ODREĐIVANJE SLOBODNIH LAKIH LANACA U SERUMU I URINU

Danica Matišić

KROHEM SKUPINAPododbor za laboratorijsku hematologiju i

morfologijuIMUNOKEMIJA: D. Matišić, V. Preden-Kereković Vizualni pregled

Bez promjena

Bence Jones protein?

Klinička sumnja iliprisutnost monoklonske

vrpce

Imunofiksacija i/ili imunoelektroforez

a

Elektroforeza proteina u mokraći

(100 x ukonc. uzorak)

Definicija M-P(određ. razreda

i tipa)

Negativ. nalaz

Prisutan BJ

protein

Denzitometrijska kvantifikacija M-P

Imunofiksacija i/ili imunoelektroforez

a

Opisni nalaz + klinička informacija

dajutumačenje nalaza

Elektroforeza serumskih proteina

DIJAGNOSTIČKI ALGORITAM ZA DEFINICIJU MONOKLONSKOG PROTEINA

Ako na elektroforetskoj slici, najmanje 100x ugušćenog urina, ne nalazimo suspektnu monoklonsku vrpcu nalaz BJP smatramo negativnim

A.R. Bradwell: Free Light Chain Assay

Razvoj Free Light Chain reagensa za kvantitativno

određivanje slobodnih lakih lanaca, SLL, kapa (κ) ili lambda (λ) tipa, otvorio je mogućnost njihovih aplikacija i povećao

njihovu kliničku važnost. Refer. interv.: SLL κ Refer. interv.: SLL λ Refer. interv. κ/λ

SERUM 3,30 – 19,40 5,71 – 26,3 0,26 – 1,65

URIN 1,35 – 24,19 0,24 – 6,66 2,04 – 10,37

A: koncentracija lakih lanaca u serumu kod

zdravih ispitanika,bubrežnih

bolesnika i bolesnika sa MMLL kapa

i lambda tipa

A

B

B: koncentracija lakih lanaca u serumu kod

zdravih ispitanika,bolesnika sa NSMM i MMLL kapa i

lambda tipaOsjetljivost SPE

Osjetljivost IF

Serum Free Light Chain Measurements: Move to Center Stage

Arthur R. Bradwell (Clinical Chemistry. 2005;51:805-807.)

serumska konc.SLL korelira samo s aktivnošću koštane srži, što znači da njihov nalaz može biti neovisan biljeg monoklonskih

gamapatija

jedan posebno važan aspekt SLL je njihov kratak poluživot:

2-3 sata za kapu i 5–6 sati za lambdu; što je 150 x kraće vrijeme od 21 dana koliko je poluživot IgG

molekule

tako konc. slobodnih lakih lanaca omogućuje vrlo brzo procjenu učinka

kemoterapije: 92-128 dana brže nego konc. M Igbolesnici koji su prema nalazu intaktnog M Ig, u remisiji mogu još uvijek imati povišenu konc. SLL što indicira ostatnu bolest

koristeći isti argument, bolesnici čija konc SLL počinje rasti nakon

modernog intenzivnog tretmana ide u prilog relapsu bolesti

Kvantitativno mjerenj SLL pokazuje da abnormalnu koncentraciju lakih lanaca ili njihov omjer

imaju 96% bolesnika s IIMM 82% bolesnika s NSMM 98 % sa AL amiloidozom svi s LCMM i LCDD

Kvantitativno mjerenje SLL može pomoći u postavljanju

Dijagnoze: kod LCMM, NSMM, AL amiloidoza, LCDD, Waldenström makroglobulinemije kao i za

Praćenje: terapije i toka same bolesti kod: IIMM, LCMM, NSMM, AL amiloidoza, LCDD, Waldenström makroglobulinemije kao i praćenje

minimalne rezidualne bolesti u mnogih bolesnika s MM koji su bili u kompletnoj remisiji prema standarnim

testovima

FREELITE™ Serum - Free Light Chain Assays

Određivanje konc SLL ima posebnu ulogu u dijgnoastici AL amiloidoze

s obzirom da su izvor fibrila monokl. SLL

Njihova je konc. nedostatna da bi se registrirala elektroforezom

Katzmann i suradnici su pokazali da određ. konc. SLL u kombinaciji s IF

omogućuje postavljanje dijagnoze AL amiloidoze:

kombinacijom određivanja SLL i IF u grupi od 110 bolesnikaoni su pravilno dijagnosticirali 109 (99 %)

Koristeći samo konc. SLL pravilno je dijagnosticirano 91 %

Novi internacionalni konsenzus za vođenje AL amiloidoze uključuje mjerenje konc. SLL

Dispenzieri i sur: uvođenje određivanja SLL povećalo je moć procjene hematološkog odgovora kod bolesnika s niskim tumorskim uzorkom.

Koncentracija slobodnih lakih lanaca Ig ovisi o produkciji plazma stanica i bubrežnom klirensu.

