Upload
kaveri
View
59
Download
0
Embed Size (px)
DESCRIPTION
Porovnanie molekulového mechanizmu N-salicylidénglutamátomeďnatých komplexov na ľudskú nádorovú líniu hrubého čreva. Katarína Koňariková Plzeň 2013. Univerzita Komenského Lekárska fakulta Ústav lekárskej chémie, biochémie a klinickej biochémie. Význam medi a meďnatých komplexov. - PowerPoint PPT Presentation
Citation preview
Porovnanie molekulového mechanizmu N-salicylidénglutamátomeďnatých
komplexov na ľudskú nádorovú líniu hrubého čreva
Katarína Koňariková
Plzeň 2013
Univerzita KomenskéhoLekárska fakulta
Ústav lekárskej chémie, biochémie a klinickej biochémie
Význam medi a meďnatých komplexov
• 2400 p.n.l. – sterilizačný prostriedok
• 1500 p.n.l. – pri bolestiach hlavy, popáleninách
• 400 p.n.l. – liečba vredov, kŕčových žíl
• 25 – 50 n.l. – syntetizované prvé deriváty medi
• 23 – 79 n.l. – lieky obsahujúce meď
• 1867 – prvé záznamy o význame medi pre imunitný systém
• 1885 – použitie acetátu medi
• 1895 - organické komplexy medi vyvinuté firmou Bayer
• 20. stor. » protinádorové účinky » ochorenia srdca» artritída» žalúdočné vredy» protizápalové účinky
Molekulový mechanizmus bunkovej smrti
Ciele
Vplyv meďnatých komplexov na nádorovú líniuhrubého čreva HT-29:
1. Cytotoxický účinok
2. Spôsob bunkovej smrti
3. Molekulový mechanizmus bunkovej smrti
Materiál a metódy
Názov Vzorec MR
(g/mol)
ZK1 monohydrát diakva-(N-salicylidén-L-glutamáto) meďnatého komplexu
[Cu(N-sal-L-glu)(H20)2].H20
366,82
MK0 etanolát bis
[izochinolín-(N-
salicylidén-
D,L-glutamáto]
dimeďnatý komplex
[Cu2 (N-sal-D,L-glu)2(izochinolín)2]. H20
975,98
MK1 monohydrát akva-(N-
salicylidénmetylester-
L-glutamáto)
meďnatého komplexu
[Cu(N-sal-5-met-L-
glu)(H20)].H20
262,82
Meďnaté komplexy
Použitý bunkový model
• Ľudské nádorové bunky hrubého čreva HT-29
Použité metódyPoužité metódy
• Určenie cytotoxického účinku– MTT test
• Určenie typu bunkovej smrti– Gélová elektroforéza
• Molekulový mechanizmus bunkovej smrti– Stanovenie aktivity kaspáz 8, 9 luminometricky
Výsledky1. Cytotoxický účinok
Cytotoxický účinok ZK1 na HT-29
0
100000
200000
300000
400000
500000
600000
700000
800000
0 24 48 72
Čas (h)
P o
č e
t
b u
n i
e k
/ m
l K
0,001 µmol/L
0,01 µmol/L
0,1 µmol/L
1 µmol/L
10 µmol/L
50 µmol/L
100 µmol/L
Cytotoxický účinok MK0 na HT-29
0
100000
200000
300000
400000
500000
600000
700000
800000
0 24 48 72
čas (h)
po
čet
bu
nie
k/m
l
K0,0010,010,111050100
0
100000
200000
300000
400000
500000
600000
700000
800000
0 24 48 72
K
0,001 µmol/L
0,01 µmol/L
0,1 µmol/L
1 µmol/L
10 µmol/L
50 µmol/L
100 µmol/L
Cytotoxický účinok MK1 na HT-29
0
100000
200000
300000
400000
500000
600000
700000
800000
0 24 48 72
čas (h)
po
če
t b
un
iek
/ml
K0.0010.010.111050100
0
100000
200000
