CFX ConnectTM リアルタイムPCR解析システム

リアルタイムPCR：CFX Connect リアルタイムPCR解析システム

2 Bio-Rad Laboratories

Advancing qPCR TogetherCFX ConnectリアルタイムPCR解析システムは2波長同時検出かつ、

ご好評頂いているCFX96 Touchと同じ優れた温度制御性能を持っています。

またLEDに基づいた革新的な光学系とパワフルなソフトウェアは

多くのリアルタイムPCRニーズを満たします。

2 Bio-Rad Laboratories

3Bio-Rad Laboratories

サンプル調製 品質確認

逆転写反応・リアルタイムPCR 試薬

リアルタイムPCR 反応

データ分析最適化

Aurum™ total RNA mini kit

Aurum total RNA 96 kit

Aurum total RNA fatty and fibrous tissue kit

iScript™ Reverse Transcription Supermix for RT-qPCR

iQ™ SYBR® Green Supermix

SsoFast™ EvaGreen® Supermix

SsoFast probes Supermix

Experion全自動電気泳動システム

CFX384 Touchリアルタイム PCR解析システム

CFX96 Touchリアルタイム PCR解析システム

CFX Connectリアルタイム PCR解析システム

MiniOpticonリアルタイム PCR解析システム

CFX Managerソフトウェア

Precision Melt Analysis ソフトウェア

バイオ・ラッドではリアルタイムPCR実験一連のワークフローをサポートしています。正確で再現性の高い結果を出すために、定量リアルタイムPCR実験（MIQE）ガイドライン（Bustin et al 2009）に適合したワークフローの個々のステップは重要です。方法と分析を適切に選択することは再現性の高い正確なデータと結論に繋がります。バイオ・ラッドのゲノミクス研究ツール群は、研究者がこのゴールに到達することを助けます。

4 Bio-Rad Laboratories4 Bio-Rad Laboratories

優れた温度均一性CFX Connectの96ウェルブロックは優れた温度制御性能と抜群の温度均一性を提供します。

各温度ステップの正確性はトータル反応時間やPCR効率にとって重要です。信頼性の高い再現性ある結果を得るために、サンプルウェルはすべての温度ステップで適切な温度を維持しなければなりません。

CFX Connectシステムでは、 6つの独立制御された温度制御回路 （TE）、ペルチェ素子の使用によりPCR実行中のすべてのポイントで厳密な温度均一性を維持するために、正確かつ再現性の高い結果を得ることができます。

CFX Connectでは温度ステップ間の温度が上昇／下降している間でさえ全ウェルがばらつきなく制御されています。さらに高速な平均温度制御速度は、迅速に目的温度に達することを可能にするため、卓越した目標温度到達後10秒以内に±0.4℃に収まる均一性は全PCR反応時間の大幅な短縮に貢献しています。

効率的なPCR条件最適化プライマーのアニーリングの温度最適化は特異的な反応とPCR反応効率に重要です。CFX Connectシステムが提供する温度グラジェント機能は１回の実験で反応条件を最適化し、貴重なサンプルおよび試薬の使用量を最小化することができ、さらに時間の節約を実現します。PCR反応中のどの温度ステップにも24℃幅までの温度グラジェントを設定することができます。

Fast Thermal Cycling

迅速に設定温度に到達して、再現性のための優れた温度均一性を実現CFX Connectシステムは高速な平均温度制御速度と10秒で全ウェルが±0.4℃に収まる優れた温度均一性を持っています。このグラフはサンプルブロック中の任意の15点の温度測定データ。ブロックの加熱中、冷却中でさえばらつきなく優れた均一性を発揮しています。

アニーリング温度最適化のための温度グラジェント実験GAPDHを含んだプラスミドDNAを105～10コピーに10倍希釈系列を作成してSYBR Green検出で55～68℃の温度グラジェント設定にて増幅された結果。この結果62℃が最適増幅を示している。RFU=相対蛍光単位

＊米国特許7,632,464

優れた均一性105コピーに希釈されたIL-1βプラスミドを鋳型としてFAMラベルプローブとiQ Supermixを用いて増幅した例。グラフは10μl反応系での96wellでの増幅結果。平均Cq=18.81±0.10　RFU=相対蛍光単位

