BAB IPENDAHULUAN
1.1. Latar Belakang
Sejak ribuan tahun yang lalu, obat dan pengobatan tradisional
sudah ada di Indonesia, jauh sebelum pelayanan kesehatan formal
dengan obat obatan modern yang dikenal oleh masyarakat
(Wijayakusuma, 2008), dimana tumbuh-tumbuhan memiliki peranan
penting dalam kehidupan masyarakat, baik sebagai sumber pangan,
maupun obat-obatan.Selain untuk perawatan medis, pemanfaatan
tumbuhan sebagai obat tradisional masih digunakan masyarakat,
terutama di daerah pedesaan yang masih kaya akan tumbuh-tumbuhan
yang berkhasiat sebagai obat (Wayan, 2004). Tanaman obat telah
terbukti efektif dapat menyembuhkan penyakit, efek samping yang
ditimbulkan juga minim (Wijayakusuma, 2008). Tanaman obat dapat
berkhasiat pada tubuh melalui sistem endokrin, kardiovaskuler,
maupun pada sistem imun. Tanaman obat yang bekerja pada sistem imun
tidak langsung bekerja sebagai efektor dalam menghadapi penyebab
penyakit, tetapi melalui pengaturan sistem imun, sehingga
digolongkan sebagai imunostimulator. Apabila tubuh mengalami
infeksi dan mendapat pengobatan imunostimulator, maka
imunostimulator tidak langsung memfagosit mikroorganisme, memacu
sistem imun melalui mekanisme efektor sistem imun (Hasana,dkk,
2006). Luka adalah hilang atau rusaknya sebagian jaringan tubuh.
Keadaan ini dapat disebabkan oleh trauma benda tajam atau tumpul,
perubahan suhu, zat kimia, ledakan, sengatan listrik, atau gigitan
hewan. Proses yang kemudian terjadi pada jaringan yang rusak ini
ialah penyembuhan luka yang dapat dibagi dalam tiga fase yaitu fase
inflamatori, fase proliferasi, fase penyudahan (Wim de jong, 2004).
Luka tidak dapat dibiarkan sembuh sendiri karena jika luka tidak
dirawat dapat menyebabkan komplikasi penyembuhan luka yaitu dapat
tejadi infeksi, perdarahan, dehiscence dan eviscerasi. Tujuan
merawat luka yaitu untuk mencegah trauma (injury) pada kulit,
membran mukosa atau jaringan lain yang disebabkan oleh adanya
trauma, fraktur, luka operasi yang dapat merusak permukaan kulit
(Prasetyo, 2009). Percepatan kesembuhan luka yang saat ini banyak
dilakukan yaitu dengan cara mempertemukan kedua sisi luka,
pemberian obat-obatan seperti salep antibiotik, dibalut dengan
teknik tertentu seperti menggunakan hidrogel (Thomas, 1997; Fossum,
1997) atau dengan teknik vakum (tenaga negatif) di atas luka dalam
beberapa menit (Thomas, 2001). Namun, cara penyembuhan itu masih
dinilai kurang sederhana oleh sebagian masyarakat sehingga
diperlukan alternatif lain untuk menyembuhkan luka selain
menggunakan obat khusus maupun antiseptik. Salah satu alternative
lain yang dapat digunakan yaitu menggunakan daun bunga tapak dara
(C. roseus L. G. Don). Dimana daun bunga tapak darah (C. roseus L.
