lu. evans( González y col (2002) en
varias comunidades del estado Anzoátegui, reportó la presencia de ambas
especies predominando Lu. evansi,
En estudios llevados a cabo en el Viejo Mundo, Ready y col (1988) y Disnesh
et al (2000) afirman que el las pruebas moleculares son muy útiles y sensibles
para revelar infección natural de Phlebotomus sp. aún en aquellas ocasiones,
cuando la carga parasitaria es tan baja que los promastigotos no pueden ser
detectados por medio de la disección y observación microscópica. Esta afirmación
soporta los hallazgos del presente estudio, donde no se observaron promastigotos
de Leishmania sp. en los tractos digestivos de las hembras flebotominas
disecadas, sin embargo el despistaje molecular realizado con los pool de tractos
digestivos de Lu. evansi capturadas a finales del período lluvioso (Diciembre
2003), se observó una amplificación del DNA del parásito, para una infección
natural del 1,95% (20/1020), triplicando el índice de infección natural 0,65%
reportado por Oviedo & Moreno (1995) en ejemplares Lu. longipalpis en El
Batatillo- estado Trujillo, así mismo puede compararse con los de otros autores,
como Aguilar y col ( 1998) quienes reportaron O, 1% de infección natural por en Lu.
evansi en Los Magallanes- estado Carabobo; Feliciangeli y col (1998) consiguió
un 4,3% en Lu. longipalpis en el estado Nueva Esparta; Feliciangeli y col (1999)
detectó un 0,15% en Lu. evansi y 0,28% en Lu. longipalpis en un antiguo foco
de LV en el estado Aragua, Vívenes (2000) determinó un 0,23% en Lu. evansi en
Montañas de Peraza- estado Trujillo; González y col (2002) reportan un 0,31% de
infección natural en hembras de Lu. evansi El Rincón- estado Anzoátegui.
Estos hallazgos revelan que la situación epidemiológica de este foco
falconiano es compleja en comparación con los focos Los Magallanes, Guayabita
y los de otros estados del país, tomando en cuenta que es otros focos
venezolanos se han reportado prevalencias de 17,8%, 11 ,4%, 10,2% de infección
humana respectivamente (AguiJar y col, 1998; Delgado y col, 1999; Zulueta y col,
1999), mientras que en Los Pozones se detectó una seroprevalencia de 22,7%. En
43
lo que respecta a la seroprevalencia canina, en otros los focos ubicados en
Carabobo, Aragua y Trujillo, se han señalado 27,3%, 15,5% y 2% de prevalencia
canina, respectivamente (Moreno, 1982, Briceño & Perales, 2001), en contraste
con el 50% de perros seropositivos detectados en la zona estudiada. Otro factor
epidemiológico que aumenta el riesgo de infección en Los Pozones, lo constituye
la presencia simpátrica de las dos especies antropofílicas incriminadas en la
transmisión de la protozoosis, con una tasa de infección natural de 1 ,95% para
Lu.evansi. A diferencia de lo señalado en otros focos del territorio nacional, donde
se han identificado una o ambas especies flebotominas con los índices de
infección natural en Lu. evansi fueron 0,1% en Los Magallanes; de 0,15% en
Guayabita; de 0,23% en Trujillo y de 0,31% en el Rincón (Aguilar y col, 1998;
Delgado y col, 1999; Vívenes, 2000; González y col, 2002).
44
7.- CONCLUSIONES
Los hallazgos señalados en el presente estudio, tomando en cuenta los
objetivos planteados, permiten concluir que:
1.- En el foco estudiado existe una incidencia de 11 casos de LV y una prevalencia
estimada de 0,086 x 100.000 habitantes, colocando al municipio Buchivacoa en el
primer lugar en prevalencia de LV durante el período 1995-2004, con un total de
13 casos, y al Estado Falcón en el primer lugar de la casuística nacional, con una
prevalencia de 3,3 x 100.000, con un total de 25 casos.
2.- Un total de 14,5% de la casuística pasó desapercibida a los exámenes clínicos
y serológicos, siendo detectados por exámenes moleculares.
3.- La prevalencia de leishmaniasis canina fue 50%, con un 100% de
seroconversión y 16,6% de perros con infección SMCA.
