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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 1 Capteurs et biocapteurs électrochimiques Daniel Thévenot, Régis Moilleron & Gilles Varrault, Cereve Université Paris 12, ENPC, ENGREF (UMR-MA 102) http:// http:// www.enpc.fr/cereve/HomePages/thevenot/thevenot.html www.enpc.fr/cereve/HomePages/thevenot/thevenot.html IUPAC commission I.7 de Chimie biophysique

électrochimiquess2.e-monsite.com/2010/02/08/10172941capteurs-electrochim-c-2004... · d’immobilisation du récepteur dans ... Emprisonnement ou inclusion : facile, ± stable

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 1

Capteurs et biocapteurs électrochimiques

Daniel Thévenot, Régis Moilleron & Gilles Varrault, Cereve

Université Paris 12, ENPC, ENGREF (UMR-MA 102)http://http://www.enpc.fr/cereve/HomePages/thevenot/thevenot.htmlwww.enpc.fr/cereve/HomePages/thevenot/thevenot.html

IUPAC commission I.7 de Chimie biophysique

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Sommaire

� 1. Capteurs / électrodes métalliques (EM)

� 2. Capteurs / électrodes spécifiques ioniques (ESI)

� 3. Capteurs / électrodes spécifiques à gaz (ESG)

� 4. Biocapteurs / électrodes à enzymes Biocapteurs / électrodes à enzymes ou anticorps immobilisé(e)sou anticorps immobilisé(e)s5. Conclusions et perspectivesConclusions et perspectives

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4. Biocapteurs électrochimiques

4.1. 4.1. DéfinitionDéfinition des biocapteurs4.2. 4.2. ClassementsClassements des biocapteurs4.3. 4.3. Constituants Constituants des biocapteurs :

sélectivité et sensibilitésélectivité et sensibilité, étape cinétiquementcinétiquement limitante

4.4.4.4. OriginalitéOriginalité des biocapteurs 4.5.4.5. Utilisation de biocapteursUtilisation de biocapteurs en milieux milieux

aquatiques : possibilités & limitesaquatiques : possibilités & limites4.6. 4.6. Conclusion Conclusion etet perspectivesperspectives

� Sommaire

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4. Biocapteur : 4.1. Définition (IUPAC)

D.R. Thévenot, K. Toth, R.A. Durst & G.S. Wilson (1999) Electrochemical biosensors: recommended definitions and classification. Pure and Applied Chemistry, 71 (12), 2333-2348

� Self-contained, integratedintegrated device� Nomenclature

�� BiologicalBiological recognition element = receptorreceptor�� PhysicoPhysico--chemicalchemical transducer = transducertransducer

� Ability to be repeatibly calibratedrepeatibly calibrated� Either continuouscontinuous operation� Or rapidly and reproducibly regeneratedregenerated

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4. Biocapteur : 4.1. Définitions

� Principe de fonctionnement & nomenclature

Retour au sommaire biocapteur

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4. Biocapteurs : 4.2. Classement

� 4.2.1. Type de reconnaissance moléculaire reconnaissance moléculaire (récepteur)(récepteur)�� CatalyseCatalyse enzymatique, métabolisme cellulaire ou

tissulaire� Fonctionnement continu possible ���� véritable capteur!� Enzyme purifié ou présent dans des cellules ou tissus� Oxydases, déshydrogénasses, hydrolases...

� Formation de biobio--complexecomplexe: réaction immunologique, récepteur membranaire� Nécessité d’amplificationd’amplification (enzyme, fluorescence...) et

de régénérationrégénération (pour fonctionnement séquentiel)

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4. Biocapteurs : 4.2. Classement

� 4.2.1. Type de reconnaissance reconnaissance moléculairemoléculaire (suite)� Mode de fonctionnementfonctionnement des membranes

� Catalytiques : fonctionnement continu

� Chélatantes : nécessité de régénération

� Caractère commun entre les 2 types de membranes à reconnaissance biologique�� ConsommationConsommation (locale) de l’espèce mesurée :

mesure stationnairestationnaire (si agitation) ou transitoiretransitoire

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4. Biocapteurs : 4.2. Classement

� 4.2.2. Type de transducteurtransducteur associ� ElectrochimiqueElectrochimique

� Ampérométrique, potentiométrique, conductimétrique, FET

�� OptiqueOptique� Optrode, résonance de plasmon de surface (SPR)

�� EnthalpimétriqueEnthalpimétrique� Micro-calorimétrie

�� MassiqueMassique� Quartz piézo-électriques, ondes acoustiques de

surface

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4. Biocapteurs : 4.2. Classement

� 4.2.3. Classement par espèceClassement par espèce(s) détectée(s)�� SubstratsSubstrats de réactions biologiques

� Sucres, acides aminés, alcools, phénols...