G. Don) dapat dingunakan sebagai obat untuk penyembuh luka. Hal ini
terjadi karena kandungan zat aktif yang terdapat dalam daun
tersebut. Adanya zat aktif inilah yang mendorong dilakukannya
penelitian ini yaitu bagaimana peran zak aktif tersebut dalam
membantu proses penyembuhan luka.1.2. Rumusan MasalahBerdasarkan
latar belakang masalah di atas, maka dapat dirumuskan masalah pada
penelitian ini, yaitu :Bagaimana ekstrak daun bunga tapak dara (C.
roseus L. G. Don) dapat mempercepat proses penyembuhan luka? dan
Berapa lama proses penyembuhan luka bila diberi ekstrak daun bunga
tapak dara (C. roseus L. G. Don) ?1.3. Hipotesis H0 : Pengaruh
pemberian ekstrak daun bunga tapak dara dapat mempercepat proses
penyembuhan luka.H1 : Pengaruh pemberian ekstrak daun bunga tapak
dara tidak dapat mempercepat proses penyembuhan luka. 1.4. Tujuan
Penelutian1.4.1. Tujuan Umum Penelitian : Untuk mengetahui
bagaimana daun bunga tapak dara (C. roseus L. G. Don) dapat
mempercepat penyembuhan luka1.4.2. Tujuan Khusus Penelitian :a.
Mengetahui seberapa cepat proses penyembuhan luka bila diberikan
ekstrak daun bunga tapak dara (C. roseus L. G. Don)b. Memahami cara
membuat ekstrak daun bunga tapak dara (C. roseus L. G. Don)c.
Melihat perbandingan kecepatan proses pentembuhan luka antara
Fovidoiodin dan Ekstrak daun bunga tapak dara (C. roseus L. G.
Don)d. 1.5. Manfaat PenelitianManfaat penelitian ini adalah
memberikan pengetahuan mengenai pemanfaatan ekstrak daun bunga
tapak dara (Catharantus roseus L. G. Don) untuk mempercepat proses
penyembuhan luka, dan memberikan alternatife obat dalam
menyembuhkan luka.
BAB IITINJAUAN PUSTAKA
2.1. Tanaman Tapak Dara (Catharanthus roseus L. G. Don)2.1.1.
Deskripsi Tanaman Tapak Dara (Catharanthus roseus L. G. Don)Tanaman
tapak dara ini banyak ditanami bahkan tumbuh liar didaerah
pedesaan, akan tetapi didaerah perkotaan hanyaditanam oleh beberapa
orang saja. Tanaman ini memiliki Taxonomi sebagai berikut :Kingdom:
PlantaeDivisio: SpermatophytaSub divisio: AngiospermaeClass:
DicotyledonaeFamily: ApocynaceaeGenus: CatharanthusSpesies:
Catharanthus roseus L. G. Don
Gambar Bunga Tapak Dara (Catharanthus roseus L. G. Don)Tanaman
ini berbentuk perdu tegak dengan tinggi maksimal berkisar 0.8 m,
mengandung getah. Berdaun tunggal dan bertepi rata, bertangkai
pendek dengan bentuk daun memanjang sampai bulat telur. Bunga dalam
anak paying, berkelamin 2 (dua) dan bercangkap. Mahkota berdaun
lekat dengan letak berputar. Kepala sari beruang dua, bakal buah
beruang satu. Mahkota berbentuk terompet dengan panjang berkisar 3
cm. Biji tanpa rambut Gombak. (Dalimartha, 2002)
