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“CARACTERIZACIÓN DE LOS PROPÓLEOS Y FUTURA NORMATIVA LEGAL” María Teresa Sancho Ortiz Universidad de Burgos Facultad de Ciencias Departamento de Biotecnología y Ciencia de los Alimentos Área de Nutrición y Bromatología

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“CARACTERIZACIÓN DE LOS PROPÓLEOS Y FUTURA NORMATIVA LEGAL”

María Teresa Sancho Ortiz Universidad de Burgos

Facultad de Ciencias Departamento de Biotecnología y Ciencia de los Alimentos

Área de Nutrición y Bromatología

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1. CARACTERIZACIÓN DE LOS PROPÓLEOS

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1. Caracterización de los propóleos-IMPORTANCIA

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1. Caracterización de los propóleos-IMPORTANCIA

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1. Caracterización de los propóleos-CONCEPTO

Exudaciones vegetales

PROPÓLEOS Propolis

pro-: delante o en defensa de; y –polis: ciudad

pegar sella espacios abiertos

pegamento de abejas

Chopos Álamos Sauces Castaños Abetos Abedules Pinos Jaras Plantas aromáticas

Capullos Hojas Ramas Cortezas

ZONAS TEMPLADAS

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1. Caracterización de los propóleos-CONCEPTO

Temperatura exterior: 22-28 oC Duración aproximada de la recolección: 1 hora

modificación

ADICIÓN cera polen enzimas

secreciones salivares

sellado

embalsamado

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1. Caracterización de los propóleos-EXTRACCIÓN

Raspado

Materiales plásticos de uso alimentario

Rejillas

Mallas

50-300 g propóleos/colmena/año

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Origen botánico Época de recolección

Grado de frescura Conservación

Especie de abeja

Color: amarillo, castaño, verde, rojo o negro Sabor: balsámico, resinoso, amargo o picante Consistencia: viscosa, pegajosa o quebradiza • a menos de 15 ºC es duro y quebradizo • a más de 30 ºC es pegajoso y blando Olor: penetrante, balsámico o resinoso Propiedades: antisépticas y antioxidantes

COMPOSICIÓN DEPENDIENTE:

1. Caracterización de los propóleos-PECULIARIDADES

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1. Caracterización de los propóleos-PROPIEDADES FÍSICO-QUÍMICAS

Densidad: 1,11-1,14 g/ml Punto de fusión: 80-105 oC Solubilidad: • muy ligeramente soluble en agua

• la mayoría de sus componentes son solubles en alcohol

• la solubilidad se incrementa con mezclas de solventes

etanol-cloroformo etanol-tolueno

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1. Caracterización de los propóleos-TIPOS

Propóleos rojo Propóleos verde

Origen geográfico

América del Norte, Europa, Zonas

templadas de Asia

Brasil, Cuba, México,

VenezuelaBrasil

Origen botánicoPrincipalmente

chopos y álamos (Populus sp.)

Granadillo o Cocobolo

(Dalbergia sp.)

Chilca o romerillo (Baccharis dracunculifolia DC.)

Principales constituyentes

Flavonoides, ácidos hidroxicinámicos y

sus ésteresIsoflavonoides

Ácidos diterpénicos, lignanos y derivados del ácido ρ-

cumárico

Propóleos de zonas tropicalesPropóleos de zonas

templadas

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1. Caracterización de los propóleos-COMPOSICIÓN. ZONAS TEMPLADAS

(1%-3%)Sustancias FENÓLICAS: fenoles, ácidos fenólicos,

ésteres, flavanonas, dihidroflavanonas,

flavonas, flavonoles, chalconas glicéridos

fenólicos

Sustancias ALIFÁTICAS: ácidos, alcoholes, ésteres, aldehidos, cetonas, ácido

benzoico y ésteres

ACEITES ESENCIALES: monoterpenos,

sexquiterpenos, sustancias aromáticas, generalmente

volátiles

OTROS COMPUESTOS

Parcialmente solubles en

etanol

(aproximadamente 5%)

sales minerales (2%), polisacáridos (2%), sustancias nitrogenadas (0.7%), lactonas,

quinonas, esteroides, vitaminas (0.3%)

(40%-70%)

COMPUESTOS BALSÁMICOS

Solubles en etanol

COMPUESTOS NO

BALSÁMICOS Insolubles en

etanol

(20-35%)

CERAS (componentes de la cera de origen principalmente animal)

Prop

óleo

s de

zon

as te

mpl

adas

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(1%-3%)

ACEITES ESENCIALES: sexquiterpenos,

sustancias aromáticas, generalmente volátiles

(10%-15%)

Alcanos, terpenoides

OTROS COMPUESTOS

Parcialmente solubles en

etanol

(aproximadamente 5%)

sales minerales (3%), carbohidratos (1%), sustancias nitrogenadas, glicerina (1%)