�� NutrimentsNutriments� Micro-DBO (micro dans sa durée et non sa taille !)

�� InhibiteursInhibiteurs, toxiques� Pesticides (organo-phosphorés), métaux,

fluorures...

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4. Biocapteurs : 4.2. Classement

� Que retenir dans le classement ?� 1. Type de reconnaissance moléculaire

� Catalytique: enzyme(s)� Chélatante: complexe antigène-anticorps� Dans les 2 cas: consommation de substrat

� 2. Type de transducteur� Ampérométrique� Potentiométrique

� 3. Type d’espèce détectée� Substrat� Nutriment� Toxique Retour au sommaire biocapteurRetour au sommaire biocapteur

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4. Biocapteurs : 4.3. Constituants

� 4.3.1. Mode d’immobilisationd’immobilisation du récepteur dans/sur la membrane� Emprisonnement ou inclusion : facile, ± stable

� Gel ou membrane préparée en présence d ’enzyme(s)� Adsorption du membrane : facile & peu stable� Liaison covalente, réticulation sur membrane :

± complexe mais stable� Activation de la membrane, activation de l ’enzyme et

réaction spontanée� Contact d ’enzyme avec une membrane activée

�� StabilitéStabilité de l ’activité de la membrane� 3 éléments: membrane + liaison physique ou

chimique (immobilisation) + activité enzyme

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4. Biocapteurs : 4.3. Constituants

� 4.3.1. Mode d’immobilisationd’immobilisation du récepteur dans/sur la membrane� Inclusion dans gel ou co-polymérisation

� Adsorption� Adsorption &

réticulation�� Liaison covalenteLiaison covalente

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4. Biocapteurs : 4.3. Constituants

� 4.3.2. Rôle des cinétiques enzymatiques cinétiques enzymatiques hétérogèneshétérogènes

-Enz

-Enz

-Enz

-Enz

Ssolution

Réaction

Transport

T ra n

sduc

teu r

(él e

ctro

d e)

Mem

b ran

e ) TransportPsolution

Pmemb.

Composition de la solution analysée modifiée, par la réaction, sur une épaisseur épaisseur δδδδδδδδ(δδδδδδδδ fonction de l ’agitation de la solution)

S: substrat(s)P: produit(s)de la réaction catalysée par l ’enzyme

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4. Biocapteurs : 4.3. Constituants

� 4.3.2. Rôle des cinétiques enzymatiques cinétiques enzymatiques hétérogèneshétérogènes�� TransportTransport du/des substrat(s) S vers le site

réactionnel (surface ou intérieur membrane)V = (DS / δδδδ) (Ssolution - Smembrane)

� avec δδδδ���� si agitation ����� avec DS diffusion substrat S et δδδδ épaisseur couche

modifiée�� RéactionRéaction du/des substrat(s) S catalysée par

l ’enzyme (Michaelis-Menten)V = Vmax . Smembrane / (Smembrane + KM,S)

� avec Vmax activité enzymatique et KM,S (Michaelis)� transport de partie du/des produits P vers le

transducteur (réponse) et vers l ’échantillon (inutile)

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4. Biocapteurs : 4.3. Constituants

� 4.3.2. Rôle des cinétiques enzymatiques cinétiques enzymatiques hétérogèneshétérogènes� Quelle étape la plus lente : cinétiquement

limitante? TransportTransport ou réactionréaction ?� Régime diffusionnel si transport = étape la +

lente� Vmax / KM,S >> DS / δδδδ� forte activité immobilisée Vmax et/ou barrière

diffusionelle externe (DS faible)� réponse ‘ indindéépendantependante ’ de l ’activité immobilisée ���� TB!