Kod nekih bolesnika s monoklonskom gamapatijom količina SLL ostaje ispod reapsorpcionog kapaciteta bubrega tako će

abnormalna konc. serumskih SLL biti nedetektibilna u urinuu tim slučajevima rezultat SLL u urinu biti će nepouzdan

Katzmann JA. i Hill P.G. pokazali su na velikom broju bolesnika, u dvije odvojene studije, da zbog oštećenja bubrega

(približno 25 % bolesnika s monoklonskim gamapatijama) možemo naći

lažno pozitivne nalaze SLL u serumu odnosno lažno negativne u urinu.

Uz poliklonsku sintezu imunoglobulina i/ili bubrežnog oštećenja,

naći ćemo 10 – 20x povećanu sintezu lakih lanaca u serumuBubrežna ekskrecija SLL raste s koncentracijom u serumu ali

značajno opada kada je visoka koncentracija kombinirana s bubrežnim oštećenjem.

Skupljanje 24 satnog urina je : mukotrpno za bolesnike i uglavnom netočno;

-laboratorijski postupak evaluacije monoklonskog

proteina se znatno produljuje

Stoga mnogi kliničari sugeriraju da se 24 satni urin eliminira iz skriniga

M-P

Urin će se obrađivati diskontinuirano tj. kod

raznih disproteinemija kao i i za praćenje bolesti

jednom kad je već monoklonski protein

identificiran.

Mjesečne novine Medicinskog laboratorija Mayo klinike

(Communique):august/ 2007:

1. Kvantitativno mjerenje SLL uz SPE i IE postiže se veća osjetljivost u

dijagnostici monoklonskih gamapatija što je posebno važno kod:

MMLL, AL amiloidoza, LLDD, NSMM

2. Primjenjujući #87997 Monoclonal Protein Study, Expanded Panel, Serum, (ukupni prot., SPE , kapa i lambda u serumu i κ:λ omjer)

eliminiramo potrebu sakupljanja 24 satnog urina

3. Određivanjem SLL moguće je razlučiti:

visoko i nisko rizične bolesnike u skupini MGUS: bolesnici s abnormalnim κ:λ

omjerom imaju 2,5 x povećan rizik od progresije bolesti u MM ili slične bolesti za većinu MGUS bolesnika preporuča se laboratorijska obrada jednom

godišnje kako približno 40 % MGUS dijagnosticiranih bolesnika spada u nisko rizične, kombinacijom κ:λ omjera i koncentracije M-proteina može se kod tih

bolesnika znatno skratiti godišnji program kontrole (studija provedena na 1140 bolesnika)

4. FREELITE™ Serum može se koristiti za praćenje toka bolesti kod bolesnika sa M-proteinom koji nije mjerljiv SPE čime bi kliničari mogli smanjiti broj biopsija

koštanih srži

KROHEM SKUPINAPododbor za laboratorijsku hematologiju i

morfologijuIMUNOKEMIJA: D. Matišić, V. Preden-Kereković Vizualni pregled

Bez promjena

Bence Jones protein?

Klinička sumnja iliprisutnost monoklonske

vrpce

Imunofiksacija i/ili imunoelektroforez

a

Elektroforeza proteina u mokraći

(100 x ukonc. uzorak)

Definicija M-P(određ. razreda

i tipa)

Negativ. nalaz

Prisutan BJ

protein

Denzitometrijska kvantifikacija M-P

Imunofiksacija i/ili imunoelektroforez

a

Opisni nalaz + klinička informacija

dajutumačenje nalaza

Elektroforeza serumskih proteina

DIJAGNOSTIČKI ALGORITAM ZA DEFINICIJU MONOKLONSKOG PROTEINA

Ako na elektroforetskoj

slici, najmanje 100x ugušćenog urina, ne nalazimo suspektnu monoklonsku vrpcu nalaz BJP smatramo

negativnim

FREELITE™ : SLLκ, SLLλ + κ/λ

Hill PG, Forsyth JM, Rai B, Mayne S. Serum free light chains: an alternative test to urine Bence Jones proteins when screening for monoclonal

gammopathies.

Clin Chem 2006;52:1743-1748. Elektroforeza proteina

u serumuFREELITE kapa i lambda i

Kapa/lambda omjer

FREELITE:

nalaz abnormalan

SPE normalna

FREELITE:

nalaz normalan

SPE abnormalna

FREELITE:

nalaz normalan

SPE normalna

FREELITE:

nalaz abnormalan

SPE abnormalna

+

Prisutan BJPPrisutan intaktni

monokl. Ig ili BJP

M-P negativanPrisutan intaktni

monokl. Ig

FREELITE™ Serum Free Light Chain Assays

FREELITE™ Serum Free Light Chain Assays

Kristali Bence-Jones proteina

Razumijevanje strukture kristala BJP moglo bi biti ključno za razvoj selektivne terapije lijekovima.

MicrogravitySpace is the laboratory of

the next millennium

Mikrogravitacijski uvjeti u svemiru su jedinstveni

okoliš za istraživanja koja vode novim produktima i

tehnologijama.STS-80

STS-95