INMUNOHISTOQUIMICA(MARCADORES TUMORALES)

7/25/2019 INMUNOHISTOQUIMICA(MARCADORES TUMORALES)

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126 Patologa Revista latinoamericana Volumen 45, nm. 3, julio-septiembre, 2007

Interpretacin bsica de inmunohistoqumica. Caractersticas generales

de diversos anticuerpos y su localizacin celular y subcelular

Artculo de revisin

Diego L Jorge Buys,* Csar O Lara Torres,**,*** Carlos Ortiz Hidalgo**,***

RESUMEN

En aos recientes la inmunohistocuqmica se ha convertido en una importante herramienta para el diagnstico histopatolgico. La tcnica

de inmunourescencia desarrollada por Albert Coons y colaboradores sent las bases de la inmunohistoqumica actual. Para la adecua-

da interpretacin de los inmunorreactantes los patlogos debemos de estar familiarizados con la localizacin celular y subcelular de los

anticuerpos. Hay antgenos celulares localizados en la membrana, el ncleo o el citoplasma as como antgenos extracelulares. Debido

a la gran variedad de factores capaces de inuir en la demostracin de antgenos pueden surgir diversos problemas tcnicos y de inter-

pretacin. La jacin, el tipo, la duracin, el pH del jador, la temperatura, la sensibilidad de la clona utilizada, el sistema de deteccin y

el cromgeno, entre otros, son esenciales para la adecuada inmunomarcacin.

Palabras clave: inmunohistoqumica, anticuerpos, localizacin.

ABSTRACT

In recent years, immunohistochemistry has become and important tool in diagnostic histopathology. The immunoorescence technique

described by Albert Coons and colleagues was the cornerstone for what latter became immunohistochemistry. Pathologists have to be

familiarized with the precise cellular and subcellular location of the immunohistochemical reaction for proper interpretations of immunos -

tains. There are cellular antigens with membranous, nuclear and cytoplasmic staining as well as extracellular antigens. Many technical and

interpretative pitfalls may arise because of a wide variety of factors that may inuence the demonstration of antigens in parafn embedded

tissue sections. Fixation, type of tissue, duration and pH of xative, temperature, as well as the sensitivity of the antibody clone, detection

system, and chormogen, amongst others, are important considerations for proper immunolabling.

Key words: Immunohistochemistry, antibodies, localozation.

* Departamento de Patologa, Hospital Espaol, Mxico, DF.** Departamento de Patologa, Centro Mdico ABC, Mxico,

DF.*** Departamento de Biologa Celular y Tisular, Universidad

Panamericana. Mxico, DF.

Correspondencia: Dr. Carlos Ortiz Hidalgo. Departamento dePatologa. Centro Mdico ABC, Sur 136, nm. 116, colonia Las

Amricas, CP 01120, Mxico, DF.E-mail: [email protected]: enero, 2007. Aceptado: julio, 2007.

La versin completa de este artculo tambin est disponible eninternet: www.revistasmedicasmexicanas.com.mx

La inmunohistoqumica es una tcnica que ha

revolucionado la histopatologa. El desarrollo

de la metodologa de anticuerpos marca-dos con fluorescena (inmunofluorescencia

indirecta) realizado por Albert H Coons (figura 1A),

Hugh Creech, Norman Jones y Ernst Berlinier, en la

Universidad de Harvard en 1941, fue el antecedente

del florecimiento de la inmunopatologa.1

El uso de anticuerpos marcados con isotiocianato de

fluorescena le permiti a Coons el estudio detallado

de diversos antgenos, la identificacin de protenas

Revista latinoamericana

Patologa 2007;45(3):126-40

tisulares, la deteccin de complejos inmunitarios, la

localizacin de antgenos virales en clulas infectadas

y de antgenos tumorales en diversas neoplasias. Apesar de esta trascendente innovacin, la tcnica de

inmunofluorescencia fue, hasta cierto punto, de utilidad

limitada en la patologa quirrgica diagnstica, quiz

debido a que requiere tejido fresco y un microscopio

especial (de fluorescencia) que no cuenta con la mejor

resolucin morfolgica. Pero sin duda el mtodo creado

por Coons y col. sent las bases de la inmunohistoqu-

mica actual.

En 1959 Rodney Porter y Gerald Edelman descri-

bieron la estructura de las inmunoglobulinas, por lo

que en 1972 recibieron el premio Nobel de Fisiologa oMedicina. Su descubrimiento fue posible gracias a que

obtuvieron grandes cantidades de estas protenas de

pacientes con mieloma de clulas plasmticas (mieloma

mltiple). Las inmunoglobulinas del mieloma, prote-

nas de Bence-Jones y macroglobulinas monoclonales

jugaron un papel fundamental en el esclarecimiento

de la estructura, gentica, sntesis y metabolismo de

las inmunoglobulinas. Algunos aos despus, Susu-


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127Patologa Revista latinoamericana Volumen 45, nm. 3, julio-septiembre, 2007

Interpretacin bsica de inmunohistoqumica

mu Tonegawa, premio Nobel de Medicina en 1987,

describi la diversidad de los anticuerpos, demostr la

compleja recombinacin somtica y los mecanismos de

hipermutacin a que estn sujetos los linfocitos B en sus

mecanismos de produccin y sntesis de inmunoglobu-

linas, lo que les permite su selecta especificidad ante la

demanda de millones de antgenos potenciales.2

En el prrafo final de la carta publicada el 7

agosto de 1975 en la revista Nature, Klher y Milstein

indicaron que: It is posible to hybridise antibody-produ-

cing cells from different origins. Such cells can be grown

in-vitroin massive cultures to provide specific antibody.

Such cultures could be valuable for medical and industrial

use.3

En 1984 Cesar Milstein, Georges JF Khler y Niels

K Jerne recibieron el Premio Nobel de Medicina por

su aportacin para la produccin de anticuerpos

monoclonales2(figura 1 B, C, D). Estos investigadores

pudieron unir dos clulas y obtener un hbrido (hibri-doma) que comparten caractersticas funcionales de

ambas poblaciones celulares. Fusionaron un linfocito

B del bazo de un ratn inmunizado con eritrocitos de

oveja (que produca anticuerpos contra un eptope

del eritrocito), con clulas plasmticas de mieloma

de un ratn, la clula resultado de esta fusin viva

de forma indefinida in vitro. Este hbrido es capaz

secretar inmunoglobulinas en contra del eptope

del eritrocito de oveja, debido a que el hibridoma

tambin haba adquirido la facultad de secrecin

de inmunoglobulinas del mieloma y su capacidad

para vivir in vitro. As fue como pudieron producir

anticuerpos in vitroen contra de un solo determinan-

te de una compleja estructura antignica. Klher y

Milstein demostraron que virtualmente es posible

fusionar cualquier clula con lneas celulares de

mieloma, produciendo as cantidades homogneas

ilimitadas de anticuerpos con la especificidad de la

clula fusionada.

Figura 1. A)Albert H. Coons, B)Cesar Milstein, C)Georges J.F. Khler, D)Niels K. Jerne.

Actualmente existen numerosas estrategias

teraputicas oncolgicas que utilizan anticuerpos

monoclonales como el anti-CD20 (Rituximab),4anti-

CD117 (Gleevec)5y anti-Her2/neu (Herceptin),6

determinantes que pueden hacerse evidentes en eltejido obtenido por biopsia mediante inmunohis-

toqumica con anticuerpos monoclonales dirigidos

contra CD20, CD117 y Her2/neu, respectivamente

(vide infra).7

El uso de anticuerpos monoclonales es parte de

la rutina de los laboratorio de patologa debido a que

son de gran utilidad en el diagnstico de tumores me-

tastsicos de primario desconocido, tumores de partes

blandas, linfomas y leucemias y pueden ayudar a la

identificacin de algunos agentes infecciosos;8adems,

los anticuerpos monoclonales pueden ser de utilidad

como factores pronsticos y predictivos en diversos

tumores.

Es necesario que el patlogo conozca las ca-

ractersticas biolgicas generales de los antgenos

utilizados, as como el tejido con el cual reacciona, la

localizacin celular donde la inmunorreaccin debe

encontrarse, y tener en mente las posibles reacciones

cruzadas inespecficas de cada anticuerpo. Como


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Jorge Buys DL y col.

ejemplos estn las inclusiones nucleares de biotina

en el endometrio gestacional mal interpretadas como

infeccin por herpes virus,9 la expresin aberrante

de CD43 y CD5 en algunos linfomas B de clulas

pequeas, la expresin de receptores de estrgenos

en adenocarcinomas pulmonares,10la positividad del

HMB45 en pecomas,11-13y la expresin de CD117 en

tumores desmoides y otros tumores de tejidos blan-

dos.14-16

Muchas de las discrepancias informadas en la lite-

ratura se han atribuido a problemas metodolgicos y

tcnicos, primordialmente relacionados con la tcnica

de conservacin y procesamiento de los tejidos.17,18Por

esto es necesario el uso de mtodos estandarizados

para inmunohistoqumica diagnstica, con un con-

tinuo programa de calidad, validez independientey acreditacin de laboratorios especializados en la

materia.19

En este artculo se discute la evaluacin de la in-

terpretacin de la inmunomarcacin, con nfasis en la

localizacin celular y subcelular de diversos anticuerpos.