2.1.2. Morfologi Tanaman Tapak Dara (Catharanthus roseus L. G.
Don)Tapak dara merupakan tanaman herba/semak yang tegak, hidup
lama, tinggi 0,2-0,8 m dan mengandung getah. Batangnya mengandung
getah berwarna putih susu, berbentuk bulat dengan diameter
berukuran kecil, berkayu, beruas, bercabang, dan berambut sangat
lebat. Daun bersusun berhadapan, bertangkai pendek, memanjang bulat
telur dengan pangkal serupa baji dan ujung tumpul panjang 2 6 cm,
lebar 1 3 cm, dan tangkai daunnya sangat pendek. Bunganya muncul
dari ketiak daun. Kelopak bunga kecil, berbentuk paku. Mahkota
bunga berbentuk terompet, dan ujungnya melebar. Tepi bunga datar,
terdiri dari taju bunga berbentuk bulat telur, dan ujungnya runcing
menutup ke kiri. berbunga sepanjang tahun, berbentuk tubular,
panjang 1,5-4 cm, lebar 5 cm memiliki 5 mahkota kecil. Bunga
berwarna violet, merah rosa, putih (var. albus), putih dengan
bintik merah (var. ocellatus), ungu, kuning pucat. Buahnya
berbentuk silindris, ujung lancip, berbulu, panjang sekitar dengan
panjang folikel 1-4 cm hijau dan berbiji banyak tanpa rambut
gombak. Bijinya mempunyai panjang 1-2mm berbentuk persegi panjang,
hitam, kotiledon datar, endosperm kecil. Panjang akar dapat
mencapai 70 cm (Hariana, 2006)
2.1.3. Kandungan Kimia Tanaman Tapak Dara (Catharanthus roseus
L. G. Don)Dalam daun tapak dara (Catharanthus roseus L. G. Don)
terkandung senyawa fitokimia yakni alkaloid vinka (vinkristin,
vinblastin, dan vinorelbin), flavonoid dan isoflavonoid. Senyawa
yang paling dominan yakni alkaloid vinka yaitu vinkristin,
vinblastin dan vinorelbin. Vinblastine digunakan untuk penderita
Hodgkins disease dan vincristine digunakan untuk anak-anak
penderita leukemia. Dengan digunakannya vincristine, anak-anak
penderita leukimia yang selamat meningkat dari 20% menjadi 80%.
Vincristine, selain dipakai dalam pengobatan leukemia, juga kanker
payudara, dan tumor ganas lainnya. Vinorelbine yang seringkali
digunakan sebagai bahan pengobatan untuk mencegah pembelahan
kelenjar. Zat itu merupakan bahan organik yang mengandung nitrogen.
Sedangkan senyawa lainnya seperti flavonoid memiliki sifat
antioksidan, antidiabetik, antikanker, antiseptik, dan
anti-inflamasi. Kandungan kimia lainnya yang terdapat di daun tapak
dara (Catharanthus roseus L. G. Don) adalah alkoloid turunan,
seperti vendicine dan vinorelbine (Winarsih, 2007)
2.2. Luka2.2.1. Definisi LukaLuka adalah rusaknya
kesatuan/komponen jaringan, dimana secara spesifik terdapat
substansi jaringan yang rusak atau hilang.Ketika luka timbul,
beberapa efek akan muncul: Hilangnya seluruh atau sebagian fungsi
organ, Respon stres simpatis, perdarahan dan pembekuan darah,
kontaminasi bakteri, kematian sel. Keadaan ini dapat disebabkan
oleh trauma benda tajam atau tumpul, perubahan suhu, zat kimia,
ledakan, sengatan listrik, atau gigitan hewan. 2.2.2. Mekanisme
Terjadinya Lukaa. Luka insisi (Incised wounds):Terjadi karena
teriris oleh instrumen yang tajam. Misal yang terjadi akibat
pembedahan. Luka bersih (aseptik) biasanya tertutup oleh sutura
seterah seluruh pembuluh darah yang luka diikat (Ligasi)b. Luka
memar (Contusion Wound):Terjadi akibat benturan oleh suatu tekanan
dan dikarakteristikkan oleh cedera pada jaringan lunak, perdarahan
dan bengkak.c. Luka lecet (Abraded Wound):Terjadi akibat kulit
bergesekan dengan benda lain yang biasanya dengan benda yang tidak
tajam.d. Luka tusuk (Punctured Wound):Terjadi akibat adanya benda,
seperti peluru atau pisau yang masuk kedalam kulit dengan diameter