4.- Se identificaron a las dos especies flebotominas incriminadas en la transmisión
de LV en el Neotrópico, tanto en refugio natural como el peridomicilio cercano a
las viviendas, durante todo el año.
5.- Se detectó un índice de infección natural de 1,95% en Lutzomyia evansi.
6.- En el caserío Los Pozones, ubicado al Occidente del Estado Falcón hay una
transmisión vectorial activa y constante de leishmanisis visceral.
45
8.- REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
AGUILAR C. M; FERNÁNDEZ E; de FERNÁNDEZ R; CANNOVA D. C;
FERRER E; CABRERA Z, SOUZA W. J and COUTINHO S. G. (1998). Urban
Visceral Leishamnaisis in Venezuela. Mem lnst Oswaldo Cruz 93: 15-16.
ALI A and ASHFORD R. W. (1993). Visceral leishmaniasis in Etiopia. l.
Cross-sectional leishmanin skin test in an endemic locality. Ann Trop Med &
Parasit87: 157-161.
ÁÑEZ N; ROJAS A; CRISANTE G; GUEVARA P and RAMÍREZ J. L.
(2003). Use of Sentinel Animals to Demonstrate Active Leishmanial Transmission
in an Area with Low Frequency of Human Lesions in Western Venezuela. Rev
Patología Tropical. 32: 63- 72.
ÁÑEZ N. (2002). Animales Centinelas y transmisión de Leishmania en
focos de baja endemicidad en la Región Andino-Venezolana. Mem Simposio de
Leishmaniasis. Barquisimeto-Venezuela. 69- 74.
AMARAL A. D. F; TORREALBA J. W; HENRIQUEZ C. E; KOWALENKO W
and BARRIOS P.A. (1961). Consideraciones sobre el Kala-azar en el Mundo y su
Presencia Comprobada en Venezuela desde 1941. Rev Vzlana de San Asist Soc
26: 350- 356.
ASHFORD D. A; BOZZA M; FREIRE M; MIRANDA J. C; SHERLOCK 1;
EULALIO C; LOPES U; FERNÁNDES O; DEGRAVE W and BARKER Jr. R. H.
(1995). Comparison of the po~ymerase chain reaction and serology for the
detection of canine visceralleishmaniasis. Am J Trop Med & Hyg. 53: 251-255.
46
ASHFORD R. W; DESJEUX W. P and de RAADT P. (1992). Estimation of
Population at Risk of lnfection and Number of Cases of Leishmaniasis.
Parasitology today. 8: 104- 105.
BADARÓ R; JONES T. C; CARVALHO E. M; SAMPAIO D; REED S. G;
BARRAL A; TEIXEIRA R and JOHNSON Jr. W. D. (1986 a) New Perspectivas on a
subclinical form of visceralleishmaniasis. J lnfect Disease 154: 1003-1011.
BADARÓ R; JONES T. C; LORENCO R; CERF B. J; SAMPAIO D;
CARVALHO E. M; ROCHA H; TEIXEIRA R and JOHNSON Jr. W. D. (1986 b) A
prospective study of visceral leishmaniasis in an endemic area of Brazil. J lnfect
Disease 154: 639-649.
BARNOLA B y POTENZA L. (1950). Leishmaniasis Visceral Infantil en
Venezuela (4 nuevas observaciones). Arch Venez Puer Pediat 13: 5- 17.
BARRIOS M. A; RODRÍGUEZ N; FELICIANGELI M. D; ULRICH M; TELLES
S; PINARDI M. E and CONVIT, J. (1994). Coexistence of two species of
Leishmania in the digestive tract in the vector Lutzomyia ovallesi, Am J Trop
Med & Hyg 5: 669- 675.
BARRIOS M. R; ZERPA, O; SALAZAR M; DE GUGLIELMO Z y
RODRÍGUEZ N. (1998). Utilidad de la PCR en la detección de posibles
Infecciones Subclínicas de la Leishmaniasis Visceral. Acta Cient Vzlana 49. (Supl.
1): 305.
BARRIOS R; ZERPA O; NEGRÓN E y RODRÍGUEZ N. (2000).
Leishmaniasis Visceral Canina: Infecciones Subclínicas detectadas por Técnicas
Moleculares. Acta Cient. V/ana. 51 (Supl. 2): 176.
