5 PATOFIZIOLOSKA DIJAGNOSTIKA HEMOSTAZNOG … PATOFIZIOLOSKA... · faktora, bolesti jetre, DIK, oralni antikoagulansi Sekundarna hemostaza Spoljašnji putevi Protrombinsko vreme (PT)

PATOFIZIOLOŠKA PATOFIZIOLOŠKA DIJAGNOSTIKA DIJAGNOSTIKA POREMEPOREMEĆAJA ĆAJA

HEMOSTAZNOG SISTEMAHEMOSTAZNOG SISTEMA

Dr vet. Dr vet. Marko R. Cincovi ćMarko R. Cincovi ć

UNIVERZITET U NOVOM SADUUNIVERZITET U NOVOM SADUPOLJOPRIVREDNI FAKULTETPOLJOPRIVREDNI FAKULTET

DEPARTMAN DEPARTMAN ZZA VETERINARSKU MEDICINUA VETERINARSKU MEDICINUPREDMET: PATOLOPREDMET: PATOLO ŠŠKA FIKA FI ZZIOLOGIJAIOLOGIJA

VEŽBA VEŽBA 55..

PLAN IZLAGANJA

STVARANJE TROMBOCITASTVARANJE TROMBOCITA

PREGLED PREGLED HEMOSTAZNOG SISTEMAHEMOSTAZNOG SISTEMA

KOAGULOPATIJEKOAGULOPATIJE

PATOFIZIOLOŠKI MARKERI U DIJAGNOSTICIPATOFIZIOLOŠKI MARKERI U DIJAGNOSTICIKOAGULOPATIJAKOAGULOPATIJA

KASKADA ODLU ČIVANJA U PATOFIZIOLOŠKOM ISPITIVANJUKASKADA ODLU ČIVANJA U PATOFIZIOLOŠKOM ISPITIVANJUHEMOSTAZEHEMOSTAZE

DIFERENCIJALNA DIJAGNOZADIFERENCIJALNA DIJAGNOZA


MEGAKARIOBLASTMEGAKARIOBLAST


PROMEGAKARIOCITPROMEGAKARIOCIT


MEGAKARIOCITMEGAKARIOCIT


TROMBOCITI TROMBOCITI -- PLATELEPLATELE



KRVNI SUDKRVNI SUD

POVREDAPOVREDA

REFLEKSIN GRČREFLEKSIN GRČ

IZLIVENA KRVIZLIVENA KRVKONTAKTNA REAKCIJAKONTAKTNA REAKCIJA

VAZOKONSTRIKCIJAVAZOKONSTRIKCIJA

ADHEZIJA I AGREGACIJA TR.ADHEZIJA I AGREGACIJA TR.REAKCIJA OSLOBAREAKCIJA OSLOBA ĐĐANJAANJA

FOSFOLIPIDFOSFOLIPIDTROMBOCITATROMBOCITA

VAZOAKTIVNE VAZOAKTIVNE MATERIJEMATERIJE

STVARANJE BELOG TROMBASTVARANJE BELOG TROMBA

KOAGULACIKA KRVIKOAGULACIKA KRVI

TROMBINTROMBINTKIVNI FAKTORITKIVNI FAKTORI

PLAZMINPLAZMIN

AKTIVISANI AKTIVISANI KONTAKTNI ČINIOCIKONTAKTNI ČINIOCI

FIBRINOLIZAFIBRINOLIZA







...I MALO...I MALODETALJNIJE...DETALJNIJE...