� Régime chimique si réaction = étape la + lente� Vmax / KM,S << DS / δδδδ� faible activité immobilisée et/ou forte agitation (δδδδ�)� réponse ‘ dépendante ’ de l ’activité immobilisée =>

peu souhaitable pour instrumentation analytique !

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4. Biocapteurs : 4.3. Constituants

� 4.3.3. TransducteurTransducteur électrochimique associé� Electrode métallique : H2O2, Fe(CN) 6

3/4 -…� Electrode spécifique ionique : H30+, NH4

+…� Electrode spécifique à gaz : O2, CO2, NH3..

1. Transducteur ampérométrique

ou pH métrique2. Membrane enzymatique

Membrane perméable aux gaz

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4. Biocapteurs : 4.3. Constituants

� Que retenir sur l’immobilisation ?� 1. Immobilisation du récepteur (enzyme)

� Inclusion ou rétention� Adsorption: peu stable� Liaison covalente: stable mais plus complexe

� 2. Cinétiques hétérogènes� Régime chimique: cinétique enzymatique limitante� Régime diffusionnel: transport du substrat limitant

(permet une plus grande stabilité du capteur)� 3. Transducteur électrochimique

� EM (H2O2), ESI (pH) ou ESG (Clark, CO2, NH3…)Retour au sommaire biocapteurRetour au sommaire biocapteur

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4. Biocapteurs : 4.4. Originalité

� 4.4.1. Sélectivité: Sélectivité: détecteur & transducteurdétecteur & transducteur� Catalyse enzymatique: très / peu sélective

� Glucose oxydase, alcools oxydase, amino-acides oxydase� Enzyme(s) purifié ou cellule / tissus biologique

� Anticorps mono- ou multi-clonal: très/peu sélective� Transducteur associé: très / peu sélectif

� 4.4.2. Amélioration de la sélectivitésélectivité� Membrane sélective supplémentaire

� Acétate de cellulose (anionique): arrêt de l’ascorbate� Transducteur électrochimique: Eappl. + faible

� Utilisation de catalyseurs supplémentaires� Montage différentiel à 2 capteurs (≈≈≈≈ colorimétrie)

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4. Biocapteurs : 4.4. Originalité

� 4.4.2. Amélioration de la sélectivitésélectivité� Montage différentieldifférentiel : soustraction des réponses

� Suppression réponse aux interférents électrochimiques

Capteursans enzymesans enzyme

Biocapteur à enzymeenzyme

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4. Biocapteurs : 4.4. Originalité

� 4.4.3. Sensibilité Sensibilité plus élevée que si réaction plus élevée que si réaction homogène (dosage par kit enzymatique)homogène (dosage par kit enzymatique)� Intégration de la reconnaissance moléculaire

et de la transduction du/des produits de la réaction� Pas de dilution dans l’échantillon

� Amplification de la réaction principale à l’aide de réaction supplémentaire� Utilisation de seconde réaction enzymatique

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4. Biocapteurs : 4.4. Originalité

� 4.4.4. StabilitéStabilité: méthodes d ’évaluation� Stabilité opératoireopératoire (fonctionnelle)(fonctionnelle)

� Même biocapteur, calibration séquentielle, répétée� Stabilité auau stockagestockage

� Différent biocapteurs issus d ’un même lot (homogène) de production: diverses durées stockage

�� DépendDépend de: membrane, enzyme, immobilisation�� Durée de vieDurée de vie: modes d ’expression

� Durée (quelques heures à quelques mois)� 50 % de décroissance de la sensibilité : tt1/21/2� soit en fonctionnementfonctionnement soit au stockagestockage

� Vitesse de décroissancedécroissance de la sensibilitéde la sensibilité : : %/mois%/mois

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4. Biocapteurs : 4.4. Originalité

� Que retenir de leur originalité ?� 1. Spécificité ou sélectivité du capteur

� Spécificité ou sélectivité enzymatique� Molécule: glucose oxydase, uréase� Famille: alcool oxydase

� Spécificité ou sélectivité du transducteur� 2. Amélioration de la sélectivité

� Montage différentiel� Membrane permsélective

� 3. Sensibilité élevée� Intégration spatiale du détecteur et transducteur

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 23

4. Biocapteurs : 4.4. Originalité

� Que retenir de leur originalité ?� 4. Stabilité

� Modes d’évaluation à bien définir� Au stockage ou en fonctionnement

� Dépend de tous les constituants du capteur et du régime cinétique utilisé

� Régime diffusionnel ou chimique ?� Durée d’utilisation comprise entre

� 1 semaine: dispositifs de recherche� Plusieurs années: dispositifs commercialisés

