Hemoglobina(Hb): cromoproteina formata din hem si globina;Rol in
transportul oxigenului la tesuturi si in mentinerea echilibrului
acido-bazic;Valori scazute : anemii, aplazie medulara, dislocari
medulare, stari posthemoragice..Valori crescute: policitemii ,
altitudine mare, boli cardiace cianogene, boli pulmonare hipoxice,
fumat excesiv, boli renale, deshidratari, arsuri;Recoltarea
sangelui : venos (K2, K3 EDTA) sau capilarMetode de masurare :
cianhemoglobina, oxihemoglobina, SLS-hemoglobina;
METODA DRABKIN:Principiu :hemoglobina este oxidata de
ferocianura de potasiu la la methemoglobina care sub actiunea
cianurii de potasiu formeaza cianmethemoglobina de culoare
galben-roscata (compus stabil) citirea se face la spectrofotometru
la = 546 nm intensitatea culorii este direct proportionala cu
concentratia de Hb din proba Tehnica si reactivi : 1.Solutia
Drabkin :K3Fe(CN) :200mg KCN 50mg KH2PO4 140mg apa distilata ad
1000 se corecteaza pH-ul la 7.3-7.5 cu NaOH 20% se pastreaza la
intuneric la 4C in sticle de culoare inchisa 1 an 2. se calculeaza
factorul (coeficientul) F de etalonare a aparatului folosind Hb
standard a carui concentratie o cunoastem (C)
3.se pipeteaza intr-o eprubeta 5ml de Hb standard4. se citeste
absorbanta (A) acestei solutii fata de martor(5ml sol.Drabkin) 5.se
calculeaza factorul (F) pentru calculul Hb(g/dl) folosind formula
F=C/A 6.tehnica de lucru :
Se lasa la temperatura camerei 20 min.
Produsul pipetat Martor ProbaSolutia Drabkin 5 ml 5mlSange
recoltat pe EDTA - 0.02 ml
Se citeste absorbanta (AP) fata de martor la 546 nm Calcularea
concentratiei ( C ) de Hb din proba: C(g/dl) = Absorbanta probei x
F C ( mmol/l = C(g/dl) x 0.621
Controlul intern de calitate cu sange de control cu concentratie
cunoscuta de HB Liniaritate : pana la 210 g/dl ( 13 mmo;/l) Aceasta
metoda a fost recomandata de catre ICSH in 1966 ca metoda standard
internationala. Nu este potrivita pentru masurare prin metoda
automata deoarece viteza de conversie este mica. Genereaza deseuri
lichide toxice ce trebuie tratate special.
Alte metode:Metoda oxihemoglobinei: Viteza de conversie a Hb in
oxihemoglobina este mare ( instantanee);Nu poate converti
methemoglobina in oxihemoglobina, dezavantah in cazul probelor care
contin cantitati mari de methemoglobina, cum ar fi sangele de
control;Metoda SLS-hemoglobina (Sodiun-Lauryl-Sulfat Hb):Viteza de
conversie a Hb este mare;Se poate folosi si pentru sangele de
controlAmbele metode folosesc reactivi nontoxici;