47
BEMERQUI A y SOTO P, L. (1959). Un nuevo caso de kala-azar en
Venezuela. En: TORREALBA, J. W. 1970. Observaciones sobre diagnóstico,
terapéutica y evolución de la leishmaniasis visceral humana y canina. Tesis
doctoral mimeografiada. Facultad de Medicina de la Universidad de Carabobo.
Valencia- Venezuela. 367pp.
BERG R. (1978). Anatomía Topográfica y Aplicada de los Animales
Domésticos. Edit. A.C. 1a edic. Madrid, España, p: 218.
BOFANTE- GARRIDO R y BARROETA S. (2002). Leishmanias y
leishmaniasis en América con especial referencia a Venezuela. Tipografía y
Litografía Horizontes. Barquisimeto- Venezuela, pp: 56- 59.
BRICEÑO A; GIL J y PERALES P. (2001). Importancia del Canis familiares
en la Epidemiología de la Leishmaniasis Visceral en el Estado Trujillo, Venezuela.
Tesis de Grado, Mimeografiado Escuela de Salud Pública, Universidad Central de
Venezuela. 43pp.
CALDAS A. J. M; COSTA J. M. L; SILVA A. A. M; VINHAS V and BARRAL
A. (2002). Risk factors associated with asymptomatic infection by Leishmania
chagasi in north-east Brazil. Trans Roy Soc Trop Med & Hyg 96: 21- 28.
CALDAS A. J. M; SILVA D. R. C; PEREIRA C. C. R, NUNES P. M. S; SILVA
B. P; SILVA A. A. M; BARRAL A and COSTA J. M. L. (2001). lnfec9ao
Leishmania (Leishmania) chagasi em crianzas de urna área endémica de
leishmaniose visceral americana na llha de Sao Luís-MA, Brasil. Rev Soc Bras
Med Trop 34: 445- 451.
CERF B. J; JONES T. C; SAMPAIO D; TEIXEIRA R and JOHNSON Jr. W.
D. (1987). Malnutrition as a Risk Factor for Severe Visceral Leishmaniasis. J lnfect
Diseases 156: 1030- 1033.
48
CHAGAS E. (1938). Estudios sobre las Grandes Endemias do Brasil (1):
Leishmaniasis Visceral Americana. O'Hospital (Rio de Janeiro) 14: 1323- 1335.
CHAGAS E; CUNHA A. M; CASTRO G. O; FERREIRA L. C and ROMAÑA
C. (1937). Leismaniose Visceral Americana. (Nova Entidade Norbida do Homen na
America do Sul). Velatorio dos Trabalhos Realizados Pela Comissao Encarregada
do Estudo da Leishmaniose Visceral Americana em 1936. Mem lnst Oswaldo
Cruz. 32: 321- 385.
CHIURILLO M. A; SACHVEDA M; DOLE V; YEPES Y; MILIANI E;
VÁZQUEZ L; ROJAS A; CRISANTE G; GUEVARA P; AÑEZ N; MADHUBALA R
and RAMÍREZ J. L. (2001). Detection of Leishmania causing visceral
leishmaniasis in the Old and New Worlds by Polymerase Chain Reaction assay
based on Telomeric Sequences. Am J Trop Med & Hyg 65: 573- 582.
CORDERO L; DÁVILA A; GARCÍA H; TORRES A; TRASMONTE A;
CAZORLA D; YÉPEZ J. Y. (1998). Aspectos Eco-epidemiológicos de las
Leishmaniasis en la Parroquia Vegas del Tuy, Municipio Unión, Estado Falcón.
Consejo de Investigaciones/Universidad Nacional Experimental Francisco de
Miranda. V Jornadas de Investigación (Supl. 1). Falcón. Venezuela: pp. 450.
CORREDOR A; GALLEGO J. F; TESH R. 8; MORALES A; FERRO de
CARRASQUILLA C; YOUNG D. G; KREUTZER R. D; BOSHELL J; PALAU M. T;
CACERES E and PELAEZ D. (1989). Epidemiology of Visceral Leishmaniasis in
Colombia. Am J Trop Med & Hyg 40: 480- 486.
