Upload
bobirsan
View
443
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
PENELITIAN FORENSIK TENTANG PENENTUAN JENIS KELAMIN
MENGGUNAKAN PCR PADA SAMPEL GIGI
Abstrak
Dalam studi ini, penentuan jenis kelamin menggunakan polymerase chain reaction (PCR)
pada material gigi adalah ditinjau dari sudut pandang kedokteran forensik. Sensitivitas PCR
untuk deteksi Kromosom Y-spesifik urutan alphoid ulangi dan ulangi alphoid kromosom X-
spesifik urutan adalah 0,5 pg DNA genom. Seks dapat ditentukan dengan PCR DNA
diekstraksi dari pulp dari 16 baru diekstraksi gigi permanen dan dentin termasuk permukaan
bubur kertas rongga 6 segar diekstraksi gigi susu. Seks dapat ditentukan dengan
menggunakan pulp di semua 20 gigi (10 laki-laki dan 10 perempuan) disimpan pada suhu
kamar selama 22 tahun. Untuk pulp dari gigi disimpan dalam air laut, seks dapat ditentukan
di seluruh 8 gigi direndam selama 1 minggu dan pada 5 dari 6 gigi direndam selama 4
minggu. Di gigi 1 yang tersisa, di mana penentuan jenis kelamin berdasarkan bubur kertas
gagal, seks dapat ditentukan benar saat DNA yang diekstraksi dari jaringan keras gigi adalah
diperiksa. Untuk gigi disimpan dalam tanah, jenis kelamin dapat ditentukan secara akurat
dalam semua 8 gigi dimakamkan selama 1 minggu, 7 dari 8 gigi terkubur selama 4 minggu,
dan di semua 6 gigi terkubur selama 8 minggu. Ketika gigi dipanaskan selama 30 menit,
penentuan seks dari pulp itu dilakukan di semua gigi dipanaskan sampai 100, 150, dan 200
derajat C, dan bahkan dalam beberapa gigi dipanaskan hingga 250 derajat C. Ketika metode
ini adalah diterapkan untuk kasus-kasus forensik aktual, jenis kelamin tubuh mumi
diperkirakan telah ditemukan setengah tahun ke 1 tahun setelah kematian bisa ditentukan
mudah dengan pemeriksaan dari pulp gigi. Dalam kerangka dari 2 badan ditempatkan di
bawah air selama kurang lebih 1 tahun dan sekitar 11 tahun dan 7 bulan, jaringan pulp telah
larut dan hilang, tetapi penentuan seks itu mungkin DNA menggunakan diekstraksi dari
jaringan gigi yang keras. Hasil ini menunjukkan bahwa metode ini bermanfaat dalam
praktek forensik untuk menentukan jenis kelamin berdasarkan sampel gigi.
KATA KUNCI: identifikasi pribadi, penentuan jenis kelamin, gigi, asam deoksiribonukleat
(DNA). Polymerase Chain Reaction
PENELITIAN FORENSIK TENTANG PENENTUAN JENIS KELAMIN
MENGGUNAKAN PCR PADA SAMPEL GIGI
Penetuan jenis kelamin adalah tahap pertaman dalam pengidentifikasian kedokteran
forensik. Pada umumnya, pengidentifikasian jenis kelamin pada seseorang dapat ditentukan
berdasarkan karakteristik anatomi genital eksternal atau apakah dari sel telur ataupun testis.