INTERPRETACIN Y CATEGORIZACIN DE

INMUNORREACCIONES BASADA EN LA

LOCALIZACIN CELULAR

Es menester informar no slo si la inmunorreaccin es

positiva o negativa, sino tambin la distribucin citol-

gica y las caractersticas de expresin de los antgenos

empleados. Si no se especifica la localizacin subcelular

(nuclear, membranosa o citoplsmica) del inmuno-

rreactante, el informe diagnstico podra carecer de

significado. Por ejemplo, en ocasiones el Her2/neu

(cerbB2) o el CD99 presentan reaccin granular cito-

plsmica que debe considerarse negativa, pues tanto

el Her2/neu como el CD99 deben interpretarse como

positivos, exclusivamente cuando la reaccin se en-

cuentra en la membrana celular (vide infra).Segn el sitio de localizacin, la inmunomarcacin de

antgenos celulares puede presentarse en la membrana,

el ncleo o el citoplasma. Existen antgenos, como el

amiloide, la fibronectina, la laminina y la colgena tipo

IV cuya localizacin es extracelular (cuadro 1).

Membranoso Citoplsmico Nuclear Extracelular Mixto

CD1a Caldesmn Receptor de Estrgenos Osteocalcina B-catenina (M/N)

CD2 /CD3 /CD4/ CD5/ CD7/

CD8

Actina de msculo liso Receptor de Progesterona Osteonectina Calrretinina (N/C )

CD10 Actina msculo especica Receptor de Andrgenos Colgena IV S-100 (N/C)

CD20 Desmina p53 Laminina ALK (N/C)

CD21 Calponina p63 Componente amiloide P WT1 (N/C)CD23 Vimentina PAX5 CD3 (M/C)

CD31 Citoqueratinas Oct 2 CD79a (M/C)

CD34 Bcl-2 Oct 3/4 CD15 (M/Golgi/C)

CD43 CD61 (GPIIIa) Bob 1 CD30 (M/Golgi/C)

CD45 CD68 Ciclina D1 LMP1 (M/Golgi/C)

CD56 Mieloperoxidasa TdT Fascina (C/M)

CD57 TIA-1 Bcl-6

Inmunoglobulinas Granzima B NPM

Kappa Perforina Miogenina

Lambda TRAcP MyoD1

CD99 DBA 44.1 p16

CD123 Kappa p21

CD138 Lambda CMV

Glucoforina Inmunoglobulinas Telomerasa

Espectrina Cromogranina CDX-2

Trombomodulina Sinaptosina TTF-1

E-cadherina Neurolamentos Ki-67PLAP GFAP PCNA

EMA AMACR VPH

Distrona Antgeno Prstata Especico Antgeno T del Virus JC

CEA a-Inhibina

PGP 9.5 Gonadotropina corinica

humana

VEGF a-fetoprotena

Her2/neu ( c-erbB2) HMB-45

EGFR1 Melan-A

Glut-1 Mamoglobina

CD117 (c-kit) VEGF

CD31 Prolactina

CD34 ACTH

Cuadro 1. Patrones de localizacin para diferentes anticuerpos


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Expresin en la membrana celular

La decoracin de la membrana puede presentarse en

diferentes circunstancias (figura 2):


Figura 2. Inmunomarcacin de membrana: CD31 en clulasplasmticas reactivas. E-caderina en carcinoma mamario ductal

inltrante. CD117 en seminoma clsico. CD138 en mieloma de

clulas plasmticas. Distrofina, marcacin submembranal en

msculo esqueltico (cortesa Dra. B de Len). EMA membrana y

acentuacin paranuclear en linfoma anaplsico de clulas grandes.

CD15 positivo granular en regin paranuclear. CD30, clulas de

Reed-Sternberg con marcacin membranosa y paranuclear.

1)Antgenos localizados en la membrana celular:

Molculas de adhesin celular como: caderi-

nas, molculas plaquetarias de adhesin endotelial

(PECAM) , molculas de adhesin celular neural

(N-CAM), molculas de adhesin celular epitelial

(Ep-CAM).

Protenas y receptores de la superficie celular o

transmembranosas, como el factor de crecimiento epi-

drmico (EGFR), Her2/neu (c-erbB-2), CD117 (c-kit),

CD31, CD34, algunos antgenos leucocitarios (CD20,

CD3, CD43,CD138), el factor de crecimiento derivado

de las plaquetas (PDGFR) y la protena latente de

membrana del virus de Epstein-Barr (LMP1).

2)Molculas con patrn membranoso. Se obtiene este

patrn debido a que los anticuerpos se unen a prote-

nas de membrana y con el citoesqueleto subyacente,

como la -catenina (en clulas epiteliales), la distrofina

(en clulas musculares) y la espectrina (en eritrocitos).

Estas protenas muestran inmunorreactividad de

membrana por su localizacin lineal a lo largo de la

interfase membrana-citoplasma.7

Algunos anticuerpos dirigidos contra antgenos

de las membranas suelen producir marcacin peri-

metral, que puede estar acompaada de acentuacin

citoplsmica para-nuclear (aparato de Golgi) como

el CD30, CD15, el LMP-1 y el EMA (este ltimo en

casos de linfoma anaplsico de clulas grandes). Esto

se debe a que el aparato de Golgi es el sitio donde se

agregan los carbohidratos a las protenas antes de ser

transportadas hacia la superficie celular (figura 2).

En ocasiones, la marcacin es exclusivamente en el

aparato de Golgi, cuando la densidad de las molculas

en la superficie celular es muy baja para su detec-

cin inmunohistoqumica, como puede verse con el

CD15 (LeuM1), como en algunos casos de linfoma deHodgkin clsico (figura 2); la fascina tiene marcacin

membranosa y citoplsmica.7

La polarizacin normal de las clulas epiteliales

hace que algunos antgenos de la membrana muestren

marcacin restringida o predominante en su superficie

apical, como puede verse con el antgeno de membra-

na epitelial, el antgeno carcinoembrionario, la villina

o en las superficies baso-laterales, como cuando se

utiliza E-caderina, -catenina, o Ep-cam (figura 3). Este

Figura 3. Inmunomarcacin con antgeno carcinoembrionario.(CEA). A) Carcinoma hepatocelular. Ntese la polarizacin de la

inmunoraccin hacia la supercie apical de las clulas (echas).

B) Carcinoma mucinoso de la glndula mamaria. La positividad al

CEA exhibe acentuacin en la parte adluminal (echas).

es el patrn de marcacin polarizado de algunos an-

tgenos en clulas normales y puede reemplazarse por

marcacin perimetral en neoplasias malignas debido

a los trastornos en la polaridad celular que ocurren

en las clulas neoplsicas.20El carcinoma mucinoso

es un ejemplo de polaridad alterada. Esta variante de

carcinoma mamario mucinoso podra ser una forma

de carcinoma in situen donde la mucina, en lugar de


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ser secretada hacia la superficie apical celular, por me-

dio de un mecanismo de inversin de la polaridad,

produce secrecin hacia el estroma, lo que conlleva

el desprendimiento del epitelio de su estroma subya-

cente. De esta forma, la mucina invade el estroma y

separa a las clulas de su membrana basal. Lo anterior

no slo explica el excelente pronstico del carcinoma

mucinoso de la mama sino, adems, el hecho de que

casi la mayor parte del moco es extracelular.21En el

carcinoma mucinoso la expresin de algunos inmuno-

rreactantes, como el antgeno de membrana epitelial

y el antgeno carcinoembrionario predominan hacia

la superficie basal, lo que traduce esta inversin de

la polaridad (figura 3).21

Los siguientes tres ejemplos de inmunorreaccin

membranosa tienen relevancia clnica bajo ciertascircunstancias:

1)La expresin membranosa del Her-2/neutiene

implicaciones pronsticas. Existe correlacin directa

entre la expresin de HER-2/neu y la resistencia a

citoxano/metotrexato y tamoxifeno. Con tecnologa

recombinante se desarroll un anticuerpo monoclo-

nal contra HER-2/neu, conocido como traztuzumab

(huMAB HER-2, Herceptin) que inhibe al HER-

2/neuy, a su vez, bloquea el crecimiento de la clula

neoplsica. Por inmunohistoquimica utilizando Her-cepTest (DAKO Corporation), o con cerbB2/CB11 se

puede determinar si hay expresin de Her2/neu. La

interpretacin se hace mediante una escala que va de

0 a 3 (marcacin de membrana) con equivalencia con

la sobreexpresin gnica. Cuando las clulas tienen

menos de 20,000 receptores no muestran inmuno-

marcacin (negativo, 0); si tienen cerca de 100,000

receptores muestran inmunomarcacin parcial, leve o

moderada de la membrana con menos de 10% de las

clulas con marcacin completa en la membrana (po-

sitivo, 1+); cuando tienen 500,000 receptores muestran

inmunomarcacin en la membrana en ms de 10% delas clulas (positivo, 2+), y si tienen aproximadamente