Retour au sommaire biocapteurRetour au sommaire biocapteur

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 24

4. Biocapteurs : 4.5. Applications

� 4.5. ApplicationApplication des biocapteurs électro-chimiques� 4.5.1. Mesure de substratssubstrats :

� Substrats simples de réactions enzymatiques� Applications médicales, environnementales ou

agro-alimentaires

� 4.5.2. Exemple de biocapteur à uréebiocapteur à urée� Sucres, acides aminés, phénols, métabolites…

� Mesure de matière oxydablematière oxydable� Mesure d’inhibiteursd’inhibiteurs enzymatiques

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4. Biocapteurs : 4.5.2. Urée

� 4.5.2. UréaseUréase immobilisé & détecteur NH3•• Réponse stationnaireRéponse stationnaire∆∆∆∆∆∆∆∆E = pente . log [urE = pente . log [uréée]e]O=C(NH2)2 + H2O =>

2 NH4+ + HCO3

-

• NHNH44++ détecté via NH3

• pH optimal définidéfini:• pH = 7 pour uréase• pH > 9,2 détection NH3

• AgitationAgitation nécessaire pour réponse stationnairestationnaire• RemplissageRemplissage du biocapteur

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4. Biocapteurs : 4.5. Applications

� 4.5. ApplicationApplication des biocapteurs électro-chimiques� 4.5.1. Mesure de substratssubstrats :

� 4.5.2 Exemple de biocapteur à urée

� 4.5.3. Exemple de biocapteur à glucosebiocapteur à glucose

� Acides aminés, phénols, métabolites…� Mesure de matière oxydablematière oxydable� Mesure d’inhibiteursd’inhibiteurs enzymatiques

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4. Biocapteurs : 4.5 3. Glucose

� 4.5.3.1. Réaction enzymatique�� ββββββββ D Glucose oxydaseD Glucose oxydase (GOD ou GOx)

immobiliséeββββ D Glucose + O2 => Gluconate + H3O+ + H2O2

� K = 9,3 .1023 à pH 5,7 => rrééaction action totaletotale (si GOx présent et actif )

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4. Biocapteurs : 4.5 3. Glucose

� 4.5.3.2. Transducteurs associés : 3 possibilités� Capteur de pHpH : non spécifique au gluconate� Capteur à oxygoxygèènene : très spécifique, mais

réponse décroît si glucose ����� Capteur métallique (Pt) oxydation Hoxydation H22OO22 :

peu spécifique à H2O2 mais réponse ���� avec glucose

�� Conditions de fonctionnementConditions de fonctionnement du capteur� Milieu à pH neutre (sang à pH 7,2)� Présence d’oxygène dissous

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4. Biocapteurs : 4.5.3. Glucose

I (nA)

T (min)

3 mM

3 mM

3 mM

3 mM

∆∆∆∆∆∆∆∆I (nA)I (nA)

� 4.5.3.3. Calibration� Électrode de Pt:

oxydation de H2O2

� Réponses à des additions de additions de glucose 3 mMglucose 3 mMdans une solution tampon (pH 7,4)

� Mesures des réponses stationnaires ∆Ι∆Ι∆Ι∆Ι∆Ι∆Ι∆Ι∆ΙTemps (min)

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 30

4. Biocapteurs : 4.5.3. Glucose

0 3 6 9 12 15 18[Glucose total]

0

5

10

15

20

25I - I0 (nA) � 4.5.3.3.

CalibrationCalibration des réponses stationnaires du biocapteur :I-I0 = f(glucose)total� Soustraction du

signal de fond I0

� Quel domaine de domaine de linéaritélinéarité ?