サイクル

103

102

10 0 10 20 30 40

RFU

0 10 20 30 40

0 10 20 30 40

RFU

104

103

102

10

30

25

20

15

1 2 3 4 5 6

Cq

RFU

104

103

102

10

30

25

20

15

1 2 3 4 5 6

Cq

サイクル ログ開始量

62°C

56°C

— SYBR® Green: E = 98.7%

— SYBR® Green: E = 93.6%

特許取得済みのMass-reduceブロックは通常のサンプルブロックに比べ加熱／冷却速度がより迅速なため、温度制御速度をより早く、PCR反応全体の時間を短縮することができます。

0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 20055

60

65

70

75

80

85

90

温度（℃）

時間（秒）

5Bio-Rad Laboratories 5Bio-Rad Laboratories

CFX Connectの光学系は半導体光学技術による正確な励起／蛍光測定を実現しています。CFX Connectでは励起光源であるLEDと検出器フォトダイオードを備えた光学シャトルがサンプルプレート上をスキャンして、各ウェルごとに高感度かつクロストークなく蛍光検出を行います。CFX Connectの光学系は、自動的に全てのウェルから蛍光検出を行うため、実験前にウェル情報を入力する必要はありません。実験中、実験後のいつでも予定に合わせてウェル情報を設定することができます。

複数の検出モードCFX Connectシステムは複数のデータ検出モードを備えます。「Fast Scan モード」はSYBR GreenⅠ、EvaGreen並びに１波長のFAMラベルプローブ検出をすることができます。「All Channelモード」では２波長検出することができます。さらに「FRETモード」では１波長のFRET（fl uorescence resonance energy transfer） 検出をすることができます。

正確な2波長マルチプレックス反応

CFX Connectシステムの光学デザインはSYBR Green／EvaGreenもしくは2波長検出のために柔軟性のある設定が可能です。光学フィルターセットは、各チャンネルが特定の蛍光色素のために最大限の蛍光検出が可能なように設計されています。全ウェル位置並びにスキャン毎で、CFX Connectの光学シャトルは光路長が常に一定であるためリファレンス色素での標準化の必要はなく、正確に蛍光検出を実現しています。

Precise Detection

SsoFast EvaGreen Supermixによる高い再現性鋳型テンプレートの1.33倍希釈系列における効果的な増幅曲線の区別と信頼性の高い定量結果。5ng-500pgのヒトゲノムDNAからCBP遺伝子を増幅した例は、ヒトゲノムDNA（500ng-5ng）の量を変えることから増幅された。左上は拡大表示図。左から右へ:（■） 5ng, 2.83ng, 1.60ng, 903pg, 511pg ; （■） 3.76 ng, 2.13ng, 1.20ng, 679pg, CBP遺伝子Effi ciency=96.5%、R2=0.996。RFU=相対蛍光単位。

2ターゲット検出における優れた直線性A,B図は異なる蛍光色素でラベルされたプローブをプラスミドDNA（108-102

コピー）を鋳型として10倍希釈系列で増幅した例。:（■）FAM/cyclophilin ; （■） VIC/IL-1β　RFU=相対蛍光単位。

A

B

CFX Connectの光学シャトルはプレート直上をスキャンします。励起光は直上からウェルの中心に照射され蛍光検出されます。図はウェル直上で緑色LEDをウェルに照射する光学シャトル側面図

104

103

102

0 10 20 30 40

RFU

サイクル

105

104

103

102

RFU

0 10 20 30 40 50

サイクル

サイクル

105

104

103

102

RFU

0 10 20 30 40 50

選べるスキャンモード

モード チャンネル 測定時間

Fast Scan 1 3秒

All Channels 1-2 12秒

FRET FRET 3秒

測定可能な色素例

チャンネル 励起波長（nm）検出波長（nm） 蛍光色素

1 450-490 515-530 FAM, SYBR Green, EvaGreen

2 515-535 560-580 VIC, HEX, TET

3 450-490 560-580 FRET chemistry

6 Bio-Rad Laboratories6 Bio-Rad Laboratories

CFX ManagerソフトウェアCFX Managerソフトウェアは各個人のユーザ・ニーズを満たして、様々な実験タイプにも対応するように直観的かつカスタマイズ可能な柔軟性をもっています。