yang kecil.e. Luka gores (Lacerated Wound):Terjadi akibat benda
yang tajam seperti oleh kaca atau oleh kawat.f. Luka tembus
(Penetrating Wound):Yaitu luka yang menembus organ tubuh biasanya
pada bagian awal luka masuk diameternya kecil tetapi pada bagian
ujung biasanya lukanya akan melebar (Walton. R, 1990)
2.2.3. Klasifikasi Luka2.2.3.1. Klasifikasi luka Menurut tingkat
Kontaminasi terhadap luka :a. Clean Wounds (Luka bersih):Yaitu luka
bedah takterinfeksi yang mana tidak terjadi proses peradangan
(inflamasi) dan infeksi pada sistem pernafasan, pencernaan, genital
dan urinari tidak terjadi. Luka bersih biasanya menghasilkan luka
yang tertutup; jika diperlukan dimasukkan drainase tertutup (misal;
Jackson Pratt). Kemungkinan terjadinya infeksi luka sekitar 1% -
5%.b. Clean-contamined Wounds (Luka bersih
terkontaminasi):Merupakan luka pembedahan dimana saluran respirasi,
pencernaan, genital atau perkemihan dalam kondisi terkontrol,
kontaminasi tidak selalu terjadi, kemungkinan timbulnya infeksi
luka adalah 3% - 11%.c. Contamined Wounds (Luka
terkontaminasi):Termasuk luka terbuka, fresh, luka akibat
kecelakaan dan operasi dengan kerusakan besar dengan teknik aseptik
atau kontaminasi dari saluran cerna; pada kategori ini juga
termasuk insisi akut, inflamasi nonpurulen. Kemungkinan infeksi
luka 10% - 17%.d. Dirty or Infected Wounds (Luka kotor atau
infeksi):Luka kotor adalah luka lama,dimana mengandung jaringan
mati dan terdapat tanda infeksi seperti cairan purulen. Luka ini
bisa sebagai akibat pembedahan yang sangat terkontaminasi. Bentuk
luka seperti perforasi visera, abses dan trauma lama (Rosdahi &
Kowalski, 2008)
2.2.3.2. Berdasarkan kedalaman dan luasnya luka, dibagi menjadi
:a. Stadium I : Luka Superfisial (Non-Blanching Erithema)Yaitu luka
yang terjadi pada lapisan epidermis kulit.b. Stadium II : Luka
Partial Thickness :Yaitu hilangnya lapisan kulit pada lapisan
epidermis dan bagian atas dari dermis. Merupakan luka superficial
dan adanya tanda klinis seperti abrasi, blister atau lubang yang
dangkal.c. Stadium III : Luka Full Thickness :Yaitu hilangnya kulit
keseluruhan meliputi kerusakan atau nekrosis jaringan subkutan yang
dapat meluas sampai bawah tetapi tidak melewati jaringan yang
mendasarinya. Lukanya sampai pada lapisan epidermis, dermis dan
fasia tetapi tidak mengenai otot. Luka timbul secara klinis sebagai
suatu lubang yang dalam dengan atau tanpa merusak jaringan
sekitarnya.d. Stadium IV : Luka Full ThicknessYaitu luka yang telah
mencapai lapisan otot, tendon dan tulang dengan adanya
destruksi/kerusakan yang luas (Black & Hawks, 2005)
2.2.3.3. Menurut waktu penyembuhan, luka dibagi menjadi :a. Luka
akut :Yaitu luka dengan masa penyembuhan sesuai dengan konsep
penyembuhan yang telah disepakati.b. Luka kronis Yaitu luka yang
mengalami kegagalan dalam proses penyembuhan, dapat karena faktor
eksogen dan endogen.
2.2.4. Proses Penyembuhan LukaTubuh secara normal akan berespon
terhadap cedera dengan jalan proses peradangan, yang
dikarakteristikkan dengan lima tanda utama: bengkak (swelling),
kemerahan (redness), panas (heat), Nyeri (pain) dan kerusakan
fungsi (impaired function). Proses penyembuhannya mencakup beberapa
fase :i. Fase InflamasiFase inflamasi adalah adanya respon vaskuler
dan seluler yang terjadi akibat perlukaan yang terjadi pada
jaringan lunak. Tujuan yang hendak dicapai adalah menghentikan
perdarahan dan membersihkan area luka dari benda asing, sel-sel
mati dan bakteri untuk mempersiapkan dimulainya proses penyembuhan.
