Atlas Interactivo de pruebas bioquimicas

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Universidad Nacional Autónoma de México

Facultad de Estudios Superiores Zaragoza

Universidad Nacional Autónoma

de México

Facultad de Estudios Superiores

Zaragoza

Q.F.B LUCÍA BAILÓN LIRA

Q.F.B. ROBERTO C. GONZÁLEZ MELÉNDEZ

M. en C. ARMANDO CERVANTES SANDOVAL

MEDIOS DE CULTIVO

TÉCNICAS DE INOCULACIÓN

PRUEBAS BIOQUÍMICASIngraham J.L.2000. .

Definición

Medios

básicos

Medios selectivos

diferenciales y de

enriquecimiento

Medios

enriquecidos

Medios

especiales

Otras

clasificaciones

Por composición

Por consistencia

Pruebas

bioquímicas

MEDIOS DE

CULTIVO

FINALIZAR

TÉCNICAS DE

INOCULACIÓN

Tipos de asas

Medio líquido

Medio sólido

Medio semisólido

Estría simple Estría en Z Inoculación masivaEstría cruzada

Inoculación en tubo

Inoculación en placa

Estría Vaciado en placa

FINALIZAR

FERMENTACIÓN DE

CARBOHIDRATOS

PRUEBA DE

CITRATO

LICUEFACCIÓN

DE GELATINA

LECHE CON

TORNASOL

REDUCCIÓN DE

NITRATOS

REACCIÓN RMVP

PRUEBA DE UREA

PRUEBA DE OXIDACIÓN

Y

FERMENTACIÓN (O/F)

REDUCCIÓN DE LA

LECHE CON AZUL DE

METILENO

L I A

T S I

S I M

PRUEBA DE

FENILALANINA

M I O

FINALIZAR

MENÚFINALIZAR MEDIOS DE CULTIVO

Placas de agar soya tripticasa inoculado con una

bacteria que produce un pigmento amarillo, importante

característica diferencial para identificar bacilos gram

negativos no fermentadores.

Koneman,1992

Un medio de cultivo es cualquier sustancia quepueda ser usada para el cultivo de microorganismos.

Los medios sirven para uno de dos propósitosprincipales:Fomentar el crecimiento microbiano en forma quepuedan comprobarse las características de cultivo.Facilitar algunas reacciones bioquímicas que luegopuedan ser demostrables por observación directa obien indirectamente por la reacción en presencia dealgunos reactivos adicionales.Todas las reacciones de cultivo así como lasbioquímicas, dependen de la composición del medio yde la naturaleza del cultivo que se estudie.

Los medios de cultivo se pueden clasificar en:

1. Medios básicos2. Medios enriquecidos3. Medios selectivos, diferenciales y de enriquecimiento4. Medios especiales

http://biomedicas.unam.mx/htm/bmyt/mao/mao.htm






FINALIZAR MEDIOS DE CULTIVO

Son aquellos medios que solo contienen algún extracto de carne u otra infusiónsimple, peptona, sal y agua.

El extracto o la infusión de carne proporcionan al organismo los aminoácidos,vitaminas, sales, y pequeñas cantidades de carbono, nitrógeno, hidrógeno y otroselementos.

Las sales usualmente cloruro de sodio sirven para obtener isotonicidad requeridapara el mantenimiento de presiones osmóticas constantes.

El agua sirve como disolvente, como medio de transporte o para ambos fines.

Los medios de cultivo que solo contienen extracto de carne, peptona, sal y agua, sonlíquidos; para el estudio de las características de las colonias es indispensable el usode medios sólidos.

La solidificación se consigue agregando agar, gelatina, albúmina de suero o dehuevo, a los otros ingredientes.

Es preferible utilizar el agar, ya que es un medio sólido que no se desintegra por losmedios físicos usados en el cultivo de la mayoría de los microorganismos.

Ejemplos

Ejemplos de medios básicos

1. Caldo nutritivo

2. Agar nutritivo

3. Caldo de triptona y soya

4. Caldo de infusión de cerebro y corazón

5. Agar de infusión de cerebro y corazón

6. Caldo de infusión de corazón

7. Agar y extracto de hígado

8. Dextrosa de Saboraud

Agar EMB con crecimiento de E. coli,

colonias de color verde birillante, las

especies de Shigella no fermentan lactosa,

por eso se ven translucidas.

Koneman,1992

FINALIZAR MEDIOS DE CULTIVO

HemólisisHacer clic

Son aquellos medios básicos que hansido complementados con líquidoscorporales, vitaminas específicas,aminoácidos, proteínas y otrosnutrientes claramente definidos comotales.

Ejemplos: Agar sangre Agar sangre chocolate Caldo de suero Agar con suero Suero de Loeffler con sangre Medios inclinados con suero Agar de Bordet Gengou Medio de Levinthal Agar de Mueller-Hinton Agar infusión de cerebro corazón Agar proteosa

Los medios selectivos son usualmente medios de agar básico, oenriquecidos, a los cuales se les han agregado ciertos reactivos queimpiden el crecimiento de la mayoría de las bacterias, permitiendo porlo tanto el aislamiento de unas cuantas seleccionadas en losespecimenes que contengan grandes números de organismosindeseables.

Los medios diferenciales son medios básicos o enriquecidos, a loscuales se les han agregado ciertos reactivos que reaccionarán conalgunos tipos específicos de bacterias en cierta forma observable.

Los medios de enriquecimiento son por lo general medios líquidosenriquecidos, que contienen algunas sustancias inhibidoras, con loque se crea un medio ambiente especialmente favorable para límitesmás bien estrechos de bacterias.

Ejemplos

MEDIOS DE CULTIVOFINALIZAR

Ejemplos de medios selectivos,

diferenciales y de enriquecimiento

Medio de Thayer Martin Agar con feniletanol Agar con sangre y bilis al

40% Agar con esculina y bilis Agar con sangre y telurito Medio de Tinsdale modificado Agar con Lowenstein Jensen

en tubos inclinados Agar con citrato y

desoxicolato Agar de sulfito de bismuto Caldo de selenito de sodio Agar XLD (xilosa, lactosa,

desoxicolato)

Agar de Mac Conkey Agar Salmonella – Shigella Agar con eosina y azul de metileno

(EMB) Agar de bilis y rojo de violeta Agar dextrosa y tripticaseina Agar entérico Hektoen Agar S-110 Agar tergitol 7 Agar verde brillante Agar Vogel Jhonson Agar Baird-Parker Agar sal y manitol Agar sangre con azida

Son los medios que no pueden ser fácilmenteagrupados bajo alguno de los anteriores grupos.

La mayoría de ellos serán medios empleados paracomprobar una o más a características bioquímicas, lo cualfacilita la clasificación, en este caso de las bacterias yhongos.

Ejemplos:

Pruebas bioquímicas

MEDIOS DE CULTIVOFINALIZAR

1. Medios sólidos. Son útiles para el crecimiento, aislamiento yobtención de cultivos puros de bacterias.

2. Medios semisólidos. Útiles para la observación de metabolismo,así como la propagación y obtención de cultivos de bacteriasanaeróbicas.

3. Medios líquidos. Permiten la difusión del microorganismo.

MEDIOS DE CULTIVO

Koneman,1992 Koneman,1992

FINALIZAR

Medios sintéticosEs aquel en el que se conoce lacomposición química exacta delos ingredientes.

Medio no sintéticoNo se conoce de una maneradefinida la composición precisa dealguna o de todas las sustanciasnutritivas.

MEDIOS DE CULTIVO

Hacer clic

Clasificación de reinos

Koneman,1992

FINALIZAR

Por picadura en forma vertical

Cuando se inocula agarsemisólido en un tubo parapruebas de motilidad (aunqueno sea la única prueba que sevalora) es importante que elasa de inoculación searetirada a lo largo del mismocamino que se usó paraatravesar inicialmente elmedio. Solo se pica el agarcon un movimiento uniformey recto y para ello se utiliza elasa recta.

TÉCNICAS DE INOCULACIÓN Hacer clic

Documento electrónico

FINALIZAR

\APBDocu\Atlas_03.pdf

Difusión

Los medios líquidos se inoculan como en el método ilustrado; el tubo debeinclinarse aproximadamente 30°, con un asa de inoculación se toca la superficieinterna del vidrio, exactamente por encima del punto donde la superficie del medioforma un ángulo agudo. Se debe utilizar el asa con arillo.

Posteriormente se vuelve a colocar el tubo en posición erecta, el área deinoculación queda sumergida en el medio.

Agitar suavemente cada tubo. No dejar que el líquido salpique la tapa del tubo. Sí se inocula una batería con una misma especie de bacteria no hay necesidad de

pasar por la llama entre cada inoculación. Cuando se utiliza una aguja o asa para inocular una batería con un solo inóculo, el

traspaso de azúcares de un tubo a otro es tan infinito que no hay problema de queun tubo contenga una mezcla de carbohidratos.

Sí se inocula una batería no es necesario observar en forma apreciable el inóculo encada uno de los tubos. Un solo inóculo espeso tomado de cultivo contiene millonesde bacterias que son suficientes para inocular cada tubo con un número apreciablede bacterias necesarias para que se produzca el metabolismo.

TÉCNICAS DE INOCULACIÓNFINALIZAR

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Pico de flauta o cola de pescado (en tubo)a) Por punción (picadura)b) Por estríac) Por punción y estría

Los picos de flauta (planos inclinados) deagar se inoculan de la siguiente forma:primero se atraviesa todo el fondo del agarcon el asa recta de inoculación, esto cuandosea necesario ya que no todos los medios lorequieren, posteriormente éste se retira conun movimiento en “S” a través del agar,con lo que se disemina el inóculo. Se utilizael asa recta.

TÉCNICAS DE INOCULACIÓNHacer clic

a)

b)

c)

FINALIZAR



FINALIZAR TÉCNICAS DE INOCULACIÓNHacer clic



Estría simple Estría en Z

Inoculación

masiva

FINALIZAR TÉCNICAS DE INOCULACIÓN Hacer clic



FINALIZAR TÉCNICAS DE INOCULACIÓN

MUESTRA POR SER CONTADA

9 ml DE SOLUCIÓN. SALINA

AGAR FUNDIDO

VERTIDO EN PLACA COLONIAS AISLADAS

COLONIAS

Hacer clic

Ingraham L.J. 2000, modificado

Vaciado en placa

Asa en arillo

Asa recta

Hisopo

FINALIZAR TÉCNICAS DE INOCULACIÓN Hacer clic



Fundamento Inoculación

Condiciones de

incubación

Resultados

InterpretaciónReporte de

resultados

AplicacionesConsistencia

del medio

Medio de cultivo

PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZARATLAS

Medio de cultivo: Caldo básico rojo de fenol y carbohidratos.

Composición:

a) Peptona

b) Extracto de carne

c) Cloruro de sodio

d) Agua destilada

e) Indicador de pH: Rojo de fenol

Ácido: Color amarillo (pH = 6.8)

Alcalino : Color rojo ( pH = 8.4)

Medio no inoculado: Rojo (pH = 7.4)

PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚ

Tinción de Gram: Micrococcus sp

Se pueden utilizar los siguientes carbohidratos: glucosa, manitol, inulina,

lactosa, inositol, sacarosa, salicina y rafinosa, principalmente.

Esta prueba determina la capacidad de un organismo de fermentar (degradar)un carbohidrato específico incorporado a un medio básico.

La fermentación es un proceso metabólico de oxido-reducción que ocurre enun medio ambiente anaerobio y, en lugar de oxígeno, un sustrato orgánico sirvecomo el aceptor final de hidrógeno (electrones). En los sistemas de pruebabacteriológicos, este proceso se detecta observando cambios de color en indicadoresde pH a medida que se forman productos ácidos.

Las bacterias que fermentan un hidrato de carbono son por lo generalanaerobios facultativos. Por medio del proceso de fermentación un carbohidrato esdegradado y descompuesto en dos moléculas de carbono (triosas) que sonnuevamente degradadas en un número de compuestos de 1,2,3 y 4 carbonos. Losproductos finales varían con cada especie bacteriana y depende del sistemaenzimático existente en la especie y las condiciones del medio ambiente.

El más importante ciclo fermentativo de la degradación de la glucosa es el ciclode Embden - Meyerhof aun cuando éste también puede producirse por la derivaciónde pentosa o el ciclo de Entner - Duodoroff. Pueden utilizarse diversos hidratos decarbono.

FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ

Utilizando un indicador de pH con un determinado

carbohidrato puede determinarse si una bacteria ha degradadoel mismo en varios productos terminales, observando un cambiode color visible en el medio.

bacteria

Indicador de pH + CHO H2CO2 (aldehídos) + cambio de color glucólisis


Consistencia del medio

Líquido

Inoculación

Por difusión, inóculo denso


Condiciones de incubación

Tiempo: 24 - 48 horas

Temperatura: 35 - 37° C

InterpretaciónPositiva = Color amarillo (ácido)

Negativa = Color rosa – rojizo (alcalina)

Color anaranjado

Reporte de resultadosA = ácido

K = alcalino

G = gas


Agar XLD con crecimiento de E. coli a las 24 horas. El

aspecto amarillo alrededor de las colonias indica

utilización de lactosa y sacarosa, por que se ha

producido una caida suficiente del pH por debajo del

punto decisivo del indicador rojo de fenol.