Namun, tulang dan gigi adalah bahan yang tersedia hanya untuk menentukan jenis kelamin di
dalam tubuh nyata busuk atau skeletonized. Jenis kelamin tubuh orang dewasa skeletonized
digunakan akan ditentukan berdasarkan karakteristik anatomi panggul dan tengkorak dan data
antropometrik. dengan metode ini, bagaimanapun, penentuan seks dianggap sulit dalam tubuh
pra-remaja, di mana seks karakteristik kerangka belum cukup berkembang. penentuan seks
sitologi uxing kromatin X dan Y telah attemped (1,2) tapi metode ini didasarkan pada asumsi
bahwa inti sel belum hancur yang limitatif efektif untuk menentukan jenis kelamin
menggunakan bahan forensik pulih dari kondisi lingkungan yang beragam.
baru-baru ini, dengan kemajuan dalam teknik analisis gen, metode untuk menentukan jenis
kelamin X dan Y menggunakan analisis kromosom DNA telah dikembangkan, dan
penyelidikan mengenai aplikasi forensik mereka telah dilakukan (3-10).
Diantara metode ini, metode untuk amplifikasi urutan kromosom Y mengulang-
spesifik alphoid centrometric (DYZ3) dengan polymerase chain reaction (PCR) melaporkan
pada tahun 1989 oleh Witt dan Erickson (11), yang dapat mendeteksi kromosom X urutan
mengulang-spesifik alphoid centrometric ( DXZ1) serta DYZ3, dianggap untuk memberikan
penentuan seks lebih akurat berdasarkan hasil pemeriksaan 2 urutan. kami sebelumnya
dilakukan verifikasi primer, dapat meningkatkan sensitivitas terhadap Y dan urutan
kromosom X-spesifik ke tingkat praktis untuk penggunaan forensik (9,12).
Dalam penelitian ini, kami menguji kromosom Y dan X-spesifik urutan ulangi alphoid
centrometric menggunakan metode diubah pada gigi tunggal dan eksperimental dievaluasi
kegunaannya untuk menentukan jenis kelamin dalam kedokteran forensik. kami juga
dikonfirmasi kegunaannya dengan mengaplikasikannya pada kasus forensik aktual
Materi dan Metode Bahan.
Materi. Gigi normal dan sedikit membusuk (65 laki-laki dan 65 perempuan) diambil dari 64
laki-laki dan 65 subyek perempuan untuk perawatan gigi digunakan sebagai bahan.
DNA yang telah diekstrak dari gigi prserved dalam keadaan kering pada suhu kamar
dari 3 bulan sampai 22 tahun, DNA diekstraksi dari pulp atau dentin termasuk permukaan
rongga pulp dari gigi direndam dalam air laut dalam ember plastik untuk maksimal 4 minggu,
dan gigi burid dalam tanah pada kedalaman 30 cm untuk maksimal 8 minggu, dan DNA
diekstraksi dari pulp dari gigi dipanaskan pada 100C ke 300C selama 30 menit diperiksa
dengan PCR, berikut ini yang menentukan jenis kelamin adalah attemped. penentuan seks
juga attemped menggunakan DNA diekstraksi dari pulp atau jaringan keras gigi dalam
beberapa kasus aktual.
Ekstraksi DNA dari gigi. DNA diekstraksi dari pulp gigi dengan memecah-belah gigi
menggunakan pemotong gigi atau palu, mengumpulkan ampas dari pulp rongga terbuka,
perawatan dengan SDS-proteinase K, ekstraksi DNA dengan fenol-kloroform, dan
pengendapan dengan isopropanol. DNA diekstraksi dari jaringan keras gigi dengan
memecah-belah dan kemudian penghancuran dalam mortir, decalcifying gigi bubuk dengan
0,5 M EDTA (pH 8,0) selama 2-4 hari, memperlakukan dengan SDS-proteanase K, ekstraksi
DNA dengan phenolform, dan pengendapan dengan isopropanol. DNA yang dikumpulkan
dilarutkan dalam buffer TE (10mm tris-HCl, 1 mM EDTA pH 8,0) dan disimpan di 4C atau-
20C sampai digunakan.