2300,000 receptores muestran inmunomarcacin com-

pleta de la membrana en ms del 10% de las clulas

(positivo, 3+). Cuando se realiza inmunohistoqumica

estandarizada en tejidos bien fijados y procesados hay

una excelente correlacin entre el nmero de genes

amplificados y la expresin proteica membranosa.22

Otro marcador de membrana con implicaciones

pronsticas es el factor de crecimiento epidrmico que

normalmente se expresa en los estratos basal y supra

basal de los epitelios escamosos estratificados y se

sobreexpresa en varios carcinomas, por incremento

en el nmero de copias gnicas.23El anti-EGFR (Ge-

fitinib) se utiliza en el tratamiento de carcinomas

del pulmn, carcinomas de la cabeza y el cuello, y

otros tipos de tumores. La evaluacin inmunohisto-

qumica del anti-EGFR es membranosa y, de manera

similar al Her2/neu, existe una forma de evaluar la

sobreexpresin del factor de crecimiento epidrmico:

multiplicando la extensin e intensidad de la positi-

vidad de la marcacin (0,1,2,3).23,24

2)Los antgenos leucocitarios, que incluyen CD-1,

CD-2, CD-3, CD-4, CD-5, CD-7, CD-8, CD-19, CD-20,CD-43 y CD-45, son receptores de la superficie celular

o ligandos involucrados en el reconocimiento, inte-

raccin, adhesin y transduccin celular de seales

o interaccin con protenas solubles-glicoprotenas y

matriz extracelular. La marcacin inmunohistoqumica

para estos antgenos produce un patrn perimetral de

membrana debido a la distribucin uniforme de estos

antgenos en la superficie celular. La expresin de mem-

brana en los linfocitos neoplsicos puede ser el blanco

de anticuerpos teraputicos. El ms utilizado en el

tratamiento de linfomas de clulas B y linfoma de Hod-gkin de predominio linfoctico nodular es el anticuerpo

anti-CD-20/rituximab (Mabthera).25Rituximab es un

anticuerpo monoclonal quimrico murino-humano que

se une especficamente al CD20 y establece funciones

para mediar la lisis de las clulas B.

Otro anticuerpo del que recientemente puede

disponerse es el Campath-1H (Alentuzumab). Este

anticuerpo est dirigido contra el CD52, que es una

protena que se encuentra en la membrana de los lin-

focitos B, y que se ha utilizado en el tratamiento de la

leucemia linfoctica crnica.26

3)El CD117 (c-kit) es una protena transmembranosade 145 KDa que funciona como receptor de la tirosina

cinasa.27El gen c-kit se localiza en el cromosoma 4

(4q11-12) prximo al gen del receptor del factor de

crecimiento epidrmico (EGFR). El CD117 es un epto-

po localizado en el dominio extracelular del receptor

y es estructuralmente similar a otros receptores con

actividad de tirosina cinasa, como el receptor del factor



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de crecimiento derivado de plaquetas (PDGFRs), y el

factor estimulante de colonias (CSF1R) entre otros. El

c-kit, normalmente, se expresa en las clulas hemato-

poyticas progenitoras, clulas cebadas (mastocitos),

clulas germinales, melanocitos y clulas intersticiales

de Cajal. La mutacin da como resultado la activacin

constitutiva del c-kit, que participa en la patognesis

de los tumores del estroma gastrointestinal y repre-

senta uno de los mayores criterios diagnsticos para

estos tumores. La demostracin inmnohistoqumica

de CD117 no slo contribuye al diagnstico de los

GIST, sino en la seleccin de los pacientes que pue-

den beneficiarse con el tratamiento con el inhibidor

del receptor de tirosina cinasa STI571 (Gleevec ).28

Existen algunos informes de la expresin de CD117 en

sarcomas de clulas claras,29tumores desmoides intra-abdominales,15 angiomiolipomas,30y otros tumores

de partes blandas.16Por las caractersticas biolgicas

del c-kit, que es un receptor transmembranoso, la

inmunomarcacin debe ser predominantemente de la

membrana celular o citoplasmtica con acentuacin

de la primera.

EXPRESIN NUCLEAR

Existen diversos anticuerpos dirigidos contra las

protenas o enzimas nucleares. La mayor parte de losantgenos nucleares incluye a protenas asociadas al

ciclo celular, protenas reparadoras de genes, enzimas

nucleares, factores de trascripcin, productos de genes

supresores tumorales, receptores de hormonas esteroi-

des, protenas ligadoras de calcio, y algunas protenas

virales nucleares (cuadro 1 y figura 4).

La decoracin nuclear puede ser homognea granu-

lar, como: TdT, bcl-6, p63 y los receptores de estrgenos,

progesterona y andrgenos; con patrn moteado, como

lo expresa del antgeno nuclear latente del Herpes virus

humano 8, o granular fino con acentuacin nucleolar

como el Ki-67 (MIB-1), telomerasa, nucleofosmina o

transductin-like enhancer of split 1TLE-1 (figura 4). El

WT1, por sus siglas en ingls [resultado de la trans-

locacin recproca t(11;22) (p13;q11) o (p13;q12)], es

un marcador nuclear que se encuantra en el tumor de

Wilms, tumor desmoplsico intraadbominal y tumo-

res serosos del ovario; sin embargo, en algunos otros

tumores puede haber positividad citoplsmica.31

El Pax-5 y Oct2 son marcadores de expresin nuclear

intensa en linfocitos B y contribuyen al diagnstico

de linfoma de Hodgkin clsico y al de predominio

linfoctico. La familia de transcriptores nucleares Pax

est compuesta por nueve miembros que funcionan

durante la embriognesis y regulan la diferenciacin

celular.32-35El Pax 5 (localizado en el cromosoma 9p13)

codifica a una protena de lnea especfica de linfocitos

B (B-cell specific activator protein/BSAP) que se expresaen clulas precursoras B (pro-B y pre-B) y linfocitos

maduros. La expresin dbil granular nuclear en las c-

lulas de Reed-Sternberg es de utilidad en el diagnstico

inmunohistoqumico del linfoma de Hodgkin clsico.36

El Oct2 es un factor de trascripcin nuclear de clulas

B que se une especficamente al octmero (5ATTG-

CAT-3) y regula la activacin de la expresin gnica

de inmunoglobulinas en conjunto con la coactivacin

de BOB-1. El Oct2 se expresa en la mayor parte de los

ncleos de los linfocitos B y en casi todos los linfomas

B. El Oct2 es positivo en los ncleos de las clulas L y

H (en palomita de maz) del linfoma de Hodgkin con

predominio linfoctico nodular y es negativo hasta en

75% de las clulas de Reed-Sternberg del linfoma de

Hodgkin clsico (figura 5).37

En algunos anticuerpos la marcacin nuclear puede

estar acompaada de positividad citoplasmtica varia-

ble, quiz relacionada con la difusin de molculas o

localizacin parcial de las molculas en el citoplasma,


Figura 4. Inmunomarcacin nuclear. TdT en linfoma linfoblstico,TLE1 en sarcoma sinovial, p63 clulas mioepiteliales de la gln -

dula mamaria. Receptores de estrgenos en carcinoma mamario

ductal, WT1 en tumor seroso de ovario, Ki67 en linfoma B difuso

de clulas grandes.


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como la protena S-100, la calretinina, y el Alk-1 (este

ltimo en algunas circunstancias produce marcacin

simultnea del ncleo y el citoplasma, vide infra).38

EXPRESIN CITOPLSMICA

El citoplasma contiene diversos orgnulos y una

red de estructuras que forman el citoesqueleto

(microfilamentos, filamentos intermedios y microt-

bulos) responsable de la forma, rigidez, transporte

intracelular y de la movilidad celular. Los antgenos

citoplasmticos muestran tres patrones de tincin:

a)granular, b)difuso, y c)fibrilar (cuadro 3).

a)Patrn citoplsmico granularLa decoracin citoplsmica granular identifica

los antgenos que se localizan en los orgnulos,

como: anticuerpos anti-mitocondriales, enzimas y

protenas lisozomales (CD68), grnulos citopls-

micos de los mastocitos (triptasa, CD117), grnulos

citotxicos (CD56, Tia-1), grnulos secretores neu-

roendocrinos (cromogranina, sinaptofisina, PGP

9.5), hormonas (prolactina, ACTH, hormona del

crecimiento) y algunos microorganismos (figu-

ra 6). La marcacin puede parecer homognea cuando

la clula est empaquetada por dichos orgnulos ogrnulos, pero en la observacin detallada se podrn

identificar grnulos en una proporcin del citoplasma

celular. Los grnulos citoplasmticos pueden tener

polarizacin celular particular, como los grnulos

de las clulas neuroendocrinas del aparato gastro-

intestinal que se concentran en la base de la clula,

que es el polo donde son vertidos hacia los vasos

sanguneos del estroma. Los grnulos de secrecin

exocrina o apcrina se localizan, predominantemente,

por debajo del polo apical de las clulas (localizacin

luminal).

