MÉTODOS DE EXAMEN MÉTODOS DE EXAMEN DE CÉLULAS Y TEJIDOSDE CÉLULAS Y TEJIDOS

Anatomía FuncionalAnatomía Funcional-- tema 2tema 2

EsquemaEsquema

Tipos de estudiosTipos de estudios

Procedencia del Procedencia del materialmaterial

Método de biopsiaMétodo de biopsia–– FijaciónFijación

–– InclusiónInclusión

–– CorteCorte

–– TinciónTinción

TIPOS DE ESTUDIOTIPOS DE ESTUDIO

Estudios vitalesEstudios vitales–– Ej.: circulación sanguínea capilarEj.: circulación sanguínea capilar

Estudios Estudios supravitalessupravitales–– Ej.: Cultivos celulares, tomas en fresco (vaginal, ...)Ej.: Cultivos celulares, tomas en fresco (vaginal, ...)

Estudios Estudios postvitalespostvitales–– Ej.: biopsias, necropsias, …Ej.: biopsias, necropsias, …

PROCEDENCIA DEL MATERIALPROCEDENCIA DEL MATERIAL

NecropsiaNecropsia (autopsia):(autopsia):–– MedicolegalMedicolegal–– ClínicaClínica

Biopsia:Biopsia:–– Biopsia diagnóstica: Biopsia diagnóstica: endoscópicaendoscópica, con aguja, , con aguja, punchpunch, …, …–– QuirúrgicaQuirúrgica

Citología:Citología:CitologCitologíía exfoliativa:a exfoliativa:

Cepillado/raspado: Ej. Triple toma ginecolCepillado/raspado: Ej. Triple toma ginecolóógica, gica, cepillado bronquial, cepillado tubo digestivo,etc.cepillado bronquial, cepillado tubo digestivo,etc.LLííquidos orgquidos orgáánicos: Ej. Orina, lnicos: Ej. Orina, lííquidos pleural, quidos pleural, ascascíítico, sinovial, L.C.R., esputo, etc. tico, sinovial, L.C.R., esputo, etc.

PunciPuncióón aspiracin aspiracióón con aguja fina (n con aguja fina (P.A.A.FP.A.A.F.).)

Método de biopsiaMétodo de biopsia procedimiento al que se somete la muestraprocedimiento al que se somete la muestra

1.1. FijaciónFijación2.2. InclusiónInclusión3.3. CorteCorte4.4. TinciónTinción

Fijación Fijación

Procedimiento que detiene los procesos de Procedimiento que detiene los procesos de autolisisautolisisy putrefaccióny putrefacción

Precipita las proteínasPrecipita las proteínas (desnaturalización, puentes (desnaturalización, puentes

intermolecularesintermoleculares--polimerización, etc)polimerización, etc), , inactiva las enzimas inactiva las enzimas autolíticasautolíticas y destruye las bacterias.y destruye las bacterias.

Tipos según mecanismos:Tipos según mecanismos:Por deshidrataciónPor deshidratación

Por cambios del estado coloidalPor cambios del estado coloidal

Formando sales (Formando sales (proteinatosproteinatos metálicos o picratos)metálicos o picratos)

Por polimerizaciónPor polimerización

Fijadores por deshidrataciónFijadores por deshidratación

Eliminan el agua ligada a las proteínasEliminan el agua ligada a las proteínas ⇒⇒

desnaturalizacidesnaturalizacióón (floculacin (floculacióón)n)

Ventajas:Ventajas: AcciAccióón rn ráápidapida

Inconvenientes:Inconvenientes: Endurece y retrae los tejidosEndurece y retrae los tejidos

Ejemplos:Ejemplos: Alcohol y acetonaAlcohol y acetona

Fijadores por cambio del estado Fijadores por cambio del estado coloidal de las proteínascoloidal de las proteínas

Las proteínas son moléculas anfóteras, a Las proteínas son moléculas anfóteras, a pHpH inferior inferior

al punto al punto isoeléctricoisoeléctrico ⇒⇒ precipitanprecipitan

Ventajas:Ventajas: Rapidez de penetración y poder Rapidez de penetración y poder

decalcificantedecalcificante

Inconvenientes:Inconvenientes: Sólo en mezclas fijadorasSólo en mezclas fijadoras

Ejemplos:Ejemplos: Acido acético, ácido Acido acético, ácido tricloroacéticotricloroacético

y ácido crómicoy ácido crómico

Fijadores que forman salesFijadores que forman sales con los tejidoscon los tejidosForman sales con cationes metálicos (Forman sales con cationes metálicos (CrCr, , HgHg) o con ) o con