Hacer clic

Identificación de

Staphylococcus

Koneman,1992


MEDIO NO INOCULADO NEGATIVO

POSITIVONEGATIVO

Microorganismos Fermentadores de Carbohidratos:

Fermentadores de glucosa: Todos losmiembros de las Enterobacteriaceae.

Fermentadores de glucosa y lactosa:Escherichia coli, Klebsiella y gruposEnterobacter.

Fermentadores de manitol: Staphylococcusaureus

Fermentadores de inositiol: Proteus rettgeri Fermentadores de lactosa: Neisseria lactamica Fermentadores de adonitol: Providencia

alcalifaciens Fermentadores de inulina: Streptococcus

salivarius y Streptococcus sanguis Fermentadores de sacarosa: Yersinia

enterocolitica Fermentadores de salicina: Listeria

monocytogenes


Ingraham L.J. 2000

Yersinia enterocolitica. American

Museum of Natural History, 1998.

http://www.monografas.com/trabajos7/rumen/rumen.shtml

http://www.monografas.com/trabajos7/rumen/rumen.shtml

http://www.monografias.com/trabajos/bactevet/bactevet.shtml



Microorganismos no Fermentadores de Carbohidratos:

No fermentadores de lactosa: Enterobacterias patógenas como Salmonella y Shigella.

No fermentadores de manitol: Staphylococcus epidermidis

No fermentadores de salicina: Especies de Corynebacterium

No fermentadores de rafinosa: Otras especies de Aeromonas

No fermentadores de inositol: Proteus morganii No fermentadores de adonitol: Providencia stuartii No fermentadores de inulina: Streptococcus del grupo D No fermentadores de sacarosa: Otras especies de

Yersinia


Escherichia coli vista en

microscopio electrónico

http://www.vdh.state.va.us/spanish/strepf.htm


Condiciones de

incubación

Resultados

Interpretación Reporte de

resultados

Aplicaciones

Consistencia

del medio

Medio de cultivo


Determina si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como únicafuente de carbono para el metabolismo y crecimiento, provocandoalcalinidad.

El medio incluye citrato de sodio un anión como única fuente de carbono, yfosfato de amonio como única fuente de nitrógeno.

Normalmente el metabolismo del citrato comprende una condensación deacetilo con la coenzima A y oxalacetato para entrar en el ciclo de Krebs. Eldesdoblamiento del citrato comprende un sistema enzimático sin laintervención de la coenzima A. Esta enzima se denomina citritasa o citratodesmolasa. El oxalacetato y el acetato son intermediarios en el metabolismodel citrato.


Los productos obtenidos del metabolismo del citrato dependen del pH del medio:

pH básico:

Citrato CO2 + ácido fórmico + 2 ácido acético

pH ácido:

2 Piruvato acetato + CO2 + lactato

2 Piruvato acetoína + 2CO2


Medio de cultivo: Citrato de Simmons

Composición:

a) Sulfato de magnesiob) Monofosfato de amonioc) Fosfato dipotásicod) Citrato de sodioe) Cloruro de sodiof) Agarg) Agua destiladah) Indicador de pH: Azul de bromotimol (pH = 6)

Alcalino : color azul de Prusia intenso (pH = 7.6)Medio no inoculado: Color verde (pH = 6.9)


Ingraham L.J. 2000


Sólido inclinado (pico de flauta)

Incubación

Tiempo = 24 - 48 horas

Temperatura = 35 - 37° C

Inoculación

Se inocula como una estría únicaen la superficie del pico de flauta.


Black, 1996

Pseudomona sp, (8100x)

InterpretaciónPositivo : Crecimiento aunque no exista

cambio de color.Crecimiento y el medio de color azulintenso en pico de flauta.

Negativo : No se observa crecimiento ymedio de color verde.Si se utiliza carbono a partir decitrato de sodio, también se extraenitrógeno del fosfato de amoniocontenido en el medio, liberándoseamoniaco. En ocasiones se detectaun crecimiento visible a lo largo dela línea de siembra antes de laaparición de color. Este crecimientovisible también indica resultadopositivo.

Reporte de resultadosNegativo (-)Positivo (+)


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Características de

Corynebacterium diphteriae

Ingraham L.J. 2000


MEDIO NO INOCULADO NEGATIVO

POSITIVO

POSITIVO POSITIVO

Microorganismos positivos

Especies de :

Salmonella

Arizona

Citrobacter

Enterobacter

Klebsiella

Serratia licuefaciens

Pseudomonas cepacia

Microorganismos negativos

Edwarsiella Yersinia enterocolitica Escherichia coli Shigella Yersinia

pseudotuberculosis Otras especies de

Moraxella Proteus morganii


Black J.G. 1996

http://gsbs.utmb.edu/microbook/ch021.htm

http://www.medmayor.cl/apuntes/farmacologia/farmacologiaIV.htm


http://www.vdh.state.va.us/spanish/shigf.htm


Condiciones de

incubación

Resultados


resultados

Aplicaciones

Consistencia

del medio

Medio de cultivo


Medio de cultivo : Gelatina nutritiva

Composición:

a)Extracto de carne

b)Peptona

c)Gelatina

d)Agua destilada


Streptococcus sp.

Determinar la capacidad de un organismo de producir enzimas de tipoproteolítico (gelatinasas) que licuan la gelatina.

Las proteínas que se producen naturalmente son demasiado grandes paraentrar en una célula bacteriana; por lo tanto, para que una célula utilicelas proteínas, primero debe ser catabolizada en componentes máspequeños. Las enzimas exonucleares de tipo protelítico, gelatinasas, sonsecretadas por ciertas bacterias para desdoblar a las proteínas y estacapacidad ayuda a la identificación bacteriana.

gelatinasas

Proteína + H2O polipéptidos

proteasas

gelatinasas

Polipéptidos + H2O aminoácidos individuales

peptidasas



Semisólido

Inoculación

Picadura en posición verticalhasta una profundidad de 2 - 2.5cm, inóculo denso. Condiciones de

incubaciónTiempo: 18 - 24 horasTemperatura : 35 - 37° C

Al termino de la incubación se coloca el tubo enun refrigerador o baño de hielo durante doshoras para determinar si se ha producido o no ladigestión de la gelatina (licuefacción).


Colonias de Serratia marcescens en agar

EMB, produciendo pigmento

Black J.G. 1996

Pseudomona aeruginosa University of Missouri-Columbia,

1998: http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides.htm

http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides.htm

Interpretación

Positivo : Medio licuado (estado líquido)

Negativo : Medio sólido

El medio de gelatina nutritiva para punción no es conveniente paralas pruebas de rutina de la actividad de la gelatinasa, dado que muchasespecies requieren una incubación prolongada antes de que aparezcanmuestras de licuefacción. En los métodos diagnósticos de rutina paraidentificar bacterias, la duración de la incubación deberá alcanzar unperíodo razonable.

Reporte de resultados

Positivo (+)

Negativo (-)


Hacer clic

Identificación de

Staphylococcus


MEDIO NO

INOCULADONEGATIVO POSITIVO


Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis (lenta) Serratia liquefaciens Serratia marcescens Pseudomona aeruginosa (rápida) Especies de Flavobacterium


Listeria monocytogenes







Condiciones de

incubación

Resultados


resultados

Aplicaciones

Consistencia

del medio

Medio de cultivo


Medio de cultivo: Medio de leche tornasolada

Composición:

1. Leche descremada

2. Agua destilada

3. Indicador de pH: Tornasol

Ácido : Color rojo (pH = 4.5)

Alcalino : Color azul ( pH = 8.3)

Medio no inoculado: Azul purpúreo (pH = 6. 8)


Clostridium perfringens, tinción

de Gram.

Permite diferenciar organismos sobre la base de sus múltiplesreacciones metabólicas en un medio lácteo como: fermentación de lactosa,caseólisis, y coagulación de la caseína. El tornasol incorporado a la leche esun indicador de pH y de oxidación-reducción que hace que el medio puedaindicar diversas funciones metabólicas. La leche contiene lactosa, caseína,lactoalbúmina y lactoglobulina, por lo tanto, un organismo puede mostraruna o varias propiedades metabólicas en la leche tornasolada ayudando asía la identificación bacteriana:

1. Fermentación de lactosa

2. Reducción del tornasol

3. Formación de coágulo

4. Peptonización (digestión)

5. Formación de gas


Fermentación de lactosa

Cuando un organismo es capaz de fermentar lactosa, produceprincipalmente ácido láctico, con una condición ácida indicada por elcambio de color del medio que se vuelve rojo rosado. A veces el ácidobutírico es el producto final.

Ciertas bacterias que forman álcalis no fermentan lactosa, pero actúansobre las sustancias nitrogenadas que se encuentran en la lecheliberando amoniaco, y dando en consecuencia un pH alcalino que semanifiesta por un color púrpura azulado.

Lactosa glucosa + galactosa

ácido lácticoGlucosa ácido pirúvico ácido butírico

CO2 + H2

Reducción del tornasol

El tornasol es un indicador de pH y un indicador de oxidación reducción; algunos organismos son capaces de reducir el tornasol a una leucobase.


Formación de coágulo

Las enzimas proteolíticas provocan la hidrólisis de las proteínas de la leche lo que resulta en sucoagulación. La principal enzima responsable de la formación de coágulo es la renina.

La formación del coágulo es causada por la precipitación de la caseína, por la formación deácidos o por la conversión de la caseína en paracaseína por la enzima renina. La caseína es unafosfoproteína compleja y es la proteína más importante de la leche.

Formación de un coágulo ácido La precipitación de la caseína provocada por los ácidos orgánicos a partir de lactosa en

condiciones ácidas produce un coágulo firme, gelatinoso que no se separa de las paredes deltubo.

caseasaLactosa ácido Láctico + caseínato de Ca caseinógeno (pp)

Otra forma de coágulo es el coajo, o sea el proceso de coajado de la leche por la conversiónde la caseína en paracaseína por las enzimas renina, pepsina o quimiotripsina contenidas en laleche. La renina provoca el coajado de la leche convirtiendo la sal de caseína soluble en unaparacaseína insoluble que es el cuajo o requesón.

reninaCaseína paracaseína (pp)

Ca


Peptonización (digestión)La hidrólisis de la caseína por la actividad enzimática produce

una conversión final del precipitado caseinógeno en un líquidoclaro; el proceso se denomina peptonización y se manifiesta poruna aclaración acuosa del medio causada por una digestión delprecipitado (coágulo) y las proteínas de la leche por las enzimasproteolíticas de las bacterias. Sin embargo, solo se produce unapeptonización cuando la bacteria que se desarrolla en la lechetornasolada contiene la enzima proteolítica caseinasa.

Formación de gasLos gases CO2 y H2 se forman como resultado final de la

fermentación de la lactosa.



Líquido

Inoculación

Difusión


Tiempo : 24 - 48 horas

Temperatura : 35 - 37° C


Ingraham L.J. 2000

Rojo rosado: Ácido; fermentación de lactosa

Azul purpúreo: No fermentación de lactosa; sincambio del indicador de pH.

Azul : Alcalino; Ausencia fermentación de lactosa.El organismo ataca las sustancias nitrogenadas quese encuentran en el medio.

Blanco : Reducción del tornasol a una leucobase.

Formación de coágulo : Coagulación de la proteínade la leche.

Aclaración del medio : Digestión; se ha ingerido laproteína de la leche.

Gas : Producción de burbujas en la campana deDurham.


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Diferencición de especies

de Streptococcus

En la tabla de resultados

solo se escribirán las letras queaparecen dentro del paréntesis.

Rojo rosado (A)

Azul purpúreo (SC)

Azul ( K)

Blanco (Red)

Coágulo (C)

Digestión (D)

Gas (G)


Encarta 2002


ME

DIO

NO

IN

OC

UL

AD

O

NO FERMENTACIÓN DE

LACTOSA

FE

RM

EN

TA

CIÓ

N D

E

LA

CT

OS

A

DIG

ES

TIÓ

N

RE

DU

CC

IÓN

DE

TO

RN

AS

OL

CO

ÁG

UL

O

Ayuda a la diferenciación deespecies sobre todo del géneroClostridium.

Sin crecimiento:

Clostridium choleraerium

Clostridium difficile

Clostridium putrefaciens

Clostridium tetanomorphum

Streptococcus equinus

Con crecimiento:

Streptococcus bovis


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Características de especies de

Bacillus y Clostridium

http://www.vdh.state.va.us/spanish/botulismf.htm

http://www.delpaciente.com/htm/0273.htm

http://www.viarural.com.ar/viarural.com.ar/biomarketprincipal/calendariossanitarios/bovinos/infecciosas/clostridium/default.html



Condiciones de

incubación

Resultados


resultados

Aplicaciones

Consistencia

del medio

Medio de cultivo


Medio de cultivo: Medio de leche

Composición:

1. Leche descremada deshidratada

2. Agua destilada

3. Indicador : Azul de metileno

Incoloro : Estado reducido

Azul : Estado oxidado ; medio no inoculado (pH= 6.4)


Diferencía organismos por su capacidad de reducir el azul de metileno en un mediocon leche.