b)Patrn citoplsmico fbrilar

El esqueleto celular est compuesto por filamentos:

pequeos (actina), grandes (microtbulos) e inter-

medios (citoqueratina, vimentina, desmina, protenafibrilar cida glial, neurofilamentos, nestina, periferi-

na, internexina y lamininas nucleares). Las fibras del

citoesqueleto forman una malla que se extiende desde

la membrana nuclear hasta la membrana celular,

por lo que la inmunomarcacin de estas protenas

exhibe de forma caracterstica un patrn fibrilar,

frecuentemente con acentuacin submembranosa

debido al revestimiento laminar que estas fibras

tienen por debajo de la membrana celular y simulan

el patrn de marcacin de membrana. Con diversos

anticuerpos en los carcinomas de clulas pequeas(queratinas), carcinomas de clulas de Merkel (CK

20, cromogranina A), tumor desmoplsico de clulas

pequeas (desmina) y tumores rabdoides malignos

(queratina/vimetina) puede apreciarse acentuacin

en la decoracin en la regin perinuclear (punto

paranuclear) debido a la existencia de cmulos o

agregados de filamentos intermedios en esta regin

(figura 7).

Figura 5. Inmunomarcacin con Oct-2. A) Linfoma de Hodgkin depredominio linfoctico nodular. Inmunomarcacin nuclear en clulas

L y H. B) Linfoma de Hodgkin clsico (esclerosis nodular). Ntese

que la clula de Reed-Stermberg (centro) es negativa, mientras que

los linfocitos B pequeos reactivos muestran positividad nuclear.

Figura 6. Inmunomarcacin citoplsmica. A) Tumor de Warthin H yE. Antimitocondrias en el mismo tumor de Warthin de la gura A y

en un caso de carcinoma mamario oncoctico. CD68 en macrfagos,

prolactina en hipsis normal, triptasa en mastocitoma cutneo,

Tia-1 en linfoma T/NK.



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c)Partn citoplasmtico

Los antgenos que producen un patrn de marcacin

citoplasmtico incluyen: protenas del citoplasma o

vesculas grandes, como: hemoglobina, albmina,

mioglobina, tiroglobulina, enolasa neurona espec-

fica, inmunoglobulinas, CD3, CD79a, bcl-2 y algunas

protenas virales, como el HBsAg, que produce unpatrn homogneo de tincin, casi siempre paranu-

clear. La positividad para estas molculas puede,

Protena detectada (IHQ) Enfermedad Gen de fusin Translocacin Patrn de tincin

Ciclina D1 Linfoma de clulas del

manto

CyclinD1-IgH t(11;14)(q13;q32) nuclear

Mieloma mltiple CyclinD1-IgH t(11;14)(q13;q32) nuclear

Bcl-2 Linfoma folicular bcl-2-IgH t(14;18)(q32;q21) nuclear

bcl-2-IgL t(2;18)(p12;q21) nuclear

Bcl-10 Linfoma MALT bcl-10-IgH t(1;14)(p22;q32) nuclear

API2-MALT1 t(11;18)(q21;q21) nuclear

bcl-10-Ig? t(1;2)(p22;p12) nuclear

ALK-1 Linfoma anaplsico de

clulas grandes

NMP/ALK t(2;5)(p23;q35) nuclear y citoplsmico

TPM3-ALK t(1;2)(q21;p23) citoplsmico con acen-

tuacin membranosa

TPM4-ALK t(2;19)(p23;p13.3) citoplsmico con acen-

tuacin membranosa

TFG-ALK t(2;3)(p23;q21) citoplasma

ATIC-ALK Inv(2)(p23;q35) citoplasma

CLTCL-ALK t(2;22)(p23;q11.2) citoplsmico granular

MSN-ALK t(X;2)(q11-12;p23) membranoso

WT1 (carboxi-t) Tumor de clulas

pequeas redondas

desmoplsico

EWS-WT1 t(11;22)(p13;q12) Nuclear (en ocasiones

puede haber marca-

cin citoplasmica,

ver texto)

FLI1 Sarcoma de Ewing/

PNET

EWS/FLI1 t(11;22)(q24;q12) nuclear

TFE3 Carcinoma renal con

tXp11.2

PRCC-TFE3 t(X;1)(p11.2;q21) nuclear

ASPL-TFE3 t(X;17)(p11.2;q25) nuclearPSF-TFE3 t(X;1)(p11.2;p34) nuclear

NonO-TFE3 Inv(X)(p11;q12) nuclear

SYT Sarcoma sinovial SYT-SSX1,2,4 t(X;18)(p11.2;q11) nuclear

Cuadro 2. Deteccin de protenas relacionadas con eventos moleculares especcos

Figura 7. Inmunomarcacin citoplsmica. Arriba izquierda y arribaderecha, neurolamentos y queratina 20 en tumor de clulas de

Merkel, ntese la acentuacin paranuclear (punto paranuclear).

Abajo izquierda pared muscular de intestino con actina, marcacin

brilar. Abajo derecha. Tumor desmoplsico de clulas pequeas

con desmina, ntese la acentuacin paranuclear.



9/15


algunas veces, mostrar un patrn granular. Las

inmunoglobulinas, CD3, CD79a, y bcl-2 tienen mar-

cacin citoplsmica con acentuacin alrededor de la

membrana nuclear. Existen casos raros de linfomas

B de clulas grandes con abundante matriz fibrilar

que mediante el uso de CD20 exhibe inmunorreac-

cin positiva con patrn de marcacin citoplsmica

estriada, lo que indica que el material est formado

por membrana celular con procesos celulares inter-

digitantes (figura 8).39

cinasa que quiz juegue un papel fundamental en la

gnesis de los LACG.40,41La localizacin inmunohis-

toqumica subcelular de ALK puede correlacionarse

con el patrn de traslocacin. En los LACG con t(2;5)

(NPM-ALK) la expresin de ALK coexiste tanto en el

ncleo como en el citoplasma. La marcacin granular

citoplsmica se relaciona con la t (2;22) (traslocacin

entre el gen de la clathrina-CLTCL y el gen ALK), y

la marcacin de membrana y citoplasma indica t(1;2)

(traslocacin entre el gen de la tropomiosina- TPM3

y el gen ALK).42,43 La positividad inmunohisto-

qumica para ALK representa un punto esencial en

el diagnstico de los LACG (figura 9). La expresin

del ALK puede identificar un subtipo de LACG que,

predominantemente, ocurre en pacientes jvenes, con

Figura 8. Linfoma no Hodgkin difuso de clulas grandes con matrizbrilar y formacin de pseudosrosetas. Izquierda H&E, derecha

CD20. Ntese como las clulas se agregan formando pseudoro-

setas y las membranas son marcadas con CD20.

EXPRESIN INMUNOHISTOQUIMICA COMOREFLEJO DE EVENTOS MOLECULARES

La expresin inmunohistoqumica de algunos antge-nos es el resultado de productos de expresin gentica

secundarios a traslocaciones especficas (cuadro 2).

Como referencia se citan tres ejemplos.

1) ALK. La expresin de ALK (Anaplastic lymophoma

kinase) en los linfomas anaplsicos de clulas grandes

(LACG) refleja la traslocacin t(2;5)(p23;q35), que se

encuentra hasta en 70% de estos linfomas. El gen de

la cinasa del linfoma anaplsico (ALK) codifica una

tirosina cinasa transmembranosa, que pertenece a la

superfamilia de receptores de insulina y se localiza en

el cromosoma 2p23. En los linfomas anaplsicos de c-

lulas grandes con la traslocacin clsica t(2;5)(p23;35),el gen ALK se fusiona con el gen de nucleofosfamina

(NPM) que se localiza en el cromosoma 5 y codifica

una protena nuclear.31,32Esta fusin de genes resulta

en la produccin de una protena quimrica con el

extremo amino terminal de nucleofosfamina unido al

dominio citoplsmico del gen de la cinasa del linfoma

anaplsico. Esto lleva a la activacin de la tirosina

Figura 9. Alk-1 en linfoma anaplsico de clulas grandes. A)Mar-cacin nuclear y citoplsmica. B)Marcacin granular citoplsmica.