CORTADA V. M; DOVAL M. E; SOUZA LIMA M. A; OSHIRO E. T;
MENESES C. R, ABREU-SILVA A. L; CUPOLILO E; SOUZA C. S; CARDOSO F.
O; ZAVERUCHA DO VALLE BRAZIL R. P; CALABRESE K. S and GONCALVES
49
DA COSTA S. C. (2004). Canine visceralleishmaniosis in Anastasia, Mato Grosso
do Sul state, Brazil. Vet Res Commun. 28: 365- 37 4.
COSTA C; STEWART J; GOMES R; GARCEZ L; RAMOS P; BOZZA M;
SATOSKAR A; DISSANAYAKE S; SANTOS R; SILVA M; SHAW J; DAVRD J and
MAGUIRE J. (2002). Asymptomatic Human Carriers of Leishmania chagasi. Am J
Trop Med & Hyg66: 334-337.
COUTINHO S; NUNES M; MARZOCHI M and TRAMONTANO N. (1985). A
Survey for American Cutaneous and Visceral Leishmaniasis among 1342 Dogs
from Areas in Rio de Janeiro (Brazil) where the Human Diseases Occur. Mem lnst
Oswaldo Cruz 80: 17-22.
CUNHA M A and CHAGAS E. (1937). Nova Especie de Protozoario do
Genero Leishmania Patogénico para o Homen. Leishmanias Chagasi, n. sp.
O'Hospita/11: 148- 152.
DEANE L. M and DEANE M. P. (1954a) Encontro de Leishmanias nas
Vísceras e na Pela urna Raposa, em Zona Endémica de Calazar, nos Arredores
de Sobra!. O'Hospita/45: 419-421.
DEANE L. M and DEANE M. P. (1954 b) Encontro de Caes Naturalmente
Infectados por Leishmania donovani, no Ceará O'Hospita/45: 43- 47.
DELGADO O; FELICIANGELLI M. D; GÓMEZ R; ÁLVAREZ J; GARCfA L
and BELLO C. (1998). The Re-emergence of American Visceral Leishmaniasis in
an Old Focus in Venezuela: Present situation on Human and Canine lnfections.
Parasite 5: 317- 323.
DISNESH D. S; KAR S. K; KISHORE K; PALITA; VERMA A; GUPTA A. K;
CHAUHAN D. S; SINGH D; SHARMA V. D ANO KATOCH V. M. (2000). Screening
50
sandflies for natural infection with Leishmania donovani, using a non-radioactive
probe based on the total DNA of the parasite. Anna/s Trop Med & Parasitol 94:
447- 451.
DUJARDIN J. C; LLANOS-CUENTAS A; CACERES A; ARANA M;
DUJARDIN J. P; GUERRENI F and ARROYO J. (1993). Molecular karyotype
variation in Leishmania (Viannia) peruviana. lndication of geographic population
in Perú distributed along a North- South cline. Ann Trop Med & Parasito/81: 335-
347.
OYE C and WILLIAMS B. G. (1993). Malnutrition, age and the risk of
parasitic disease: visceral leishmaniasis revisited. Proceeding Roy Soc London
(England) 254: 33- 39.
EVANS T.G; VASCONCELOS l. A. B; LIMA J. W; TEIXEIRA J. M;
McAULLIFE l. T; LOPES U. G; PEARSON R. D and VASCONCELOS A. W.
(1992). Epidemiology of visceral leishmaniasis in northeast Brazil. J lnfect
Diseases 166: 1124-1132.
EWEL J. J; MADRIZ A and TOSSI J. A. (1976). Zonas de vida de
Venezuela. 23 edición. Edit. Sucre. Caracas. 270pp.
FELICIANGELI M. D. (1991). Vector of Leishmaniasis in Venezuela.
Parassitologia. 33 (Suppl. 1 ): 229-236.
FELICIANGELI M. D; RODRÍGUEZ N; DE GUGLIRLMO Z and
RODRÍGUEZ A. (1999). The Re-Emergence of American Visceral Leishmaniasis
in an Old Focus in Venezuela. 11. Vectors and Parasites. Parasite 6: 113-120.
FELICIANGELI M. D; ZERPA O; RODRÍGUEZ N; BRAVO A; GALINDO W
and CONVIT J. (1998). Hallazgos de Lutzomyial longipalpis (Diptera.