ácidos (ácidos (ácác. Pícrico) . Pícrico) ⇒⇒ Proteinatos metProteinatos metáálicos o licos o

picratospicratos

Ventajas:Ventajas: Velocidad de fijaciVelocidad de fijacióónn

Inconvenientes:Inconvenientes: Escaso poder de penetraciEscaso poder de penetracióón, n,

precipitado negruzco, sprecipitado negruzco, sóólo en mezclas fijadoraslo en mezclas fijadoras

Ejemplos:Ejemplos: Cloruro de mercurio, Cloruro de mercurio, dicromatodicromato

potpotáásico, sico, áácido pcido píícricocrico

Fijadores por Fijadores por reticularizaciónreticularización de las proteínasde las proteínas

Establece puentes de metilo entre las proteínas Establece puentes de metilo entre las proteínas formando una malla reticular polipeptídicaformando una malla reticular polipeptídica

Ventajas:Ventajas: Buen fijador, escasa retracción, Buen fijador, escasa retracción, económico y buen desinfectanteeconómico y buen desinfectante

Inconvenientes:Inconvenientes: Irritantes de mucosas, Irritantes de mucosas, cancerígenos, pigmento formólicocancerígenos, pigmento formólico

Tipos:Tipos: Formaldehído al 10% (formol), Formaldehído al 10% (formol), glutaraldehídoglutaraldehído

InclusiónInclusión

Sustitución del agua de los tejidos por una cera Sustitución del agua de los tejidos por una cera (parafina) que lo endurece(parafina) que lo endurece

Etapas: Etapas: –– 1º Deshidratación con alcoholes1º Deshidratación con alcoholes

–– 2º “Aclaramiento”: Exposición a agentes solubles en 2º “Aclaramiento”: Exposición a agentes solubles en

alcohol y parafina (xilol, tolueno,...)alcohol y parafina (xilol, tolueno,...)

–– 3º Parafina fundida (tª fusión de 563º Parafina fundida (tª fusión de 56--58ºC)58ºC)

CorteCorte

MicrotomoMicrotomo ⇒⇒ 2 a 4 2 a 4 µµ

TinciónTinción

Tratamiento de los tejidos con colorantes que Tratamiento de los tejidos con colorantes que contrastan diferentes componentes celulares y contrastan diferentes componentes celulares y tisularestisulares..Tipos de reacción: ácidoTipos de reacción: ácido--básebáse, , oxirreducciónoxirreducción, , afinidad, afinidad, liposolubilidadliposolubilidad......

Técnicas de tinción más utilizadasTécnicas de tinción más utilizadas

HematoxilinaHematoxilina (básico)(básico) y eosinay eosina (ácido)(ácido)Carbohidratos Carbohidratos ⇒⇒ P.A.S. (ácido peryódico de Schiff):P.A.S. (ácido peryódico de Schiff):El ácido peryódico oxida el glucógeno y MPS El ácido peryódico oxida el glucógeno y MPS neutros, dando grupos aldehidos (neutros, dando grupos aldehidos (--CHO), que CHO), que reaccionan con la fucsina básica y adquieren color reaccionan con la fucsina básica y adquieren color magentamagentaGrasas Grasas ⇒⇒ Escarlata R y Sudan IIIEscarlata R y Sudan IIITejido conjuntivo Tejido conjuntivo ⇒⇒ TricrTricróómico de Masson, van mico de Masson, van Gieson, reticulina de GomoriGieson, reticulina de Gomori……Cationes pesados metCationes pesados metáálicos:licos: nitrato de plata y nitrato de plata y cloruro de orocloruro de oroOtras tinciones:Otras tinciones: PapanicolaouPapanicolaou, , GiemsaGiemsa, , GramGram, , ZiehlZiehl--NielsenNielsen,...,...

• Hematoxilina: tono violáceo de estructuras ácidas (núcleos, ribosomas, retículo rugoso).

• Eosina: tono rosado – rojizo de estructuras básicas (citoplasma, fibras de colágeno, …)

Hematoxilina - Eosina

• Glucógeno y mucinas neutras.

•Membranas basales.

• Borde en cepillo de mucosa intestinal y respiratoria.

P.A.S.

Papanicolaou

Giemsa

Ziehl Nielssen

Giemsa

Tricrómico de Masson

Método de oro

Reticulina de Gomori

Método de Grimelius

Otras técnicasOtras técnicas

InmunohistoquímicaInmunohistoquímica

Hibridación in situ:Hibridación in situ:–– FISH (con fluorescencia)FISH (con fluorescencia)–– CISH (con cromógeno)CISH (con cromógeno)–– SISH (con plata)SISH (con plata)

PCRPCR

CitogenCitogenééticatica

……

InmunohistoquímicaInmunohistoquímica (1)(1)

InmunohistoquímicaInmunohistoquímica (2)(2)

InmunohistoquímicaInmunohistoquímica (3)(3)

Hibridación in situHibridación in situ

her2Neu - her2Neu +

FISH de cáncer de mama

CGH Hibridación

SKY

Microarrays