Upload
others
View
7
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
Újabb eredmények a pajzsmirigy kórtanában
(TSH receptor)Balázs Csaba
Budai Irgalmasrendi KórházMTA 2005
A pajzsmirigynem immun immun eredetű
betegségei
Basedow-Graves kór
StrumaHyperthyreosisInfiltrativophthalmopathia(TAO)Pretibialismyxoedema
Hisztológiai és cytológiai kép B-G kórban
Definició: a Basedow-Graves kór olyan szerv-specifikus autoimmun betegség, amelyet a következőkjellemeznek (Amino et al, 1999):
Jellegzetes klinikai kép:az autoimmun hyperthyreosisstrumaszemtünetek (TAO)pretibialis myxoedema
A betegség létrejöttében meghatározóak a TSH-receptor (TSH-R) elleni autoimmun humorális és celluláris folyamatok (Th1-Th2 "shift"):
TSH-R elleni stimuláló antitestekTSH-R elleni blokkoló antitestekegyes celluláris markerek, amelyet a Th1, ill. Th2 sejtek aktiválódására utalnak
Thyroxine (T4)
A pajzsmirigy hormonjai
A pajzsmirigy komponensei, autoantigénjei
• Thyreoglobulin• TPO (thyroid
peroxidase)• NIS (natrium jód
symporter)• TSH-receptor
(TSH-R)• Dejodináz
The Sodium-Iodide Symporter
TSH receptor gén
G-protein receptorok
TSH, FSH, LH, HCG phylogenesise
A TSH-R felépítése
Molecular structure of TSH-receptor (Davies T, 2005)
TSH-TSH-R interactions
TSH-receptor vedlés („shedding”)
Levedlett A alegység
A TSAb fő kötődésihelyei (epitópjai)
TSH-R
TSH
TSH -elleni antitest(ab1)
anti-TSH elleni antitest =TSH-R elleni antitest (ab2)
acinussejt
acinussejt
A TSH receptor elleni antitest, mint TSH elleni anti-iditípus antitest
Binding of anti-TSH receptor antibodies to CHO cells transfected by human TSH receptor
Binding of anti-TSH receptor antibodies to CHO cells transfected by human TSH receptor
(Balázs Cs et al.2002)
Binding of anti-TSH receptor antibodies to CHO cells transfected by human TSH receptor
Binding of anti-TSH receptor antibodies to CHO cells transfected by human TSH receptor
Types of anti-TSH-R antibodies (Davies T, 2005)
Az MS-1 TSH-R elleni monoklonális antitest hatásának vizsgálata
a) Az MS-1 monoklonális antitest kötődése a TSH-R-raltranszfektált CHO sejtekhez(vonal) és a nem specifikus kötődés (szaggatott vonal)
(b) CHO-TSH-R-raltranszfektált sejtek aktivitása (cAMP produkció) MS-1 emelkedő koncentrációja jelenlétében. Signifikánsstimuláció (kétszeresnél magasabb cAMP szint emelkedés) volt kevesebb, mint 10 ng/ml MS-1jelenlétében.
TSH-induced desensitization in TSH receptor transfected CHO cells (Farid et al, 2000)
0
20
40
60
80
100
cAM
P ( p
mol
e s/1
0 c
ells
Control1h TSH stimulation16h TSH inc.+ 1h TSH stim
A TSH-R elleni autoimmun folyamat elvileg 2 alapvető okra vezethető vissza:
A TSH-R mutációja miatt megváltozik a receptor immunogenitása?
A TSH-R-ral szemben csökken az immuntolerancia (a "természetes autoimmunitás" változik ) ?
1.
2.
TSH-R mutációinak fő típusai
Következtetés:
• A TSH-R 241 eltérő mutációját analizálva egyik esetben sem lehetett a TSH-R-ralszemben autoantitest termelődést kimutatni, tehát:az autoimmun folyamat nem a TSH-R
immunogén struktúrájának megválto-zására vezethető vissza.
A TSH-R-ral szembeni immuntolerancia csökkenése visszavezethető:
HLA-DR expresszió formái cytológiai anyagban
kezeletlen betegekbenkezelt betegekben
Az IFN-gamma által kiváltott HLA-DR expressióA Graves IgG által indukált HLA-DR expressióA humán thyreocyta kultúrákban az IFN- gamma és a Graves IgG által indukált HLA-DR expresszió befolyásolása Metothyrinnel
HLA antigének szerepe Basedow-Graves kórban (Stenszky et al., 1985)
HLA B8 RR: 3.8HLA DR3 RR:4.8B8-DR3 RR: 16.7 (ophthalmopathiáraszámítva)HLA B8-DR3 és az Ir gén(ek) potenciális kapcsolata?