Pada awal fase ini kerusakan pembuluh darah akan menyebabkan
keluarnya platelet yang berfungsi sebagai hemostasis. Platelet akan
menutupi vaskuler yang terbuka (clot) dan juga mengeluarkan
substansi vasokonstriksi yang mengakibatkan pembuluh darah kapiler
vasokonstriksi (Wim de jong, 2004) Selanjutnya terjadi penempelan
endotel yang akan menutup pembuluh darah. Periode ini berlangsung
5-10 menit dan setelah itu akan terjadi vasodilatasi kapiler akibat
stimulasi saraf sensoris (Local sensory nerve endding), local
reflex action dan adanya substansi vasodilator (histamin,
bradikinin, serotonin dan sitokin). Histamin juga menyebabkan
peningkatan permeabilitas vena, sehingga cairan plasma darah keluar
dari pembuluh darah dan masuk ke daerah luka dan secara klinis
terjadi edema jaringan dan keadaan lingkungan tersebut menjadi
asidosis. Secara klinis fase inflamasi ini ditandai dengan :
eritema, hangat pada kulit, edema dan rasa sakit yang berlangsung
sampai hari ke-3 atau hari ke-4 (Wim de jong, 2004)ii. Fase
ProliferatifProses kegiatan seluler yang penting pada fase ini
adalah memperbaiki dan menyembuhkan luka dan ditandai dengan
proliferasi sel. Peran fibroblas sangat besar pada proses perbaikan
yaitu bertanggung jawab pada persiapan menghasilkan produk struktur
protein yang akan digunakan selama proses reonstruksi jaringan.Pada
jaringan lunak yang normal (tanpa perlukaan), pemaparan sel
fibroblast sangat jarang dan biasanya bersembunyi di matriks
jaringan penunjang. Sesudah terjadi luka, fibroblas akan aktif
bergerak dari jaringan sekitar luka ke dalam daerah luka, kemudian
akan berkembang (proliferasi) serta mengeluarkan beberapa substansi
(kolagen, elastin, hyaluronic acid, fibronectin dan proteoglycans)
yang berperan dalam membangun (rekontruksi) jaringan baru. Fungsi
kolagen yang lebih spesifik adalah membentuk cikal bakal jaringan
baru (connective tissue matrix) dan dengan dikeluarkannya substrat
oleh fibroblas, memberikan pertanda bahwa makrofag, pembuluh darah
baru dan juga fibroblas sebagai kesatuan unit dapat memasuki
kawasan luka. Sejumlah sel dan pembuluh darah baru yang tertanam
didalam jaringan baru tersebut disebut sebagai jaringan granulasi.
Fase proliferasi akan berakhir jika epitel dermis dan lapisan
kolagen telah terbentuk, terlihat proses kontraksi dan akan
dipercepat oleh berbagai growth faktor yang dibentuk oleh makrofag
dan platelet (Wim de jong, 2004)iii. Fase MaturasiFase ini dimulai
pada minggu ke-3 setelah perlukaan dan berakhir sampai kurang lebih
12 bulan. Tujuan dari fase maturasi adalah ; menyempurnakan
terbentuknya jaringan baru menjadi jaringan penyembuhan yang kuat
dan bermutu. Fibroblas sudah mulai meninggalkan jaringan granulasi,
warna kemerahan dari jaringa mulai berkurang karena pembuluh mulai
regresi dan serat fibrin dari kolagen bertambah banyak untuk
memperkuat jaringan parut. Kekuatan dari jaringan parut akan
mencapai puncaknya pada minggu ke-10 setelah perlukaan.Untuk
mencapai penyembuhan yang optimal diperlukan keseimbangan antara
kolagen yang diproduksi dengan yang dipecahkan. Kolagen yang
berlebihan akan terjadi penebalan jaringan parut atau hypertrophic
scar, sebaliknya produksi yang berkurang akan menurunkan kekuatan
jaringan parut dan luka akan selalu terbuka (Wim de jong, 2004)
Luka dikatakan sembuh jika terjadi kontinuitas lapisan kulit dan