300000
400000
500000
600000
700000
800000
0 24 48 72
K
0,001 µmol/L
0,01 µmol/L
0,1 µmol/L
1 µmol/L
10 µmol/L
50 µmol/L
100 µmol/L
IC50 (µmol/L)
24h 48h 72h
ZK1 42 21 6
MK0 10 4 1
MK1 31 25 6
Názov Vzorec MR
(g/mol)
ZK1 monohydrát diakva-(N-salicylidén-L-glutamáto) meďnatého komplexu
[Cu(N-sal-L-glu)(H20)2].H20 366,82
MK0 etanolát bis
[izochinolín-(N-
salicylidén-
D,L-glutamáto]
dimeďnatý komplex
[Cu2 (N-sal-D,L-glu)2(izochinolín)2]. H20
975,98
MK1 monohydrát akva-(N-
salicylidénmetylester-
L-glutamáto)
meďnatého komplexu
[Cu(N-sal-5-met-L-
glu)(H20)].H20
262,82
Výsledky2. Typ bunkovej smrti
–––––––24h–––––– –––––––48h––––– –––––––72h–––––– PK K 1 10 50 100 1 10 50 100 1 10 50 100 µmol/L
Určenie typu bunkovej smrti ZK1
–––––––24h–––––– –––––––48h––––– –––––––72h–––––– PK K 1 10 50 100 1 10 50 100 1 10 50 100 µmol/L
Určenie typu bunkovej smrtiMK0, MK1
Výsledky3. Molekulový mechanizmus
bunkovej smrti
Aktivity kaspázy 8 a 9ZK1
HT-29, Kaspáza-8
0200000400000600000800000
1000000
12000001400000160000018000002000000
0 10 20 30 40
čas (min)
RLU
C
1 µmol/L
10 µmol/L
50 µmol/L
100 µmol/L
HT-29, Kaspáza 9
0
200000
400000600000
800000
1000000
1200000
14000001600000
1800000
2000000
0 10 20 30 40
Čas (min)
RLU
PK
K
1 µmol/L
10 µmol/L
50 µmol/L
100 µmol/L
Aktivity kaspázy 8 a 9MK0
HT-29, Kaspáza 8
010000002000000300000040000005000000600000070000008000000
0 10 20 30 40 50 60
Čas (min)
RLU
K
1 µmol/L
10 µmol/L
50 µmol/L
100 µmol/L
HT-29, Kaspáza 9
010000002000000300000040000005000000600000070000008000000
0 10 20 30 40 50 60
Čas (min)RL
U
PK
K
1 µmol/L
10 µmol/L
50 µmol/L
100 µmol/L
Aktivity kaspázy 8 a 9MK1
HT-29, Kaspáza 8
02000000400000060000008000000
100000001200000014000000
0 10 20 30 40 50 60
Čas (min)
RLU
K
1 µmol/L
10 µmol/L
50 µmol/L
100 µmol/L
HT-29, Kaspáza 9
02000000400000060000008000000
100000001200000014000000
0 10 20 30 40 50 60
Čas (min)RL
U
PK
K
1 µmol/L
10 µmol/L
50 µmol/L
100 µmol/L
Meďnaté komplexy ZK1, MK0 a MK1 vykazovali na ľudskú
nádorovú líniu hrubého čreva HT-29:
1) Cytotoxický účinok
• závislý od použitej koncentrácie a času
pôsobenia
• najvyšší cytotoxický účinok – komplex MK0 s
izochinolínovým ligandom po 72 h pôsobenia
Záver
2. Apoptotickú smrť HT-29 buniek pri koncentráciách
komplexu 1-100 µmol/L:
• ZK1 po 48h pôsobenia
• MK0 a MK 1 po 72h pôsobenia
Záver
3. Komplex ZK1 - [Cu(N-sal-L-glu)(H20)2].H20
Záver
4. Komplex MK0 - [Cu2 (N-sal-D,L-glu)2(izochinolín)2]. H20
Záver
5. Komplex MK1 - [Cu(N-sal-5-met-L- glu)(H20)].H20
Záver
Poďakovanie
• Doc. Ing. Ingrid Žitňanová, PhD.• Prof. Ing. Zdeňka Ďuračková, PhD.• RNDr. Lucia Andrezálová, PhD.• MSc. Georgios Perdikaris
• Kolektív Ústavu lekárskej chémie, biochémie a klinickej biochémie
• Vega grant 1/0752/13
Ďakujem za pozornosť