MARCO ANTONIO MESA GUEVARA

Mg. Bilogo-Microbilogo

Bacterias en forma de bastn o coco bacilar.

Se colorean de color rojo con el Gram.

Crecen bien en los medios de cultivo.

Forman colonias grandes lisas o mucosas.

Son aerobias, facultativas o anaerobias.

Pueden fermentar la glucosa.

Causan la mayora de infecciones.

Su habitad es el hombre, animales, agua.

Membrana citoplsmica

CITOPLASMA

Peptidoglicano Espacio

periplsmico

Lipopolisacrido LPS

Membrana

externa

Ag O

Core Lpido A

Proteinas Porinas

Lipoproteinas

Medio externo

ESTRUCTURA PARED

Antgenos O : antgenos somticos

Antgenos H: antgenos flagelares

Antgenos K: antgenos capsulares (Vi)

Antgenos F: antgeno de fimbria

Familia Enterobacteriaceae

Familia Vibrionaceae

Familia Aeromonaceae

Familia Campylobacteriaceae

Familia Helicobacteriaceae

Familia Pseudomonaceae

Familia Pasteurellaceae

Bacilos Gran Negativos Fermentadores Oxidasa Negativo:

BGNFO(-): Enterobacterias

Bacilos Gram Negativos Fermentadores Oxidasa Positivos:

BGNFO(+): Vibrios y Aeromonas

Bacilos Gram Negativos No Fermentadores Oxidasa Positivo:

BGNNFO(+): Pseudomonas, Alcaligenes.

Bacilos Gran m Negativos No ferementadores Oxidasa

Negativo: BGNNFO(-): Stenotrophomonas, Acinetob.

Bacterias Fastidiosas: BGNF.

Bacterias Anaerobios: BGNA.

Medios Selectivos:

Pocos selectivos: EMB, Mac Conkey.

Moderadamente Selectivos: XLD, SS, HecKtoen

Muy Selectivos: BS, BGA.

Cultivar: por agotamiento, para obtener colonias

aisladas

Directa

Area.

Oral.

Contacto.

Sexual.

Indirecta

Agua.

Alimentos

Comidas

Artefactos

Insectos

1- Utilizacin de la Lactosa.

2- Utilizacin de la Glucosa.

3- Produccin de gas de la Glucosa.

4- Descarboxilacin de la Lisina.

5- Produccin de cido sulfrico.

6- Utilizacin del citrato.

7- Produccin de la ureasa.

8- Motilidad.

9- Produccin de Indol

La identificacin final del gnero o de la especie de

la bacteria investigada por mtodo clsica, se hace

comparando las pruebas positivas o negativas con

tablas estndares de reacciones bioqumicas de

entero bacterias.

Usar tablas estndares con resultados positivos o

negativos a los sustratos y tablas con resultados

expresados en porcentajes.

Pruebas

E. coli Enterobact

er spp. Serratia

spp

Pantoea agglomeran

s

Klebsiella Citrobacter

pneumoniae

oxytoca frunc otro

MC (Colonia

) Roja Roja V Incolora Roja Roja

Roja tardia

Roja

TSI A/Ag A/Ag A/A, A/Ag

K/A,K/Ag A/A, K/A

A/Ag

A/Ag

A/Ag(K/A

A/Ag

LIA K/K K/A,

K/K(E.aerog)

K/K

K/A

K/K

K/K

K/A

K/A

VP Negativ

o Positivo Positivo Positivo v Positivo negativo

Negativo

CITRATO

Negativo

Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo positivo Positivo

INDOL Positivo Negativo Negativo Negativo negativo Positivo negativo Positivo

ROJO METILO

Positivo Negativo Negativo Negativo V Negativ

o positivo Positivo

Movilidad

Positivo Positivo Positivo Positivo Negativo Negativ

o positivo Positivo

UREASA Negativ

o Negativo Negativo Negativo V

positivo

V(lento) V

SH2 Negativ

o Negativo Negativo Negativo Negativo

Negativo

positivo Negativ

o

ODC V V Positivo v Negativo Negativ

o negativo Positivo

Pigmento (25C)

negativo

negativo v Negativo negativo Negativ

o negativo

negativo

CARACTERISTICAS GENERALES

Bacilos cortos Gram negativos.

No esporulados.

Mtiles (flagelos pertricos) o

no.

Capsulados o no

Presencia de pilis.

BIOQUMICA

Anaerobios facultativos.

Catalasa positiva.

Oxidasa negativa.

Fermentan glucosa y/o lactosa

Reducen nitratos a nitritos.

MEDIOS DE CULTIVO

Medios No Selectivos

Agar Sangre

Medios Selectivos/Diferenciales:

Agar Mc Konkey

Agar EMB

Agar TSI

Mc Konkey: Colonias rosadas (fermentan

lactosa) y colonias transparentes (no fermentan lactosa).