(vase texto).

buena respuesta a la quimioterapia y pronstico favo-

rable.44,45Por excepcin, algunos linfomas difusos de

clulas grandes B pueden expresar ALK. Estos casos

presentan, predominantemente, morfologa inmuno-

blstica-plasmoblstica y pueden tener crecimiento

sinusoidal.46El patrn de inmunomarcacin tambin

se correlaciona bien con el gen traslocado, que es cito-

plasmtico granular cuando es CLTCL (Clathrina), ynuclear-citoplasmtico cuando es NPM.46

La expresin del ALK no es exclusiva de los LACG,

puede encontrase en otros tumores, como los inflama-

torios miofibroblsticos (en donde se ha identificado

la traslocacin del gen ALK), en el rabdomiosarcoma

alveolar, el mesenquimoma maligno, los liposarcomas

pleomrficos y mixoides, el sarcoma de Ewing/tumor



10/15


neuroectodrmico primitivo, el sarcoma fibromixoide

de bajo grado, el osteosacroma extraesqueltico, los

schwannomas, los lipomas y en el mieloma de clulas

plasmticas.47-50

2) BCL-2. El Bcl-2 (B-cell lymphoma-2), descrito

en 1984 por Tsujimoto y col (con la participacin

de Peter C. Nowell, quien describi el cromosoma

Filadelfia) fue la primera protena que se relacion

con traslocaciones y que se identific en linfomas

(linfoma folicular).51El Bcl-2 es una protena que se

localiza en la membrana interna mitocondrial (y en

menor proporcin en la membrana nuclear y el retculo

endoplsmico) que juega un papel fundamental en la

proteccin celular contra la apoptosis.52El Bcl-2 suele

encontrarse en el citoplasma de los linfocitos B de lazona del manto, en algunas clulas del centro germinal

y en algunos linfocitos T. En la traslocacin t(14;18)

identificada en los linfomas foliculares se yuxtapone el

gen que codifica para la protena Bcl-2 del cromosoma

18 con el gen de cadena pesada de inmunoglobulina

del cromosoma 14, e induce la sobreexpresin de Bcl-2.

Esta traslocacin sucede en 75 a 90% de los linfomas

foliculares y puede hacerse evidente por medio de

inmunomarcacin con anti-Bcl-2. Esto se observa en

un porcentaje mayor de casos de linfomas foliculares

grado I, comparada con los de grado III.53

Debido aque los centros germinales reactivos no son positivos

al Bcl-2, la inmunomarcacin con este anticuerpo ha

sido de gran utilidad en el diagnstico diferencial entre

hiperplasias y linfomas foliculares. No obstante, la

expresin de Bcl-2 no es especfica de linfomas folicu-

lares ni indica necesariamente un origen folicular, ya

que puede existir en otros procesos linfoproliferativos,

aunque en ellos la sobre-expresin de la protena no

se vincula con la traslocacin (14;18).54

Debido a que algunas clulas T son positivas al

Bcl-2 en los folculos neoplsicos, es necesario realizar

marcadores complementarios para clulas B y T paraevidenciar qu clulas son las reactivas al Bcl-2 en

dichas neoplasias. El Bcl-2 es de utilidad en el diag-

nstico diferencial entre linfomas difusos de clulas

grandes con inmunofenotipo B y el linfoma de Burkitt.

El linfoma de Burkitt es negativo al Bcl-2 mientras que

el linfoma difuso puede expresar Bcl-2 hasta en 30%

de los casos.55

3) BCL-10. El Bcl-10 es una protena adaptadora,

con una unin a caspasa (caspase recriutment do-

main/CARD) que promueve la apoptosis y activa la

pro-caspasa 9 y NF-kB, descrita por primera vez en

los linfomas B tipo MALT.56Lo normal es que Bcl-10

se exprese en el citoplasma de linfocitos B localizados

en centros germinales y en la zona marginal.

La expresin nuclear de BCL-10 se manifiesta en un

grupo de linfomas B de la zona marginal, extraganglio-

nar (linfomas MALT) con traslocacin t(1;14)(p22;q32)

o t(11;18)(q21;q21). Puede haber inmunomarcacin

citoplsmica en casos de LZM con t(14;18) que afectan

el gen MART1.57,58Los casos de LZM con marcacin

nuclear positiva tienen menor edad de presentacin

(51.4), mayor predominio del sexo masculino (19/14)

y predileccin por la localizacin pulmonar y delaparato digestivo, comparados con los casos con solo

marcacin citoplasmtica (como en los linfomas MALT

tiroideos). En los casos originados en el aparato diges-

tivo existe correlacin entre el porcentaje de tumores

Bcl-10 positivos y el grado de invasin de la neopla-

sia. Fueron positivos al Bcl-10 36.4% de los tumores

confinados a la mucosa y en 100 % de los casos de los

tumores con extensin mas all de la serosa. Adems

de su reconocida expresin en linfomas B tipo MALT,

la expresin de Bcl-10 puede presentarse en algunos

casos de linfomas linfoplasmocticos (macroglobuli-nemia de Waldenstrom, 55%), todos con positividad

nuclear.57En general, este ltimo grupo de linfomas

muestra mayor ndice de afeccin de la mdula sea,

pero no existe correlacin entre la positividad al anti-

cuerpo y las concentraciones sricas de paraprotena

IgM de cadenas ligeras o variables clnicas.57

ANTGENOS EXTRACELULARES

a) Osteocalcina

Existen diversas protenas que intervienen en el pro-

ceso de mineralizacin, que al identificarlas medianteinmunohistoqumica son de importancia diagnstica

en los tumores seos. La osteocalcina es una de las

principales protenas intraseas, de funcin poco

precisa, que predominantemente se localiza en el

citoplasma de los osteoblastos.59 Es una molcula

de peso aproximado de 5.8 KDa compuesta por 49

aminocidos que incluyen tres residuos cido gamma-



11/15


carboxilglutmico (gla). Despus de su produccin

por los osteoblastos, la osteocalcina se incorpora a la

matriz sea y una fraccin se libera a la circulacin

y puede medirse como parmetro bioqumico del

metabolismo seo. La osteocalcina se sobreexpresa

en presencia de anlogos de la vitamina D, como la

1,25dihidroxivitamina D2 y la 24-epi-1,25dihidroxi-

vitamina D2, en el paso final de la diferenciacin

osteoblstica y en la formacin de osteoide. Est de-

mostrado que algunos fibroblastos pueden expresar

eptopes que pueden producir reacciones cruzadas

cuando se utilizan anticuerpos policlonales anti-os-

teocalcina, por lo que para un diagnstico especfico

se requieren anticuerpos monoclonales con recono-

cimiento selectivo de pptidos. En la deteccin de

tumores formadores de hueso, la osteocalcina tiene70% de sensibilidad y 100% de especificidad, compa-

rada con 90% de sensibilidad y 50% de especificidad

informada con la osteonectina.59Adems, hay que

considerar que la osteonectina puede ser positiva en

el tumor de clulas gigantes, el condroblastoma, en

clulas endoteliales y fibroblastos, por lo cual debe

tenerse precaucin en su interpretacin.60,61

b) Colgena tipo IV y laminina

La colgena tipo IV es el principal componente

estructural de la membrana basal.62

Los genes que co-difican para la molcula de la colgena IV se localizan

en el cromosoma13q. La colgena IV difiere de los

otros tipos de colgena en su secuencia de aminoci-

dos, pues no forma fibras y su estructura helicoidal

se interrumpe. La laminina y la enactina-nidogen

son otros de los componentes de la membrana basal

que se une a los glucosaminoglicanos: actan como

puente para la unin de la colgena tipo IV de la

membrana basal con la matriz adyacente. Adems, la

colgena IV forma el sustrato para el crecimiento de

algunas clulas endoteliales, musculares y de nervios

perifricos y participa en la interaccin intercelular.Quiz la alteracin estructural de la colgena IV

contribuya a diversas alteraciones en la morfologa

celular.62

Los anticuerpos contra colgena IV son tiles para

evaluar la integridad de las membranas en clulas

normales, as como la ausencia de sta en carcinomas.