PCR. Amplifikasi dari urutan ulang 172 base-pasangan kromosom-Y spesifik alphoid
dan X urutan 131-base-pasangan kromosom- X spesifik ulang alphoid dengan PCR dilakukan
pada dasarnya seperti yang dijelaskan sebelumnya (9). Secara singkat, PCR dilakukan dalam
tabung 500l menggunakan 30l dari volume campuran reaksi. komposisi buffer PCR adalah 10
mM tris-HCl pH 8,3, 50mM KCl, MgCl2 1.5mm, masing-masing 100M dNTP, 200 g / ml
serum albumin sapi, 1 unit ampliTaq Emas DNA polimerase (Perkin Elmer, kota asuh, CA,
USA), masing-masing 0.5m Y11 (ATGATAGAAACGGAAATATG) dan
(AGTAGAATGCAAAGGGCTC) Y22 primer atau X1 (AATCATCAAATGGAGATTTG)
dan (GTTCAGCTCTGTGAGTGAAA) X2 primer, dan 1l sampel, berlapis oleh sekitar 50L
minyak mineral dalam tabung masing-masing. siklus pemanasan dari PCR pemanasan pada
95C selama 30 menit dan siklus pemanasan 35 (94C selama 40 detik, 55C untuk 40seconds
dan 72C selama 40 detik) menggunakan PC-700 (Astec, Fukuoka, Jepang)
Elektroforesis dan penentuan seks. Produk PCR dalam gel dielektroforesis poliakrilamid
5% pada 200 V selama 1 jam, bromida pewarnaan dilakukan dan diperkuat band urutan Y
dan X-spesifik diamati di bawah sinar UV. Jenis kelamin subjek dianggap laki-laki ketika
kedua Y-dan urutan X-spesifik yang terdeteksi, namun wanita ketika hanya urutan X-spesifik
terdeteksi.
Sensitivitas deteksi X Y dan urutan tertentu dengan PCR. konsentrasi DNA diekstrak
dari limfosit dari 2 laki-laki dan 2 perempuan ditentukan menggunakan GeneQuant II
(Amersham Pharmacia Biotech, Cambridge, Inggris) secara spektrofotometri serapan, ini
sampel diencerkan dengan konsentrasi DNA dari 10n / l menjadi 0,1 pg / l, dan Y-dan X-
spesifik urutan terdeteksi dengan metode PCR.
Hasil
Dasar evaluasi penentuan seks dengan PCR DNA dari gigi.
Tabel 1 dan Gambar 1. menunjukkan hasil evaluasi tingkat deteksi Y dan kromosom
X urutan spesifik dari jumlah jejak DNA. Y dan kromosom X urutan khusus dalam sampel
laki-laki, dan kromosom X urutan spesifik pada sampel wanita dapat dideteksi dalam jumlah
DNA dari 5,0 pg.
Tabel 2 menunjukkan hasil penentuan seks dengan PCR pada DNA diekstraksi dari
pulpa dikumpulkan gigi dari gigi permanen baru diekstrak dan yang diekstrak dari dentin
termasuk permukaan rongga pulp dari gigi susu yang baru diekstrak. penentuan seks
memungkinkan terjadinya pengunaan di semua diperiksa 22 gigi (16 permanen dan 6 gigi
susu)
Tabel 3 menunjukkan hasil penentuan seks menggunakan pulp dikumpulkan gigi dari
gigi disimpan dalam keadaan kering pada suhu kamar. seks itu bisa ditentukan dengan benar
di semua gigi disimpan pada suhu kamar selama 3 bulan, 6 bulan, 1 tahun, dan 5 tahun (4
jantan dan 4 gigi perempuan pada setiap titik waktu). seks juga dapat ditentukan pada 20 gigi
(10 pria dan 10 gigi perempuan) disimpan pada suhu kamar selama 22 tahun. Gambar 2
menunjukkan electropherograms dari 2 laki-laki dan 2 perempuan gigi disimpan pada suhu
kamar selama 22 tahun.