Principalmente ácido cinámico y derivados, ácido cumárico, ARTEPILINA C. Menores

concentraciones de compuestos fenólicos, tales como flavonoides, ácido benoico, ácidos alifáticos

y ésteres

(40%-70%)

COMPUESTOS BALSÁMICOS

Solubles en etanol

COMPUESTOS NO

BALSÁMICOS Insolubles en

etanol

(15-25%)

CERAS (componentes de la cera de origen principalmente animal)

Propóleos verde

1. Caracterización de los propóleos-COMPOSICIÓN. PROPÓLEOS VERDE

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• Recolección métodos apropiados

• Almacenamiento • Conservación

• Libre contaminantes tóxicos

• Buen rendimiento de extracción

• Bajos porcentajes

• Definir su procedencia botánica compuestos activos

• Contenidos elevados de compuestos fenólicos

• Correctas características organolépticas

1. Caracterización de los propóleos-CRITERIOS DE CALIDAD

condiciones higiénicas

sustancias insolubles: CERAS agua cenizas

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Constituyente Propóleos de zonas templadas (g /100 g)*

Propóleos verde (g /100 g)**

Componentes balsámicos ≥45 ≥35

Fenoles totales ≥21 ≥7 Flavonoides totales

(de los cuales): ≥9 ≥1

Flavonas y flavonoles Flavanonas y

dehidroflavanonas

≥5 -

≥4 -

Ceras ≤25 ≤25

Componentes no balsámicos ≤5 ≤5

Cenizas No especificado ≤5

*Criterios propuestos por Popova et al., 2007 ** Criterios establecidos en la legislación brasileña, 2005

1. Caracterización de los propóleos-CRITERIOS DE CALIDAD

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1. Caracterización de los propóleos-CONSERVACIÓN

Estabilidad: Muy estable Conservación a temperatura ambiente • Recipientes herméticos

• Oscuridad 1 AÑO

• Evitar calor directo Extractos etanólicos Propóleos congelado

Estabilidad de los compuestos fenólicos

Flavonas Quinonas

evita oxidación

3 AÑOS

Varios años

Mantenimiento de la actividad antibacteriana

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1. Caracterización de los propóleos-FRESCURA

Determinación de la actividad de la α-glucosidasa Disminuye exponencialmente con el tiempo

a temperatura ambiente

sustancia nitrogenada

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Tinturas etanólicas Ingredientes de CREMAS UNGÜENTOS DENTÍFRICOS CARAMELOS

Comercialización Cosméticos

Alimentos

1. Caracterización de los propóleos-USOS PRINCIPALES

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Medicina

Complemento alimentario

Barnizado

Embalsamado

1. Caracterización de los propóleos-OTROS USOS

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Antioxidante

Antibacteriano

Antifúngico

Antiviral

Hepatoprotector

Inmunoestimulante

1. Caracterización de los propóleos-PROPIEDADES BIOACTIVAS

Dosis tóxica próxima a la dosis terapéutica

EFECTOS ATRIBUIDOS

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1. Caracterización de los propóleos-PROPIEDADES BIOACTIVAS

Falta de caracterización

de sus constituyentes

Diferencias cualitativas y cuantitativas de los

componentes (flavonoides)

NO HA CONCEDIDO NINGUNA

DECLARACIÓN DE

PROPIEDADES SALUDABLES

EFSA (2010) Autoridad europea de seguridad alimentaria

Ausencia de estudios de

relación causa-efecto

Toxicidad potencial

IRRITANTE DE LA PIEL DISRUPTOR ENDOCRINO

URL: https://www.efsa.europa.eu/en/efsajournal/pub/1810

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• Los antioxidantes pueden proteger de los radicales libres, ayudando a combatir la desnutrición o aumentando la cantidad de nutrientes.

• Contribuye a incrementar la capacidad antioxidante del organismo.

• Ayuda a las defensas naturales.

• Contribuye a mantener la fluidez de la sangre.

• Contribuye a mantener el hígado sano, ayudando a la digestión y purificación corporal.

• Incrementa la resistencia fisiológica del organismo en caso de condiciones muy adversas.

• Promueve la salud del tracto respiratorio superior.

• Mantiene en buen estado el sistema inmunitario y las defensas corporales.