kekuatan jaringan parut mampu atau tidak mengganggu untuk melakukan
aktifitas normal. Meskipun proses penyembuhanluka sama bagi setiap
penderita, namun outcome atau hasil yang dicapai sangat tergantung
pada kondisi biologis masing-masing individu, lokasi serta luasnya
luka. Penderita muda dan sehat akan mencapai proses yang cepat
dibandingkan dengan kurang gizi, diserta penyakit sistemik diabetes
mielitus (Wim de jong, 2004)
2.2.5. Faktor Yang Mempengaruhi Penyembuhan Luka1. UsiaSemakin
tua seseorang maka akan menurunkan kemampuan penyembuhan jaringan
yang terjadi akibat menurunnya imun atau daya tahan tubuh
seseorang.2. InfeksiInfeksi tidak hanya menghambat proses
penyembuhan luka tetapi dapat juga menyebabkan kerusakan pada
jaringan sel penunjang, sehingga akan menambah ukuran dari luka itu
sendiri, baik panjang maupun kedalaman luka.3. HipovolemiaKurangnya
volume darah akan mengakibatkan vasokonstriksi dan menurunnya
ketersediaan oksigen dan nutrisi untuk penyembuhan luka.4.
HematomaHematoma merupakan bekuan darah. Seringkali darah pada luka
secara bertahap diabsorbsi oleh tubuh masuk kedalam sirkulasi.
Tetapi jika terdapat bekuan yang besar hal tersebut memerlukan
waktu untuk dapat diabsorbsi tubuh, sehingga menghambat proses
penyembuhan luka.5. Benda asingBenda asing seperti pasir atau
mikroorganisme akan menyebabkan terbentuknya suatu abses sebelum
benda tersebut diangkat. Abses ini timbul dari serum, fibrin,
jaringan sel mati dan lekosit (sel darah merah), yang membentuk
suatu cairan yang kental yang disebut dengan nanah (Pus).
6. IskemiaIskemi merupakan suatu keadaan dimana terdapat
penurunan suplai darah pada bagian tubuh akibat dari obstruksi dari
aliran darah. Hal ini dapat terjadi akibat dari balutan pada luka
terlalu ketat. Dapat juga terjadi akibat faktor internal yaitu
adanya obstruksi pada pembuluh darah itu sendiri.7.
DiabetesHambatan terhadap sekresi insulin akan mengakibatkan
peningkatan gula darah, nutrisi tidak dapat masuk ke dalam sel.
Akibat hal tersebut juga akan terjadi penurunan protein-kalori
tubuh.8. PengobatanSteroid: akan menurunkan mekanisme peradangan
normal tubuh terhadap cederaAntikoagulan: mengakibatkan
perdarahanAntibiotik: efektif diberikan segera sebelum pembedahan
untuk bakteri penyebab kontaminasi yang spesifik. Jika diberikan
setelah luka pembedahan tertutup, tidak akan efektif akibat
koagulasi intravaskular (Perkasa, 2009)
BAB IIIMETODE PENELITIAN
3.1. Jenis dan Rancangan PenelitianPenelitian ini menggunakan
metode eksperimental dengan rancangan Nonequivalent Control Group
Design. Terdapat tiga kelompok penelitian yaitu kelompok
ekperimental, kelompok kontrol positif,dan kelompok kontrol
negatif. Dimana kelompok eksperimental diberikan perlakuan berupa
pemberian ekstrak daun bunga tapak dara, kelompok kontrol positif
diberikan perlakukan berupa pemberian povido iodine, sedangkan
kelompok kontrol negatif tidak diberikan perlakuan.3.2. Waktu dan
Tempat PenelitianPenelitian ini dilaksanakan di Laboratorium
Fakultas Kedokteran Universitas Bengkulu, pada Bulan Maret 2013
sampai Juni 2013
3.3. Sampel dan Besar SampelSampel dari penelitian ini adalah
tikus putih yang dipilih secara acak yang terdiri dari tikus jantan
dan betina dengan berat badan berkisar 200-250 g. Besar sampel
ditentukan dengan rumus menurut Fraenkle and Wallen.