Ketika penentuan seks dicoba menggunakan pulp gigi gigi direndam dalam air laut,
seks dapat ditentukan di seluruh 8 gigi direndam selama 1 minggu dan 5 dari 6 gigi direndam
selama 4 minggu (Tabel 4). Di gigi 1 di mana untuk menentukan jenis kelamin tidak benar,
band diperkuat dari urutan kromosom Y-spesifik tidak terdeteksi (sampel Nomor 4 pada
gambar 3) meskipun sampel laki-laki. Namun, urutan kromosom Y dan X-spesifik dapat
dideteksi dengan menggunakan metode yang sama pada DNA yang diekstraksi dari jaringan
keras gigi dan DNA diekstraksi dari darah dari donor yang sama (gambar 4), yang
memungkinkan penentuan seks yang benar.
Untuk gigi yang terkubur di tanah pada kedalaman 30 cm, jenis kelamin dapat
ditentukan di seluruh 8 gigi terkubur selama 1 minggu, 7 dari 8 gigi terkubur selama
berminggu-minggu, dan 6 gigi terkubur selama 8 minggu (Tabel 5). Gambar 5 menunjukkan
electropherograms dari 2 laki-laki dan 2 gigi perempuan. Sangat band yang jelas yang
ditunjukkan dengan metode ini bahkan dalam sampel disimpan di bawah kondisi ini. Di gigi
1 laki-laki terkubur di dalam tanah selama 4 minggu di mana penentuan jenis kelamin tidak
benar, penentuan seks itu mungkin menggunakan DNA yang diekstraksi dari jaringan keras.
untuk gigi dipanaskan dalam tanur listrik selama 30 menit, seks dapat ditentukan dalam 2
laki-laki dan 2 perempuan masing-masing gigi dipanaskan pada 100, 150, dan 200C, dan
penentuan seks adalah mungkin dalam beberapa gigi dipanaskan pada suhu 250C selama 30
menit, walaupun band amplifikasi yang sangat samar (Tabel 6)
Penentuan Seks dalam Kasus-Kasus Aktual
Kasus 1: penentuan jenis kelamin tubuh mumi dan skeletonized. Gambar 6
menunjukkan tubuh skeletonized ditemukan di rumah di sebuah kota Okayama Preferecture,
bagian barat Jepang, pada Mei 1992. Jenazah itu diperkirakan telah ditemukan antara
setengah tahun dengan 1 tahun setelah kematian dan hampir benar-benar skeletonized dengan
terurai jaringan lunak mumi yang hanya sebagian tersisa di belakang. Fitur anatomi dari
kedua organ seks eksternal dan internal benar-benar dihapuskan.
Pada otopsi, jenis kelamin tubuh diperkirakan perempuan dari ciri-ciri anatomi dari
tengkorak dan panggul dan nilai-nilai antropometrik, dan umur untuk menjadi 40-50 tahun,
tetapi penentuan seks telah berusaha dengan menggunakan metode PCR terhadap pulpa gigi
dari 2 gigi untuk konfirmasi. Seperti yang ditunjukkan pada gambar 7, hanya urutan
kromosom X-spesifik diamplifikasi di kedua gigi, dan jenis kelamin mayat itu dinilai
perempuan.
Menurut penyelidikan polisi, seorang saudara 46 tahun dan seorang saudara
perempuan 39 tahun, keduanya memiliki kelainan jiwa, tinggal di rumah di mana tubuh itu
ditemukan, tetapi adik telah hilang selama 10 bulan. Meskipun konfirmasi oleh saudara itu
immpossible karena gangguan kejiwaan itu, polisi yakin bahwa tubuh itu adalah adiknya.
Temuan otopsi dan hasil penentuan seks dengan PCR setuju dengan pendapat ini.
