Prenatālo ģenētisko testu perspektīvas

Perspectives in prenatal genetic testing

Prenatālā ģenētiskā testēšana galvenokārt

tiek veikti grūtniecības laikā, lai prognozētu iespējamus, iedzimtus defektus

Galvenais šo testu mērķis ir nodrošināt ģimeņu informētību par reprodukciju, ar to saistītajām ģenētiskajām problēmām un nodrošināt ārstus ar visaptverošāko informāciju, kas palīdzētu sievietēm grūtniecības periodā

https://www.labcorp.com/genetics/prenatal_genetic_testing/index.html

Prenatālais tests

Noteikts prenatālais skrīnings ir pieejams visām grūtniecēm Kopumā visām grūtniecēm tiek piedāvāts mātes seruma skrīnings

Galvenokārt ģenētiskie testi tiek piedāvāti pāriem vai indivīdiem, kas atrodas riska grupā iegūt noteiktas patoloģijas :

Grūtniecēm, kas ir 35 gadus vecas un vecākas Pie abnormāliem ultraskaņas attēliem Pāriem, kas ir tuvi asins radinieki, piemēram, pirmās pakāpes

māsīcas un brālēni Etniskā piederība Neplānoti vai vairāki aborti Ar ģimenes vēsturi, kas ietver pārmantotas slimības, mentālas

saslimšanas Sievietēm, kas slimo ar diabētu Pie pozitīva mātes seruma skrīninga (AFP tetra)

Ir divas testu metodes: skrīnings un diagnostika

https://www.labcorp.com/genetics/prenatal_genetic_testing/index.html

Nevar diagnosticēt iedzimtos defektus, bet tikai determinēt vai auglim ir augsts

vai zems risks uz pētāmo problēmu

Tiek izmantotas grūtnieces asinis, ar mērķi noteikt vai auglim ir iespēja būt ar Dauna sindromu, 18 hromosomas trisomiju un atvērtās nervu caurulītes defektu

Proteīni, ko izdala placenta un bērns, iekļūst mātes asinsritē.

Biežāk noteiktie proteīni ir AFP (alfa-fetoproteīns), HCG (cilvēka horija gonadotropīns) UE3 (nesajauktais estriols) im DIA (dimēru inhibirots A)

Nosakot šo proteīnu līmeni asinīs, iespējams noteikt vai risks sievietei būt bērnam ar kādu no ģenētiskajām saslimšanām

Tomēr šī metode nav diagnostiska, tādēļ pat, ja seruma skrīninga tests ir pozitīvs, kas nozīmē, ka ir paaugstināta iespēja uz ģenētisku saslimšanu, ārsts var izdarīt tālākus izmeklējumus

https://www.labcorp.com/genetics/prenatal_genetic_testing/index.html

Skrīnings

Spēj diagnosticēt noteiktu augļa patoloģiju ar ļoti augstu

precizitāti

CVS - horija bārkstiņu paraugu paņemšana

Aminocentēze – augļa ūdens diagnostiskais tests. Auglim augot, tā šūnas nonāk amnija šķīdumā un var tikt izmantotas hromosomu izmeklējumos.

Visaptverošā ultrasonogrāfija

(http://www.nsgc.org/resourcelink.cfm).

Diagnostika

Pētījums

Tiek vispārīgi runāts par prenatālā ģenētiskā testa devumu mūsdienu sabiedrībai un kā tas uzlabo populācijas veselību

Akcents tiek likts uz FISH un Real-time multiplex PCR amplifikāciju un veidu kā tas samazina rezultātu iegūšanas laiku no 2-3dienām līdz 1-2 dienām, sasniedzot pat dažas stundas!

FISH metode

Cytogeneticists can now go "FISH-ing" for chromosomal abnormalities :)

Izmantojot fluorescentās DNS zondes, 13, 18 ,21, X un Y hromosomas katrā šūnā var tikt izskaitītas

Atšķirībā no parastajām hromosomu analīzēm, kurās nepieciešams, lai šūnas būtu aktīvi augošas, spējīgas dalīties un, kas prasa 7-14 dienas, šī ātrā tehnoloģija var tik izmantota nekultivētām šūnām tieši no amnija šķidruma

Kamēr ne visas hromosomālās anomālijas var tikt identificētas tikai saskaitot specifiskās hromosomas, tomēr lielākoties tādas saslimšanas kā Dauna sindroms (trisomija 21), trisomija 18, trisomija 13, Klinefelter sindroms (47,XXY), triple-X sindroms (47,XXX), Turner sindroms (45,X) un 47,XYY var tikt veiksmīgi atrastas

http://www.nature.com/scitable/topicpage/fluorescence-in-situ-hybridization-fish-327

PCR

Ar polimerāzes ķēdes reakciju var atrast noteiktu DNS fragmentu un to pavairot

Polimerāzes ķēdes reakcijai ir 3 posmi, kas tiek atkārtoti cikliskā veidā.