(np - 1) (p - 1) pDi mana : p = jumlah kelompok hewan coba n =
jumlah hewan coba tiap kelompok
(np - 1) (p - 1) p
(n.4 - 1) (4 - 1) 4(4n - 1) 3 16 4n 20 n 5Berdasarkan
perhitungan tersebut sampel minimal yang diperlukan adalah 5 (lima)
ekor tikus putih untuk setiap kelompok perlakuan. Sehingga jumlah
minimal seluruh sampel yang digunakan adalah 20 ekor tikus putih.
Pada penelitian ini, tiap kelompok perlakuan dilebihkan 2 ekor
tikus putih, sehingga jumlah tikus putih yang digunakan 28 ekor
tikus putih.3.4. Kriteria Sampel3.4.1. Kriteria Inklusi Tikus
jantan dengan berat badan 150 200 g, usia 3 bulan3.4.2. Kriteria
Ekslusi Terdapat penyakit penyerta pada sampel Terdapat luka pada
sampel Tikus mati sebelum dilakukan percobaan3.5. Alat dan
Bahan3.5.1. AlatPenelitian ini menggunakan peralatan berupa
surgical blade, gunting, pinset, alat pencukur, erlenmeyer, rotary
evaporator, gelas ukur, lumping dan mortar, corong kaca, labu ukur
100 mL, beker glass, pipet volume 1 mL, dan spuit 1 mL.
3.5.2. BahanBahan yang digunakan adalah Tikus putih jantan, daun
bunga tapak dara (Catharantus roseus L. G. Don), etanol 95%,
alkohol 70% pellet ( pakan standar tikus), povido iodine 10%
(betadin), ketamine 0,3 mg/ekor, dan rompun 1,5 mg/ekor.3.6.
Prosedur Kerja3.6.1. Pembuatan Ekstrak Daun Bunga Tapak Dara
(Catharantus roseus L. G. don)a. Penyediaan SampelSampel yang
digunakan adalah daun bunga tapak dara (Catharantus roseus L. G.
Don) yang didapatkan di daerah Kota Bengkulu. Sampel dibersihkan
dari pengotor dan dihaluskan dengan menggunakan blender sampai
diperoleh serbuk daun bunga tapak dara (Catharantus roseus L. G.
Don) kemudian di keringkan di udara terbuka, setelah kering sampel
ditimbang sebanyak 1 kg.b. Pembuatan EkstrakSerbuk daun bunga tapak
dara (Catharantus roseus L. G. Don) dimaserasi dengan cara sebanyak
1 kg serbuk daun bunga tapak dara (Catharantus roseus L. G. Don)
yang telah dihaluskan dimasukkan dalam erlenmeyer dan ditambahkan
etanol hingga semua serbuk daun sirsak terendam. Lalu, dibiarkan
selama 24 jam kemudian disaring, perlakuan ini dilakukan selama 3
hari berturut-turut. Selanjutnya filtrat yang diperoleh dipisahkan
dari pelarutnya, pelarut diuapkan dengan bantuan rotary evaporator
agar diperoleh ekstrak yang kental.3.6.2. Uji Fitokimiaa. Uji
Alkanoid (Uji Draggendorff)Sebanyak 0,5 gram sampel digerus dengan
mortar kemudian ditambahkan dengan 10 ml kloroform dan beberapa
tetes amoniak. Akan terbentuk dua fase. Fase kloroform kemudian
dipisahkan dan diasamkan dengan H2SO4 sebanyak 10 tetes. Bagian
asamnya dipisahkan dan diuji dengan 3 pereaksi, yaitu pereaksi
Dragendrof, Mayer dan Wagner. Adanya alkaloid ditandai dengan
terbentuknya endapan warna merah dengan penambahan pereaksi
Dragendrof, dengan endapan putih denga pereaksi Mayer, dan endapan
coklat dengan pereaksi Wagner (Robinson, 1995)b. Uji Saponin (Uji
Forth)Sebanyak 0,5 gram sampel ditambahkan air lebih kurang 2 ml.