La adenosis esclerosante y la microglandular de la

glndula mamaria tienen una membrana basal bien

desarrollada que puede ser resaltada por medio de

inmunomarcacin con colgena IV. Lo anterior y la

existencia de clulas mioepiteliales evidenciadas por

medio de la actina (p63 o CD10) favorecen el proce-

so reactivo sobre un carcinoma.63Para distinguir la

pseudoinvasin provocada por cortes tangenciales en

un plipo adenomatoso de un verdadero adenocar-

cinoma infiltrante puede utilizarse colgena IV (vide

infra). Un ejemplo de la utilidad de la colgena IV en

sarcomas es el diagnstico diferencial histolgico entre

histiocitoma fibroso maligno, fibrosarcoma y tumor

maligno de vaina nerviosa perifrica. La existencia de

colgena IV o laminina favorece el tumor maligno de

vaina nerviosa perifrica, cuando la P-S100 y el CD57

(marcadores de tumor maligno de vaina nerviosaperifrica) son negativos.64

Con E-caderina y colgena tipo IV es posible

evaluar el estado de las uniones intercelulares junto

con la membrana basal. En el adenocarcinoma estos

anticuerpos muestran marcacin discontinua en 65%

con E-caderina y 96% con colgena IV. Las glndulas

en focos de pseudoinvasin muestran expresin mem-

branosa intensa, difusa y continua con E-caderina y

continua y bien delimitada en la membrana basal con

colgena tipo IV.65

c) Amiloide

El trmino amiloide (amylum) lo acu en 1838 el bo-

tnico Matthias Schleiden para describir la apariencia

del almidn en las plantas. En 1854 Rudolf Virchow

emple el trmino para designar a los cuerpos ami-

lceos del sistema nervioso debido a su reaccin con

tinciones de yodo. Virchow estaba convencido que

los cuerpos amilceos cerebrales podan considerar-

se idnticos al almidn de las plantas y aplicaba el

trmino amiloide para las enfermedades llamadas

degeneracin lardcea o ceroide de rganos, como

el hgado o el bazo.66

La existencia de amiloide define un grupo de

enfermedades con etiopatogenia diversa, cuyas ca-

ractersticas sobresalientes son: el depsito tisular de

material proteinceo acelular, amorfo, eosinfilo y que

muestra birrefringencia color verde-manzana con luz

polarizada con la tincin de rojo Congo.67El amiloide

corresponde a diversos grupos de protenas fibrilares



12/15


no ramificadas que, por difraccin de rayos X, orientan

perpendicularmente al eje de la fibra a las cadenas de

amiloide, en una especie de patrn de plegamiento

beta (fibrilosis).

Un elemento ms de ayuda para la identificacin

del material amorfo eosinfilo sospechoso como ami-

loide es la presencia de una molcula pentagonal de

25 KDa, llamada componente amiloide P, que es parte

de todos los tipos de amiloide.69,70Existen anticuerpos

comerciales dirigidos en contra del componente P.

En un estudio de 169 biopsias con amiloidosis, todas

fueron positivas para el componente P.67

Despus de que se determina que el material amor-

fo es amiloide, el siguiente paso es la caracterizacin

de la protena amiloidognica, pues el tratamiento

mdico es diferente, dependiendo de la causa subya-cente a la produccin de amiloide. Hasta el momento

se han identificado ms de 20 diferentes tipos de

sustancias generadoras de amiloide. Los tipos ms

frecuentes de amiloidosis son los provocadas por:

a) cadenas ligeras de inmunoglobulinas (AL/45%/

amiloidosis primaria), b)el amiloide AA (amiloidosis

reactiva/AA-19%) y c)por transtiretina (ATTR-12%/

amiloide senil). Algunos otros tipos de substancias

amiloidognicas poco frecuentes son la 2-microglo-

bulina, calcitonina, fibringeno, apolipoprotena AI,

lisozima, queratoepitelina y lactoferrina.67

Para la caracterizacin de AL se utilizan anti-

cuerpos contra las cadenas ligeras kappa y lambda

de las inmunoglobulinas. El material casi siempre

es positivo a uno de los dos inmunorreactantes.

Desafortunadamente el AL deriva de las porciones

variables de las cadenas ligeras o por lo cual cada

paciente poseer un tipo nico de amiloide L, lo que

disminuye las posibilidades de que un solo anticuerpo

sea capaz de detectar todas las variantes. Aunado a

esto, las protenas amiloides, especialmente el tipo L,

pueden precipitar otras protenas sricas y provocar

inmunomarcacin positiva con ms de un anticuer-po. Una dificultad ms estriba en la coexistencia de

dos o ms protenas amiloides en el mismo paciente

(AL+A2M, AL+ATTR, AA+A2M).71-73Por lo tanto,

es importante identificar si existe restriccin de ca-

denas ligeras en las clulas plasmticas del tejido en

estudio y correlacionarlas con los hallazgos clnicos

del paciente.

CONSIDERACIONES TCNICAS

Factores que inuyen en la inmunomarcacin

En la evaluacin de las inmunomarcaciones son

importantes dos elementos: 1)el factor preanaltico

(intrnseco) y 2)el factor analtico (extrnseco).

1) El factor pre-analtico se refiere a las caracte-

rsticas del tejido y su preservacin antignica. La

conservacin adecuada de las caractersticas antig-

nicas del tejido depende del tipo de fijador empleado,

de la fijacin adecuada, y del tiempo de la fijacin. 73

El formol buffer al 10% es el fijador ms utilizado. El

pH del formol tiene influencia directa en la conserva-

cin antignica del tejido y la variacin de este puede

alterar la estructura proteica de los eptopes. Algunosprocedimientos tcnicos, como el sobrecalentamiento

del tejido, la descalcificacin y la congelacin, tambin

pueden afectar la preservacin antignica.73

2)Los factores analticos (extrnsecos) son los ele-

mentos externos al tejido que pueden controlarse en el

laboratorio de inmuohistoqumica e incluyen: el tipo

de anticuerpo utilizado, la sensibilidad y dilucin, el

sistema de deteccin, los cromgenos empleados, el

mtodo de recuperacin utilizado y la interpretacin

de la reaccin por el patlogo. (Para mayor detalle

sobre factores intrnsecos y extrnsecos consltese lareferencia 73).

Falsos positivos por biotina endgena

La biotina es una protena que acta como cofactor

en la reaccin de descarboxilacin, es parte del com-

plejo de la vitamina B, y se encuentra en clulas ricas

en mitocondrias, como en las clulas de los tbulos

contorneados proximales del rin, los hepatocitos, las

clulas apcrinas y las clulas de Hrthle de la tiroi-

des.74Durante la recuperacin antignica inducida por

el calor (Heat induced antigen retrieval/ HIAR) puedeincrementarse la actividad de la biotina endgena y la

actividad tipo biotina (actividad de unin a avidina) y

producir marcaciones falsas positivas cuando se utiliza

un sistema de deteccin inmunohistoqumico tipo

avidina-biotina.75,76Estos falsos positivos se presentan,

sobre todo, con algunos anticuerpos, como es el caso

de la inhibina en carcinomas hepatocelulares, del virus



13/15


herpes simple en endometrio gestacional, y del cito-

megalovirus cuando se utiliza hibridacin in situ.77,79

La tincin de biotina se localiza con ms frecuencia

en el citoplasma, casi siempre con patrn granular o

moteado. La biotina tambin puede localizarse en el

ncleo, como puede verse en el endometrio gestacio-

nal, en las mrulas del carcinoma de endometrio,

en el blastoma pulmonar, en la variante cribiforme del

carcinoma papilar de tiroides, en el pancreatoblastoma

y en los adenomas colnicos.80-83Estas falsas positivas

secundarias a la actividad de biotina endgena pueden

sospecharse cuando la localizacin y el patrn subce-

lular de un anticuerpo dado no es el esperado, como

el patrn idntico de marcacin visto con mltiples

anticuerpos dirigidos contra diferentes antgenos,

particularmente si la tincin es dbil. La forma desolucionar esta marcacin de biotna endgena es con

la inmunomarcacin con un bloqueo avidina-biotina

o un sistema de deteccin alternativo que no incluya

avidina-biotina, como el sistema de deteccin de po-

lmeros o peroxidasa-antiperoxidasa. Sin embargo,

estos sistemas de deteccin no estn totalmente libres

de tinciones inespecficas. Un ejemplo relativamente

comn es observar la tincin citoplasmtica difusa

dbil en las clulas del msculo liso usando el sis-

tema de deteccin de polmeros (EnVision/Dako);

adems, algunos anticuerpos por s solos tambinpueden producir tinciones inespecficas (como algu-

nos anticuerpos policlonales).

CONCLUSIN

La inmunohistoqumica ha contribuido al diagnstico

histopatolgico pero sobre todo al diagnstico y clasi-

ficacin de tumores. Esta tcnica ha aportado pautas

pronsticas y determinado algunas formas especficas

de tratamiento. La inmuohistoqumica es una tcnica

laboriosa que requiere, por parte del histotecnlogo,

conocimiento profundo del procedimiento, as comodel histopatlogo la interpretacin adecuada con

correlacin morfolgica estricta. Para la seleccin

de los anticuerpos se necesita que el diagnstico de

presuncin sea lo ms exacto posible, dirigido tanto

por el conocimiento de la morfologa como por la

presentacin clnica. Es obvio que si no incluimos en

nuestro diagnstico diferencial el diagnstico ade-

cuado, la inmunohistoqumica no nos ser de mucha

ayuda, e incluso los resultados pueden ser confusos

y orientarnos a un diagnstico errneo. Al pensar

en seleccionar una batera de anticuerpos debemos

preguntarnos:

1)Cul es el diagnstico ms probable, dada la

morfologa de la lesin y el cuadro clnico?

2)Qu anticuerpos podran reaccionar en forma

positiva y cules seran negativos en la lesin que

estamos pensando, y

3)Cmo estos anticuerpos deberan localizarse en

la membrana, en el ncleo o en el citoplasma?

Es claro que la ayuda de la inmunohistoqumica

est directamente relacionada con las preguntas quenosotros hagamos durante el examen morfolgico de

la lesin y que las inmunorreacciones interpretadas

aisladamente, en la mayor parte de las situaciones,

no son de mucha utilidad; es decir, slo obtendre-

mos respuestas adecuadas si hacemos las preguntas

correctas.