„Cluster” analizis B-G kórban (Balázs Cs. et.al. 1996)
MHC-expression in thyrocytes from Graves’thyroid gland
MHC II expression on thyrocytes in patient withGraves’disease after treatment
Egészséges humán thyreocyták (HLA-DR sejtek %-ában)
Tápfolyadék 3.7±4.4
Gamma-IFN (100 U/ml) 39.8±19.5
Gamma-IFN (100 U/ml) + Metothyrin (10 mM) 34,1±16,1 ( n.s.)
Graves IgG (2 mg/ml) 58.6±13.9
Graves IgG (2 mg/ml) + Metothyrin (10 mM) 23.4±13.2 ( p<0,01)
A Metothyrin hatása a thyreocyták IFN-gamma és Graves IgG-vel kiváltott HLA-DR expressziójára ( Balázs Cs. et al. 2001)
Experimental model in BALBc mice for Graves'disease (Ludgate 2000)
TSH-R MHC II TSH-R+ MHC II
Anti-TSH-R antibodies none none
detected+ hyperthyroid
ism
Polymorphism of TSH-R (Kaczur V et al, 1999)
TSH-R gén 1. exonjának vizsgálata (Kaczúr V. et al. Mol Genet Metab 78: 275-290. 2003)
• Vizsgálatainkat:101 BG kóros és 163 kontroll egyénben végeztük
• Az „A 253” (CCC/ACC, P52T) mutáns allél 8,9 %ban (heterozigóta formában) fordult elő a betegekben és 7.9%-ban az egészségesekben
• Konklúzió: az A253 polimorfizmusnak nincs klinikai jelentősége
TAO (Pajzsmirigybetegséggel társult orbitopathia)
• Proptosis• Chemosis• Coniunctivitis• Diplopia• Keratitis• Amaurosis
TSH-receptor kimutatása(in situ hibridizációval)
pajzsmirigy külső szemizom
szívizom vázizom
CigB8DR3
0
10
20
30
40
bete
gek
szám
a
dohányziknem dohányzikHLA B8+/DR3+HLA B8-/DR3 -
Az infiltrativ ophthalmopathia, a dohányzás, a HLA B8/DR3 antigének közötti összefüggés vizsgálata
(N= 98)
Y kromoszóma kimutatása XX kariotípusúanya pajzsmirigyében (FISH)
• Az Y kromoszóma zöld
• Az X kromoszóma vörös
Hypothetical mechanism by which fetal cellsmodulate AITD postpartum
Diagnosztikai lehetőségek
131 J scintgigraphia B-G kórban
Fokozott, egyenletes, diffúz jódtárolása
Ultrahang vizsgálat B-G kórban
• Diffúz hypoechogénpajzsmirigy
Color-Doppler kép B-K kóros beteg pajzsmirigyében
• Fokozott artériás vérellátás, keringés
(
A TSH receptor elleni stimuláló és blokkolóantitestek kimutatásának lehetőségei
Humán pajzsmirigy membránszeletsejttenyészet
Sertés pajzsmirigyszeletmembránsejttenyészet
FRTL-5 sejtek tenyészeteTSH-receptorral transzfektált CHO sejtek tenyészete
Dose-response curves for TSH stimulatedcAMP accumulation in TSH-R -CHO cells
0
200
400
600
800
1000
1200
pmol
es c
AM
P (%
of c
ontro
l)
CHO cellsTSH-R transfected CHO cells
Dose-response curves of cAMP production in TSH-R CHO cells stimulated by bTSH and
Graves' IgG
0
10
20
30
40
50
60
70
cAM
P ( p
mo l
/we l
l)
Terápia lehetőségei és módjai
A Basedow kór kezelésének lehetséges új útjai
• „Stop and replace” kezelési elv• Nagy dózisú immunglobulin kezelés
(TSH-receptor elleni antitest megkötése?)• Immunizálás: TSH-R epitópjait hordozó
vakcinával a TSH-R elleni antitest képződésének gátlása, ill. nem stimuláló, hanem neutrális, vagy blokkoló antitestek produkciója