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 31

4. Biocapteurs : 4.5.3. Glucose

0 3 6 9 12 15 18 21[glucose total]

0

0,5

1

1,5∆∆∆∆I / ∆∆∆∆C (nA/mM)

domaine de linéarité

� 4.5.3.3. Calibration� Sensibilité stationnaire S (réponse

relative) = ∆∆∆∆∆∆∆∆I/I/∆∆∆∆∆∆∆∆C C � Domaine de linéarité de la

réponse lorsque S = S = ∆∆∆∆∆∆∆∆I/I/∆∆∆∆∆∆∆∆C = constanteC = constante

� [glucose]max. indicateur de l’étape cinétiquement l’étape cinétiquement limitantelimitante

� Ici diffusiondiffusion du glucose vers le site réactionnel (membrane à GOx)

� Car [glucose]max > KM,glu

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 32

4. Biocapteurs : 4.5.3. Glucose

Réponsestationnairestationnaire :IIstatstat. . = s [glu]= s [glu]

Réponsetransitoire:(dI/dt)max. = s [glu]

� 4.5.3.3. Calibration

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 33

4. Biocapteurs : 4.5.3. Glucose

Polyurethanemembrane

Pt-Ir anode

Ag - cathode

450 µm o.d.

Teflon

Sensing cavity : Cellulose acetateGOx + BSA + GA250 µm o.d.

Ag / AgCl

Teflon

170 µm o.d.

100 µm o.d.

� 4.5.3.4. Biocapteur implantable (KU, Paris 12, INSERM)

Brevet US 5,165,407 (24/11/1992)Brevet US 5,165,407 (24/11/1992)

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 34

4. Biocapteurs : 4.5.3. Glucose

� 4.5.3.4.Biocapteur implantable (Université de Manchester)

�� capteurcapteur extrémité extrémité (anode de Pt 125 µm)et électrode auxiliaire / référence en acier inox

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 35Sensor Research Center, Greifswald, Allemagne

4. Biocapteurs : 4.5.3. GlucoseSuivi de la glycémie sur un volontaire non diabétiquemesure continue sous-cutanée (ligneligne) et ponctuelle plasmatique (����)

Absorption 100 g Glu Injection 12 g Glu

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 36

4. Biocapteurs : 4.5.3. Glucose

� 4.5.3.4. Biocapteur jetable (MediSense)� Languette à usage

unique avec zone d’insertion-aspiration de la goutte de sang

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 37

4. Biocapteurs : 4.5.1. Substrats

� Que retenir sur les biocapteurs à substrats?� Les plus étudiés, publiés, brevetés,

commercialisés� Marché agro-alimentaire mais surtout médical

� Diabète = maladie touchant une part importante de la population et entraînant des problèmes importants: reins, vision…

� Nécessite la mesure multi quotidienne de la glycémie sanguine (pour injection d’insuline)

� 2 approches complémentaires� Capteur à usage unique� Capteur implanté in vivo

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4. Biocapteurs : 4.5.1. Substrats

� Que retenir sur les biocapteurs à substrats?� Multiplicité de transducteurs électrochimiques

possibles� Eau oxygénée produite� Oxygène consommé

� Bonne stabilité (conservation et fonctionnement) de la glucose oxydase� Possibilité de commercialisation de capteurs à usage

unique (sans étalonnage par usager)� Développements industriels et scientifiques

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 39

4. Biocapteurs : 4.5. Applications

� 4.5. ApplicationApplication des biocapteurs électro-chimiques� 4.5.1. Mesure de substratssubstrats

� 4.5.2. Exemple de biocapteur à urée� 4.5.3. Exemple de biocapteur à glucose

� 4.5.4. Exemple de mesure d’acide aminé et métabolites

� Mesure de matière oxydablematière oxydable� Mesure d’inhibiteursd’inhibiteurs enzymatiques

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 40

4. Biocapteurs : 4.5.4. Métabolites

� 4.5.4. Capteur à L aminoacides L aminoacides (spécifique (spécifique dd ’1 famille)’1 famille)� a.a oxydase� capteur

à O2� courbes

de cali-brationà diffé-rentamino-acides

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Dispositif de mesure ponctuelle Dispositif d’analyse à circulationSensLab GmbH, Leipzig (alcool, glucose, lactate, glutamate)

4. Biocapteurs : 4.5.4. Métabolite

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 42

4. Biocapteurs : 4.5. Applications

� 4.5. ApplicationApplication des biocapteurs électro-chimiques :� 4.5.1. Mesure de substratssubstrats

� 4.5.5. Mesure de matière oxydablematière oxydable (levure immobilisée) :