El sistema citocromo oxidasa activa la oxidación del citocromo reducido por eloxígeno molecular que a su vez actúa como un aceptor de electrones en el periodoterminal del sistema de transferencia de electrones. Cuando existen condiciones aeróbicasel oxígeno es el aceptor final del hidrógeno, produciendo agua o peróxido de hidrógenosegún la especie bacteriana y su sistema enzimático.

Los sustratos artificiales como el azul de metileno, pueden sustituir a los aceptoresde electrones naturales en cualquier lugar de la cadena de transporte de electrones,donde actúan como reductores del sistema citocromo. Cuando se agrega el colorantesintético reducible, azul de metileno a un medio que contenga organismosmetabolizantes, los electrones producidos por un sustrato oxidable son desplazados de suciclo normal, si se produce reductasa y son utilizados para reducir el colorante.

Cuando se agrega el colorante a un medio con organismos metabolizantes, loselectrones producidos por un sustrato oxidable son desplazados de su ciclo normal, si seproduce reductasa y son utilizados para reducir el colorante. Anaerobicamente la formaoxidada del color azul es reducida por un organismo a un compuesto incoloro,hidrogenado, leuco-azul de metileno.


Custom Medical Stock, 1999.

El azul de metileno, salbásica, es un indicador de laoxidación reducción que cuandoes incorporado a un medio,indica los cambios en elpotencial de oxidación-reducciónproducidos por un organismo.

Algunos organismos,utilizando el oxígeno disuelto enun medio, son capaces dereducir el potencial redox, lareducción es catalizada por laenzima reductasa, enzimarespiratoria vinculada con laoxidación celular.


Azul de metileno (estado oxidado color azul)

Reductasa

Leuco-azul de metileno (estado reducido, incoloro)

(CH3)2NN(CH3)2

N

(CH3)2NN(CH3)2

N

(CH3)2NN(CH3)2

N

S

H

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Diferenciación de especies

de Streptococcus


Líquido

Inoculación

Difusión, inóculo denso


Tiempo: 18 - 24 horas

Temperatura : 35- 37° C


Beta hemólisis

Enterococcus feacalis, fisión

binaria.

Black J.G. 1996

Black J.G. 1996


MEDIO NO

INOCULADO

NEGATIVO POSITIVO

Interpretación

Positiva : Incoloro; reducción

Negativa : Azul; no hay reducción


R = Reducción

(-) = Negativo, sin cambio de color


Streptococcus sp, tinción de Gram

Ingraham L.J. 2000

Esta capacidad enzimática se utiliza fundamentalmente paradiferenciar los enterococos (especies de Streptococcus del grupo D) deotros miembros del género Streptococcus.


Enterococos (Streptococcus del grupo D)


Especies de Streptococcus que por lo general no son Enterococos.

La oxidación del azul de metileno reducido produce peróxido de hidrógeno comosu producto final. La mayoría de las bacterias contienen la enzima catalasa, quedegrada el peróxido de hidrógeno, dado que su acumulación es tóxica.

Sin embargo, las especies de Estreptococos no producen catalasa y por lo tantomueren. Los Enterococos del grupo D si producen catalasa sobreviviendo al medio.


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Características bioquímicas de

especies de Streptococcus

http://www.monografias.com/trabajos/bacterias/bacterias.shtm

http://www.monografias.com/trabajos/bacterias/bacterias.shtm


Condiciones de

incubación

Resultados


resultados

Aplicaciones

Consistencia

del medio

Medio de cultivo


Medio de cultivo : Medio básico de Hugh Leifson, medio OF

Composición:

1. Peptona2. Cloruro de sodio3. Fosfato de potasio 4. Hidratos de carbono ( glucosa, lactosa, sacarosa, maltosa )5. Agar6. Agua destilada7. Indicador de pH : Azul de bromotimol

Ácido : Color amarillo (pH = 6)Alcalino : Azul de Prusia intenso (pH = 7.6)

Medio no inoculado : Verde (pH = 7.1)

Se deben tener dos tubos para esta prueba uno abierto y otro con sello de parafina.



Semisólido (también permite la observación de movilidad).

Inoculación

Picadura, inóculo poco denso. Picar ambos tubos aproximadamente hasta 0.6 mm de fondo.


Tiempo : 18 - 24 horasTemperatura : 35 - 37° C


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Aislamiento de bacterias

en heces

Amarillo: ácido

Burbujas : Gas

Verde : alcalino Incubación

Oxidativo

No fermentador

Fermentador No oxidativo

No fermentador


METABOLISMO TUBO CON REACCIÓN

TUBO SIN SELLO

TUBO CON SELLO

Oxidación (O) Abierto Amarillo (A) Verde (-)

Fermentación (F) Cubierto Amarillo (A) Amarillo (A)

Fermentación (F) Cubierto Amarillo (AG) Amarillo (AG)

Ni fermentación

ni oxidación (-)

Ninguno Azul o verde (-) Verde (-)

Fermentación y

oxidación (O+F)

Ambos Amarillo (A ó

AG)

Amarillo (A ó

AG)



MEDIO NO INOCULADO

FERMENTADOR NO OXIDATIVO NO FERMENTADOR

OXIDATIVO NO FERMENTADOR

1.Fundamentalmente paradiferenciar géneros intestinales noentéricos, gram negativos de lasEnterobacterias.

2. Ayuda a la diferenciación entrelos géneros de la familiaMicrococcaceae.

Micrococcus oxida glucosa Staphylococcus fermentan glucosa.

3. Ayuda a la identificación deEnterobacterias

Fermentadoras de glucosa: Escherichiacoli

Oxidativas de glucosa: Pseudomonasaeruginosa

No sacarolítico: Especies de Moraxella


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Características de la

Familia Micrococcacea

World Book, 1991

http://www.facmed.unam.mx/bmnd/plm/productos/586.htm






Condiciones de

incubación

Resultados


resultados

Aplicaciones

Consistencia

del medio

Medio de cultivo


Medio de cultivo: Agar urea de Christensen

Composición:

a) Peptonab) Cloruro de sodioc) Fosfato monopotásicod) Glucosa e) Ureaf) Agar g) Agua destiladah) Indicador de pH : Rojo de fenol

Ácido: Amarillo (pH = 6.8)Alcalino : Rojo rosado (pH = 8.4)Medio no inoculado : Amarillo (pH = 6.8)


Determina la capacidad de un organismo de desdoblar la ureaformando dos moléculas de amoniaco por la acción de la enzimaureasa produciendo un cambio de color rojo en el medio.

La ureasa es una importante enzima microbiana vinculada con ladescomposición de los compuestos orgánicos.

H2NC=O + 2 HOH CO2 + H2O + 2

NH3(NH4)2CO2

H2N


urea

Carbonato de amonio


Sólido en pico de flauta (cola de pescado)

Inoculación

Estría en pico de flauta (no hacer punción).


Tiempo : 18 - 24 horasTemperatura : 35 - 37° C


Cultivo mixto de crecimiento de 24 horas

en agar sangre de colonias no

pigmentadas, mucoides y relativamente

grandes de Klebsiella, en comparación de

las colonias amarillas más pequeñas de S.

aureus.

Efecto swarming producido por

Proteus vulgaris

Koneman,1992


MEDIO NO

INOCULADO

POSITIVO POSITIVO

NEGATIVO

Interpretación

Positivo : Rojo rosado intenso en el pico de flauta

Negativo: Amarillo


Positivo (+)

Negativo (-)

OBSERVACIONESEn muchas especies, la reacción positiva de ureasa se detecta primero por un

cambio de color rojo en la parte de pico de flauta, el cual, al principio se vuelve rojoporque la acción alcalina, resultado de la degradación de pequeñas cantidades de urea,es aumentada por las aminas formadas a partir de la descarboxilación oxidativa de losaminoácidos en la parte del medio expuesta al aire.


Black J.G. 1996

Se usa para diferenciar los organismos Proteus rápidamenteureasa positivos de otros miembros de las Enterobacterias, otrosgéneros pueden ser positivos retardados.

Klebsiella sp (+)

Escherichia coli (-)

Proteus sp (+ rápido)

Providencia sp (-)


Placa de agar sangre que indica un patrón

de swarming como ondas de una cepa

móvil de Proteus.

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Pruebas para la identificación de Enterobacterias

Koneman,1992

http://www.vdh.state.va.us/spanish/ecolif.htm

http://www.seimc.org/protocolos/cap11.htm

Fundamento

Inoculación

Condiciones de

incubación

Resultados

Interpretación

Reporte de

resultados

Aplicaciones

Consistencia

del medio

Medio de cultivo

Reactivos

adicionales


Medio de cultivo : Medio de Clark y Lubs (caldo RM/VP)

Composición:

1. Polipeptona

2. Dextrosa

3. Fosfato de potasio

4. Agua destilada

5. Indicador: rojo de metilo

pH inicial = 6.9, medio no inoculado, color rojo.

Ácido: rojo (pH = 4.4)

Alcalino: amarillo (pH = 6)


Permite comprobar la capacidad de un organismo de producir y mantener estableslos productos terminales ácidos de la fermentación de la glucosa y vencer lacapacidad amortiguadora del sistema. Es una prueba cualitativa de la producción deácido (determinación de pH). Las bacterias que principalmente siguen la vía defermentación de ácidos mixtos a menudo producen suficiente ácido para mantener unpH menor de 4.4.

La prueba de rojo de metilo se basa en el empleo de un indicador de pH paradeterminar la concentración de iones hidrógeno presentes cuando un organismofermenta glucosa. Las bacterias RM positivas producen ácidos estables manteniendouna alta concentración de iones hidrógeno hasta alcanzar cierta concentración yentonces cesa toda actividad.

Los organismos RM negativo también producen ácidos pero tienen una menorconcentración de iones hidrógeno porque hay una reversión hacia la neutralidaddebida a la nueva degradación de los ácidos orgánicos en carbonatos.

La validez de la prueba de RM depende de un tiempo de incubación suficiente comopara permitir que se produzca la diferencia en el metabolismo de la glucosa. Losorganismos en estudio se incubarán por lo menos 2 días, lo que permite que todoslos organismos con baja proporción gaseosa muestren su límite en la concentraciónde iones hidrógeno.


Determina la capacidad de algunos organismos de producir unproducto final neutro, la acetoína a partir de la fermentación de glucosa.

La reacción de VP se basa en la detección de acetoína como productofinal neutro derivado del metabolismo de la glucosa. Esta es metabolizadaen ácido pirúvico, intermediario clave en la glucólisis. A partir del ácidopirúvico, una bacteria puede seguir muchas vías. La producción de acetoína(precursor de la producción de 2,3-butanediol) es uno de los ciclos para ladegradación de la glucosa en las bacterias. La formación de acetoína ybutilenglicol es una vía alternativa del metabolismo del ácido pirúvico. Lasbacterias que utilizan esta vía producen solo pequeñas cantidades de ácidosmixtos que son insuficientes para disminuir el pH del medio de rojo demetilo, lo bastante como para producir un cambio de color. Por este motivomuchas de las especies de Enterobacterias son VP positivas, con pocasexcepciones son RM negativas y viceversa.


El primer reactivo agregado a una alícuota incubada es el catalizador alfa-naftolporque este actúa como intensificador del color, lo que aumenta la sensibilidad de lareacción sin pérdida de su especificidad.

El segundo reactivo es el KOH que cuando se agrega al medio de VP contribuye a laabsorción de CO2. No debe excederse de un volumen exacto. El KOH reaccionará conla peptona dando un color rosado salmón y con el agregado posterior de alfa-naftolno habrá alteración del color.

El hidróxido de potasio actúa como agente oxidante para apresurar la oxidación de laacetoina en diacetilo.

El diacetilo es la sustancia reactiva activa por ello esta prueba se basa en la reacciónentre el diacetilo y el núcleo guanina presente en la peptona, en condicionesalcalinas.

Por lo tanto cuando se mezclan cantidades correctas de diacetilo, la peptona y elalfa-naftol, se produce casi instantáneamente un color rojo en la superficie delmedio. La velocidad de desarrollo de color depende del volumen de acetoína que seencuentra en el cultivo de prueba.



OH

+

CH3

C O

CHOH

CH2

CH3

C O

CH2

C O

+

C

NH2

NH

NH R

KOH

O2 OXIDADO

Alfa-naftol (catalizador)

AcetoínaDiacetilo

Núcleo de guanidina

condensaciónColor rojo rosado


Líquido

Inoculación

Difusión


Tiempo : 24 - 48 horas

Temperatura: 35 - 37° C


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Coprocultivo

Salmonella typhi, tinción de flagelos,

observada en microscópio electrónico

Reactivos adicionales para Rojo de Metilo

Rojo de metilo. Adicionar 5 gotas al tubo previamente incubado.Interpretar el resultado del color inmediatamente.Conservación: Guardar el reactivo en refrigeración (4° C) mientras no se usa.

