Slide 1

PERHITUNGAN JUMLAH MIKROBAAnggota :Cahyono Tri Wahyudi (09)Devia Puspitasari (13)Latifah Istiqomah (26)

KELOMPOK KUDAPENDAHULUANJumlah mikroba pada suatu bahan dapat dihitung dengan berbagai macam cara, tergantung pada bahan dan jenis mikrobanya. Ada 2 macam cara perhitungan jumlah mikroba/bakteri, yaitu :Perhitungan secara langsung (direct method)Perhitungan secara tidak langsung (indirect method)

PERHITUNGAN SECARA LANGSUNGMenggunakan Kamar Hitung (Counting Chamber)Menggunakan Cara Pengecatan dan Pengamatan MikroskopikMenggunakan Filter Membran

1. Menggunakan Kamar HitungPerhitungan ini dapat menggunakan hemositometer, Peteroff Hauser Bacteria Counter atau alat-alat lain yang sejenis.Dasar perhitungannya ialah dengan menempatkan satu tetes suspensi bahan pada alat tersebut ditutup dengan gelas penutup kemudian diamati dengan mikroskop yang perbesarannya tergantung pada besar kecilnya mikroba.

1. Menggunakan Kamar Hitung1. Jumlah luas LP = Luas Preparat Luas LP2. Jumlah sel/preparat = Jml LP x rata2 jml sel per LP3. Jml sel/ ml = Jml sel preparat vol

CONTOHLuas Preparat : 5.000 mikrometer2Luas LP : 10 mikrometer2Volume sampel/preparat : 0,1 mlJml sel rata-rata /LP :15Jml bakteri/ml sampel: ???

JAWABAN a. Jumlah luas LP = Luas Preparat = 5.000 = 500 Luas LP 10 b. Jumlah sel/preparat = Jml LP x rata2 jml sel per LP = 30 x 500 = 15.000 c. Jml sel/ ml = Jml sel = 25.000 =250.000 sel preparat vol 0,1

2. Menggunakan Cara Pengecatan dan Pengamatan MikroskopikMencampurkan 1 cc biakan bakteri dengan 1 cc darah manusiaSetelah homogen dibuat preparat mikroskopikHitung jumlah rata-rata sel bakteri dan sel darah merah NB : Darah manusia normal 5juta sel erytrosit per l darah

Contoh Rata-rata sel 1 LP = 5 erytrosit : 2 sel bakteri1 l darah = 5 juta sel erytrositJumlah sel bakteri?

Jumlah sel bakteri = 2 x 5.000.000 = 2.000.000 sel

3. Menggunakan Filter MembranSaring sejumlah volume tertentu suatu suspensi bahan.Lalu disaring dengan filter membran yang telah disterilkan terlebih dahulu.Lakukan pengecatan.Menghitung jumlah sel rata-rata tiap satuan luas pada filter membran.

SECARA TIDAK LANGSUNG1. Menggunakan Centrifuge 2. Berdasarkan kekeruhan (turbiditas/turbidimetri)3. Menggunakan Perhitungan Elektronik (Elektronic Counter)4. Berdasarkan Analisa Kimia5. Berdasarkan Berat Kering6. Menggunakan Cara Pengenceran7. Menggunakan Cara Most Probable Number (MPN)8. Menghitung Dengan Metode Cawan9. Berdasarkan Jumlah Koloni

131. Menggunakan centrifunge10 cc biakan cair mikroba dipusing kecepatan 3500-6000 rpm dan dengan waktu 5-10 menit, Ditutup kapas.Hitung volume mikroba seluruhnya.Dapat digunakan untuk mengetahui jumlah-jumlah mikroba tiap cc

2. Berdasarkan kekeruhan (turbiditas/turbidimetri)Bakteri menyerap cahaya sebanding dengan volume total sel (ditentukan oleh ukuran dan jumlah).Dasar penentuan cara ini adalah jika seberkas sinar dilakukan pada suatu suspensi bakteri, maka makin pekat (keruh) suspensi tersebut makin besar intensitas sinar yang diabsorbsi, sehingga intensitas sinar yang diteruskan makin kecil.

3. Menggunakan Perhitungan Elektronik (Elektronic Counter)Alat ini dapat digunakan untuk menentukan beribu-ribu sel tiap detik secara tepat.Prinsip kerja alat ini yaitu adanya gangguan-gangguan pada aliran ion-ion (listrik) yang bergerak diantara dua electrode. LANJUTANPenyumbatan sementara oleh sel mikroba pada pori sekat yang terdapat diantara kedua electrode itu menyebabkan terputusnya aliran listrik. Jumlah pemutusan aliran tiap satuan waktu dihubungkan dengan kecepatan aliran cairan yang mengandung mikroba merupakan ukuran jumlah mikroba dalam cairan tersebut.

4. Berdasarkan Analisa KimiaCara ini didasarkan atas hasil analisa kimia sel-sel mikrobaYang dipakai sebagai dasar penentuan umumnya kandungan protein, asam-asam nukleat (DNA dan RNA) atau fosfor dari asam-asam nukleat

5. Berdasarkan Berat KeringCara ini terutama digunakan untuk penentuan jumlah jamur benang misalnya dalam industri mikrobiologi.Kenaikan berat kering suatu mikrobia sama dengan kenaikan sintesa dan volume sel-sel.