51
Psychodidae) Naturalmente Infectada con Promastigotes en un Foco Endémico de
Leishmaniasis Visceral en la Isla de Margarita, Venezuela. Bol o;r Malaria/ y San
Amb 38: 73- 75.
FERRER E; CANNOVA D. C; AGUILAR C. M and CABRERA Z. (1995).
Leishmaniasis Visceral Periurbana. 111. Evaluación Serológica por ELISA. Barrio
Los Magallanes. Edo. Carabobo. 1993-1994. Acta c;ent. Vzlana. 46 (Supl1): 160.
FORATTINI O. P. 1973. Entomología Médica. Vol. 4. Editorial Univ. Sao
Pauto, Brasil. 658pp.
FUNDACIÓN PARA EL DESARROLLO DE LA REGIÓN CENTRO
OCCIDENTAL DE VENEZUELA (FUDECO). 1995. El Estado Falcón en Cifras.
LAGOVEN S.A., fial de PDVSA. 4a edición. Barquisimeto, Venezuela. 8pp.
GUEVARA P; DELGADO O; SILVA S; CORASPE V; PECILE M;
FELICIANGELI M. D and RAMÍREZ. J. L. (1999). Diagnóstico Molecular e
Infecciones lnaparentes por Leishmania: 1) El Perro como Reservorio en la
Leishmaniasis Visceral Americana. Acta c;ent Vzlana 50 (Supl. 1 ): 338.
GONZÁLEZ R; de SOUZA L; DEVERA R; JORQUERA A and LEDEZMA E.
(1999). Seasonal and Nocturnal Domiciliary Human Landing/Biting Behaviour of
Lutzomyia (Lu) evansi and Lutzomyia (Psychodopygus) panamensis (Diptera:
Psychodidae) in a Periurban Area of a City on the Caribbean Coast of Eastem
Venezuela (Barcelona; Anzoategui State). Trans Roy Soc Trap Med & Hyg 93:
361- 364.
GONZÁLEZ R; JORQUERA A; de SOUZA L; LEDEZMA E and DEVERA R.
(2002). Sandfly Fauna of Endemic leishmaniasis Foci in Anzoátegui State,
Venezuela. Trans Roy Soc Trap Med & Hyg 96: 57- 59.
52
GLOBAL POSSITION SISTEM. (2003). Coordenadas UTM Los Pezones.
HERRERA; HOWARD A. C and RONALD J. B (1971). Use of sentinel
animals in epidemiological studies of cutaneous leishmaniasis. Trans Roy Soc
Trap Med & Hyg 65: 538- 539.
HERRER A; HOWARD A. C and RONALD, J. B. (1973). Detection of
leishmanial activity in nature by means of sentinel animals. Trans Roy Soc Trap
Med & Hyg 67: 870- 879.
LAINSON R and SHAW J. J. (1971). Epidemiological Considerations of the
New World. In: Ecology and Physiology of Parasites. A symposium held at
University of Taranta 19 and 20 February 1970. Edited by A. M. Fallís. University
ofToronto Press. Ganada: 21-57.
LAINSON R and SHAW J. J. (1978). Epidemiology and Ecology of
Leishmaniasis Visceral in Latinamerica. Review Articles: Parasitology Supplement.
Nature 273: 595-600.
LEFICHOUX Y; QUARANTA J. F; AUFEUVRE A. P; LELIEVRE A; MARTY
P; SUFFIA 1; ROUSSEAU O and KUBAR J. (1999). Occurrence of Leishmania
infantum parasitemia in asymptomatic blood donors living in an area of endemicity
in Southern France. J C/in Micribiol 37: 1953- 1957.
LUTZ A and NEIVA A. (1912). Contribuígao para o conhecimento das
especies do genero Phlebotomus existentes no Brasil. Mem lnst Oswaldo Cruz 4:
82-95.
MARTÍNEZ N. A y PONS A. R. (1941). Primer Caso de Kala-azar en
Venezuela. Gaceta Méd Caracas. 48: 329-332.
53
MEDINA R; ROMERO J; GOLDMAN C y ESPÍN J. (1960). Comprobación
del Primer Perro Infectado en Venezuela. Gaceta Méd Caracas 69: 441- 447.
MIRSA M. (1953). Insectos de Interés Médico en Los Chorros, Edo.