Reactivos adicionales para Voges ProskauerAlfa naftol al 5%, intensificador del colorHidróxido de potasio 40%, agente oxidante

Agregar directamente los reactivos al tubo después de la incubación en el siguiente orden:

1) 0.6 ml de alfa naftol2) 0.2 ml de KOH3) Agitar el tubo suavemente, dejar reposar de 10 a 15 minutos antes de la

interpretación.

PRECAUCIONES El orden de adición de los reactivos es importante, ya que la inversión de incorporación dará como

resultado un débil positivo o falso negativo. No debe excederse un volumen exacto de KOH ya que el exceso puede ocultar una reacción VP

débilmente positiva.



MEDIO NO

INOCULADO

POSITIVO NEGATIVO

Reacción de rojo de metilo

No debe intentarse interpretar unresultado con el rojo de metilodespués de menos de 48 horas deincubación.

Positiva: Rojo en la superficie delmedio (pH = 4.4)

Algunas bacterias pueden producirmenores cantidades de ácido a partirdel sustrato por ello es posible queaparezca un color naranja. Estoindica una prueba positiva.

Negativo : Amarillo (pH = 6) ónaranja

Reacción de Voges-Proskauer

Positivo: Rojo rosado en la superficiedel medio (presencia de acetoína)

Negativo : Amarillo. Puede formarseun color cobrizo pero aún así lareacción es negativa.

Reporte de resultados(ambas reacciones)

Positivo (+)Negativo (-)


Prueba de rojo de metiloMicroorganismos positivos

Escherichia coli

Especies de Yersinia


Enterobacter aerogenes

Enterobacter cloacae

Klebsiella

Pruebade Voges ProskauerMicroorganismos positivos

Klebsiella pneunoniae

Yersinia enterocolitica


Escherichia coli

K. ozaenae


Hacer clic

Urocultivo

Encarta, 2002


Fundamento

Inoculación

Condiciones de

incubación

Resultados

Interpretación

Reporte de

resultados

Aplicaciones

Consistencia

del medio

Medio de cultivo

Reactivos

adicionales


Medio de cultivo: Caldo con nitrato

Composición:

Extracto de carne

Peptona

Nitrato de potasio

Agar

Agua destilada

pH inicial = 7.0


Determina la capacidad de un organismo de reducir el nitrato en nitritos oen nitrógeno libre.

La reducción de nitrato en nitrito y en gas nitrógeno tiene lugargeneralmente en condiciones anaeróbias, en las cuales un organismoobtiene su oxígeno del nitrato. El oxigeno sirve como un aceptor dehidrógeno.

Esta respiración anaerobica es un proceso de oxidación por el cual lassustancias inorgánicas, especialmente nitrato y sulfato o raramente hidratosde carbono proporcionan oxígeno para que sirva como aceptor de electronespara suministrar energía.

Reducción del nitrato en nitritoNO3 + 2 e + 2 H + NO2 + H2O

Nitrato Nitrito

Nitrato en nitrógeno molecular2 NO3 + 10 e + 12 H+ N2 + 6 H2O


La reducción de nitrato en nitrito está indicada por la aparición decolor cuando el nitrito reacciona con los dos reactivos. La reacciónde color resultante se debe a la formación de un compuestodiazoico, p-sulfobenceno-azo-alfa-naftilamina.

El enlace del grupo azo –N=N- da como resultado un compuestocoloreado por medio de una reacción nitrosa. El colorante diazoicose forma por acoplamiento a través del enlace azo de una aminaaromática con un compuesto de tipo fenólico por lo general en laposición para de un grupo (OH) o amino.

La reducción de la sal diazóica por el agente reductor polvo de zinc,en presencia del ácido acético produce un compuesto coloreado, laarilhidracina.



+ CH2COOH (C6H3NHNH3) – OSO3H

Zn

Ácido sulfanilico

(incoloro)

Alfa-naftilaminaP-sulfobenceno-azo-affa-naftilamina (rojo)

Ácido acético Arilhidracina

NH2

SO2H NH2

+ HNO2

SO2H NH2

N N

SO2H NH2

N N

Consistencia del medioLíquido

InoculaciónDifusión, inóculo denso.

Condiciones de incubaciónTiempo: 18 - 24 horasTemperatura 35 - 37 ° C

Raramente es necesaria unaincubación prolongada de hasta 5 días.La mayoría de los organismos capacesde reducir el nitrato, lo hacen dentrode las primeras 24 horas.


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Características de Bacterias

Gramnegativas no fermentadoras

Crecimiento de Salmonella thypi en agar sangre,

observese la producción de H2S (colonias de color negro).

1. Alfa - naftilamina 0.05%

2. Ácido sulfanílico 0.8 %

Adicionar directamente al tubo de reacción en el siguiente orden:

1. Alfa - naftilamina 1ml.

2. Ácido sulfanílico 1 ml.

Conservación: Guardar ambos reactivos en el refrigerador mientras no se usan. Por lo general

se mantienen estables durante tres meses.


InterpretaciónSe interpretan los resultadosun minuto después deadicionar los reactivos.

Positivo: Rosado a rojointenso

Negativo: Amarillo

PRECAUCIONESUna prueba negativa indica que los nitratos,no han sido reducidos o que han sidoreducidos a otros productos, como amoniaco,nitrógeno molecular, oxido nítrico u óxidonitroso e hidroxilo. Dado que los reactivos deprueba detectan solo nitritos, este últimoproceso llevaría a una lectura falso –negativa. Por ende es necesario agregar unapequeña cantidad de polvo de zinc a todaslas reacciones negativas.

Los iones zinc reducen nitratos a nitritos y laaparición de color rojo después del agregadode zinc indica una reacción positiva.


Positivo (+)

Negativo (-)


Koneman,1992

AplicacionesAyuda a la identificación deEnterobacterias que por lo general sonpositivas.

Todas las Enterobacterias, conexcepción de ciertos tipos deEnterobacter agglomerans y especiesde Erwinia, reducen nitratos a nitritos.


MEDIO NO

INOCULADO

POSITIVO NEGATIVO

http://www.monografias.com/trabajos/bacilosgram/bacilosgram.shtm/

http://www.monografias.com/trabajos/bacilosgram/bacilosgram.shtm/

Fundamento

Inoculación

Condiciones de

incubación

Resultados

Interpretación

Reporte de

resultados

Aplicaciones

Consistencia

del medio

Medio de cultivo

Reactivos

adicionales


Medio de cultivo: medio de fenilalanina

Composición:

1. D-L-fenilalanina

2. Extracto de levadura

3. Cloruro de sodio

4. Fosfato de sodio

5. Agar

6. Agua destilada

7. pH inicial = 7.3


Determina la capacidad de un organismo de desaminar lafenilalanina en ácido fenilpirúvico por su actividad enzimática, conla consiguiente acidez resultante.

El aminoácido aromático fenilalanina sufre una desaminaciónoxidativa catalizada por un aminoácido oxidasa para producir elácido cetónico.

La desaminación oxidativa da como resultado la extracción delgrupo amino del aminoácido para formar un doble enlace alfa-cetoácido y libre de amoniaco.

Este es un proceso en dos etapas:1. La extracción del hidrógeno dando un aminoácido y un hidrógeno,

se combina con el oxígeno para formar agua.2. El aminoácido es hidrolizado en un cetoácido.



CH2 CH

NH2

COOH

+ 1/2 O

- 2H

FLAVOPROTEÍNA

FENILALANINA

CH2 COOH

O

C

+ NH2

AMONIACO

ÁCIDO FENILPIRÚVICO

Como la fenilalanina se encuentra desaminada, el color producido como consecuenciadel agregado de cloruro férrico al 10% se debe a la formación de un cetoácido, el ácidofenilpirúvico.

La reacción positiva con este reactivo se debe a la formación de una hidrazona. Elcloruro férrico actúa como agente quelante actuando con el ácido fenilpirúvico paraformar un color verde.

Cuando se expone al oxígeno atmosférico un tubo de cultivo con fenilalanina despuésdel agregar el cloruro férrico aumenta la producción y la intensidad de la reacciónpositiva.


CH2 C COOH

O + RNH NH2

CH2 C COOH

N NHR

Ácido fenilpirúvico

Hidracina

-

Fenilhidrazona


Sólido en pico de flauta

Inoculación

Estría en pico de flauta, inóculo denso.


Tiempo: 18 - 24 horasTemperatura 35 - 37 ° C

Reactivos adicionales

Cloruro férrico 10%

Adicionar de 4-5 gotas a un tuboincubado

Hacer rotar suavemente el tubopara que el crecimiento sesepare.

Esperar de 1 a 5 minutos paraleer la reacción

Guardar los reactivos enrefrigeración y colocarlos enfrascos oscuros para evitar ladescomposición.


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Características de Bacilos

Gramnegativas oxidasa positivas


MEDIO NO

INOCULADO

POSITIVO

NEGATIVO

NEGATIVO

Interpretación

Positiva: Verde claro a intenso en el pico de flauta.

Negativo: Amarillo


Positivo (+)

Negativo(-)

Aplicaciones

Esta actividad enzimática escaracterística de todas lasespecies de Proteus y del grupoProvidencia, y se usa paraseparar estos dos géneros deotros miembros de lasEnterobacterias


Fundamento

Inoculación

Condiciones de

incubación

Resultados

Interpretación

Reporte de

resultados

Aplicaciones

Consistencia

del medio

Medio de cultivo

Reactivos

adicionales


Medio de cultivo: Medio SIM

Composición:

Extracto de carne

Peptona

Hierro peptonizado (Indicador de SH2)

Tiosulfato de sodio (indicador de SH2)

Agar

Agua destilada

pH = 7.3


Prueba de ácido sulfhídrico

La proteolisis de las proteínas en aminoácidos (aa.) individuales, algunas especiesbacterianas son capaces de liberar azufre enzimaticamente de los diferentes aa. que las contienen,produciendo el gas ácido sulfhídrico (SH2). La peptona, cisteína y tiosulfato, todos son fuentes deazufre, pero las diferentes especies utilizan distintos compuestos o aa. que contienen azufre paraproducir SH2. La enzima responsable de esta actividad es la cisteinasa.

Primera etapaLa bacteria reacciona con el tiosulfato de sodio por medio de una reacción de reducción que

da un sulfito y un sulfato. Este es un proceso de respiración anaeróbica donde el átomo de azufresirve como aceptor de electrones para la oxidación de los sustratos orgánicos. El tiosulfatoreemplaza al sulfato como aceptor de electrones y es una fuente de azufre para el organismo.

Segunda etapa

El gas incoloro SH2 reacciona con una sal pesada, citrato férrico de amonio para producir unprecipitado negro insoluble, sulfuro ferroso.

Bacteria (medio ácido) + tiosulfato de sodio gas SH2

SH2 + iones férricos sulfuro ferroso (pp. negro)


El triptófano es un aminoácido que puede ser oxidado por ciertas bacterias paraformar tres metabolitos principales: indol, escatol e indolacético. Diversas enzimasintracelulares que intervienen en éste proceso reciben el nombre de triptofanasa, loque implica el sistema completo de enzimas vinculadas con la producción del indol. Elprincipal intermediario en la degradación del triptófano es el ácido indolpírúvico.

La degradación del triptófano libera indol, ácido pirúvico, amoniaco y energía. Elácido pirúvico puede ser nuevamente metabolizado por medio del ciclo glucolítico oentrar en el ciclo de Krebs para liberar CO2 y H2O y una gran producción de energía.El NH3 puede ser utilizado para sintetizar nuevos aminoácidos empleando la energíaque se encuentra para la reacción anabólica.

La formación de indol se produce solamente en aquellos organismos capaces defermentar los hidratos de carbono. La elevada acidez producida por la fermentaciónde la glucosa puede impedir el crecimiento del organismo o inhibir la enzima. Elagregado de triptófano estimula la producción de indol mientras que la glucosa lainhibe.


La prueba de indol se basa en la formación de un complejo de color rojocuando el indol reacciona con el grupo aldehído de p-dimetilaminobenzaldehído (sustancia activa del reactivo de Kovacs).


N

H

COOH

NH2

L - Triptófano

N

H

Indol

+H3C COOH

O

Ácido Pirúvico

+ NH3

Amoniaco

Triptofanasa H2ODesaminación

XilenoP-dimetilaminobenzaldehído

Color rojo

INDOL

TRIPTÓFANO

PIRUVATO NH3

BACTERIAS

Trip

tofa

nasa


Determina si un organismo es móvil oinmóvil. Las bacterias tienen movilidadpor medio de sus flagelos, que seencuentran principalmente entre losbacilos; sin embargo algunas formasde cocos son inmóviles.

Las bacterias móviles pueden contenerun solo flagelo o muchos; además sulocalización varía con su especiebacteriana y las condiciones de cultivo.

A veces, las bacterias con movilidadproducen variantes no móviles queparecen ser estables y raramente serevierten en formas móviles. Losorganismos no móviles carecen deflagelos.