REFERENCIAS

1. Taylor CR. Principles of immunomicroscopy. In: Immunomi-

croscopy. A diagnostic Tool for surgical pathologists. Mayor

problems in Pathology. 3rded. New York: Saunders, 2006;pp:1-46.

2. Stone MJ. Monoclonal antibodies in the prehybridoma Era:

A brief Historical Perspective and personal Reminiscence.

Clinical Lymphoma 2001;2;148-54.

3. Kohler G, Milsten C. Continuous cultures of fused cells secre-

ting antibodies of predened specicity. Nature 1974;256:495-

97.

4. Coifer B. Rituximab therapy in malignant lymphoma. Onco-

gene 2007;26:3603-13.

5. Schiffer CA. BCR-ABL tyrosine kinase inhibitors for chronic

myelogenous leukemia. N Engl J Med 2007;357:258-65.

6. Hudis CA. Trastuzumab-mechanism of action and use in

clinical practice. N Engl J Med 2007;357:39-51.

7. Chuek W, Chan JKC. Subcellular localization of immunohisto-

chemical signals. Knowladge of the ultrastructural of biologicfeatures of the antigens helps predict the signal localization

and proper interpretation of immunostains. Int J Surg Pathol

2004;185:185-206.

8. Chan JK. Advances in immunohistochemistry: impact on surgi-

cal pathology practice. Semin Diagn Pathol 2000;17:170-7.

9. Sickel JZ, di SantAgnese PA. Anomalous immunostaining of

optically clear nuclei in gestational endometrium. A potential

pitfall in the diagnosis of pregnancy-related herpesvirus infec-

tion. Arch Pathol Lab Med 1994;118:831-3.

10. Lau SK, Chu PG, Weiss LM. Immunohistochemical expression



14/15


of estrogen receptor in pulmonary adenocarcinoma. Appl

Immunohistochem Mol Morphol 2006;14:83-7.

11. Mai KT, Belanger EC. Perivascular epithelioid cell tumour

(PEComa) of the soft tissue. Pathology 2006;38:415-20.

12. McCluggage WG, Maxwell P, Patterson A, Sloan JM. Im-

munohistochemical staining of hepatocellular carcinoma

with monoclonal antibody against inhibin. Histopathology

1997;30:518-22.

13. Iezzoni JC, Mills SE, Pelkey TJ, Stoler MH. Inhibin is not an

immunohistochemical marker for hepatocellular carcinoma.

An example of the potential pitfall in diagnostic immunohis-

tochemistry caused by endogenous biotin. Am J Clin Pathol

1999;111:229-34.

14. Hornick JL, Fletcher CD. Immunohistochemical staining for KIT

(CD117) in soft tissue sarcomas is very limited in distribution.

Am J Clin Pathol 2002;117:188-93.

15. Yantiss RK, Spiro IJ, Compton CC, Rosenberg AE. Gastroin-

testinal stromal tumor versus intra-abdominal bromatosis of

the bowel wall: a clinically important differential diagnosis. Am

J Surg Pathol 2000;24:947-57.

16. Barisella M, Andreola S, Rosai J. CD117 in soft tissue sarco-

mas. Am J Clin Pathol 2002;118:470-1.

17. Seidal T, Balaton AJ, Battifora H. Interpretation and quanti-

cation of immunostains. Am J Surg Pathol 2001;25:1204-7.

18. Werner M, Chott A, Fabiano A, Battifora H. Effect of formalin

tissue xation and processing on immunohistochemistry. Am

J Surg Pathol 2000;24:1016-9.

19. Wick MR, Mills SE. Consensual interpretive guidelines for diag-

nostic immunohistochemistry. Am J Surg Pathol 2001;25:1208-

10.

20. Dow LE, Humbert PO. Polarity regulators and the control of

epithelial architecture, cell migration, and tumorigenesis. Int

Rev Cytol 2007;262:253-302.

21. Rosai J. Breast en Rosai and Ackermans surgical pathology.

9th ed. Vol 2. China: Mosby, 2004;pp:1805-7.22. Ross JS, Fletcher JA, Linette GP, Stec J, et al. The HER-2/neu

gene and protein in breast cancer 2003: biomarker and target

of therapy. Oncologist 2003;8:307-25.

23. Putti TC, To KF, Hsu HC, Chan AT, et al. Expression of epider-

mal growth factor receptor in head and neck cancers correlates

with clinical progression: a multicentre immunohistochemical

study in the Asia-Pacic region. Histopathology 2002;41:144-

51.

24. Zandi R, Larsen AB, Andersen P, Stockhausen MT, Poulsen

HS. Mechanisms for oncogenic activation of the epidermal

growth factor receptor. Cell Signal 2007;9:2013-23.

25. Forero A, Lobuglio AF. History of antibody therapy for non-

Hodgkins lymphoma. Semin Oncol 2003;30(6 Suppl 17):1-5.

26. Tallman MS. Monoclonal antibody therapies in leukemias.

Semin Hematol 2002;39:12-9.27. Frenso Forcellado MF. Determinacin inmunohistoqumica

de CD117 /c-ki en el GIST (tumor estromal gastrointestinal).

Oncologa 2004;27:242-45.

28. Dematteo RP, Heinrich MC, El-Rifai WM, Demetri G. Clinical

management of gastrointestinal stromal tumors: before and

after STI-571. Hum Pathol 2002;33:466-77.

29. Sarlomo-Rikala M, Kovatich AJ, Barusevicius A, Miettinen M.

CD117: a sensitive marker for gastrointestinal stromal tumors

that is more specic than CD34. Mod Pathol 1998;11:728-

34.

30. Makhlouf HR, Remotti HE, Ishak KG. Expression of KIT (CD117)

in angiomyolipoma. Am J Surg Pathol 2002;26:493-7.

31. Nakatsuka SI, Oji Y, Horiuchi T, et al. Immunohistochemical

detection of WT1 protein in a variety of cancer cells. Mod Pathol

2006;19:804-14.

32. Lang D, Powell SK, Plummer RS, Young KP, Ruggeri BA. PAX

genes: roles in development, pathophysiology, and cancer.

Biochem Pharmacol 2007;73:1-14.

33. Manuel M, Price DJ. Role of Pax6 in forebrain regionalization.

Brain Res Bull 2005;66:387-93.

34. Dziarmaga A, Quinlan J, Goodyer P. Renal hypoplasia: lessons

from Pax2. Pediatr Nephrol 2006;21:26-31.

35. Cobaleda C, Schebesta A, Delogu A, Busslinger M. Pax5:

the guardian of B cell identity and function. Nat Immunol

2007;8:463-70.

36. Pileri SA, Ascani S, Leoncini L, Sabattini E, et al. Hodgkins lym-

phoma: the pathologists viewpoint. J Clin Pathol 2002;55:162-

76.

37. Torlakovic E, Torlakovic G, Nguyen PL, Brunning RD, Delabie

J. The value of anti-pax-5 immunostaining in routinely xed

and parafn-embedded sections: a novel pan pre-B and B-cell

marker. Am J Surg Pathol 2002;26:1343-50.

38. Medeiros J, Elenitoba-Johnson KSJ. Anaplastic Large Cell

Lymphoma. Am J Clin Pathol 2007;127:707-22.

39. Ortiz-Hidalgo C, de la Vega G, de Len Bojorge B. Linfoma

de clulas grandes con matriz brilar y formacin de pseudo-

rrosetas. An Med Soc Med Hosp ABC 1993;38:34-3.

40. Bischof D, Pulford K, Mason DY, Morris SW. Role of the nu-

cleophosmin (NPM) portion of the non-Hodgkins lymphoma-

associated NPM-anaplastic lymphoma kinase fusion protein

in oncogenesis. Mol Cell Biol 1997;17:2312-25.

41. Bai RY, Dieter P, Peschel C, Morris SW, Duyster J. Nucleophos-

min-anaplastic lymphoma kinase of large-cell anaplastic lym-

phoma is a constitutively active tyrosine kinase that utilizes

phospholipase C-gamma to mediate its mitogenicity. Mol CellBiol 1998;18:6951-61.

42. Touriol C, Greenland C, Lamant L, Pulford K, et al. Further

demonstration of the diversity of chromosomal changes in-

volving 2p23 in ALK-positive lymphoma: 2 cases expressing

ALK kinase fused to CLTCL (clathrin chain polypeptide-like).

Blood 2000;95:3204-7.

43. Lamant L, Dastugue N, Pulford K, Delsol G, Mariame B. A new

fusion gene TPM3-ALK in anaplastic large cell lymphoma crea-

ted by a (1;2)(q25;p23) translocation. Blood 1999;93:3088-95.

44. Chan JK. Anaplastic large cell lymphoma: redefining its

morphologic spectrum and importance of recognition of the

ALK-positive subset. Adv Anat Pathol 1998;5:281-313.