主な特長 ●クイックスタートウィザード機能と直観的な操作で簡単にご使用頂けます。　

●実験準備も万全スケジューラー機能を使用して機器を予約したり、Master Mix Calculatorを使用して試薬分注量を簡単に計算することができます。

●何処にいても結果分析が可能ラン終了後にデータを添付してe-mail送信することができます。

●データについてより早い決断が可能 Custom Data View機能を用いて１つのウィンドウ内に重要なデータを選択して表示することができます。

●遺伝子発現解析複数のリファレンス遺伝子を用いたり、個別の増幅効率を用いた相対定量解析が可能です。

●柔軟なエクスポート機能希望のデータだけを柔軟に外部ソフトウェアで解析するためにエクスポートすることができます。

Precision Melt AnalysisソフトウェアこのソフトウェアはHRM（Hight Resolution Melt）分析用のソフトウェアです。CFX Connectシステムで検出されたジェノタイプサンプルのデータをPrecision Melt Analysisソフトウェアにインポートして解析することができます。このソフトウェアは新しい遺伝子変異体のスクリーニング、SNPsのスクリーニング、挿入／欠失もしくは未知の変異の検出とサンプル中のメチル化DNA割合の推定など様々なアプリケーションに対応することができます。

Custom Data View機能

簡単に目的サンプルを認識することができるハイライト機能

Gene Study 画面Precision Melt Analysisソフトウェアを用いた迅速かつ正確なジェノタイプサンプル分析SsoFast EvaGreen Supermixを用いたヒト血液凝固第V因子のSNP遺伝子型（T→C）の検出例。ホモ接合野生型（■）、変異体（■）、ヘテロ接合（■）サンプルの標準化融解曲線グラフ。

Powerful SoftwareNormalized RFU

1.0

0.8

0.6

0.4

0.2

0.0 73 74 75 76 77 78

Temperature, ℃

7Bio-Rad Laboratories 7Bio-Rad Laboratories

バイオ・ラッドでは弊社サーマルサイクラー並びにリアルタイムPCR解析システムに最適なチューブ、プレート、シール、キャップなど消耗品とリアルタイムPCR用Supermixなど試薬を取り揃えています。

またqPCR実験ワークフローに関わるRNA抽出やRNA収量・純度・品質確認など全てのステップで最適な製品をご提供することができます。

リアルタイムPCR用試薬SsoFast EvaGreen Supermix ● Sso7d融合ポリメラーゼによる高速反応 ● GC-Richなど多様なサンプルに対応 ●低コピーサンプルでもばらつきのない増幅 ● SYBRよりも強い蛍光シグナル

SsoAdvanced SYBR Green Supermix ● Sso7d融合ポリメラーゼによる高速反応 ●従来SYBR製品に比べ強い蛍光強度 ●標準/Fast両方のプロトコールに対応

A Complete System

PCR用プラスティック消耗品 ● PCR／リアルタイムPCRに最適化したデザイン ●クラス10,000もしくは100,000クリーンルームにて製造 ●オートメーションに最適な歪まないHard-Shellプレート ●リアルタイムPCRのためにウェル間のばらつきを抑えて優れた均一性を実現したプレート

Sso7d

Polymerase

Sso7d

Polymerase

各社のリアルタイムPCR用試薬による蛍光強度比較例緑色：Bio-Rad SsoFast EvaGreen Supermix、赤色：A社Fast SYBR、青色：T社 SYBR他社のSYBR採用2製品より高い蛍光強度を誇ります。

SsoFastTM リアルタイムPCR Supermixは特許取得のSso7d融合タンパク質技術により高速な反応速度、PCR阻害剤耐性を実現しています。SsoFast Supermixシリーズに採用されているSso7d融合ポリメラーゼはDNA結合タンパク質Sso7dが鋳型DNAからのポリメラーゼの脱落を防ぐために従来品よりも高速なDNA合成と阻害剤耐性を実現しています。