Miranda. Rev Venez Sanidad Asist Soc 18:733-766.
MONZART G; MORONT L. (1995). Leishmaniasis Visceral Canina en un
Foco Endémico del Estado Falcón. Tesis de Grado. Mimeografiado. Universidad
Nacional Experimental "Francisco de Miranda", Coro. 71pp.
MORENO G. (1982). Estudio Epidemiológico sobre Leishmaniasis Visceral
en el Estado Trujillo, Venezuela. Trabajo Mimeografiado. Universidad de Los
Andes. Núcleo Universitario "Rafael Rangel" Trujillo. Estado Trujillo-Venezuela:
25p.
MORENO G; SCORZA J. V y AÑEZ N. (1990). Leishmania infantum en el
Estado Trujillo, Venezuela. Acta Cient Vzlana 41 (Supl. 1): 271.
NÚÑEZ TOVAR, M. 1924. Mosquitos y flebótomos de Venezuela. En:
TORREALBA, J. W. 1970. Observaciones sobre diagnóstico, terapéutica y
evolución de la leishmaniasis visceral humana y canina. Tesis doctoral
mimeografiada. Facultad de Medicina de la Universidad de Carabobo. Valencia
Venezuela. 367p.
OMS, 1996. Manual de lucha contra la leishmaniasis visceral.
WHO/LEISH/96.40. Ginebra. 82p.
OPS/OMS (2002). Definición de caso: Leishmaniasis Visceral. Boletín
Epidemiológico. 23 (3): 13-14.
54
OTERO A C; DA SILVA V O; LUZ K G; PALATNIK K; PIRMEZ C;
FERNANDES O and PALATNIK DE SOUSA C. B. 2000. Short report: occurrence
of Leishmania donovani DNA in donated blood from seroreactive Brazilian blood
donors. Am. J. Trap. Med. & Hyg. 62: 128- 131.
OZBEL Y; OSKAM L; OZENSOY S; TURGAY N; ALKAN M. Z; JAFFE C. L
and OZCEL, M. A. (2000). A survey on canine leishmaniasis in western Turkey by
parasite, DNA and antibody detection assays. Acta Trop. 74: 1- 6.
PAMPIGLIONE S; MANSON-BAHR P. E; LA PLACA M; BORGATTI M.
A and MUSUMECI S. 1975. Studies in Mediterranean leishmaniasis. 3. The
leishmanin skin test in kala-azar. Trans. Ro y. Soc. Trop. Med. & Hyg. 69: 60- 68.
PAPADOPOULOU C; KOSTOULA A; DIMITRIOU O; PANAGIOU A;
BOBOJIANNI C and ANTONIADES, G. 2005. Human and canine leishmaniasis in
asymptomatic an symptomatic population in Northwestern Greece. J. infect. 50:
53- 60 (Abstract).
PIFANO F. (1969). Algunos Aspectos en la Ecología y Epidemiología de las
Enfermedades Endémicas con Focos Naturales en el Área Tropical,
especialmente en Venezuela. Ediciones del Minist. de Sanidad y Asist. Soc.
Caracas: 153-186.
PIFANO, F y ORTÍZ, l. 19 Representantes Venezolanos del Género
Phlebotomus rondai, 1940. {Díptera: Psychodidae). Rev. Venez. Sanidad Asist.
Soc. 17: 135-151.
PIFANO F y ROMERO J. (1973). Comprobación de un Foco Autóctono de
Leishmaniasis Visceral (Kala-azar) en la Isla de Margarita, Estado Nuevo Esparta,
Venezuela. Arch. Vzlanos de Med. Trop. y Parasitol. Med. 5: 129- 144.
55
PIFANO F; ROMERO J y HENRIQUEZ GARCIA R. (1962). Comprobación
de un foco de Leishmaniasis Visceral (Kala-azar) en un Sector del Piedemonte
Andino-Llanero del estado Portuguesa. Arch. Vzlanos de Med. Trop. y Parasitol.
Médica. 4:3- 15.
PONDÉ R; MANGABEIRA F O and JANSEN, G. (1942). Alguns dados
sobre a Leishamaniose Visceral Americana e Doenca de Chagas no Noedeste
Brazileiro. Mem. lnst. Oswaldo Cruz. 37 (3): 333- 368.
