Tutor Imunologi

PEMERIKSAAN hCG

DENGAN METODE ELFA

Pande Putu Ayu Patria Dewi/

Endang Retnowati K

1

PENDAHULUAN

Human chorionic gonadotropin ( hCG)

2

chordata

Setelah lahir

gonadotropin

Berasal dari gonad

STRUKTUR hCG

Berat 36.000 dalton

Rantai dan , non kovalen

HormonGliko

protein

Mirip FSH, LH,TSH

3

Sumber: Cole,1997

BENTUK hCGhCG

hyperglycosylated hCG

hCG free subunit

hyperglycosylated hCG

free subunit

sulfated hCG

4

Sumber: clinica

chimica acta 2011

Bentuk Hormon hCG.pptx

FUNGSI hCGmerangsang korpus luteal progesteron

angiogenesis vaskuler uterus

differensiasi cytotrophoblast,

pertumbuhan uterus

merangsang pertumbuhan organ fetus dantali pusat

5

6

Diagram Konsentrasi hCG pada masa kehamilan

(Sumber: Taylor and Martin,1997)

ARTI KLINIS hCG

Kanker

Eklampsia

Kehamilan Ektopik

Mola Hidatidosa

Gynecomastia

Kehamilan

Abortus

Tidak TerjadiFertilisasi

KehamilandenganRuptur

7

METODE ELFA

8

Alat VIDAS dengan metode Enzyme Linked

Fluorescent Assays (ELFA)

PRINSIP PEMERIKSAAN

Sampel yang mengandung hCG dimasukkan ke dalamsumuran yang dilapisi antibodi anti-hCG berlabel alkaline phospatase.

Pencucian

Dicampur dengan substrat 4-Methyl-umbelliferyl phosphate

Produk fluoresens : 4-Methyl-umbelliferone

Deteksi dengan 450 nm 9

ELFA

(Enzyme-Linked Fluorescent Assay)

(Sumber: Anonim,2009)

SPESIMEN Serum

Plasma (EDTA atau Lithium Heparin)

Suhu 2-80C selama 7 hari

Dibekukan pada suhu -2560C

11

PROSEDUR KERJA

Kalibrator, Kontrol ,dan Sampel dipipet masing-masing sebanyak 100 L

Kode dimasukkan dan dipilih HCG

Diamkan pada suhu kamar min 30 menit

Reagen dikeluarkan dari refrigerator

12

lanjutan

SPRs dan strip yang telah digunakan diambildari alat.

Dilakukan pemeriksaan secara otomatis

SPRs dan strip dimasukkan ke alat

13

REAGEN

14

Strip

Reagen

SPR

Strip ReagenSumuran Reagen

1 Sumuran sampel

2-3-4 Sumuran kosong

5 Konjugat: alkaline phosphatase-labeled mouse monoclonal

anti-hCG immunoglobins +1 g/l sodium azide (600L )

6-7 Buffer Pencuci: Sodium fosfat (0,01 mol/l,pH 7,4) + 1 g/l sodium

azide (600L )

8 Buffer Pencuci: diethanolamine DEA (1,1 mol/l atau 11,5 %) pH

9,8 +1 g/l sodium azide (600L )

9 Sumuran Kosong

10 Kuvet dengan substrat : 4-Methyl-umbelliferyl phosphate (0.6

mmol/l) + DEA (0,62 mol/l, atau 6.6%, pH 9.2) + 1g/l sodium

azide (300 L). 15

HASIL

BackgroundSetelahInkubasi

RFV

( Relative Fluorescence

Value)

16

Rentang Nilai Laki-laki: < 3 mIU/ml

Wanita : < 4 mIU/ml

Wanita Menoupase: < 13 mIU/ml

17

Lanjutan.

Wanita Hamil

18

Week Mean (mIU/ml)

Limit values

(mIU/ml)

4-5

5-6

6-7

7-8

8-9

9-10

10-11

11-12

12-13

13-14

Second trimester (14-26)

Third trimester (26-39)

7.400

32.800

52.000

74.000

100.000

105.000

96.000

75.300

66.700

65.900

26.150

27.200

1.500-23.000

3.400-135.300

10.500-161.000

18.000-209.000

37.500-219.000

42.800-218.000

33.700-218.700

21.800-193.200

20.300-166.100

15.400-190.000

2.800-176.100

2.800-144.400

INTERFERENS Hemolisis (hingga kadar 300 mol/ L),

Lipemia (hingga kadar 2 g/L)

Bilirubinemia(hingga kadar 513

mol/L).

19

Keterbatasan Metode

Kehamilan

Kadar Rendah Gejala danPemeriksaan Fisik

Patologis

Penyakit Tropoblastik dan Tumor Germinal

Pemeriksaan > Spesifiik

20

Pemantapan Kualitas

Pada kit baru dilakukan kontrol

Kalibrasi

Setiap 14 Hari

21

22