Kasus 2: penentuan jenis kelamin tengkorak skeletonized direndam dalam air selama
1 tahun setelah kematian. Gambar 8 menunjukkan tengkorak ditemukan di sebuah saluran
irigasi di Prefektur Okayama pada bulan Agustus 1997. Tengkorak ini diperkirakan telah di
kanal selama sekitar 1 tahun setelah kematian, dan jaringan lunak benar-benar hilang kecuali
bahwa bahan lumpur seperti dianggap sebagai otak busuk diamati dalam tempurung kepala.
pemeriksaan anatomi menyarankan bahwa tubuh itu mungkin telah menjadi laki-laki berusia
30-50 tahun.
Penentuan jenis kelamin dengan menggunakan PCR dicoba menggunakan 2 geraham
di antara gigi yang tersisa di rahang atas tempurung kepala. Karena pulp ini sudah terurai,
DNA diekstraksi dari jaringan keras gigi diperiksa. Seperti ditunjukkan dalam gambar 9, baik
X dan urutan kromosom Y-spesifik diamplifikasi dari 2 gigi, dan jenis kelamin tubuh dinilai
telah laki-laki.
Kasus 3: seks penentuan badan skeletonized adipoceratous direndam dalam air selama
11 tahun dan 7 bulan setelah kematian. penentuan Seks attemped dalam tubuh skeletonized
adipoceratous direndam dalam air selama 11 tahun dan 7 bulan setelah menggunakan
kematian gigi dan jaringan lunak adipoceratous. Badan itu skeletonized di kursi pengemudi
mobil ditemukan di dasar kolam di prefektur Okayama barat selama kekeringan pada tahun
1994. Pada penemuan, sebagian besar tubuh dilaporkan telah terkubur dalam lumpur di dasar
kolam. Seperti ditunjukkan dalam gambar 10, tubuh hampir skeletonized dengan jaringan
lunak adipoceratous tersisa hanya di perut, pinggul, dan lutut bilateral. nekropsi temuan
menunjukkan bahwa tubuh adalah laki-laki usia 50-55 tahun. Juga, berdasarkan mobil di
mana mayat itu ditemukan, piyama dikenakan oleh tubuh, dan barang, termasuk kartu kredit
pompa bensin, tubuh diperkirakan menjadi laki-laki 55-tahun yang meninggalkan rumahnya
di mobilnya dalam piyama pada bulan Januari 1983 dan sejak itu hilang.
Penentuan jenis kelamin tubuh ini skeletonized dicoba dengan PCR. Seperti
ditunjukkan dalam gambar 11, baik X dan urutan kromosom Y-specifc diamplifikasi dalam
sampel termasuk jaringan keras gigi, dan tubuh itu dinilai laki-laki.
Diskusi
Seks penentuan menggunakan gigi adalah penting dalam tubuh nyata busuk atau
skeletonized. enamel gigi adalah jaringan tersulit dari tubuh manusia, dan gigi tetap lama
setelah kematian. Untuk alasan ini, banyak penelitian untuk menentukan jenis kelamin
individu menurut perbedaan seksual dalam morfometri anatomi gigi (perempuan> laki-laki)
telah dilakukan (13-20). Namun, seks perbedaan nilai morfometrik gigi tidak berbeda kecuali
pada gigi taring, dan penentuan seks dari sebuah gigi tunggal acak sangat sulit. Tidak ada
metode penentuan diandalkan seks di gigi tunggal terlepas dari apakah itu bersifat permanen
atau susu atau apakah itu sebuah gigi seri, taring, atau molar.
Baru-baru ini, dengan perkembangan analisis DNA, penentuan jenis kelamin
berdasarkan analisis DNA kromosom Y menjadi mungkin, tetapi uji menggunakan analisis
blot Southern membutuhkan jumlah yang relatif besar berat molekul tinggi (HMW) DNA
sehingga tidak sangat berlaku untuk menentukan jenis kelamin dari gigi tubuh busuk atau
skeletonized. Metode untuk menentukan jenis kelamin menggunakan PCR kemudian
dikembangkan, dan aplikasi untuk kedokteran forensik telah dievaluasi (8-10)
Pada tahun 1989, Witt dan Erickson (11) melaporkan suatu metode untuk
memperkuat ulangi urutan tertentu alphoid centrometric oleh PCR dan untuk menentukan
jenis kelamin berdasarkan noda darah. Metode ini diharapkan dapat memungkinkan
penentuan seks lebih akurat karena urutan kromosom X ulangi spesifik alphoid dapat
dideteksi bersama dengan mengulangi urutan kromosom Y-spesifik. Namun, ketika kami
melakukan PCR sesuai untuk memungkinkan deteksi dalam waktu kurang dari 100 pg DNA.
