Upload
claudio-cuba
View
217
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
Integración de DNA en microorganismos:
herramientas genéticas I
Integración de DNA exogeno en el genoma bacteriano
• Recombinación homóloga• Recombinación sitio-específica• Recombinación ilegítima
– Transposición
Homologous pairing
Resolution
One-strand repair/replication
Recombinación homóloga
3’
5’RecBCD
3’
5’
3’
5’
5’3’
Recombinación homóloga: respuesta a DSB
3’
5’RecBCD
3’
5’RecBCD
RecA3’
5’
Chi sites:E. coli 5’GCTGGTGG3’B. subtilis 5’ACTGCG3’L. lactis 5’GCGCGTG3’
Recombinación homóloga: RecBCD y Chi
RecA3’
5’
RecA
Recombinación homóloga: desplazamiento de hebra
RuvABC
A
B
A B
RuvAB
RuvCRuvC
Intermediario de Holliday
Integración tipo Campbell Conversión génica
Integrando DNA por recombinación homóloga
marker
marker
Intercambio alélico
marker
marker
marker
Resolución de secuencias en tandem
marker
3’
5’
3’
5’RecBCD
RecBCD
Chi mejora el intercambio alélico
Genes marcadores de selección positiva y negativa
sacBR (B.subtilis)
Production of levansucrasa in presence of 5% sacarosa es tóxica en Gram -
nar1Necesario para asimilar nitrato, tóxico en presencia de clorato
Ab
Ab
Ab
Conversión génica
Ab
Conversión génica y Chi, haciendo más facil el trabajo
Ab
Ab
X XAb
X X
Ab
X XAb
Ab
Conversión génica: para KOs y mas...
Integración de DNA exogeno en el genoma bacteriano
• Recombinación homóloga• Recombinación sitio-específica• Recombinación ilegítima
– Transposición
Recombinación específica de sitio
Estructura de una diana de SSR
SSR en acción
SSR en acción
SSR en acción
SSR en acción
Invertasas
Sistemas de variación de fase
Resolvasas/Integrasas
Estabilidad plasmidica, transposición...