ČČINIOCI HEMOSTAZNOG SISTEMAINIOCI HEMOSTAZNOG SISTEMA


TROMBOCITITROMBOCITI

SPECIFIČNI PLAZMATSKI PROTEINISPECIFIČNI PLAZMATSKI PROTEINI

FIBRINOLIZNIFIBRINOLIZNISISTEMSISTEM

KOAGULACIJSKIKOAGULACIJSKISISTEMSISTEM

INHIBITORI INHIBITORI HEMOSTAZNOG HEMOSTAZNOG

SISTEMASISTEMA

KRVNI SUDKRVNI SUD

KOAGULOPATIEKOAGULOPATIE

HEMORAGIČNE DIJATEZE USLED OŠTEĆENJA KAPILARAHEMORAGIČNE DIJATEZE USLED OŠTEĆENJA KAPILARAa)a) Simptomatska purpura (krvarenje u sluzokožama)Simptomatska purpura (krvarenje u sluzokožama)b)b) Alergijska purpuraAlergijska purpurac)c) CC--avitaminoza i Pavitaminoza i P --avitaminozaavitaminoza

H.D. USLED POREMEĆAJA KOLI ČINE I FUNKCIONALNOG STANJA TR.H.D. USLED POREMEĆAJA KOLI ČINE I FUNKCIONALNOG STANJA TR.a)a) Trombocitopenija (primarna i sekundarna)Trombocitopenija (primarna i sekundarna)b)b) TrombocitostenijaTrombocitostenija

HEMORAGIČNE DIAJTEZE USLED POREMEĆAJA KOAGULACIJE KRVIHEMORAGIČNE DIAJTEZE USLED POREMEĆAJA KOAGULACIJE KRVI

NEDOSTATAK TROMBOPLASTINA (HEMOFILIJE)NEDOSTATAK TROMBOPLASTINA (HEMOFILIJE)a)a) Hemofilija A (klasi čna, nedostatak VIII faktora)Hemofilija A (klasi čna, nedostatak VIII faktora)b)b) Hemofilija B (Christmasova boest, nedostatak IX fak tora)Hemofilija B (Christmasova boest, nedostatak IX fak tora)c)c) Hemofilija usled nedostatka predhodnika tromboplast inaHemofilija usled nedostatka predhodnika tromboplast inad)d) Ostale hemofilijeOstale hemofilije

NEDOSTATAK PROTROMBINANEDOSTATAK PROTROMBINAa)a) UroUrođđena hipoprotrombinemijaena hipoprotrombinemijab)b) KK--avitaminozaavitaminozac)c) Trovanje dikumarolom i njegovim derivatimaTrovanje dikumarolom i njegovim derivatimad)d) Oštećenje parenhima jetreOštećenje parenhima jetre

HIPOKALCEMIJAHIPOKALCEMIJA

POVEĆANA KONCENTRACIJA HEPARINA I SLI ČNIH SUPSTANCIPOVEĆANA KONCENTRACIJA HEPARINA I SLI ČNIH SUPSTANCI

AA--/HIPOFIBRINOGENEMIJA, FIBRINOLIZA/HIPOFIBRINOGENEMIJA, FIBRINOLIZA

KOAGULOPATIEKOAGULOPATIE


VASKULARNA I VASKULARNA I TROMBOCITNA TROMBOCITNA KOMPONENTAKOMPONENTA

TEST KAPILARNETEST KAPILARNEOTPORNOSTIOTPORNOSTI

BROJ TROMBOCITABROJ TROMBOCITAVREME KRVARENJAVREME KRVARENJA

KOAGULACIJA KRVIKOAGULACIJA KRVIUNUTRAŠNJI SISTEMUNUTRAŠNJI SISTEM

AKTIVACIJEAKTIVACIJEFaktori XII, XI, VIII, IXFaktori XII, XI, VIII, IX

ZAJEDNIČKI PUTZAJEDNIČKI PUTPROTROMBIN (F. X,V)PROTROMBIN (F. X,V)