Monotricas Atricas

Lofotricas Peritricas

Black J.G. 1996 Black J.G. 1996


Medios para la detección de H2S

Agar sulfito de bismuto Agar citrato sulfuro Agar desoxicolato-citrato Medio LIA Medio TSI Agar acetato de plomo Agar S-S Agar XLD Medio SIM

Medios para la detección de movilidad

SIM

MIO


Consistencia del medioSemisólido en forma vertical

InoculaciónPicadura en forma vertical


Tiempo: 24 - 48 horasTemperatura 35 - 37° C

Los cultivos que van a someterse a pruebasde indol deberán ser incubadosaeróbicamente el descenso de la tensión deoxígeno disminuye la producción de indol.


Salmonella typhimurium,

tinción de Gram.

Klebsiella pneumoniae en

sedimento, tinción de Gram

Reactivo de Kovacs

Composición:

a) Alcohol amílico

b) p-dimetilaminobenzaldehído

c) HCl

Adicionar 5 gotas directamente al tubo después de la incubación.

Agitar suavemente

Leer inmediatamente la reacción

PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR MENÚHacer clic

Coprocultivo


MEDIO SIN

INOCULAR

INDOL

NEGATIVO

INDOL

POSITIVO

H2S

NEGATIVO

H2S

POSITIVO

GAS MOVILIDAD

Ácido sulfhídricoPositivo: Ennegrecimiento del medioNegativo: Sin ennegrecimiento

IndolPositivo: Anillo rojo en la superficie del medio.Negativa: No se produce colorNegativa: Color naranja en la superficie del medio. Indica desarrollo de escatol, un

compuesto metilado que puede ser el precursor de la formación de indol.

La reacción positiva después de 24 horas indica una prueba completa.Si el cultivo de 24 horas es negativo deberá incubarse otras 24 horas y repetirse la

prueba.

MovilidadPositiva. Los organismos móviles migran de la línea de siembra y se difunden en el

medio provocando turbiedad.Negativa. Crecimiento bacteriano acentuado siguiendo la línea de siembra.


Black J.G. 1996

Streptococcus pneumoniae:

las cápsulas se observan de

color blanco.

Bacteria Producción de H2S

Prouducción de indol

Movilidad

Salmonella thypi

+ o - - +

Salmonella sp.

+ o - - +

E. coli - + + o -

Klebsiella - + o - -

Enterobacter - - +

Citrobacter + - +

Shigella + o - + o - + o -




http://escuela.med.puc.cl/paginas/publicaciones/AnatomiaPatologica/02Respiratorio/2neumonia.html

http://www.medconce.cl/revista/1997/1997num2/clinica.htm

Fundamento

Inoculación

Condiciones de

incubaciónResultados

Interpretación

Reporte de

resultados

Aplicaciones

Consistencia

del medio

Medio de cultivo


Medio de cultivo: Agar hierro triple azúcar (Agar Hierro de Kliger, AHK)

Composición:1. Extracto de carne2. Extracto de levadura3. Peptona4. Proteasa5. Lactosa6. Dextrosa7. Sulfato ferroso8. Cloruro de sodio9. Tiosulfato de sodio10. Agar11. Agua destilada12. Indicador : Rojo de fenol Ácido: amarillo Alcalino: rojo Medio no inoculado: anaranjado rojizo (pH = 7.4)


Superficie de agar Mac Conkey con crecimiento

de 24 horas de colonias fermentadoras de

lactosa rojas.

Koneman,1992

No fermentación

pH = 7.4

O2 Pico de flauta alcalino/profundidad alcalina

Dextrosa

Ácidos mixtos

O2

O2

Pico de flauta ácido/profundidad ácida

Reacción inicial

O2

Pico de flauta alcalino/profundidad ácida

Reacción retardada

Pico de flauta ácido/profundidad ácida

Dextrosa

Ácidos mixtos

Dextrosa + lactosa

Ácidos mixtos

No fermentador

No fermentador de lactosa

Fermentador de lactosa (sacarosa)


Consistencia del medioSólido en pico de flauta

InoculaciónPicadura y estría en pico de flauta

Condiciones de incubaciónTiempo: 18 - 24 horas

Temperatura: 35 - 37 ° C


Hacer clic

Urocultivo

1. Rojo en pico de flauta: alcalino; degradación aeróbica de glucosaAmarillo en capa profunda: ácido; degradación anaeróbica de la glucosa

2. Amarillo en pico: ácidoAmarillo en capa profunda: ácido

3. Rojo en pico de flauta: alcalinoSin cambio de color en capa profunda: alcalina.Producción de H2S: precipitado negroProducción de gases: Producción de burbujas, descomposición del medio, ligeramuesca del medio sobre el costado del tubo o desplazamiento del medio del fondodejando un espacio libre.

OBSERVACIONES Una bacteria productora de H2S puede dar tal cantidad de precipitado negro de sulfuro ferroso que

oculte completamente la acidez producida en la capa profunda. Sin embargo, si se forma H2S esque existe en la capa profunda una condición ácida, aun cuando no se observe, y debe serregistrada como tal.

Es esencial que se interprete la fermentación al término de 18 – 24 horas de incubación, ya queuna interpretación prematura o demorada dará formas de fermentación no válidas que llevarán aerrores en el agrupamiento del género o especie.


Klebsiella pneumoniae agar Mac Conkey. University

of Missouri-Columbia, 1998:



1. K / A (Fermentación de glucosa solamente)2. A / A (Fermentación de glucosa y lactosa)3. K / K (No fermentación de glucosa y lactosa).

Los resultados se escriben siempre siguiendo un patrón. Primero la reacción del picode flauta seguida por la reacción de la capa profunda, separadas por una barra.

Reacciones de TSI Pico de flauta alcalino / profundidad alcalina (K/K). No fermentación de hidratos de

carbono. Característico de bacterias no fermentadoras como Pseudomonasaeruginosa.

Pico de flauta alcalino / profundidad ácida (K/A). Glucosa fermentada, lactosa nofermentada. Característico de bacterias no fermentadoras de lactosa como especiesde Shigella.

Pico de flauta alcalino / profundidad ácida (negra) (K/A/H2S). Glucosa fermentada,lactosa no fermentada; producción de H2S. Característico de bacterias nofermentadoras de lactosa y productoras de H2S como: Salmonella, Arizona,Citrobacter y algunas especies de Proteus.

Pico de flauta ácido / profundidad ácida (A/A). Glucosa y lactosa fermentadas.Característico de coliformes que fermentan lactosa como: E. coli y grupo Klebsiella-Enterobacter.


Este tipo de pruebas se utilizan principalmente para laidentificación primaria de los miembros de las Enterobacterias.

Especie bacteriana

Superficie inclinada

Fondo Gas H2S

Enterobacter A K ++ -

Hafnia K A + -

Klebsiella A A ++ -

E. coli A A + -

Shigella K A - -

Salmonella thypi K A - +


http://www.jic.bbsrc.ac.uk/science/molmicro/kpneu.html

http://www.seimc.es/control/revi_Bacte/Rshigella.htm

S. parathypi K A + -

S. choleraesuis K A + -

Otras Salmonellas K A + +++

Citrobacter K A + +++

Edwarsiella K A + +++

Serratia K A - -

Proteus vulgaris K A + +++

P. mirabilis K A + +++

P. morganii K A - -

P. retgeri K A - -

Providencia K A + o - -



Fundamento

Inoculación

Condiciones de

incubaciónResultados

Interpretación

Reporte de

resultados

Aplicaciones

Consistencia

del medio

Medio de cultivo


Medio de cultivo: base de descarboxilasa de Moller

Composición:1. Peptona2. Extracto de carne3. Piridoxal4. L-lisina5. Citrato de amonio6. Tiosulfato de sodio7. Glucosa8. Agua destilada9. Agar10. Indicador de pH: Púrpura de bromocresol

Ácido: color amarillo (pH = 5.2)Alcalino: color púrpura (pH = 6.8)Medio no inoculado: color púrpura intenso

brillante (pH = 6.0)


Crecimiento de Pseudomona aeruginosa en

agar sangre.University of Missouri-

Columbia,1998:



Mide la capacidad enzimática de un organismo para descarboxilar unaminoácido (lisina y arginina) para formar una amina, con la consiguientealcalinidad.

La descarboxilación es el proceso mediante el cual las bacterias que poseenenzimas descarboxilasas específicas son capaces de atacar a losaminoácidos en su grupo carboxilo dando una amina o una diamina yanhídrido carbónico. La descomposición de los aminoácidos se produceanaeróbicamente. El proceso de descarboxilación es irreversible, nooxidativo y requiere una coenzima común, el fosfato de piridoxal.

El aminoácido L-lisina sufre la descarboxilación para dar cadaverina y CO2por acción de la enzima específica lisina-descarboxilasa.

El aminoácido L-arginina es catabolizado a través de dos sistemas quepueden ocurrir simultánea o separadamente. Estos sistemas son dearginina deshidrolasa y arginina descarboxilasa.


Consistencia del medioSólido en pico de flauta

InoculaciónPor picadura y estría, inóculo liviano

Condiciones de incubaciónTemperatura: 35 – 37° C

Tiempo: 18 – 24 horas


Superficie de placa de agar EMB que ilustra el

brillo verde producido por miembros de

Enterobacterias fermentadoras de lactosa, como

Escherichia coli.

Koneman,1992

K/K = azul de Prusia /azul de Prusia

Desaminación oxidativa / descarboxilación

K/A= azul de prusia / lila

No desaminación

Producción de H2S = Ennegrecimiento del medio

Producción de gas = Burbujas o levantamiento del

medio del tubo.


A = Ácido

K = Alcalino

N = Neutra

R = Rojo ( desaminación oxidativa)


Hacer clic

Clasificación y pruebas para Streptococcus

Encarta, 2002


MEDIO

NO INOCULADO

PRODUCCIÓN

DE H2SK/K

K/K

K/A

GAS

H2S

Especie bacteriana

Superficie inclinada

Fondo Gas H2S

E. coli K K o N - o + -

Shigella K A - -

Salmonella thypi

K K - + o -

S. parathipy K A + o - - o +

Otras Salmonellas

K K o N - +

Arizona K K o N - +

Citrobacter K A - o + + o -

Edwarsiella K K - o + +


Klebsiella K K o N + o - -

Enterobacter cloacae

K A + o - -

E. aerogenes K K o N + -

E. hafniae K K o N - o + -

Proteus vulgaris

R A - -

P. mirabilis R A - -

P. morganii K o R A - -

P. rettgeri R A - -

Providencia R A - -


Fundamento

Inoculación

Condiciones de

incubación

Resultados

Interpretación

Reporte de

resultados

Aplicaciones

Consistencia

del medio

Medio de cultivo

Reactivos

adicionales


Medio de cultivo

Composición:

Extracto de levadura

Peptona

L- ornitina

Dextrosa

Agar

Agua

Indicador de pH: púrpura de bromocresol

Ácido: color amarillo (pH = 5.2)

Alcalino: color púrpura (pH = 6.8)

Medio no inoculado: color púrpura intenso brillante (pH = 6.0)


La prueba MIO se utiliza para la identificación de Enterobacterias sobre la base demovilidad, la producción de ornitina descarboxilasa y de indol.

Mide la capacidad enzimática de un organismo para descarboxilar un aminoácido(ornitina) para formar una amina, con la consiguiente alcalinidad.

La descarboxilación es el proceso mediante el cual las bacterias que poseen enzimasdescarboxilasas específicas son capaces de atacar a los aminoácidos en su grupocarboxilo dando una amina o una diamina y anhídrido carbónico. La descomposiciónde los aminoácidos se produce anaeróbicamente. El proceso de descarboxilación esirreversible, no oxidativo y requiere una coenzima común, el fosfato de piridoxal.

El aminoácido L-lisina sufre la descarboxilación para dar cadaverina y CO2 por acciónde la enzima específica lisina-descarboxilasa.

El aminoácido L-ornitina es descarboxilado por la enzima ornitina descarboxilasa paradar la diamina putrescina y CO2, producidos en condiciones anaerobias.


Consistencia del medioSemisólido en forma vertical

InoculaciónPor picadura, en forma vertical

Condiciones de incubaciónTemperatura: 35 – 37° CTiempo: 24 – 48 horas

Reactivos adicionales

Prueba de indolReactivo de Kovacs

Adicionar 5 gotas y agitar suavemente el tubo

Interpretar inmediatamente.

Conservación: Los reactivos deberánguardarse en el refrigerador (4° C) mientrasno se usan su estabilidad es variable, por lotanto se hará todas las semanas un controlde calidad, desechándolos si muestran unareacción débil o negativa con un organismopositivo conocido.


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Exudado faringeo

Bacteria flagelar mostrada

por la técnica de anticuerpo

fluorescente

Black J.G. 1996


MEDIO NO

INOCULADO

ORNITINA POSITIVO

MOVILIDAD NEGATIVO

ORNITINA NEGATIVO

MOVILIDAD POSITIVO

(turbidez)

INDOL

NEGATIVO

INDOL

POSITIVO

Ornitina descarboxilasaPositivo: color púrpura del medioNegativo: Color amarillo en el fondo del tubo que puede ser púrpura al final

IndolPositivo: Anillo rojo en la superficie del medio.Negativa: No se produce colorNegativa: Color anaranjado en la superficie del medio. Indica desarrollo de escatol, un

compuesto metilado que puede ser el precursor de la formación de indol.