READY P. D; SMITH D. F and KILLICK-KENDRICK, R. (1988). DNA
hybridations on squarsh-blotted sandflies to identify both Phlebotomus papatasi
and infecting Leishmania mayor. Med & Vet. Entorno/. 2: 109- 116.
REALE S; MAXIA L; VITALE F; GLORIOSO N. S; CARACAPPA S and
VESCO G. 1999. Detection of Leishmania infantum in dogs by PCR with lymph
node aspirates and blood. J. Clin. Microbio/37: 2931- 2935.
RODRÍGUEZ A; PIFANO F; GÓMEZ P; TORRES J; ORTÍZ 1 y ÁLVAREZ A.
(1976). Sobre un foco de Leishmaniasis Visceral en el Área Costera Oriental del
Distrito Federal, Venezuela. Rev. lnst. Nac. Hig. 9: 107- 113.
RODRÍGUEZ N; GUZMÁN B; RODAS A; TAKIFF H; BLOOM 8 and
CONVIT, J. (1994). Diagnosis of cutaneous leishmaniasis and species
discrimination of parasites by PCR and hybridization. KJ. Clin. Microbio!. 32: 2246-
2252.
ROJAS A; CRISANTE G; GUEVARA P; CHIURILLO M; YÉPEZ J. Y;
RAMÍREZ J; ÁÑEZ N. (2004). Combinación de Métodos Serológicos y Moleculares
para la detección de leishmaniasis canina en Venezuela. Mem. Resúmenes 1 Jorn.
Extensión y Postgrado y VI Jom. lnvest. UNEFM Dr. León Croizat. p. 159.
56
ROMERO J. (1968). Aspectos epidemiológicos de la leishmaniasis visceral
(kala-azar) en Venezuela. Referido por: TORREALBA, J. W. 1970. Observaciones
sobre diagnóstico, terapéutica y evolución de la leishmaniasis visceral humana y
canina. Tesis doctoral mimeografiada. Facultad de Medicina de la Universidad de
Carabobo. Valencia- Venezuela. 367p.
SANDOVAL L y AGÜERA E. (1988). Anatomía Aplicada Veterinaria
(Caballo, Vaca y Perro). Edit. Salvat. Editores S.A. 23 edición. Barcelona, España.
SCHAEFER K. U; SCHOONE G. J, GACHIHI G. S; MULLER A. S; KAGER
P. A and MEREDITH S. E. O. (1995). Visceral leishmaniasis: use of the
polymerase chain reaction in an epidemiological study in Baringo District, Kenya.
Trans. Roy. Soc. Trap. Med. & Hyg. 89:492-495.
SILVA E S; GONTIJO C. M; PIRMEZ C; FERNÁNDES O; BRAZIL R. P.
(2001 ). Short Report: Detection of Leishmania DNA by polymerase chain reaction
on blood samples from dogs with visceralleishmaniasis.
SPECIAL PROGRAMME FOR RESEARCH ANO TRAINING IN TROPICAL
DISEASE (TDR). 2002. Leishmaniasis. www.who.int/tdr. pp: 1-5. Enero, 2004.
TORREALBA J. W. 1970. Observaciones sobre diagnóstico, terapéutica y
evolución de la leishmaniasis visceral humana y canina. Tesis doctoral
mimeografiada. Facultad de Medicina de la Universidad de Carabobo. Valencia
Venezuela. 367p.
TORREALBA J. W; AMARAL A. D. F; HENR(QUEZ C. E; KOWALENKO, W
y BARRIOS P. A. (1961). Observaciones Iniciales sobre el Perro (Canis
familiaris) como Reservorio de Kala-azar en Venezuela. Rev. Venez. de San. y
Asist. Soc. 26: 342-349.
57
VALENZUELA J. G; BELKAID Y; GARFIELD M. K; MENDEZ S; KAMHAWI
S; ROWfON E. D; SACKS D and RIBEIRO J. M. 2001. Toward a defined anti
Leishmania vaccine targeting vector antigens: characterization of a protective
salivary antigen. J. Exp. Med. 194: 331- 342.
VARGAS-DÍAZ E; ÁÑEZ N; ROJAS A; CRISANTE G; YÉPEZ,J. Y. 2004.