1. Pirmais posms ir denaturācija - DNS ķēžu atdalīšana. 940C temperatūtā tiek sarautas saites starp bāzu pāriem un izveidojas divas vienpavediena DNS ķēdes

2. Nākamais posms ir praimeru piesaistīšanās vienpavediena DNS. Praimeri ir aptuveni 20 – 30 bāzu gari vienpavediena DNS fragmenti, viens no tiem piesaistās vienai, bet otrs otrai DNS vienpavediena molekulai, tā lai tie katrs no savas puses ietvertu nepieciešamo DNS fragmentu. Praimeru sekvence ir specifiski piemērota, lai piesaistītos noteiktā DNS rajonā. Piesaistīšanās temperatūru parasti izvēlās aptuveni 40 – 600C, tas ir atkarīgs no praimeru garuma un sekvences

3. Trešajā posmā Tag polimerāze sāk komplementāri vienpavediena DNS ķēdei pievienot nukleotīdus, pagarinot praimerus interesējošā fragmenta virzienā. Parasti ķēdes pagarināšanās notiek 720C. Jaunuzsintezētais DNS fragments kalpo kā jauna vieta kur piesaistīties praimeriem

    Pēc trim secīgajiem posmiem no dubutrspiralizētā DNS ir izveidojušās divas dubultspiraliskās DNS, kuru sekvences ir nepieciešamais DNS fragments. Trīs posmu ciklu parasti atkārto 20-30 reizes. Tā vairākos ciklos fragments tiek pavairots ģeometriskajā progresijā un pēc 20 cikliem ir izveidojušās aptuveni miljons fragmenta kopijas, bet pēc 30 – biljons kopiju

http://raksti.daba.lv/referaati/2004/VIgnatovica/metodes.shtml

Real-time multiplex PCR

Ir balstīti uz brīvā fetālā DNS analīzi, kas atrodas grūtnieces asinscirkulācijā

Rezultāti jāiegūst ar ierobežotu fetālā DNS daudzumu,attiecībā pret augsto mātes brīvo DNS

Real-time PCR izmanto fluorescences zondes vai krāsas un tam domātus instrumentus, lai novērotu amplikonu uzkrāšanos, kas veidoti caur PCR attīstību

Real-time PCR var tikt izmantots kvantitatīvai vai kvalitatīvai PCR produktu novērtēšanai un ir ideāli piemērota nukleotīdu secību variāciju(punktveida mutācijas) un gēnu devu maiņas ( lokusa delēcijas vai insercijas/duplikācijas), kas izraisa cilvēka monogēnās saslimšanas, analīzei

Real-time PCR piedāvā veidus ātrākai un potenciāli precīzākai pārbaudei, bez precizitātes apdraudēšanas

Ļauj noteikt heterozigus vai blastomēras, kas var būt bijuši ķļūdaini diagnosticēti par homozigotiem ar parastajām PCR metodēm, kā arī dzimumu, aneoplodiju, DNS pirkstu nospiedumus u.c

http://www.sciencedirect.com/science?_ob=ArticleURL&_udi=B6T9P-4J3NY9J-1&_user=10&_coverDate=06%2F30%2F2006&_rdoc=1&_fmt=high&_orig=gateway&_origin=gateway&_sort=d&_docanchor=&view=c&_searchStrId=1684129449&_rerunOrigin=google&_acct=C000050221&_

version=1&_urlVersion=0&_userid=10&md5=67efa06468870941a715b92bd102680c&searchtype=a

OOH OH

COOH

Fluorescîns (F luorescin)

ON N+

COOH

CH3

CH3

CH3

CH3

Cl-

R odamîns (R hodamine B )

Diagnosticētas hromosomālas patoloģijas Latvijā 2010.gadā

PATOLOĢIJAS 2005.

2006. 2007. 2008. 2009. 2010.

21.HROMOSOMAS TRISOMIJA

9 19 24 15 27 21

18.HROMOSOMAS TRISOMIJA

3 4 4 8 3 3

13.HROMOSOMAS TRISOMIJA

- 2 - 3 1 5

Citas (45,x0; 47,xxx; 47,xyy; 47,xxy; 69,xxx u.c.)hromosomālas patoloģijas

4 9 9 6 15 6

Dati : VSIA „Bērnu klīniskā universitātes slimnīca” Valsts medicīniskās ģenētikas klīnikaPrenatālās diagnostikas nodaļa

Multiplex and Real-Time Quantitative PCR on Fetal DNA in Maternal

Plasma: A Comparison with Fetal Cells Isolated from Maternal BloodSINUHE HAHN, XIAO YAN ZHONG, MARTIN R. BÜRK, CAROLYN TROEGER, WOLFGANG HOLZGREVE Rapid Screening of Multiple ß-Globin Gene Mutations by Real-Time PCR

on the LightCycler: Application to Carrier Screening and Prenatal Diagnosis of Thalassemia Syndromes

Christina Vrettou1,2, Joanne Traeger-Synodinos1, Maria Tzetis1, George Malamis1 and Emmanuel Kanavakis1,a

Rapid Single-Tube Screening of the C282Y Hemochromatosis Mutation by Real-Time Multiplex Allele-specific PCR without Fluorescent Probes

Gerard G. Donohoe1, Maija Laaksonen1, Kari Pulkki1, Tapani Rönnemaa2 and Veli Kairisto1,a

Citi pētījumi

Prenatālās ģenētiskās pārbaudes sniedz informāciju par

iespējamajām augļa/embrija anomālijām

Šīs metodes ir invazīvas, lielākoties izmantojot amnija šķīdumu

Jaunākie mūsdienu atklājumi ir ļāvuši diagnostikas laiku samazināt līdz pat dažām stundām

FISH un Real-time PCR ir prenatālās pārbaudes metodes, kas ļauj izmeklētajai personai (grūtniecei) gūt informāciju par iespējamajām ģenētiskajām saslimšanām

Secinājumi