La reacción positiva después de 24 horas indica una prueba completa.Si el cultivo de 24 horas es negativo deberá incubarse otras 24 horas y repetirse la prueba.

MovilidadPositiva. Los organismos móviles migran de la línea de siembra y se difunden en el

medio provocando turbidez.Negativa. Crecimiento bacteriano acentuado siguiendo la línea de siembra.

Se leen las reacciones de movilidad y de ornitina descarboxilasa antes de agregar elreactivo de Kovacs para la prueba de indol.


Prueba Positivo Negativo

Movilidad + -

Indol + -

Ornitina + -

Bacterias Indol Movilidad H2S

Salmonella thypi

- + + o -

Otras

Salmonellas- + + o -

E. coli + + -

Klebsiella + o - - -

Enterobacter - + -

Citrobacter - + +

Shigella + o - + o - -


http://www.vdh.state.va.us/spanish/typhoidf.htm

http://www.vdh.state.va.us/spanish/typhoidf.htm

http://www.vdh.state.va.us/spanish/salmf.htm

Microorganismos ornitina positivos

Especies deEnterobacter

Proteus mirabilis

Proteus morganii

Yersinia enterocolitica

Microorganismos ornitina negativos

Especies de Klebsiella

Enterobacter aglomerans

Proteus vulgaris

Proteus rettgeri

Yersinia pestis

Yersinia pseudotuberculosis


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Urocultivo

Robert Koch (1843-1910), científico alemán galardonado con el premio Nóbeliniciador de la bacteriología médica moderna; aisló varias bacterias patógenas,incluida la de la tuberculosis, y descubrió los vectores animales de transmisión deuna serie de enfermedades importantes.

Nacido en Klausthal-Zellerfeld el 11 de diciembre de 1843, Koch se incorporó a laUniversidad de Gotinga en 1862, donde estudió botánica, física y matemáticas einició la carrera médica, que ocuparía el resto de su vida. Tras breves estancias en elHospital General de Hamburgo y en una institución para niños discapacitadospsíquicos, comenzó a ejercer la medicina privada. Sus actividades profesionales no leimpidieron desarrollar otros intereses como la arqueología, la antropología, lasenfermedades ocupacionales, como el envenenamiento por plomo, y el emergentecampo de la bacteriología.

Su primer descubrimiento importante se produjo en la década de 1870, cuandodemostró que el carbunco infeccioso, también conocido como ántrax, sólo sedesarrollaba en los ratones cuando el material inyectado en su torrente sanguíneocontenía bastones o esporas viables del Bacillus anthracis. El aislamiento del bacilodel carbunco por parte de Koch constituyó un hito histórico, ya que por primera vezpudo demostrarse sin duda cuál era el agente causante de una enfermedadinfecciosa. Quedó claro que las enfermedades infecciosas no estaban causadas porsustancias misteriosas, sino por microorganismos específicos, en este caso bacterias.Koch mostró también cómo debe trabajar el investigador con dichosmicroorganismos, cómo obtenerlos a partir de animales infectados, cómo cultivarlosartificialmente y cómo destruirlos. Koch comunicó sus observaciones al gran patólogoalemán Julius Friedrich Cohnheim y sus colaboradores, uno de los cuales era elbacteriólogo Paul Ehrlich, pionero de la inmunología moderna.

Prueba del ácido sulfhídrico

Prueba de indol

Prueba de movilidad

Medios para la detección de H2S

Medios para la detección de movilidad



PRUEBA POSITIVO NEGATIVO

Sulfuro + -

Indol + -

Movilidad + -


MEDIO

NO INOCULADO

K/A

A/A

K/K

H2S

GAS

En 1880, tras finalizar un importante trabajo bacteriológico sobre infecciones en lasheridas, fue nombrado consejero del gobierno en el Departamento Imperial de laSalud en Berlín, donde, a partir de entonces, llevó a cabo la mayoría de susinvestigaciones. En 1881 dio a conocer sus estudios sobre la tuberculosis y al añosiguiente anunció que había aislado el bacilo responsable de tan terrible enfermedad.Sus hallazgos fueron confirmados por investigadores de todo el mundo. Eldescubrimiento permitió mejorar las técnicas diagnósticas mediante la identificacióndel bacilo en las excreciones corporales, especialmente en los esputos.

Koch dedicó entonces su atención al cólera, que en 1883 había alcanzado niveles deepidemia en la India. Se desplazó allí, identificó el bacilo causante de la enfermedady descubrió que era transmitido a los seres humanos sobre todo a través del agua.Más tarde viajó a África, donde estudió las causas de las enfermedades transmitidaspor insectos.

En 1891 Koch fue nombrado director del Instituto de Enfermedades Infecciosas deBerlín (que en la actualidad lleva su nombre), creado para la investigación médicaespecializada. Permaneció al frente del mismo hasta el día de su jubilación en 1904.En 1905 obtuvo el Premio Nobel de Fisiología y Medicina. Murió el 27 de mayo de1910 en el balneario alemán de Baden-Baden.

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Determina el metabolismo oxidativo o fermentativo de un hidrato decarbono.

La utilización que una bacteria hace de los hidratos de carbono tiene lugarpor alguno de dos procesos, de fermentación o de oxidación. Algunasbacterias son capaces de metabolizar un carbohidrato solo en condicionesaeróbicas, mientras que otras producen ácido tanto aeróbica comoanaeróbicamente.

La diferencia principal entre el metabolismo fermentativo y oxidativodepende de los requerimientos de oxígeno atmosférico y de la fosforilacióninicial.

La fermentación es un proceso anaeróbico que requiere la fosforilacióninicial de la glucosa previamente a su degradación, mientras que laoxidación, en ausencia de compuestos inorgánicos como nitrato y sulfato,es un proceso estrictamente aeróbico que comprende la oxidación directade una molécula de glucosa no fosforilada (inicialmente).

La fermentación produce una acidez más elevada que el procesometabólico oxidativo.


Tamaño: diámetro en mm.

Forma: puntiforme, circular, filamentosa, irregular, rizoide.

Elevación: plana, sobreelevada, convexa, pulvinada, umbonada, umbilicada.

Margen (borde): entero, ondulante, lobulado, lacerado, filamentoso, rizado.

Color: blanco, amarillo, negro, marrón, naranja, etc.

Superficie: brillante, opaca, erizada, rugosa

Densidad: opaca, translúcida, transparente, etc.

Consistencia: cremosa, seca, mucoide (viscosa), membranosa, quebradiza.

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http://www.austin.cc.tx.us/microbugz/labindex.html

PRUEBAS BIOQUÍMICASFINALIZAR

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Los tres tipos generales de reacciones producidas por bacterias que crecen enagar hierro de Kligler.

En A se ilustran bacilos no fermentadores que son incapaces de producirácidos a partir de la fermentación de glucosa o lactosa; no existe ningúncambio en el medio.

B ilustra una acidificación inicial de la profundidad y el pico de flauta delmedio por bacterias que fermentan glucosa, pero el pico de flauta retorna a unpH alcalino a medida que se forman aminas alcalinas a partir de ladescarboxilación oxidatíva de péptidos (derivados de proteínas en el medio)cerca de la superficie.

C ilustra la completa acidificación permanente de la profundidad y el pico deflauta por bacterias que fermentan lactosa.

Beta hemólisis. Zona de

aclaramiento total de sangre

alrededor de las colonias

debido a la lisis de los

eritrocitos.

Alfa hemólisis. Aclaramiento

parcial de sangre alrededor

de las colonias con

coloración verde del medio,

contorno de los eritrocitos

intacto.


Prueba con Rojo de Metilo

Prueba de Voges - Proskauer

Bases bioquímicas

Reacciones


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http://www.mco.edu/depts/micro/awards.html

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REINO PRINCIPALES CARACTERÍSTICAS EJEMPLOS DE ORGANISMOS

Monera Organismos procariotas unicelulares. Bacterias

Protistas Organismos eucariotas unicelulares y sus descendientes más inmediatos. Algas,

protozoos

Hongos Organismos heterótrofos que obtienen su alimento por absorción. No

realizan la fotosíntesis. La pared celular contiene generalmente quitina.

Levaduras, setas

Vegetal Organismos inmóviles que realizan la fotosíntesis. Pared celular

compuesta de celulosa.

Musgos,

helechos,

árboles

Animal Organismos móviles sin pared celular. Ingieren el alimento. Presentan

tejidos diferenciados.

Moluscos, peces,

aves

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COPROCULTIVOMEDIOSPARA AISLAMIENTO PARA ENRIQUECIMIENTO PARA IDENTIFICACIÓNAgar entérico Hektoen Base de caldo tetrationato Agar de hierro y triple azúcarAgar de eosina y azul de metileno Caldo de selenito y cistina Caldo rojo de fenol y carbohidratosAgar ENDO Medio ureaAgar XLD Medio SIMAgar Salmonella Shigella Agar hierro y lisinaAgar verde brillante Medio MIO

Agar citrato de Simmons

AISLAMIENTO

PLACA: Agar EMB ó

ENDO, XLD, Mac

Conkey

IDENTIFICACIÓN

BIOQUÍMICA

TSI, MIO, LIA, SIM,

fenilalanina,

RMVP,Citrato de

Simmons, urea

ENRIQUECIMIENTO

TUBOS: Caldo

tetrationato y/o

caldo selenito

INCUBACIÓN

24 hs – 37° C

PLACAS: Agar verde

brillante,sulfito de

bismuto,XLD,EMB,

ENDO, Mac Conkey.

PLACAS: Agar S-S,

verde brillante, sulfito de

bismuto.

Agar sangre

Principales Pruebas para la identificación de Enterobacterias

BACTERIA OXIDASA INDOL VP RM CITRATO SH2 UREA MOVILIDAD

GELATINA

LISINA DESC.

ARGININA DESC

.

E. coli - + - + - - - - - - -

Shigella - + - + - - - - - - +

Edwardsiella - + - + - + - - - + -

Salmonella - - - + - + - - - + +

Arizona -- - - + + + - + + + +

Citrobacter - - - + + + - - - - -

Klebsiella - + + - + - + - - + -

Enterobacter - - + - + - - + + + -

Serratia - - + + + - - + + + -

Proteus vulgaris

- + - + + + + + + - -

Providencia - + - + + - - - - - -

Hacer

clic

http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides.html

http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides.html

Bacterias Gramnegativas no Fermentadoras

Prueba

bioq.

Géneros

O/F

glucosa

Oxida

sa

Catala

sa

Reducci

ón de

NO2

Red.ucc

ión de

N2

Movilida

d

Mac

Conkey

SS Agar

pseudo

cel

Pseudonomas O + + Variable Variable + (excepto

P. mallei)

+ + +

Acinetobacter O -- + - - - + V -

Achromobacter O + + + - + + + -

Alcaligenes Inactivo + + Variable - + + V V

Eikenella corrodens

Inactivo + - + - - - - -

Flavobacterium O + + - - - - - -

Grupos del CDC Variable + + Variable Variable Variable - V V

Moraxella Inactivo + + Variable Variable - - - -

ESTAFILOCOCOSMEDIOSPARA AISLAMIENTO PARA IDENTIFICACIÓNAgar S-110 Medio CTAAgar sal y manitol Caldo rojo de fenolAgar de Vogel Johnson Caldo SF

1.Examen directo

2. Siembra

Tinción de Gram

Agar S-110

Agar sal y manitol

Agar de Vogel Johnson

3. Frotis

4. Pruebas bioquímicas

Coagulasa

Catalasa

Fermentación de

manitol

Susceptibilidad a

novobiocina

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FAMILIA MICROCOCCACEA

CARACTERÍSTICA MICROCOCCUS STOMATOCOCCUS PLANOCOCCUS STAPHYLOCOCCUS

Racimos irregulares + + + +

Tetradas + - - -

Cápsula - + - -

Movilidad - - + -

Crecimiento G-furazolidona

+ - - -

Fermentación de glucosa

- + - +

Oxidasa + - No desarrolla -

Resistencia de lisostafina

R R R S

Glicina de péptido-glicana

- - - +

Ácidos teicoicos en pared celular

- - - +

Identificación de Staphylococcus

PRUEBA S. aureus S. epidermidis S. saprophyticus

Pigmento colonial + - 10-90% cepas +

Coagulasa + - -

Factor de agregación + - -

Nucleasa termoestable + - -

Fosfatasa alcalina + + -

Ornitina descarboxilasa - 10-90% cepas + -

Ureasa 10-90% cepas + + +

Beta-galactosidasa - - +

Producción de acetoína + + +

Resistencia a novobiocina - - +

Resistencia a polimixina + + -

Trehalosa + - +

Manitol + - 10-90% cepas +

Manosa + + -

Xilosa - - -

Celulosa - - -

Maltosa + + +

Sacarosa + + +

ESTREPTOCOCOS

Especie Susceptibili

dad

bacitraci

na

Susceptibili

dad

optoquin

a

Hidrólisi

s

hipúrat

o

Hidrólisi

s

esculina

Crecimient

o en bilis

Crecimient

o en NaCl

6.5%

CAM

P

Fenómen

o

satelitism

o

Estreptoco-

cos beta-hemolíticos

Grupo A

Grupo BS

R

R

R

+

-

-

+

-

-

-

+

-

+

-

-

Enterococos

No enterococos

R

R

R

R

+

-

-

-

+

+

+

-

-

-

-

-

S. viridans R R - - - - - +

S. pneumoniae

R R - - - - -

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http://www.medschool.lsumc.edu/Micr/COURSES/DMIP/dmex16.htm

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Diferenciación de especies de Streptococcus

Especie Reducción

de Azul de

metileno

Crecimieto en Litmus

milk

Lactosa Trehalosa Sorbitol Manitol Sacarosa

HEMOLÍTICO PIOGÉNICO

S. pyogenes

S. agalactiae

S. equi

-

-

-

-

+

-

+

+

-

+

+

-

-

-

-

-

-

-

+

+

-

ORALES

S. salivarius

S. Mutanm

S. termophilus

-

-

-

+

+

+

+

+

+

+

-

-

+

-

-

+

+

+

DEL ÁCIDO LÁCTICO

S. lactis

S cremoris

+

+

+

+

+

+

-

-

ENTEROCOCOS

E. feacalis

S. liquefaciens

S zymogenes

+ + +

Características S. pneumoniae Streptococcussp.