Agar EMB: Colonias azules (fermentan lactosa)

y colonias transparentes (no fermentan lactosa).

MEDIOS DE CULTIVO

Medios Altamente Selectivos:

Agar SS

Agar XLD

Agar Hektoen Entrico.

Agar SS

Agar XLD

PRUEBA TSI

Permite determinar las siguientes

pruebas bioqumicas:

Fermentacin de Lactosa

Fermentacin de Glucosa

Formacin de H2S

Formacin de Gas

PRUEBA TSI

Resultados en Superficie inclinada/fondo:

Alcalina/alcalina: Lactosa (-), Glucosa (-)

Pseudomonas

Acida/Acida: Lactosa (+) y Glucosa (+)

E. coli, Klebsiella, Citrobacter, Enterobacter, etc.

Alcalina/Acida: Lactosa (-) y Glucosa (+)

Salmonella (H2S+), Shigella (H2S -), Yersinia.

PRUEBA TSI

Resultados en Superficie inclinada/fondo:

Produccin de H2S

Produccin de pigmento negro: H2S (+)

No pigmento negro: H2S (-)

Produccin de Gas

Presencia de burbujas: Gas (+)

No burbujas: Gas (-)

OTRAS PRUEBAS BIOQUIMICAS:

Produccin de ureasa

Produccin de indol

Utilizacin del citrato

Motilidad

Descarboxilacin de lisina, arginina,

ornitina

Produccin de fenilalanina

desaminasa

Esta prueba sirve para determinar la

presencia de enzimas oxidasas.

Prueba de la Oxidasa

La prueba de la oxidasa se usa sobre todo

para

Identificar todas las especies de

Neisseria (+)

Diferenciar Pseudomonas de los

miembros oxidasa negativos de las

enterobacterias.

El reactivo de la oxidasa ms recomendado es la

solucin acuosa al 1% de diclorhidrato de

tetrametil-p-fenilendiamina (reactivo de

Kovacs).

Realizacin de la prueba:

1.Mtodo en placa directa

Agregar directamente 2-3 gotas de

reactivo a algunas colonias. No inundar

toda la placa y no invertirla.

Observar los cambios de color. Con el

reactivo de Kovacs la reaccin se produce

en unos 10-15 segundos.

Prueba del Citrato

Esta prueba sirve para determinar si un organismo es capaz de utilizar citrato como nica fuente de carbono y

compuestos amoniacales como nica fuente de nitrgeno en su metabolismo, provocando una alcalinizacin del

medio. Entre las enterobacterias estas caractersticas se dan en los siguientes gneros: Enterobacter, Klebsiella,

Serratia, Citrobacter y algunas especies de Salmonella. Sin embargo, Escherichia, Shigella, Salmonella typhi y

Salmonella paratyphi son incapaces de crecer con esos nutrientes.

Se cultiva el microorganismo en agar citrato de Simmons. Este medio

contiene citrato de sodio y fosfato de amonio como fuentes de carbono

y de nitrgeno respectivamente y azul de bromotimol como indicador de

pH. Slo las bacterias capaces de metabolizar el citrato podrn

multiplicarse en este medio y liberarn iones amonio lo que, junto con la

eliminacin del citrato (cido), generar una fuerte basificacin del

medio que ser aparente por un cambio de color del indicador de pH, de

verde a azul.

Simmons Citrato Agar

Medio utilizado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la capacidad de usar citrato como nica fuente de

carbono y energa.

Fundamento

En el medio de cultivo, el fosfato monoamnico es la nica fuente de nitrgeno y el citrato de sodio es la nica fuente

de carbono. Ambos componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano. Las sales de fosfato forman un sistema

buffer, el magnesio es cofactor enzimtico. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y el azul de bromotimol

es el indicador de pH, que vira al color azul en medio alcalino. El medio de cultivo es diferencial en base a que los

microorganismos capaces de utilizar citrato como nica fuente de carbono, usan sales de amonio como nica fuente

de nitrgeno, con la consiguiente produccin de alcalinidad.

El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a travs del ciclo del

cido tricarboxlico. El desdoblamiento del citrato da progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este ltimo, en

presencia de un medio alcalino, da origen a cidos orgnicos que, al ser utilizados como fuente de carbono, producen

carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de la produccin de citrato

permeasa.

Prueba del Indol

Mediante esta prueba se detecta la liberacin de indol en un cultivo bacteriano. Dicha liberacin se debe a la

degradacin del aminocido triptfano mediante el enzima triptofanasa.

Para la realizacin de esta prueba la bacteria se cultiva durante 24-48 horas en un caldo de triptona con NaCl al

0,5% (la triptona presenta abundante triptfano). Para la posterior deteccin del indol se usa el reactivo de Kovacs

Para el control de calidad del reactivo se pueden utilizar cultivos conocidos. Las ms convenientes son Escherichia

coli (indol+) y todas las especies de Klebsiella (indol-).