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1. Caracterización de los propóleos-PROPIEDADES BIOACTIVAS DENEGADAS

Registro de propiedades nutricionales y saludables de la Unión Europea (2015)

URL: http://ec.europa.eu/nuhclaims

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1. Caracterización de los propóleos-AFIRMACIONES ACEPTABLES

• Se puede indicar en la etiqueta que un producto

CONTIENE PROPÓLEOS

• OBLIGATORIO

Indicar la cantidad de propóleos

Registro de propiedades nutricionales y saludables de la Unión Europea (2015)

URL: http://ec.europa.eu/nuhclaims

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1. Caracterización de los propóleos-PROPIEDADES BIOACTIVAS

Tratamiento post-cosecha

para la protección de

plantas

FUNGICIDA

EXTRACTO DE PROPÓLEOS

EFSA (2018) Autoridad europea de seguridad alimentaria

Tratamiento superficial

de frutas con piel no

comestible (PLATANOS)

BACTERICIDA

URL: https://www.efsa.europa.eu/en/supporting/pub/en-1494

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2. FUTURA NORMATIVA LEGAL PARA LOS

PROPÓLEOS

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Legislación específica: China, Rusia, Argentina y Brasil

En España: o No existe legislación específica

o Propóleos procesado se considera un complemento alimentario

2. Futura normativa legal para los propóleos

NECESIDAD DE UNA CARACTERIZACIÓN COMÚN

En la actualidad:

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1. Caracterización de los propóleos-ESTUDIO INTERLABORATORIO

ENSAYO INTERLABORATORIO

DESARROLLO DE MÉTODOS ANALÍTICOS PARA EL PROPÓLEOS

2. Futura normativa legal para los propóleos

2015

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13 Participantes – 9 Países

Bulgaria - Vassya Bankova, Milena Popova, Boryana Trusheca and Nartsislav Petrov, Institute of Organic Chemistry Alemania - Christof Kunert and Martin Linkogel, Intertek Food Services

- Gudrun Beckh; Juergen Wehlitz and Petra Wessel, QSI GmbH - Hartmut Schreiter and Machie Jewski, Allwex

Grecia - Chrysa Tananaki, Aristotle University of Thessaloniki Francia - S. Georgé, CTCPA; Naïma Dlalah

Italia - Silvia Gardini, CRA-API

Portugal - Miguel Vilas-Boas and Soraia Falcão, IPB -Paulo Antunes and Luisa Paulo - CATAA

Eslovenia - Adriana Pereyra, Medex ;

España - Teresa Sancho, Universidad de Burgos;

Turquía - Kadriye Sorkun and Omur Gencay, Hacettepe University

- Tuğçe Dastan, AltiparmaK

COORDINADOR

2. Futura normativa legal para los propóleos. ENSAYO INTERLABORATORIO

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• Brasil • Bulgaria • Eslovenia • España • Francia • Italia • Países Bálticos • Polonia • Portugal • Ucrania • Turquía

15 Muestras

2. Futura normativa legal para los propóleos. ENSAYO INTERLABORATORIO

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CONDICIONES VARIABLES

PATRONES

EQUIPAMIENTO

REACTIVOS

MÉTODOS

TEMPERATURAS

2. Futura normativa legal para los propóleos. ENSAYO INTERLABORATORIO

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Propóleos bruto

Cenizas

Cera

Contenido balsámico

• Extracción Soxhlet (6 h) • Extracción ultrasonidos (30 min)

• Extracción: agitación durante (24 h) • Extracción: ultrasonidos (30 min)

2. Futura normativa legal para los propóleos. ENSAYO INTERLABORATORIO

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Flavanonas

Flavonas Flavonoles

Fenoles totales

2. Futura normativa legal para los propóleos. ENSAYO INTERLABORATORIO

Extracto de propóleos

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Métodos apropiados para el análisis de propóleos: - Cenizas - Cera (extracción Sohxlet) - Contenido balsámico (extracción por agitación) - Fenoles totales - Flavonas/Flavonoles Métodos no apropiados y que deben mejorarse: - Cera (ultrasonidos) - Contenido balsámico (ultrasonidos) - Flavanonas

2. Futura normativa legal para los propóleos. ENSAYO INTERLABORATORIO

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1. Caracterización de los propóleos-ESTUDIO INTERLABORATORIO 2. Futura normativa legal para los propóleos

NORMA ISO

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2. Futura normativa legal para los propóleos NORMAS ISO TC34/SC19

ESTANDARIZACIÓN DEL PROCESADO Y CIRCULACIÓN DE

PRODUCTOS APÍCOLAS

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2. Futura normativa legal para los propóleos NORMAS ISO TC34/SC19

Normas ISO

91 Estados miembros

Organismos nacionales de normalización

Garantía de satisfacción

Decretadas por el Organismo Internacional de

Estandarización (ISO) 1947

Asociación Española de Normalización

(AENOR)

necesidades expectativas

CONSUMIDORES

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procesos requerimientos

envasado almacenamiento transporte

2. Futura normativa legal para los propóleos NORMAS ISO TC34/SC19

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ISO – PROPÓLEOS (en preparación)

2. Futura normativa legal para los propóleos NORMAS ISO TC34/SC19

Beneficios:

Estandarizar Propóleos

PRODUCCIÓN CALIDAD SEGURIDAD

Facilitar Soporte técnico para el comercio internacional bilateral o multilateral

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Criterios comunes

Envasado

Almacenamiento

Transporte

Normativa común

Procesado

Características

Composición

Calidad

ISO – PROPÓLEOS (en preparación)

2. Futura normativa legal para los propóleos NORMAS ISO TC34/SC19

Líder hasta finalizar 2023: Dr Chi ZHANG (China)

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2. Futura normativa legal para los propóleos NORMAS ISO TC34/SC19: BORRADOR

Términos y definiciones

Concepto de propóleos

Artepilina C

Extracto etanólico de propóleos

Fuentes botánicas de propóleos

Flavonoides totales

Requisitos

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2. Futura normativa legal para los propóleos NORMAS ISO TC34/SC19: BORRADOR

Requisitos físco-químicos para el propóleos

Propóleos de zonas templadas Propóleos verde

Otros tipos frecuentes de

propóleos

Valor máximo para la pérdida en el secado (%) 6 9 ISO 662 GRAVIMETRÍA

Valor máximo para el contenido en cenizas (%) - 5 ISO 6884 GRAVIMETRÍA

Valor mínimo para el extracto etanólico del propóleos (%) 30 50 Apéndice A GRAVIMETRÍA. Diferencia de pesada con

respecto al residuo insoluble

Valor mínimo para el contenido en flavonoides totales (%) 5 4 Apéndice B

Separación en COLUMNA de los flavonoides. Medida por ESPECTROFOTOMETRÍA (360 nm)

Valor mínimo para el contenido en artepillina C (%) - 1,4 Apéndice C

EXTRACCIÓN con etanol (85%). Cuantificación por CROMATOGRAFÍA (RHPLC-UV)

Valor máximo para el tiempo de oxidación (s) 22 22 Apéndice D TIEMPO en el que el color púrpura del

permanganato potásico se desvanece

Contenido mínimo en compuestos fenólicos (%) 6 8 Apéndice E GRAVIMETRÍA

RequerimientoParámetro Método analítico

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2. Futura normativa legal para los propóleos NORMAS ISO TC34/SC19: BORRADOR

Requisitos físco-químicos para el extracto etanólico de propóleos

Propóleos de zonas templadas Propóleos verde

Otros tipos frecuentes de

propóleos

Valor máximo para la pérdida en el secado (%)

ISO 662 GRAVIMETRÍA

Valor máximo para el contenido en cenizas (%)

ISO 6884 GRAVIMETRÍA

Valor mínimo para el extracto etanólico del propóleos (%)

Apéndice A GRAVIMETRÍA. Diferencia de pesada con respecto al residuo insoluble

Valor mínimo para el contenido en flavonoides totales (%)

18 8 Apéndice BSeparación en COLUMNA de los flavonoides. Medida por ESPECTROFOTOMETRÍA (360 nm)

Valor mínimo para el contenido en artepillina C (%) - 2,5 Apéndice C

EXTRACCIÓN con etanol (85%). Cuantificación por CROMATOGRAFÍA (RHPLC-UV)

Valor máximo para el tiempo de oxidación (s)

Apéndice D TIEMPO en el que el color púrpura del permanganato potásico se desvanece

Contenido mínimo en compuestos fenólicos (%) 12 16 Apéndice E GRAVIMETRÍA

18

ParámetroRequerimiento

Método analítico

5

5

98

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2. Futura normativa legal para los propóleos NORMAS ISO TC34/SC19: BORRADOR

Requisitos sanitarios

Valor máximo para el contenido en plomo (mg/kg)

ISO 12193 ESPECTROSCOPÍA DE ABSORCIÓN ATÓMICA en cámara de grafito

RequerimientoParámetro Método analítico

2

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2. Futura normativa legal para los propóleos NORMAS ISO TC34/SC19

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ISO/TC 34/SC 19 - Secretariat SAC China Standardization Administration of China No. 9 Madian Donglu, Haidian District Beijing 100088 China Tel: +8610 8226 2644 Fax: +8610 8226 0660 Email: [email protected] Web: http://www.sac.gov.cn Secretariat direct: Ms Xuan Li Tel: 008625823182 Email: [email protected]

Responsable: Dr Chi ZHANG

2. Futura normativa legal para los propóleos NORMAS ISO TC34/SC19

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MUCHAS GRACIAS POR SU ATENCIÓN

M. Teresa Sancho Universidad de Burgos Área de Nutrición y Bromatología Departamento de Biotecnología y Ciencia de los Alimentos Facultad de Ciencias Plaza Misael Bañuelos s/n 09001 BURGOS (Burgos) - Castilla y León Teléfono: 947-258-813 FAX: 947-258-831 Correo electrónico: [email protected]