Morfología Diplococo lanceolado Pequeñas cadenas de cocos

Cápsula + -

Hemólisis Alfa Alfa

Crecimiento en caldo Turbio uniforme Crecimiento granuloso

Solubilidad en bilis + -

Fermentación de inulina + -

Sensibilidad a Optoquina + -

Virulencia para ratón + -

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HEMOLISINAS DE STHAPYLOCOCCUS

Tipo serológico Eritrocitos susceptibles

Leucocitos susceptibles

Toxicidad

ALFA Conejo

Borrego

Conejo

Humano

Dermonecrótica para conejo

BETA Borrego

Humano

Ninguno Letal para conejo en grandes dosis

GAMMA Conejo, humano, borrego, cobayo,

rata

Dermonecrótica para conejo y

cobayo; letal para conejo

DELTA Conejo, humano, borrego, cobayo,

rata

Conejo, humano, ratón, cobayo

Edema en conejo y cobayo

BACILLUS Y CLOSTRIDIUM

CARACTERÍSTICA Bacillus Clostridium

Forma Bacilos Bacilos

Esporas + +

Movilidad + +

Crecimiento en:

Aerobiosis

Anaerobiosis

+

-

-

+

Catalasa + -

Ácido de glucosa + +

Diferencias de especies de BacillusCaracterísticas B. anthracis B. cereus B. megaterium B. subtilis

Ácido de:

Arabinosa

Glucosa

Manitol

Salicina

-

+

-

-

-

+

-

+/-

+

+

+

-

+

+

+

+/-

Cápsula + - -

Crecimiento en:

Agar penicilina

Anaerobiosis

-

+

+

+

-

- -

Citrato + + + +

Glucosa O/F F F O O

Hemólisis ASC - BETA - +/-

Hidrólisis de:

Almidon

Gelatina

+

+

+

+

+

+

+

+

Indol - - - -

Movilidad - + + +

Peptonización LT - + +/- +

Reducción de Nitratos + + - +

Virulencia de ratón + - - -

Voges-Proskauer + + - +

Diferencias de especies de Clostridium

Características C. perfringes C. botulinum C. tetani

Ácido de:

Glucosa

Lactosa

Maltosa

Manitol

Sacarosa

Sorbitol

Trehalosa

+

+

+

-

+

-

Variable

+

-

Variable

-

Variable

Variable

Variable

-

-

-

-

-

Crecimiento aeróbico - - -

Esporas Subterminal Subterminal Terminal

Hemólisis ASC + +/- +

H2S - +/- Variable

Indol - - Variable

Leche tornasolada ACG - Variable

Movilidad - + +

Reducciónd de nitratos Variable - -

Voges - Proskauer Variable - -

Especie Morfología celular

Morfología en ASC

Crecimiento en caldo

Hemólisis Fermentación

Glu Sac Alm

Variedad gravis

Bacilos cortos Colonias 2-4mm, grises, cabeza de margarita, planas

Película - + - +

Variedad mitis Bacilos largos, con granos en los extremos

Colonias 1-2mm, negras, convexas, lisas y brillantes

Difuso + + - -

Variedad intermedius

Bacilos largos en bastón

Colonias >0.5mm, negras, planas, secas, duras

Sedimento granular

- - - -

CORYNEBACTERIUM DIPHTERIAE

EXUDADO FARINGEOMEDIOS

PARA AISLAMIENTO

Agar sangre Agar S-110

Agar eosina y azul de metileno Medio de transporte Stuart

Agar sal y manitol Agar BIGGY

Tinción de Gram

Agar sangre

Agar eosina y

azul de metileno

Agar S-110, sal

y manitol

Agar BIGGY

Streptococcus

Neumococos

Enterobacterias

Staphylococcus

aureus y otros

Micrococcus

Candida albicans

Hemolítico grupo A

Disco de bacitracina

Disco de optoquina

Solubilidad de bilis

TSI, LIA, MIO, citrato y urea

Catalasa y coagulasa

Tubos germinales y

clamidiosporas

UROCULTIVOMEDIOS

PARA AISLAMIENTO

Agar sangre

Agar EMB

Agar S-110

Agar sal y manitol

Agar Biggy

PARA IDENTIFICACIÓN

TSI, Caldo rojo de fenol

Urea, SIM, MIO, LIA,

Citrato de simmons

PARA SENSIBILIDAD A

ANTIBIÓTICOS

Agar de Mueller Hinton

Agar soya tripticaseína

Agar sangre,

identificación de:

Estafilococos

Estreptococos

Neumococos

Observación de

hemólisis

Agar EMB

Identificación de:

Enterobacterias

Pseudomonas

Salmonella y

Shigella

Tinción de Gram

Agar S-110 ó sal

y manitol

Identificación de

Staphylococcus y

otros Micrococos

AISLAMIENTO E

IDENTIFICACIÓN

Orina

Aislamiento de bacterias patógenas en heces

Salmonella, Shigella, Escherichia coli, Y. enterocolitica

Materia fecal

Mac Conkey EMB o XLD Sulfito de bismuto Caldo de selenito

Seleccionar colonias lactosa (-)= Salmonella Colonia negra = Salmonella Sulfito de bismuto XLD, VB

Lactantes: colonias lactosa (+)= E. coli y

Shigella

Certifique Y. enterocolitica Colonia negra Colonia lactosaSalmonella (-)=Salmonella typhi

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http://endeavor.med.nyu.edu/courses/microbiology/coursew

are/infect-disease/Gram_Neg_Bacilli5.html

http://endeavor.med.nyu.edu/courses/microbiology/courseware/infect-disease/Gram_Neg_Bacilli5.html




Clasificación y pruebas para Streptococcus

Grupo

de

Lancefi

eld

Especie Hemóli

sis

Habitat

humano

Enfermedades Pruebas de

laboratorio

A S. pyogenes beta Faringe, piel Infecciones primarias: Faringitis aguda, erisipela, celulitis, impétigo, septicemia

Secuelas postinfecciosas: Fiebre reumática, glomerulonefritis, endocarditis reumática.

Disco de bacitracina A

Aglutinacion en látex

BS. agalactiae beta Faringe, vagina Sepsis puerperal,

endocarditis, neumonitis, neumonía, meningitis, septicemia.

Prueba de CAMP

Bilis esculina

Aglutinación en látex

CS. equi

S. equisimilis

S. dysgalactiae

beta

beta

alfa

Faringe, vagina, piel

Infecciones en heridas, sepsis puerperal, celulitis, endocarditis.

Hidrólisis de hipurato, Fermentación de glicerol, trehalosa, sorbitol

Aglutinación al látex

Grupo

de

Lancefi

eld

Especie Hemóli

sis

Habitat

humano

Enfermedade

s

Pruebas de

laboratorio

DEnterococos:

E. faecalis

E. faecium

E. turans

No enterococos:

S. bovis

S. equinus

Alfa

Beta

Gama

Alfa

Intestino grueso Infecciones en tractourinario, abcesospelvianos, peritonitis,infecciones enheridas, endocarditis.

Hidrólisis de bilis esculina

Aglutinación al latex

Tolerancia a 6.5% NaCl

FS. anginosus Beta Boca, dientes, faringe Sinusitis, caries

dental, meningitis,abceso cerebral,neumonía

Producción de ácido apartir de glucosa,maltosa, salicina ysacarosa

Aglutinsación al latex

HS. sanguis Alfa Boca, dientes, faringe Caries dental,

endocarditis,septicemia

Fermentación de inulina

KS. salivarius Alfa Faringe, boca Endocarditis,

septicemia, sinusitis,meningitis

Ácido aprtir de glucosa,sacarosa y maltosa

S. pneuomoniae Alfa Faringe, boca, traquea Neumonía lobar,septicemia, otitis,meningitis,endocarditis

Serotipíficación

Reacción de quellung

Solubilidad en bilis

Susceptibilidad a laoptoquina

BACILOS GRAM NEGATIVOS OXIDASA POSITIVOS

Prueba Aeromonas Plesiomonas Vibrio Pseudomonas

Fermentación de glucosa

+ + + -

Crecimiento en NaCl 6.5%

- - + -

Ácido de inositol

- + - No aplicable

Ácido de manitol

+ - + No aplicable

Crecimiento en TCBS

- - + -

Licuefacción de gelatina

+ - + Variable

Bacteria con forma de bastón (bacilo), que pertenece a la familia de las Enterobacteriaceas; está

considerada como el material biológico más utilizado en experimentación. Esta bacteria se encuentra en el

tracto intestinal de los mamíferos. La especie comprende varios grupos que se establecen según su

actividad. Las especies de Escherichia coli oportunistas producen infecciones sólo si abandonan el colon.

Otros grupos producen hasta el 90% de las diarreas infantiles y la denominada diarrea del viajero. Esta

última no es grave, pero la gastroenteritis aguda de los niños puede provocar la inflamación de la mucosa

intestinal, dando lugar a deshidratación grave y heces purulentas. La Escherichia coli es un organismo

adecuado para la investigación por su crecimiento rápido y porque su cultivo es sencillo. Ha facilitado

descubrimientos muy importantes sobre metabolismo, reproducción celular e ingeniería genética.Biblioteca de Consulta Microsoft® Encarta® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos.

Streptococcus, bacteria Gram positiva de forma esférica. Los estreptococos aparecen en

pares o cadenas, y algunas especies son patógenas en los seres humanos. Las infecciones

estreptocócicas comprenden la faringitis, la escarlatina, erisipelas, fiebre puerperal y algunas

neumonías. Los fármacos de elección en el tratamiento de estas infecciones son la penicilina

y la eritromicina. Los cultivos de los estreptococos no patogénicos lácticos se emplean en la

fermentación de productos lácteos como el queso y la mantequilla.Biblioteca de Consulta Microsoft® Encarta® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos.

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La bacteria Staphylococcus aureus es un patógeno común en el serhumano que se localiza principalmente en las mucosas y la piel. Puedeoriginar abcesos y forúnculos en la piel además de provocarosteomielitis, endocarditis y otro gran número de infecciones.

Enciclopedia Microsoft ® Encarta ® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos. Lester V. Bergman/Corbis

La bacteria Salmonella typhi es responsable de la fiebre tifoidea, unaenfermedad infecciosa que origina fiebre alta, erupción de manchasrojas en tórax y abdomen y a veces diarrea y hemorragia intestinal.

Enciclopedia Microsoft ® Encarta ® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos. Tektoff-Merieux, CNRI/Science Photo Library/Photo Researchers, Inc.

Estructura proteica de un microtúbulo

Los microtúbulos son tubos finos y huecos que ayudan al soporte de ciertas estructurascelulares como cilios y flagelos. Éstos son orgánulos filamentosos, destinados a la locomocióny a la obtención de alimento, que están incrustados en la membrana celular de algunosorganismos eucariotas. Las paredes del tubo están formadas por dos tipos de subunidades deuna proteína globular, la alfa y la beta tubulina, que se reúnen para formar un dímero. Losdímeros se ensamblan, se enrollan y componen un tubo de la longitud necesaria. Dentro decada cilio (corto) o flagelo (largo), aparecen nueve pares de microtúbulos que rodean a undécimo par central.Enciclopedia Microsoft ® Encarta ® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos. © Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos.