Namun, beberapa ratus nanogram DNA neede untuk mendeteksi urutan kromosom Y-
spesifik, yang menunjukkan perbedaan luas dalam sensitivitas selama 2 urutan, dan kepekaan
untuk urutan kromosom Y-spesifik tidak cukup untuk penggunaan praktis. Kami dievaluasi
lebih lanjut metode dan berhasil meningkatkan sensitivitas untuk kedua Y dan X urutan
chromoosome khusus untuk sekitar 5pg DNA (sekitar 0,0002 l sebagai keseluruhan darah)
oleh sebagian memodifikasi urutan dari oligonukleotida primer untuk amplifikasi urutan Y-
spesifik ( 9). Kami mencoba untuk menentukan jenis kelamin menggunakan metode
menggunakan bahan-bahan forensik berbagai dengan resluts baik (9,12).
Sebelum kita menggunakan metode untuk menentukan jenis kelamin dari gigi, kita
memeriksa batas-batas deteksi dari Y dan urutan kromosom X-spesifik dengan metode ini
dengan sedikit modifikasi dari protokol sebelumnya (9) dalam DNA diekstraksi dari limfosit.
Akibatnya sensitivitas metode ini sangat tinggi menunjukkan, dengan batas deteksi urutan
kedua menjadi 0,5 pg DNA. Hanaoka et al. (21) juga telah melaporkan penentuan seks
berdasarkan gigi dengan menggunakan metode Witt dan Erickson (11). Namun, mereka
menggunakan primer yang sama dijelaskan dalam metode asli (11), sehingga nilai-nilai Tm
primer untuk amplifikasi urutan Y-spesifik discrepant satu sama lain dan sensitivitasnya tidak
setinggi metode kami. Jadi, ketika sampel DNA menit dan / atau rusak diuji, metode mereka
dianggap cenderung Gove hasil negatif palsu tentang urutan Y-spesifik bahkan dalam
spesimen laki-laki. analisis DNA gigi untuk penentuan seks harus bisa dilakukan dalam tubuh
seperti badan nyata busuk atau skeletonized yang tidak memberikan bahan lainnya. Dalam
badan tersebut, DNA gigi dianggap cukup terurai dan terfragmentasi. Oleh karena itu, suatu
metode yang sangat sensitif seperti metode kita sekarang dianggap cocok untuk menentukan
jenis kelamin menggunakan DNA dari gigi. Y dan kromosom X urutan spesifik ulangi
alphoid, yang kami diperiksa dalam penelitian ini, adalah 100 dan diulang beberapa ribu kali
per genom (22,23), masing-masing, dan dapat diamplifikasi dengan PCR jika bagian dari
salinan ini tetap utuh. Oleh karena itu, metode ini lebih menguntungkan berkaitan dengan
sensitivitas daripada metode menggunakan salinan urutan basa (10,24,25). Di antara urutan
basa salinan, X_Y sekuens gen homolog amelogenin telah terdeteksi untuk menentukan jenis
kelamin dari spesimen forensik karena produk X-spesifik dapat bertindak sebagai kontrol
internal untuk PCR (26,27). Namun, metode amelogenin gen itu tidak sensitif sebagai metode
kami untuk mendeteksi urutan multicopy alpha-satelit. Selanjutnya, urutan salinan tunggal
terkadang tidak diperkuat dari DNA menit seperti template seperti dalam beberapa sel karena
template dikeluarkan ke dalam tabung arection tidak mungkin secara kebetulan berisi urutan.