Amplifi cation

サイクル数

RFU（10^ 3）

00

5

10

15

10 20 30 40

SsoAdvancedは、標準プロトコール／Fastプロトコールの両方において、従来製品よりもシグナルが立ち上がるサイクル数が少なく、蛍光強度も強い。緑色：SsoAdvanced SYBR Green Supermix、オレンジ色：iQ SYBR Green Supermix（*1）標準プロトコール：初期熱変性95℃ 30秒：熱変性95℃ 10秒, アニーリング／伸長反応60℃ 30秒×40サイクル

SsoAdvanced SYBR Green: Effi ciency = 99.2%, R2 = 0.998 iQ SYBR Green: Effi ciency = 101.3%, R2 = 0.995（*2）Fastプロトコール：初期熱変性95℃ 30秒：熱変性95℃ 1秒, アニーリング／伸長反応60℃ 1秒×40サイクル

SsoAdvanced SYBR Green: Effi ciency = 102.7%, R2 = 0.994 iQ SYBR Green: Effi ciency = 136.1%, R2 = 0.981

SsoAdvanced SYBR Green SupermixとiQ SYBR Green Supermixの比較

標準プロトコール（*1）

RFU (10^3)

サイクル数0

0

5

15

10

10 20 30 40

Fastプロトコール（*2）

RFU (10^3)

サイクル数0

0

5

15

10

10 20 30 40

Visit us at http://discover.bio-rad.co.jp 本　　　社 〒140-0002 東京都品川区東品川 2-2-24 天王洲セントラルタワー TEL：03-6361-7000　FAX：03-5463-8480大阪営業所 〒532-0025 大阪市淀川区新北野 1-14-11 第一生命ビル TEL：06-6308-6568　FAX：06-6308-3064福岡営業所 〒812-0013 福岡市博多区博多駅東 2-5-28 TEL：092-475-4856　FAX：092-475-4858

* 学術的お問い合わせは TEL：03-6404-0331　FAX：03-6404-0334

＊価格 ( 税抜き）、仕様などは予告無く変更することがありますので、ご了承ください。＊価格は 2011 年 10 月現在のもので、メーカー希望小売価格（税別）です。※本カタログに記載されている会社名、商品名は各社の商標または登録商標です。

取扱店

Ｃ10391 1110A

バイオ・ラッド ラボラトリーズ 株式会社ライフサイエンス事業部

Bustin SA et al. （2009）. The MIQE guidelines: minimum information for publication of quantitative real-time PCR experiments. Clin Chem 55, 611-622.

EvaGreen is a trademark of Biotium, Inc. Bio-Rad Laboratories, Inc. is licensed by Biotium, Inc. to sell reagents containing EvaGreen dye for use in real-time PCR, for research purposes only. Excel, Microsoft, PowerPoint, Windows, and Windows Vista are trademarks of Microsoft Corporation. FAM is a trademark of Applera Corporation. Linux is a trademark of Linus Torvalds. Macintosh is a trademark of Apple Inc. SYBR is a trademark of Molecular Probes, Inc. Bio-Rad Laboratories, Inc. is licensed by Molecular Probes, Inc. to sell reagents containing SYBR Green I for use in real-time PCR, for research purposes only.LabChip and the LabChip logo are trademarks of Caliper Life Sciences, Inc. Bio-Rad Laboratories, Inc. is licensed by Caliper Life Sciences, Inc. to sell products using the LabChip technology for research use only. These products are licensed under U.S. Patent Numbers 5,863,753; 5,658,751; 5,436,134; and 5,582,977; and pending patent applications, and related foreign patents, for internal research and development use only in detecting, quantitating, and sizing macromolecules, in combination with microfl uidics, where internal research and development use expressly excludes the use of this product for providing medical, diagnostic, or any other testing, analysis, or screening services, or providing clinical information or clinical analysis, in any event in return for compensation by an unrelated party.