Estudio Epidemiológico de Leishmaniasis Visceral en El Limón, al norte del Estado
Lara, Venezuela. Bol. Malaria/. Salud Amb. 44: 101- 107.
VARGAS-DÍAZ E y PERNALETE D. 2001. Estudios de Seroprevalencia de
Leishmaniasis Visceral Humana y Canina en la Población de "El Limón" municipio
Urdaneta- estado Lara. Trabajo mimeografiado. Tesis de grado para Médico
cirujano, de la Universidad Nacional Experimental Francisco de Miranda. Coro,
Venezuela, 67 p.
VARGAS-DÍAZ E; YÉPEZ J. Y. 2004. Aspectos Epidemiológicos de la
Leishmaniasis Visceral en Venezuela, con especial referencia al Estado Falcón.
Bol. Malaria/. Salud Amb. 44: 9-19.
VÍVENES M. A. 2000. Lutzomyia evansi hospededor biológico de parásitos
del Complejo Leishmania mexicana. Trabajo mimeografiado. Tesis de la
Maestría en Protozoología de la Universidad de Los Andes. Núcleo Universitario
"Rafael Rangel". Trujillo, Venezuela. 90 p.
WHO, 2000. Reporto n Global Surveillance of Epidemia-prone lnfectious
Diseases. WHO/CDS/CSR/ISR/2000.1. Ginebra: 121- 127.
VIMIW.a-venezuela.com/mapas/map/htmllviales/falconv.html Mapa Vial del
estado Falcón, Venezuela. Enero, 2005.
58
YÉPEZ J. Y. (2003). Aspectos Eco-Epidemiológicos de algunas afecciones
parasitarias en el estado Falcón. Una experiencia docente y de investigación.
Trabajo de Ascenso a Profesor Titular. Mimeografia. Universidad Nacional
Experimental Francisco de Miranda. Coro- Venezuela, 585 p.
YÉPEZ J. Y; GONZALEZ F; CAZORLA D y TRASMONTE, A. 1995. Estudio
Epidemiológico de Leishmaniasis Visceral en Morrocoy, Municipio Unión del
Estado Falcón. Consejo de Investigaciones/Universidad Nacional Experimental
Francisco de Miranda. V Jornadas de Investigación (Supl. 1). Falcón. Venezuela:
pp. 449.
YOUNG D. G ANO DUNCAN M. A. 1994. Guide to the identification and
geographic distribution of Lutzomyia sand flies in México, the West lndies, Central
and South America (Díptera: Psychodidae). Memoirs of the American
Entomologicallnstitute. Associated Publishers. Florida- USA. N° 54. 881p.
ZERPA O; ULRICH M; BENITEZ M; ÁVILA C; RODRÍGUEZ V; CENTENO
M; BELISARIO D; REED S and CONVIT J. 2002. Epidemiological and
lmmunological Aspects of Human Visceral Leishmaniasis on Margarita lsland,
Venezuela. Mem. lnst. Oswaldo Cruz. 97: 1079- 1083.
ZERPA O; ULRICH M; BORGES R; RODRÍGUEZ V; CENTENO M;
NEGRÓN E; BELIZARIO D and CONVIT, J. (2003). Epidemiological aspects of
human and canine visceral leishmaniasis in Venezuela. Rev. Panam. Salud
Publica/Pan. Am. J. Public Health 13: 239-245.
ZERPA O; ULRICH M; NEGRON E; RODRÍGUEZ N; CENTENO M;
RODRÍGUEZ V; BARRIOS R. M; BELISARIO D; REED S and CONVIT J. (2000).
Canine Visceral Leishmaniasis on Margarita lsland (Nueva Esparta, Venezuela).
Trans. Ro y. Soc. Trop. Med. & Hyg. 94: 484- 487.
59
ZULUETA A. M; VILLARROEL E; RODRÍGUEZ N; FEUCIANGELI M. D;
MAZZARRI M; REYES O; RODRÍGUEZ V; CENTENO N; BARRIOS R. M and
ULRICH M. (1999). Epidemiology Aspect of American Visceral Leishmaniasis in an
Endemic Focus in Eastern Venezuela. Am. J. Trop. Med. & Hyg. 6: 945-950.
60
