EVIDENCIAS FOTOGRAFICAS.ENZIMAS OXIDATIVAS.

IVY ALEXANDRA CASTILLO BORRERO.ERIKA NATALIA MONTENEGRO.

KATHERIN SANCHEZ.

UNIVERSIDAD COOPERATIVA SEDE VILLAVICENCIO.FACULTAD DE MEDICINA.

BIOESTRUCTURAS.2014.

MATERIALES Y REACTIVOS.• MATERIALES Y REACTIVOS. • MUSLO DE POLLO FRESCO.• ARENA. • HIELO. • CLORURO DE SODIO. • NORITA (CARBON ACTIVADO). • AZUL DE METILENO 0.02 % • CIANURO DE POTACIO. • AGUA DESTILADA. • LACTATO 1%• ACEITE MINERAL.

INTRODUCCIÓN. • En esta practica los extractos enzimáticos y algunas sustancias

de importancia biológica se preparan de los tejidos del animal. Debido a que las enzimas se deterioran rápidamente después de la muerte del animal, los órganos requeridos deben ser extraídos lo mas pronto posible y los extractos de cada uno, preparados en rápida sucesión.

• Los siguientes tejidos son para ser usados como se indica: Músculo: Coenzimas y enzimas (deshidrogenasa).

PREPARACION DE LA COENZIMA.

1. SE TOMO 1 GRAMO DE MUSLO.

2. se coloco el gramo de muslo en 8 mL de agua caliente (para activar las enzimas del muslo que pueden destruir la coenzima después de la muerte). Caliente al baño maría por 4 a 5 min.

3. luego de calentar el gramo de muslo, se coloco todo el contenido en un mortero junto con 1 gramo de arena y se trituro hasta formar una pasta fina.

4. se puso la mezcla en un tubo para centrifugar y luego se puso el sobrenadante con la coenzima en un baño de hielo hasta que fue usado.

PREPARACION PARA LA ENZIMA.

1. SE TOMO 1 GRAMO DE MUSLO.

2. se coloco en un mortero junto con 20 ml de NaCl 0.9% y 1 a 2 gramos de arena, luego se trituro hasta formar una pasta fina.

3. se coloco la mezcla en un tubo y se puso a centrifugar y luego se tomo el sobrenadante que contiene la enzima láctica.

4. luego de separar el sobrenadante, se añadió ½ de norita (carbón activado) para remover cualquier resto de la coenzima de la preparación enzimática, luego se volvió a centrifugar, se guardo la solución de enzima pura en hielo.

RELACION ENZIMA SUSTRATO.

• Para evidenciar la relación enzima, coenzima y sustrato se hicieron las siguientes soluciones.

• se agregaron en cada tubo de ensayo los anteriores componentes, y luego aceite mineral (sin hacer burbujas), este para establecer condiciones relativamente anaerobias.

• Al tener los tubos ya con cada mezcla, proseguimos a llevarlos al baño serológico .

• Al salir del baño serológico, se dejaron por 3 horas los tubos de ensayo en una gradilla para ver cual presentaba decoloración.

CONCLUSIONES.• Obtuvimos un cambio notorio en la mezcla del tubo #2, el azul

de metileno se disipó por la presencia de la enzima, había suficiente flavoproteina para disipar el azul de metileno, tenia coenzima que es necesaria para el trabajo en conjunto con la enzima para las reacciones.

• El que menos disipo el azul de metileno fue el tubo #4 por

falta de la enzima.