Si la bacteria posee la enzima triptofanasa, al aadir al medio 5 gotas del reactivo de Kovacs, se producir un anillo

de color rojo en la superficie del caldo y la prueba ser considerada positiva. Si esto ocurre despus de 24 horas, la

prueba se considera completa, pero si es negativo deber incubarse otras 24 horas y repetirse la prueba. Por ello es

conveniente hacer siempre la prueba no en el tubo incubado sino en una porcin de unos 2ml que se retira de l

aspticamente.

SIM Medio

Es un medio semislido destinado a verificar la movilidad, produccin de indol y de sulfuro de hidrgeno en un

mismo tubo.

Es til para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae.

Fundamento

El triptfano es un aminocido constituyente de muchas peptonas, y particularmente de la triptena, que puede

ser oxidado por algunas bacterias para formar indol. En el proceso interviene un conjunto de enzimas llamadas

triptofanasa. El indol producido se combina con el aldehdo del reactivo de Kovacs o de Erlich, para originar un

compuesto de color rojo. Las cepas mviles pueden apreciarse en este medio, por la turbidez que producen

alrededor de la puncin de siembra, mientras que aquellas cepas productoras de sulfhdrico se distinguen por la

formacin de un precipitado negro de sulfuro de hierro a partir del tiosulfato siempre que el medio se mantenga a

un pH mayor a 7.2.

Siembra

A partir de un cultivo de 18-24 horas en medio slido, sembrar por puncin profunda con aguja de inoculacin

recta (no usar ansa con anillo). Se debe inocular el centro del tubo, y la puncin debe abarcar 2 tercios de

profundidad del medio de cultivo desde la superficie. Es importante que la siembra se realice en lnea recta.

Incubacin

Durante 24 horas, a 35-37 C, en aerobiosis.

Luego de la incubacin, agregar 3-5 gotas de reactivo de Kovacs o de Erlich.

Resultados

Cepas mviles: producen turbidez del medio, que se extiende mas all de la lnea de siembra.

Cepas inmviles: el crecimiento se observa solamente en la lnea de siembra.

Cepas SH2 positivas: ennegrecimiento a lo largo de la lnea de siembra o en todo el medio.

Cepas SH2 negativas: el medio permanece sin cambio de color.

Cepas indol positivas: desarrollo de color rojo luego de agregar el reactivo de Kovacs o de Erlich.

Cepas indol negativas: sin cambio de color.

Limitaciones

-En las bacterias aerobias estrictas, que slo crecen en superficie,

la movilidad puede ser difcil de observar.

-Algunas bacterias productoras de melanina como M. morganii,

pueden dar un color parduzco, que no debe confundirse con el

color negro debido a la produccin de cido sulfhdrico.

Simmons Citrato Agar Medio utilizado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la capacidad de usar citrato como nica fuente de carbono y energa. Fundamento En el medio de cultivo, el fosfato monoamnico es la nica fuente de nitrgeno y el citrato de sodio es la nica fuente de carbono. Ambos componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano. Las sales de fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es cofactor enzimtico. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira al color azul en medio alcalino. El medio de cultivo es diferencial en base a que los microorganismos capaces de utilizar citrato como nica fuente de carbono, usan sales de amonio como nica fuente de nitrgeno, con la consiguiente produccin de alcalinidad. El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a travs del ciclo del cido tricarboxlico. El desdoblamiento del citrato da progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este ltimo, en presencia de un medio alcalino, da origen a cidos orgnicos que, al ser utilizados como fuente de carbono, producen carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de la produccin de citrato permeasa.

Siembra

A partir de un cultivo puro de 18-24 horas, sembrar

en superficie un inculo ligero , usando una ansa sin

arrastrar el agar.

Incubacin

A 35-37 C, durante 24-48 horas, en aerobiosis.

Algunos microorganismos pueden requerir hasta 4

das de incubacin.

Resultados

-Positivo: crecimiento y color azul en el pico,

alcalinidad.

-Negativo: el medio permanece de color verde

debido a que no hay desarrollo bacteriano y no hay

cambio de color

Limitaciones

-Si se usa un inculo denso para sembrar el medio de cultivo, puede variar el color del pico del verde al amarillo-

amarronado.

Esto no afecta el color verde del resto del medio de cultivo, pero puede afectar la visualizacin azul de un

resultado positivo.

-Inculos muy densos, pueden originar resultados falsos positivos.

-Cuando se siembra una serie de pruebas bioqumicas a partir del mismo cultivo, se debe esterilizar la aguja de

inoculacin antes de inocular la prueba del citrato o sino inocularla primero. Cualquier arrastre de materia

orgnica puede originar resultados falsos positivos.

Caractersticas del medio

Medio preparado: verde.