Setelah dipanaskan selama 5 menit, lau didinginkan. Filtrate
kemudian dikocok selama lebih kurang 5 menit. Busa yang terbentuk
tidak kurang dari 1 cm dan stabil setelah 15 menit menunjukkan
bahwa terdapatnya senyawa saponin (Harborne, 1996)c. Uji Steroid
dan TriterpenoidSebanyak 0,5 gram sampel ditambahkan 25 ml etanol
kemudian dipanaskan dan disaring. Filtratnya diuapkan dan
ditambahkan eter. Lapisan eter direaksikan dengan pereaksi
Liebermann-Buchard (3 tetes asam asetat anhidrat dan 1 tetes H2SO4
pekat). Terbentuknya warna hijau atau biru menunjukkan adanya
steroid dan terbentuknya warna merah atau ungu menunjukkan adanya
triterpenoid (Harborne, 1996)d. Uji FlavonoidSebanyak 0,5 gram
sampel dilarutkan dalam methanol kemudian dipanaskan. Filtrat
kemudian ditambahkan dengan H2SO4 pekat. Terbentuknya warna merah
menunjukkan adanya flavonoid (Harborne, 1996)e. Uji TaninSebanyak
0,5 gram sampel ditambahkan iar lebih kurang 2 ml kemudian
dididihkan dan disaring filtratnya. Filtratnya ditambah dengan
FeCL3 1 % (b/v) terbentuknya warna biru atau hijau kehitaman
menunjukkan adanya senyawa tannin (Harborne, 1996)3.6.3. Pembuatan
Luka pada Mencit dan Perlakua LukaPerlakuan luka dilakukan sesuai
metode morton. Caranya kulit punggung mencit dirontokkan bulunya
kemudian dianestesi dan dibuat luka berbentuk lingkaran diameter 2
cm (area melingkar = 300 mm2) dan kedalaman 0,2 cm dengan cara
mengangkat kulit mencit dengan pinset dan digunting dengan gunting
bedah.Kemudian pada masing-masing kelompok hewan uji yang telah
dibuat luka langsung diberikan perlakuan yaitu dioleskan krim
sebanyak 100 mg/KgBB/hari sesuai dengan kelompoknya dengan
frekuensi 3 x sehari kemudian ditutup dengan kasa dan
plaster.Parameter yang diamati adalah hiperemis (warna),
pembentukan jaringan granulasi, pembentukan krusta, kontraksi dan
epitelisasi setiap harinya pada masing-masing kelompok. Hewan
dinyatakan sembuh ditandai tumbuhnya kulit baru dan tumbuh bulu
disekitar luka. Pembanding yang digunakan pada pengujian efek ini
adalah povidon iodine 10%.3.7. Variabel PenelitianVariabel Bebas :
ekstrak daun bunga tapak dara (Catharantus roseus L. G.
Don)Variabel Terikat : proses penyembuhan luka3.8. Analisis
DataData yang telah diperoleh dari hasil pengamatan parameter
penyembuhan luka dianalisis secara statistic dengan parametric test
yaitu ANAVA satu arah (One way ANOVA). Analisa dilakukan untuk
mengetahui ada atau tidaknya pengaruh perlakuan antara ke-3
perlakuan, jika terdapat perbedaan maka analisis data dilanjutkan
dengan Uji beda rerata pengaruh perlakuan Beda Nyata Terkecil (BNT)
sesuai koefisiensi keragaman (KK). Kesimpulan yang diambil
berdasarkan nilai signifikansi p