45. Falini B, Bigerna B, Fizzotti M, Pulford K, et al. ALK expres-

sion denes a distinct group of T/null lymphomas (ALK lym-

phomas) with a wide morphological spectrum. Am J Pathol1998;153:875-86.

46. Reichard KK, McKenna RW, Kroft SH. ALK-positive diffuse

large B-cell lymphoma: report of four cases and review of the

literature. Mod Pathol 2007;20:310-9.

47. Grifn CA, Hawkins AL, Dvorak C, Henkle C, Ellingham T,

Perlman EJ. Recurrent involvement of 2p23 in inammatory

myobroblastic tumors. Cancer Res 1999;15(59):2776-80.

48. Lawrence B, Perez-Atayde A, Hibbard MK, Rubin BP, et al.

TPM3-ALK and TPM4-ALK oncogenes in inammatory myo-

broblastic tumors. Am J Pathol 2000;157:377-84.



15/15


49. Cook JR, Dehner LP, Collins MH, Ma Z, et al. Anaplastic

lymphoma kinase (ALK) expression in the inammatory myo-

broblastic tumor: a comparative immunohistochemical study.

Am J Surg Pathol 2001;25:1364-71.

50. Chan JK, Cheuk W, Shimizu M. Anaplastic lymphoma kinase

expression in inammatory pseudotumors. Am J Surg Pathol

2001;25:761-8.

51. Tsujimoto Y, Finger LR, Yunis J, Nowell PC, Croce CM. Cloning

of the chromosome breakpoint of neoplastic B cells with the

t(14;18) chromosome translocation. Cloning of the chromoso-

me breakpoint of neoplastic B cells with the t(14;18) chromo-

some translocation. Science 1984;226(4678):1097-9.

52. Verma YK, Gangenahalli GU, Singh VK, Gupta P, et al. Cell

death regulation by B-cell lymphoma protein. Apoptosis

2006;11:459-71.

53. Bende RJ, Smit LA, van Noesel CJ. Molecular pathways in

follicular lymphoma. Leukemia 2007;21:18-29.

54. Coelho Siqueira SA, Ferreira Alves VA, Beitler B, Otta MM,

Nascimento Saldiva PH. Contribution of immunohistochemistry

to small B-cell lymphoma classication. Appl Immunohisto-

chem Mol Morphol 2006;14:1-6.

55. De Jong D, Rosenwald A, Chhanabhai M, Gaulard P, et al.

Lymphoma Biomarker Consortium. Immunohistochemical

prognostic markers in diffuse large B-cell lymphoma: validation

of tissue microarray as a prerequisite for broad clinical appli-

cations-a study from the Lunenburg Lymphoma Biomarker

Consortium. J Clin Oncol 2007;25:805-12.

56. Capello D, Gaidano G. Molecular pathophysiology of indolent

lymphoma. Haematologica 2000;85:195-201.

57. Merzianu M, Jiang L, Lin P, Wang X, et al. Nuclear BCL-10

expression is common in lymphoplasmacytic lymphoma/Wal-

denstrm macroglobulinemia and does not correlate with p65

NF-kappaB activation. Mod Pathol 2006;19:891-98.

58. Talwalkar SS, Valbuena JR, Abruzzo LV, Admirand JH, et

al. MALT1 gene rearrangements and NF-kappaB activationinvolving p65 and p50 are absent or rare in primary MALT

lymphomas of the breast. Mod Pathol 2006;19:1402-8.

59. Fanburg JC, Rosenberg AE, Weaver DL, et al. Osteocalcin

and osteonectin immunoreactivity in the diagnosis of osteo-

sarcoma. Am J Clin Pathol 1997;108:464-73.

60. Fanburg-Smith JC, Bratthauer GL, Miettinen M. Osteocalcin

and osteonectin immunoreactivity in extraskeletal osteosar-

coma: a study of 28 cases. Hum Pathol 1999;30:32-8.

61. Fanburg JC, Rosenberg AE, Weaver DL, Leslie KO, et al.

Osteocalcin and osteonectin immunoreactivity in the diagnosis

of osteosarcoma. Am J Clin Pathol 1997;108:464-73.

62. Ortega N, Werb Z. New functional roles for non-collage-

nous domains of basement membrane collagens. J Cell Sci

2002;15;(Pt 22):4201-14.

63. Joshi MG, Lee AK, Pedersen CA, Schnitt S, et al. The role ofimmunocytochemical markers in the differential diagnosis of

proliferative and neoplastic lesions of the breast. Mod Pathol

1996;9:57-62.

64. Huang L, Espinoza C, Welsh R. Malignant peripheral nerve

sheath tumor with divergent differentiation. Arch Pathol Lab

Med 2003;127:147-50.

65. Yantiss RK, Bosenberg MW, Antonioli DA, Odze RD. Utility

of MMP-1, p53, E-cadherin, and collagen IV immunohisto-

chemical stains in the differential diagnosis of adenomas

with misplaced epithelium versus adenomas with invasive

adenocarcinoma. Am J Surg Pathol 2002;26:206-15.

66. Virchow R. Lecture XVII. Amyloid degeneration. Inammation.

In: Cellular Pathology as Based Upon Physiological and Patho-

logical Histology. New York: Dover Publications, 1971;pp:409-

37.

67. Kebbel A, Rocken C. Immunohistochemical classication of

amyloid in surgical pathology revisited. Am J Surg Pathol

2006;30:673-83.

68. Skinner M, Pepys MB, Cohen AS, Heller LM, Lian JB. Amyloid

and Amyloidosis. Eds: Glenner GG, Pinho e Costa P, Falcao

de Freitas F. Amsterdam: Excerpta Medica, 1980;pp:384-91.

69. Tennent GA, Lovat LB, Pepys MB. Serum Amyloid P compo-

nent prevents proteolysis of the amyloid brils of Alzheimers

disease and systemic amyloidosis. Proc Natl Acad Sci USA

1995;92:4299-303.

70. Isobe T, Matsushita T, Minakata T, et al. Coexistence of AL

and Ab2M amyloid in tissues of a patient with myeloma on

hemodialysis. Amyloid 1996;3:41-43.

71. Liepnieks JJ, Benson MD. Codeposition of transthyretin and

immunoglobulin lambda light chain in senile cardiac (ATTR)

amyloidosis. In: Grateau G, Kyle R, Skinner M, eds. Amyloid

and Amyloidosis. London: CRC Press, 2005;pp:332-33.

72. Strkel S, Strer A. Combined amyloidosis of the AA and AB

type following chronic hemodialysis. Pathologe 1989;10:107-

13.

73. Leong A SY. Pitfalls in diagnostic immunohistology. Adv Anat

Pathol 2004; 11:86-93.

74. Cruz Spano L, Meron de Vargas PR, Gagliardi Leite JP,

Pereira do Nascimento J. False positive reaction due to endo-

genous biotin activity in glandular epithelium of decidua. Braz

J Microbiol 2005;36:109-13.

75. Kashima K, Yokoyama S, Daa T, Nakayama I, et al. Cytoplas-

mic biotin-like activity interferes with immunohistochemical

analysis of thyroid lesions: a comparison of antigen retrieval

methods. Mod Pathol 1997;10:515-9.76. Bussolati G, Gugliotta P, Volante M, Pace M, Papotti M.

Retrieved endogenous biotin: a novel marker and a potential

pitfall in diagnostic immunohistochemistry. Histopathology

1997;31:400-7.

77. Kalousek DK, Lau AE. Pathology of spontaneous abortion. In:

Dimmick JE and Kalousek, eds. Developmental pathology of the

embryo and fetus. Philadelphia: Lippincott, 1992;pp:55-82.

78. Kaplan C. The placenta and viral infections. Seminars Diag

Pathol 1993;10: 232-50.

79. Ekblad U. Biological Agents and Pregnancy. JOEM

1995;37:962-65.

80. Sickel JZ, di SantAgnese PA. Anomalous immunostaining of

optically clear nuclei in gestational endometrium. A potential

pitfall in the diagnosis of pregnancy-related herpesvirus infec-

tion. Arch Pathol Lab Med 1994;118:831-3.81. Nakatani Y, Kitamura H, Inayama Y, Ogawa N. Pulmonary

endodermal tumor resembling fetal lung. The optically clear

nucleus is rich in biotin. Am J Surg Pathol 1994;18:637-42.

82. Yokoyama S, Kashima K, Inoue S, Daa T, et al. Biotin-con-

taining intranuclear inclusions in endometrial glands during

gestation and puerperium. Am J Clin Pathol 1993;99:13-7.

83. Cameselle-Teijeiro J, Chan JK. Cribriform-morular variant of

papillary carcinoma: a distinctive variant representing the spo-

radic counterpart of familial adenomatous polyposis-associated

thyroid carcinoma? Mod Pathol 1999;12:400-11.


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INMUNOHISTOQUIMICA(MARCADORES TUMORALES)