Notice regarding Bio-Rad thermal cyclers and real-time systems: Purchase of this instrument conveys a limited non-transferable immunity from suit for the purchaser’s own internal research and development and for use in human in vitro diagnostics and all other applied fi elds under U.S. Patent Number 5,475,610 （Claims 1, 44, 158, 160‒163, and 167 only）, or corresponding claims in its non-U.S. counterpart, owned by Applera Corporation. No right is conveyed expressly, by implication, or by estoppel under any other patent claim, such as claims to apparatus, reagents, kits, or methods such as 5' nuclease methods. Further information on purchasing licenses may be obtained by contacting the Director of Licensing, Applied Biosystems, 850 Lincoln Centre Drive, Foster City, California 94404, USA.

Bio-Rad’s real-time thermal cyclers are licensed real-time thermal cyclers under Applera’s U.S. Patent Number 6,814,934 B1 for use in research, human in vitro diagnostics, and all other fi elds except veterinary diagnostics.

Bio-Rad’s real-time thermal cyclers are covered by one or more of the following U.S. patents or their foreign counterparts owned by Eppendorf AG: U.S. Patent Numbers 6,767,512 and 7,074,367.

Practice of the patented 5' Nuclease Process requires a license from Applied Biosystems. The purchase of these products includes an immunity from suit under patents specifi ed in the product insert to use only the amount purchased for the purchaser’s own internal research when used with the separate purchase of Licensed Probe. No other patent rights are conveyed expressly, by implication, or by estoppel. Further information on purchasing licenses may be obtained from the Director of Licensing, Applied Biosystems, 850 Lincoln Centre Drive, Foster City, California 94404, USA.

＜サーマルサイクラー部＞サンプル数 96ウェルサンプル容量 1～50μｌ（10～25μｌ推奨）温度設定範囲 0～100℃最大温度制御速度 5.0℃ /秒平均温度制御速度 3.3℃ /秒温度制御方法 ペルチェ温度正確性 ±0.2℃（90℃で測定）温度均一性 ±0.4℃（設定温度に到達した10秒後の測定）温度グラジェント設定温度幅 1～24℃温度グラジェント設定温度範囲 30～100℃温度グラジェント段階数 8段階

＜光学モジュール部＞光源 LED　3波長検出 フォトダイオード　3波長検出励起／検出チャンネル1 Ex　450-490／Em　515-530励起／検出チャンネル2 Ex　515-535／Em　560-580励起／検出チャンネル3 Ex　450-490／Em　560-580最大マルチプレックス数 2色測定スキャン速度（マルチモード） 12秒以下スキャン速度（シングルチャンネルFastモード） 3秒

＜コンピュータ部＞OS Windows 7CPU 2GHz以上RAM 2GB以上HD 20GB以上光学ドライブ 要ポート USB

＜CFX共通（サーマルサイクラー部および光学モジュール部）＞操作環境 周辺温度：15～31℃

相対湿度：80%以下（ただし結露のないこと）入力電源 100～240V／50～60Hz最大消費電力 850Wサイズ（W×D×H） 33×46×36cm重量 21.4kg