Sedangkan dalam metode kami, urutan sasaran dapat dideteksi dengan mudah dari seperti
jumlah menit DNA template, dan karena kepekaan deteksi urutan Y-spesifik disesuaikan agar
sesuai atau lebih tinggi dari urutan X-spesifik pada tujuan, kami metode dapat memberikan
hasil yang handal bahkan ketika sampel DNA menit dekat dengan batas deteksi, sekitar 1 pg
DNA, diperiksa.
Penentuan seks itu mungkin dengan menggunakan metode ini pada DNA diekstraksi
dari pulp dari gigi tetap segar diekstraksi terlepas dari jenis gigi. Sejak pulp tidak dapat
diperoleh dari gigi susu yang baru diekstrak, penentuan seks dilakukan dengan metode PCR
menggunakan DNA diekstraksi dari dentin termasuk permukaan rongga pulp, tetapi seks
dapat ditentukan dengan benar di semua gigi. Penentuan seks gigi susu menggunakan
prectically mungkin telah menggunakan metode morfometrik konvensional. Dengan analisis
DNA, bagaimanapun, penentuan seks dapat dilakukan dengan mudah pada gigi susu maupun
gigi permanen.
Telah dilaporkan bahwa DNA dari pulp gigi gigi diekstraksi diawetkan pada suhu
kamar yang stabil dan pemulihan HMW DNA mungkin bahkan setelah 19 tahun (28). Dalam
studi ini, juga, determinataion seks adalah mungkin dalam pulp dari seluruh 20 gigi
diawetkan selama 22 tahun dalam keadaan kering pada suhu kamar.
berikutnya, penentuan seks adalah attemped menggunakan gigi ditempatkan dalam keadaan
basah, yaitu, di bawah air atau dalam tanah. Karena degradasi pembusukan atau DNA
disebabkan oleh proses autolytic dalam keadaan basah, analisis DNA dalam sampel berusia
dianggap sulit (28).
Pada gigi yang direndam dalam air laut, jenis kelamin dapat ditentukan secara akurat
dalam 5 dari 6 gigi bahkan setelah 4 minggu. Untuk gigi 1 sisa di mana seks tidak bisa
ditentukan secara benar, tidak ada band yang diperkuat dari urutan kromosom Y-spesifik
obatained dari laki-laki, dan amplifikasi produk aan hampir 150 pb terdeteksi. Jelas band
diperkuat dari X dan urutan kromosom Y-spesifik terdeteksi dalam DNA diekstrak dari
jaringan keras gigi ini dan yang diekstrak dari darah donor yang sama. Dalam gigi ini, karena
itu, pembusukan karena bakteri dianggap telah berkembang tajam oleh infiltrasi air laut ke
rongga pulp, dan DNA jaringan pulp dianggap telah berkembang tajam oleh infiltrasi air laut
ke dalam rongga pulp, dan DNA dari jaringan pupl dianggap telah terdegradasi sedemikian
rupa sehingga amplifikasi urutan kromosom Y-spesifik dengan PCR menjadi tidak mungkin,
dan sejumlah kecil produk amplifikasi berasal dari DNA bakteri mungkin telah dihasilkan
pada 150 bp. Dalam sampel ini, band diperkuat dari urutan kromosom X-spesifik terdeteksi
meskipun itu dari urutan kromosom Y-spesifik tidak, mungkin karena amplifikasi fragmen
dari urutan kromosom X-spesifik tidak, mungkin karena amplifikasi fragmen dari urutan X-
kromosom-tertentu yang lebih pendek dari urutan kromosom Y-spesifik, kurang bertanggung
jawab yang akan dipengaruhi oleh degradasi DNA karena busuk dan bacause jumlah
pengulangan dari urutan kromosom X-spesifik dalam genom tunggal beberapa puluhan kali
lebih besar daripada urutan kromosom Y-spesifik
Meskipun penentuan seks adalah mungkin dalam semua 6 laki-laki dan perempuan 8
minggu setelah sampel dikuburkan di tanah, dalam 1 dari 4 sampel buuried selama 4 minggu
di dalam tanah band diperkuat dari urutan kromosom X-spesifik tidak terdeteksi oleh PCR
dan penentuan seks tidak mungkin. Decay dalam rongga pulp dianggap telah berkembang
lebih cepat, dan DNA telah terdegradasi ke tingkat yang lebih besar, di gigi ini daripada di
urutan gigi karena ketidakmatangan akar gigi ini's.