�Micro-DBO: capteur à demande biologique en oxygène (réponse en ½ h)

� Mesure d’inhibiteursd’inhibiteurs enzymatiques

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 43

4. Biocapteurs : 4.5.5. Micro-DBO

� 4.5.5. Capteur à Demande Biologique en Oxygène (DBO)� Capteur à O2 avec

membrane en téflon

� Levures immobiliséesdans une membranemembrane

�� EchantillonEchantillon aéré : circu-lation

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 44

4. Biocapteurs : 4.5.5. Micro-DBO

� Biosensores SL, Moncofar, Espagne� Suivi du fonctionnement de stations

d ’épuration

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Suivi continu de la DBO en entréeentrée et sortiesortie de la station d’épuration de Valence (Alboraya)

4. Biocapteurs : 4.5.5. Micro-DBO

� Biosensores SL, Moncofar, Espagne

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4. Biocapteurs : 4.5. Applications

� 4.5. ApplicationApplication des biocapteurs électrochimiques� 4.5.1. Mesure de substratssubstrats

� 4.5.5. Mesure de matière oxydablematière oxydable� 4.5.6. Mesure d’inhibiteursd’inhibiteurs enzymatiques

� Pesticides, métaux lourds, fluorures…� Intérêt environnemental: soutien Européen� Exemple de biocapteur à pesticidesbiocapteur à pesticides

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 47

4. Biocapteurs : 4.5.6. Pesticides

� 4.5.6.1. Importance de la mesure des pesticidespesticides� Contrôle de la qualité des eaux

(réglementation Européennes)� 4.5.6.2. Toxicité des pesticides en relation

avec leur inhibitioninhibition de l ’AChEAChE� 4.5.6.3. Développement de biocapteur

miniaturisé à AChEminiaturisé à AChE pour leur mesure dans échantillons aqueux ou organiques (G. Turdean, Univ. Cluj, Roumanie)

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4. Biocapteurs : 4.5.6. Pesticides

� 4.5.6.4 Détection� Type 1. MélangeMélange Pesticide + ASCh :

� Addition 0,2 ou 1 mM ASCh => I0

� Addition de pesticide => ∆∆∆∆I = I0 - I� ∆∆∆∆I / I0 vs log [pesticide] => courbe calibration courbe calibration

� Type 2. Incubation avec le pesticide seulpesticide seul� Courbe de calibration ASCh, i.e. I vs [ASCh]� Incubation 30 min avec pesticide (sans ASCh)� Courbe de calibration ASCh (sans pesticide) =>

inhibition : diminution de la sensibilitéinhibition : diminution de la sensibilité

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4. Biocapteurs : 4.5.6. Pesticides

� Type 1: Inhibition AChE par [pesticide] = 0.1-10 µM avec [ASCh] = 200 µM

� Moyenne de 4 capteurs� 10% inhib. = 0,4 µM0,4 µM

ParaoxonParaoxon ::

C H O

C H O

O

P - O - C H -NO5

5 22

2 56

[AChE] = 480 mU/mm2

tampon phosphate pH 8à 30°CE=+410 mV vs Ag/AgCl

0,1 10

20

40

60

80

100

∆∆ ∆∆I/I o

(%)

log [paraoxon] (µM)

Détection de type I

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4. Biocapteurs : 4.5.6. Pesticides

�� LimiteLimite détection détection insecticide organophosphoré (10% inhibition) [AChE]� Trichlorfon (Dipterex) 5 - 55 µM 5-150 mU/mm2

� Paraoxon 0,4 µM 480 mU/mm2

�� RégénérationRégénération (30 min, 1 mM 2-PAM)� 85-90 % => réversibilitéréversibilité de l’inhibition insecticide

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4. Biocapteurs : 4.5. Applications

� 4.5. ApplicationApplication des biocapteurs électro-chimiques :� 4.5.1. Mesure de substratssubstrats� 4.5.5. Mesure de matière oxydablematière oxydable� 4.5.6. Mesure d’inhibiteursd’inhibiteurs enzymatiques

�� 4.5.7.4.5.7. Biocapteurs à ADN� Oxydation électrochimique de la guanine� Fonction de l ’état d ’hybridation de l ’ADN� Permet la reconnaissance d ’ADN