（＊）現在は上記の仕様となっておりますが、今後予告なしに変更される場合がありますのでご了承ください。

仕様 Ordering Information

PCR消耗品カタログ番号 品名●Hard-Shellプレート／White well （Low Profi le）HSP-9655 96well Hard-Shell マイクロプレート White well／White Shell（50枚）HSP-9635 96well Hard-Shell マイクロプレート White well／Blue Shell（50枚）HSP-9645 96well Hard-Shell マイクロプレート White well／Green Shell（50枚）HSP-9665 96well Hard-Shell マイクロプレート White well／Black Shell（50枚）●Hard-Shellプレート／Clear well（Low Profi le）HSP-9601 96well Hard-Shell マイクロプレート Clear well/White Shell（50枚）HSP-9611 96well Hard-Shell マイクロプレート Clear well/Red Shell（50枚）HSP-9621 96well Hard-Shell マイクロプレート Clear well/Yellow Shell（50枚）HSP-9631 96well Hard-Shell マイクロプレート Clear well/Blue Shell（50枚）HSP-9641 96well Hard-Shell マイクロプレート Clear well/Green Shell（50枚）HSP-9661 96well Hard-Shell マイクロプレート Clear well/Black Shell（50枚）●Low Profi leプレート／White well （Low Profi le）MLL-9651 Multiplate 96well PCRプレート（Low Profi le） ／ホワイト（25枚）MLL-9651B05 Multiplate 96well PCRプレート（Low Profi le） ／ホワイト（25枚×5セット）●Low Profi leプレート／Clear well （Low Profi le）MLL-9601 Multiplate 96well PCRプレート（Low Profi le）／ナチュラル（25枚）MLL-9601B05 Multiplate 96well PCRプレート（Low Profi le） ／ナチュラル（25枚×5セット）●キャップ／シールMSB-1001 Microseal 'B'シーリングフィルム（100枚）MSB-1001B05 Microseal 'B'シーリングフィルム（100枚×5セット）MSC-1001 Microseal 'C'シーリングフィルム（100枚）TCS-0803 0.2ml Optical8連フラットキャップ／ナチュラル（120個）TCS-0803B05 0.2ml Optical8連フラットキャップ／ナチュラル（120個×5セット）※価格はお問い合わせください。

リアルタイムPCR試薬カタログ番号 品名 保存温度●SsoFast EvaGreen Supermix172-5200 SsoFast EvaGreen Supermix 2ml（20μl×200反応） -20℃172-5201 SsoFast EvaGreen Supermix 5ml（20μl×500反応） -20℃172-5201B02 SsoFast EvaGreen Supermix 10ml（20μl×1000反応） -20℃172-5201B04 SsoFast EvaGreen Supermix 20ml（20μl×2000反応） -20℃172-5203 SsoFast EvaGreen Supermix 20ml（20μl×2000反応）ボトル -20℃●SsoAdvanced SYBRGreen Supermix172-5260 SsoAdvanced SYBRGreen Supermix 2ml（20μl×200反応） -20℃172-5261 SsoAdvanced SYBRGreen Supermix 5ml（20μl×500反応） -20℃172-5261B02 SsoAdvanced SYBRGreen Supermix 10ml（20μl×1000反応） -20℃172-5261B05 SsoAdvanced SYBRGreen Supermix 25ml（20μl×2500反応） -20℃172-5261B10 SsoAdvanced SYBRGreen Supermix 50ml（20μl×5000反応） -20℃●SsoFast Probes Supermix～２プローブまでのリアルタイムPCRに最適172-5230 SsoFast Probes Supermix 2ml（20μl×200反応） -20℃172-5230B02 SsoFast Probes Supermix 4ml（20μl×400反応） -20℃172-5230B05 SsoFast Probes Supermix 10ml（20μl×1000反応） -20℃172-5230B10 SsoFast Probes Supermix 20ml（20μl×2000反応） -20℃●Precision Melt Supermix～メチレーションを含むHRM解析に最適172-5110 Precision Melt Supermix 2ml（20μl×200反応） -20℃172-5110B05 Precision Melt Supermix 10ml（20μl×1000反応） -20℃※価格はお問い合わせください。

CFX Connect リアルタイムPCR解析システムカタログ番号 品名 価格185-5201J1 CFX Connect リアルタイムPCR解析システム

構成内容：CFX Connectシステム、ノートPC、ステップアップトランス、マニュアル

¥4,800,000

185-5201J4 CFX Connect HRMリアルタイムPCR解析システム構成内容：CFX Connectシステム、ステップアップトランス、マニュアル、Precision Melt Analysisソフトウェア

¥5,400,000

ワークフロー製品カタログ番号 品名 価格145-0009J1 TC10全自動セルカウンター　プリンター付 ¥625,000145-0001J1 TC10全自動セルカウンター　 ¥550,000170-2525 SmartSpec Plus スペクトロフォトメーター ¥680,000700-7001J1 Experion タンパク質/核酸分析PCシステム ¥2,750,000

HRM解析ソフトウェアカタログ番号 品名 価格184-5025JA Precision Melt Analysisソフトウェア（２ライセンス） ¥600,000