Dalam keadaan basah, jaringan pulpa secara bertahap lisis karena otolisis dan
membusuk, dan sampling nya menjadi sulit. Selanjutnya, DNA yang terkandung dalam
jaringan pulp terdegradasi dan fragmentaed sehingga deteksi DNA kromosom seks khusus
dengan PCR menjadi tidak mungkin. Dalam kasus seperti itu, penentuan seks dapat dilakukan
dengan mengumpulkan DNA dari jaringan keras gigi, yang tersisa setelah perkembangan
pembusukan. Dalam studi ini, juga, seks DNA kromosom-spesifik dapat terdeteksi oleh PCR
di ekstrak dari jaringan keras gigi, memungkinkan determinatin seks, bahkan ketika
penentuan seks menggunakan jaringan pulpa sulit.
Seks bisa ditentukan di semua 4 gigi dipanaskan pada 200C selama 30 menit dan 2
dari 4 gigi dipanaskan pada suhu 250C. Sebelumnya, kami melaporkan bahwa penentuan
seks mungkin ketika noda darah dipanaskan di 150C atau kurang selama 30 menit tetapi
bahwa tidak ada urutan X Y atau kromosom-spesifik terdeteksi ketika mereka dipanaskan
pada 200C selama 30 menit (12). Dibandingkan dengan noda darah, DNA dalam pulpa gigi
lebih stabil versus pemanasan, mungkin karena rongga pulp dilindungi oleh jaringan keras
gigi mengurangi efek pemanasan.
Ketika metode ini telah diberikan untuk penentuan seks sebenarnya tubuh
skeletonized, jenis kelamin tubuh mumi skaletonized dalam keadaan kering dapat ditentukan
dengan mengekstrak DNA dari jaringan pulpa sisa kering. Yang 2 lainnya kasus skelotons
ditemukan dalam air setelah terendam selama kurang lebih 1 tahun dan sekitar 11 tahun dan 7
bulan, masing-masing. Karena jaringan pulpa benar-benar segaris dan kehilangan, penentuan
seks adalah attemped menggunakan DNA yang diekstraksi dari jaringan keras gigi. Tidak
seperti gigi yang telah dicabut, akar gigi dalam tubuh skeletonized sebenarnya terletak di
alveoli, sehingga mereka dianggap kurang tepat untuk mengizinkan masuk atau proliferasi
bakteri dan perubahan fisikokimia bahkan di air atau tanah. Juga, dalam tubuh skeletonized
direndam dalam air selama sekitar 11 tahun dan 7 bulan setelah kematian, tubuh bagian atas
termasuk kepala dianggap telah terkubur di lumpur. Juga, dalam tubuh skeletonized
direndam dalam air selama sekitar 11 tahun dan 7 bulan setelah kematian, tubuh bagian atas
termasuk kepala dianggap telah berada dalam kondisi anaerob. Hal ini dianggap telah
melindungi gigi dari efek di atas dan telah menunda perkembangan fragmentasi DNA.
Dari hasil ini, jenis kelamin penentuan gigi dengan cara PCR dianggap sangat
berguna untuk identifikasi atau nyata busuk atau skeletonized badan, yang sulit menggunakan
metode morfologi konvensional.