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Université de FlorenceBiocapteur électrochimique : ‘hybridation’ ADN

Biocapteur électrochimique pour détection de

l’hybridation de l ’ADN

Biocapteur électrochimique pour molécules se liant à ADN

4. Biocapteurs : 4.5.7. ADN

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4. Biocapteurs : 4.5. Applications

� 4.5. ApplicationApplication des biocapteurs électro-chimiques� 4.5.1. Mesure de substratssubstrats� 4.5.5. Mesure de matière oxydablematière oxydable� 4.5.6. Mesure d’inhibiteursd’inhibiteurs enzymatiques� 4.5.7. Biocapteurs à ADN

� 4.5.8. Micro-capteurs et micro-cellules de mesure

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Micro système bioanalytique avec

un réseau de biocapteur et mélangeur de

réactifs

Institute of Microsystem Technology (IMTEK), Université de Freiburg, Allemagne

4. Biocapteurs : 4.5.8. Miniature

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4. Biocapteurs : 4.5. Applications

� Que retenir sur les applications ?� Très grand foisonnement de proposition de

capteurs & instruments� Exploitant le principe des biocapteurs

électrochimiques� Souvent de dissémination/valorisation

limitée� Complexité du passage de la recherche à la

réalisation industrielle� Moyens et objectifs très différents !

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4. Biocapteurs : 4.6. Conclusions

�� PotentialitésPotentialités très importantes des biocapteurs� Diversité, sélectivité, sensibilité

�� ComplexitéComplexité opérationnelle des biocapteurs� Multi-disciplinarité des compétences nécessaires

� Effets de modemode et perspectivesperspectives des progrès en � Electrochimie, miniaturisation, optique, immunologie,

ADN, production industrielle, traitement de signal� Difficultés spécifiques aux mesures en eaux eaux

naturelles ou uséesnaturelles ou usées

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5. Capteurs électrochim. : Conclusion

� 5.1. Synthèse des performancesperformances des capteurs� 4 types de capteurs / électrodes spécifiques

� 5.2. Étapes de développementÉtapes de développement des capteurs et instruments associés : � Quel fonctionnement ?

� Mesure unique� Surveillance continue� Alerte...

� Quels utilisateurs ? Patient, technicien…

� Quel degré d’automatisme ?

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 58

5. Capteurs électrochim.: 5.1. Synthèse

Type cap-teur

Métal Spécif.ionique

Spécif. à gaz Biocapteur

Espèce Réduc-teur, oxy-

dant

Ions miné-raux

Gaz oxydantou ac-base

Métabolite, in-hibiteur

Transduc-teur

Pt, Au,Hg, C

2 électrodesde référence

Electrode Pt,Au

ou capt. pH

Electrode Pt, Cou capteur à pH,

O2 ou CO2Membrane Sans Verre, cris-

taux, orga-nique

Hydrophobe,perméable aux

gaz

Enzyme(s) ouAb immobili-

sé(s)Réponse :calibration

Ip ∀ C∆E ∀ lg C

∆E ∀ lg C Istat ∀ C∆E ∀ lg C

Istat ∀ C∆E ∀ lg C

Réponse :type

Transi-toire, sta-tionnaire,équilibre

Equilibre Stationnaire,équilibre

Stationnaire,transitoire

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5. Capteurs électroch. : 5.3. Perspective

� 5.3. PerspectivesPerspectives offertes par :� La miniaturisation, � La production industrielle des capteurs et

instruments associés � Le traitement de signal

� Capteurs “ intelligents ”, redondants (ex: nez artificiel)

� L'utilisation de transducteurs non électrochimiques� Optiques� Massiques� Enthalpiques...

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5. Capteurs électroch. : 5.4. Perspective

� 5.4. CompétencesCompétences nécessaires au développement de capteurs et capteurs électrochimiques :� Analytique,� Physico-chimique,� Biochimique et micro biologique,� Electronique et traitement de signal� Mathématiques et modélisation

� Fort développement en cours : à vous de jouer !

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Biocapteur à DBOBiosensores SL, Moncofar, Espagne

4. Biocapteurs : 4.5.5. DBO

� Biosensores SL, Moncofar, Espagne� Suivi de la présence de toxiquestoxiques :

inhibiteurs