6. Menggunakan Cara PengenceranDasar perhitungannya adalah dengan mengencerkan sejumlah volume tertentu suatu suspense bahan atau biakan mikroba secara bertingkat, setelah diinokulasikan ke dalam medium dan diinkubasikan, dilihat pertumbuhan mikrobanya

20

Perhitungan 1.Jika didapat jumlah koloni ideal antara 30 - 300 :Jumlah koloni pada pengenceran terkecil dan jumlah koloni pada pengenceran terbesar dibuat perbandingan, jika hasil:< 2 jumlah koloni pada pengenceran terkecil dikali pengencerannya dan jumlah koloni pada pengenceran terbesar dikali pengencerannya dibagi 2>2 jumlah koloni pada pengenceran terbesar dikali pengencerannya2.Jika didapat jumlah koloni kurang dari 30 :Jumlah koloni pada pengenceran terkecil dikali pengencerannya3.Jika didapat jumlah koloni lebih dari 300 Jumlah koloni pada pengenceran terbesar dikali pengencerannya

7. Menggunakan Cara MPNPrinsip metode ini adalah menggunakan media cair di dalam tabung reaksi dan menggunakan tabung durham (untuk melihat gas).Metode MPN ini umumnya digunakan untuk menghitung jumlah bakteri pada air khususnya untuk mendeteksi adanya bakteri koliform yang merupakan kontaminan utama sumber air minum, dengan 3-5 seri tabung.

Tahap Uji MPN ColiformTahap 1: Uji pendahuluan (presumtif)Sampel ditumbuhkan pada seri tabung sebanyak 3 atau 5 buah tabung untuk setiap kelompok. Apabila dipakai 3 tabung maka disebut seri 3, dan jika dipakai 5 tabung maka disebut 5 seri. Media pada tabung adalah Lactose Broth yang diberi indikator perubahan pH dan ditambah tabung durham. Pemberian sampel pada tiap seri tabung berbeda-beda. Untuk sampel sebanyak 10 ml ditumbuhkan pada media LBDS (Lactose Broth Double Stegth) Lanjutan...Untuk sampel 1 ml dan 0,1 ml dimasukkan pada media LBSS (Lactose Broth Single Stegth)Berdasar sifat coliform, maka bakteri ini dapat memfermentasikan laktosa menjadi asam dan gas yang dideteksi oleh berubahnya warna dan gas dalam tabung durham. Nilai MPN ditentukan dengan kombinasi jumlah tabung positif (asam dan gas) tiap serinya setelah diinkubasi.

Tahap Uji MPN ColiformTahap 2: Uji penegasan (konfirmasi untuk bakteri non fekal dan fekal)Untuk bakteri non fekal (contoh: Enterobacter aeroginas), suspensi yang positif dari uji presumtif ditanam pada media BGLB (Briliant Green Lactosa Bile Broth), diinkubasi pada suhu 36C selama 24 jam, sedangkan untuk bakteri fekal (contoh: Escherichia coli) diinkubasi pada suhu 44,5C selama 24 jam.

Tahap Uji MPN ColiformTahap 3: Uji lengkap (Complete Test)Yaitu dengan menggunakan media spesifik, misalnya dengan media endo agar (untuk Enterobacter aerogenes) dan eosin metilen blue (untuk Escherichia coli) serta media uji biokimia (untuk menentukan spesies bakteri)CARA MENGHITUNG

didapatkan kombinasi jumlah tabung positif : 321 maka jumlah bakteri coliform adalah 150 sel/100 ml.BGLB8. Menghitung Dengan Metode Cawan

Prinsip metode ini adalah sel mikroba yang masih hidup ditumbuhkan pada media agar padat, maka sel mikroba tersebut akan berkembang biak dan membentuk koloni yang dapat dilihat langsung dengan mata tanpa mikroskopMetode cawan ada dua cara:1. metode tuang2. metode pengusapan

9. Berdasarkan Jumlah KoloniDasarnya adalah membuat suatu seri pengenceran bahan dengan kelipatan 10 dari masing-masing pengenceran diambil 1 cc dan dibuat taburan dalam Petridis (pour plate) dengan medium agar yang macam dan caranya tergantung pada macamnya mikroba.

Contoh Rumus :Jumlah koloni di plate x pengenceran sampel = jumlah bakteri / ml.Contoh :jika adalah 32 koloni di plate pengenceran 1/10.000, maka hitung jumlah bakteri per ml sampel?Jmlh bakteri/ ml32 x 10000 = 320000/mlspl.

SOAL1.Diketahui : Luas Preparat : 10.000 mikrometer2Luas LP : 10 mikrometer2Volume sampel/preparat : 0,1 mlJml sel rata-rata /LP : 25Jml bakteri/ml sampel: ???SOAL2. Sebutkan tahapan dan media yang digunakan pada perhitungan jumlah bakteri metode MPN Coliform!3. Sebutkan macam-macam perhitungan bakteri secara :a. Directb. Indirect JAWABAN1. a. Jumlah luas LP = Luas Preparat = 10.000 = 1000 Luas LP10 b. Jumlah sel/preparat = Jml LP x rata2 jml sel per LP = 25 x 1000 = 25.000 c. Jml sel/ ml = Jml sel = 25.000 = 250.000 sel preparat vol0,1

JAWABAN2.a. Uji pendahuluan LBD dan LBSb. Uji penegasan BGLBc. Uji pelengkap ENDO, MC, media uji biokimiaTERIMAKASIH