El ciclo de Krebs empieza y acaba con la combinación de la acetil coenzima A (acetil Co A) y el oxalacetato paraformar ácido cítrico. Este compuesto ácido tiene seis átomos de carbono y experimenta una serie de reaccionesquímicas catalizadas por enzimas que separan dos de estos átomos. Las enzimas también modifican laestructura del compuesto, que se transforma en oxalacetato al final del ciclo. Éste se combina a continuacióncon la acetil Co A para iniciar de nuevo la cadena de reacciones. Cada ciclo genera una molécula de ATP rico enenergía (que se forma por liberación de cuatro electrones) y otra de GTP.Enciclopedia Microsoft ® Encarta ® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos. © Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos.

Esta micrografía electrónica ilustrala bacteria Vibrio cholerae,causante del cólera, una graveenfermedad infecciosa del hombre.Produce una toxina que induce lasecreción de grandes cantidades delíquido en el intestino delgado, locual determina un cuadro devómitos, diarrea, calambresmusculares y, a veces, la muerte.Hay una vacuna preparada conbacterias muertas que proporcionaprotección parcial.Enciclopedia Microsoft ® Encarta ® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos. Moredun Animal

Health LTD/Photo Researchers, Inc.

http://www.drscope.com/privados/consulta/colera/



Bacilos Gram positivos grandesque se agrupan formandocadenas, forman esporas y sonaerobios La mayor parte de lasespecies de Bacillus producencatalasa, y la esporulación noes inhibida por la incubaciónaerobia característica positivaque ayuda a la diferenciacióndel género Bacillus delClostridium. El Bacillusanthracis causa antráx enanimales y humanos. ElBacillus cereus ha sidoasociado con brotes deintoxicación alimentaría.

http://www.vdh.state.va.us/spanish/anthraxf.htm

Diplococos Gram positivos,frecuentemente lanceolados yagrupados en cadenas, poseenuna cápsula formada porpolisacáridos que permite unafácil tipificación con antisuerosespecíficos. Pueden ser lisadoscon facilidad por agentestensoactivos, como las salesbiliares. Estos organismos sonhabitantes del aparatorespiratorio superior delhombre, y pueden causarneumonía, sinusitis, otitis,bronquitis, meningitis entreotros.

Ingraham L.J. 2000

Ingraham L.J. 2000

Black, 1996

http://escuela.med.puc.cl/paginas/Cursos/tercero/AnatomiaPatologica/Imagenes_Ap/patologia225-233.html

Son bacilos Gram positivos,inmóviles y no esporulados, quefrecuentemente presentan susextremos en forma de mazas, asícomo gránulos irregularmenteteñidos. A menudo se encuentranformando asociacionescaracterísticas, semejando letraschinas o palizadas. Algunasespecies forman parte de la floranormal del aparato respiratorio delhombre. C diphtheriae produceuna poderosa exotoxina que causala difteria en el hombre.

Corynebacterium diphteriae en tinción de Gram.

University of Missouri-Columbia, 1998:


Corynebacterium diphtheriae en medio Tinsdale.



http://www.vdh.state.va.us/spanish/diphf.htm



Streptococcus faecalis enfisión binaria, coco Grampositivo, flora normal delintestino grueso, sinembargo causa infeccionesen el tracto genitourinario yen sistema cardiovascular.Los enterococos se puedendesarrollar típicamente enmedios con concentracionesde NaCl al 6.5% o bilis al40%, son inhibidos pero nodestruidos por laspenicilinas.

Estafilococo, nombre común de un género de bacterias parásitas (Staphylococcus) de forma

redondeada, que se encuentran habitualmente en el aire, el agua, la piel (especialmente en

zonas con pelo o vello) y la parte alta de la faringe humana. Son de naturaleza patógena, y

cuando abandonan su localización en la piel y pasan a invadir otras estructuras pueden

producir procesos como los forúnculos, infecciones de heridas (abscesos; neumonía;

meningitis; septicemia). Casi siempre existe una puerta de entrada a través de la piel o la

faringe. El tratamiento de las infecciones estafilocóccicas se realiza mediante antibióticos,

como los de la familia de las penicilinas y sulfamidas, pero es frecuente la existencia de

cepas resistentes a los antibióticos habituales, que requieren antibióticos más específicos

para su control. Biblioteca de Consulta Microsoft® Encarta® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos.

http://www.uphs.upenn.edu/bugdrug/antibiotic_manual/Gram3.htm

http://www.uphs.upenn.edu/bugdrug/antibiotic_manual/Gram3.htm

Helicobacter pylori, bacteria implicada en el desarrollo de gastritis y úlceras pépticas. Se asocia

también con algunos cánceres de estómago. Con toda probabilidad, la infección por

Helicobacter pylori se produce en la edad infantil.

Es un bacilo Gram negativo corto, helicoidal, con múltiples flagelos, microaerófilo (con

preferencia por medios escasos en oxígeno), que coloniza las capas profundas del moco de

recubrimiento gástrico y duodenal y se adhiere a las células epiteliales superficiales de la

mucosa del estómago y duodeno, sin invadir la pared. La bacteria segrega amoníaco,

alcalinizando el medio; así se protege de la acción acídica del jugo gástrico (pH 3). El amoníaco

además irrita la mucosa, ayudado por proteasas y fosfolipasas bacterianas que destruyen el

moco protector. La mucosa y su lámina propia son invadidas por un denso infiltrado de células

inflamatorias, especialmente neutrófilos.

Se ha relacionado con el 95% de las úlceras duodenales, el 70% de las úlceras gástricas, el

100% de las gastritis crónicas activas y el 100% de las gastritis crónicas tipo B.

DIAGNÓSTICO

Las pruebas que se utilizan para diagnosticar esta infección pueden ser directas, si se basan en

la identificación del microorganismo (histología y cultivo) e indirectas, cuando estudian alguna

característica del germen (prueba de la ureasa y pruebas en aire espirado) o bien los

anticuerpos producidos por el paciente (serología). Las muestras utilizadas para el diagnóstico

pueden obtenerse por métodos invasivos (biopsia durante la endoscopia) o no invasivos

(suero, saliva, aliento).Biblioteca de Consulta Microsoft® Encarta® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos.

Salmonella, género de bacterias patógenas descubiertas por el veterinario americano Daniel Elmer Salmon

en 1885. El organismo se transmite por determinados alimentos contaminados como carne de ave, huevos

u otras carnes. Se divide en tres especies: Salmonella typhi, S. choleraesuis y S. enterititis. Ésta última

presenta más de 1.400 variedades antigénicas distintas. La S. typhi produce la fiebre tifoidea. Las

diferentes S. enteriditis, la más típica de las cuales es la S. typhimurium, producen gastroenteritis

(salmonelosis) que son intoxicaciones alimentarias que producen dolor abdominal, fiebre, náuseas, vómitos

y diarrea. El periodo de incubación varía entre 8 y 48 horas y la duración de los síntomas oscila entre 3 y 7

días. Los casos leves se tratan con dieta y limonada alcalina (preparado rehidratante y reponedor de las

pérdidas de electrolitos); no se deben usar antidiarreicos porque pueden transformar al enfermo en

portador crónico de salmonelas. Los casos graves deben hospitalizarse y tratarse con rehidratación

intravenosa y, en ocasiones, con antibióticos. La prevención de estas infecciones pasa por extremar la

higiene, la limpieza cuidadosa y el aumento del tiempo y la temperatura en la preparación culinaria de los

alimentos.Biblioteca de Consulta Microsoft® Encarta® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos.

Beyong,2001:http://beyond2000.com/news/Nov_00/story_901.html

Las arquebacterias constituyenun grupo de bacterias adaptadoa vivir en condiciones extremas.La especie Methanospirillumhungatii es una arquebacteriametanogénica Gram negativapresente en ambientes carentesde oxígeno. Estas bacteriasproducen metano a partir dedióxido de carbono e hidrógeno.En la fotografía aparece labacteria en fase de escisión, esdecir, mientras se estádividiendo para dar lugar a doscélulas hijas.Enciclopedia Microsoft ® Encarta ® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos. Dr. Kari

Lounatmaa/Science Photo Library/Phot Researchers, Inc.

Las espiroquetas son bacterias con una morfología y mecanismo de movilidadúnicos. Se encuentran diseminadas en ambientes acuáticos y en los cuerpos deanimales. Algunas de ellas causan enfermedades como la sífilis, originada porTreponema pallidum. La célula espiroqueta es delgada, flexuosa y de formahelicodal.

Enciclopedia Microsoft ® Encarta ® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos. Omikron/Science Source/Photo Researchers.

La bacteria Neisseriameningitidis que muestraesta imagen, producemeningitis bacteriana asícomo otras enfermedades. Sucarácter Gram negativo sedebe a su incapacidad paracaptar un tipo específico decolorante bacterianodenominado tinción de Gram.Enciclopedia Microsoft ® Encarta ® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos. Tektoff-

Merieux/CNRI/Science Source/Photo Researchers, Inc

Neiseria meningitidis University of Missouri-

Columbia, 1998:



N

NH2

N

O

N

N

C

O

H

N

COOH

N

CH3

H

COOH

L - Triptofano

H

COOH

Indolpiruvico

H

Indol

DESAMINACIÓN

H

Indolacetaldehído

H

Ácido Indolacético(indolacetato).

Incubación de corto tiempo

H

Escatol (metilindol)incubación de largo término


Glucosa

Glucosa-6-fosfato

Fructosa-6-fosfato

Fructosa-1,6-bifosfato

3-fosfogliceraldehídoDihidroxiacetona fosfato

2 1,3-bifosfoglicerato

2 3-fosfoglicerato

2 2-fosfoglicerato

2 fosfoenolpiruvato

2 piruvatoATP ADP

ATP ADP

2 NAD2 NADH

2 PO4

2 ADP 2 ATP

H2O

2 ADP

2 ATP

G L U C O L I S I S

Piruvato Acetil CoA

oxalacetato

isocitrato

malato

fumarato

succinato Succinil CoA

Alfa-cetoglutarato

citrato

NADH NAD

CO2CoA

NADH

NAD

H2O

FAD

FADH2

CoA

CoA

CO2NAD

NADH

NAD

NADH

CO2

CoA

GTP GDP

C I C

L O

D

E K

R E

B S

Glucosa

Glucosa-6-fosfato

5-P-gluconato

Ribulosa-5-P

Fru

cto

sa-5

-P

Glicera

ldeh

ído

-3-P

Eri

tro

sa-4

-P

Glicera

ald

eh

ído

-3-P

Sed

oh

ep

tulo

sa-7

-P

Xilo

sa-5

-P

NADPNADPH

CO2

NADPH

NADP

Rib

osa-5

-p

Fru

cto

sa-5

-P

G L U C O L I S I S

VIA

HE

XO

SA

M

ON

OF

OS

FA

TO

Microbial Systematics,2002

http://www.umanitoba.ca/faculties/science/microbiology/staff/cameron/60_347.htm PRUEBAS BIOQUÍMICAS

http://www.umanitoba.ca/faculties/science/microbiology/staff/cameron/60_347.htm













Bacillus subtillis Proteus vulgaris

Microbiology lab index, 2002:

http://www.austin.cc.tx.us/microbugz/03morphology.html


Streptococcus pyogenes Staphylococcus aureus

Microbiology lab index, 2002:



Homepage of Microbiologia clínica, 2000

http://www.saudetotal.com/microbiologia/colcocos.htm#topo


http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides

.htm

Streptococcus pyogenesStaphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis

Streptococcus viridans Streptococcus faecalis Streptococcus pneumoniae

http://www.saudetotal.com/microbiologia/colcocos.htm



En algunos casos es necesario sembrar una muestra para conocer el número decélulas viables o vivas, en este caso bacterias. Para ello se realiza entre otrosmétodos el vaciado en placa.

Para obtener el número apropiado de colonias, usualmente se debe diluir lamuestra a contar. Es común usar varias diluciones decimales de la muestra.

Para la dilución se toma 0.1 ml de muestra problema y 9.9 ml de diluyente. En la mayor parte de los casos se necesita realizar diluciones seriadas. Cuando se hacen diluciones es importante que se utilice una pipeta diferente para

cada dilución, aun cuando sea de la misma muestra. Las cuales deben estaresterilizadas previamente al igual que todo el material que se utilizará.

Esto se debe a que la muestra inicial, que contiene la mayor cantidad deorganismos, no se expulsó a todos los microorganismos de la pipeta al expulsar elcontenido de esta.

Los organismos que se adhieren a las paredes de la pipeta pueden ser arrastradosfuera en diluciones posteriores y ocasionar un serio error en la cuenta final que seobtiene.

El número de colonias obtenidas sobre una placa no depende solamente de lacantidad del inóculo, sino también de los adecuado del medio de cultivo y de lascondiciones de incubación.

No todas las células depositadas sobre la placa formarán colonias a la mismavelocidad y si se usa un tiempo corto de incubación, se puede obtener menos delmáximo de colonias.

El recuento de viables está sujeto a gran error. Si se desean cuentas exactas, sedebe tener gran cuidado y se deben preparar muchas placas por duplicado.

Para expresar el resultado, el recuento de viables se expresa como el número deunidades formadoras de colonias (UFC).

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Atlas Interactivo de pruebas bioquimicas