TROMBINTROMBIN

SPOLJAŠNJI SPOLJAŠNJI SISTEM SISTEM AKTIVACIJEAKTIVACIJEF. VIIF. VII

AKTIVISANO AKTIVISANO PARCIJALNOPARCIJALNO

TROMBOPLASTINSKO TROMBOPLASTINSKO VREMEVREME

TRANSFORMACIJATRANSFORMACIJAFIBRINOGENAFIBRINOGENA

TROMBINSKO VREMETROMBINSKO VREME

PROTROMBINSKO PROTROMBINSKO VREMEVREME

STABILIZACIJA FIBRINASTABILIZACIJA FIBRINAF. XIIIF. XIII

RASTVORLJIVOST RASTVORLJIVOST KOAGULUMAKOAGULUMA

U UREJIU UREJI

FIBRINOLIZAFIBRINOLIZAEUGLOBULINSKA LIZAEUGLOBULINSKA LIZA

KOAGULUMAKOAGULUMA


/Hiperfibrinogenemija,DIK, Heparin, Inhibitori faktora II

Vreme stvaranja trombinskog ugruška (TCT)

HemofilijeTeška vWBHeparin...

Sekundarna hemostazaUnutrašnji putevi

Aktivisano parcijalno tromboplastinsko vreme (aPPT)

Poremećaj K-vit. zavisnih faktora, bolesti jetre, DIK, oralni antikoagulansi

Sekundarna hemostazaSpoljašnji putevi

Protrombinsko vreme (PT)

Kvantitativni poreme ć.tr.vWB

Primarna hemostazaVreme krvarenja

Kvantitativni poreme ćaji trombocita

TrombocitiPrimarna hemostaza

Broj svih elemenata i razmaz

Poremećaj u :Mehanizam istraživanjaPregledni test

PREGLEDNI TESTOVI PACIJENATA SA POREMEĆENOM HEMOSTAZOM


NPPPNNKOAGULACIONIKOAGULACIONI

P ILI NNNNPPTROMBOCITNITROMBOCITNI

N ILI PNNNNN ILI PVASKULARNIVASKULARNI

Test kapilarne rezistencije

Trombinsko vereme

PTaPTTBroj tr.Vreme krvarenja

PoremećajPoremećaj

ELIMINACIONI TESTOVIELIMINACIONI TESTOVI

N N –– Normalno; P Normalno; P –– PatološkoPatološko


ISPITIVANJE VASKULARNIH POREME ĆAJAISPITIVANJE VASKULARNIH POREME ĆAJATest kapilarne otpornostiTest kapilarne otpornosti

OdreOdređđivanje vremena krvarenja po Ajviju ivanje vremena krvarenja po Ajviju

ISPITIVANJE TROMBOCITNIH POREMEĆAJAISPITIVANJE TROMBOCITNIH POREMEĆAJAPregled razmaza krviPregled razmaza krvi

Pregled razmaza koštane sržiPregled razmaza koštane sržiOdreOdređđivanje broja tr.ivanje broja tr.

OdreOdređđivanje adhezivnosti tr. in vivoivanje adhezivnosti tr. in vivoIspitivanje agregabilnosti trombocitaIspitivanje agregabilnosti trombocita

ISPITIVANJE KOAGULACIONIH POREME ĆAJAISPITIVANJE KOAGULACIONIH POREME ĆAJAAktivisano parcijalno tromboplastinsko vremeAktivisano parcijalno tromboplastinsko vreme

OdreOdređđivanje protrombinskog vremenaivanje protrombinskog vremenaOdreOdređđivanje trombinskog vremenaivanje trombinskog vremena

Parakoagulacioni testoviParakoagulacioni testoviOdreOdređđivanje funkcijske aktivnosti antitrombina IIIivanje funkcijske aktivnosti antitrombina III

ODREODREĐĐIVANJE POREMEĆAJA FIBRINOLIZNOG SISTEMAIVANJE POREMEĆAJA FIBRINOLIZNOG SISTEMAEuglobulinsko vreme lize koagulumaEuglobulinsko vreme lize koaguluma

Kvalitativno odreKvalitativno odre đđivanje razgradnih proizvoda fibrina i/ili fibrinoge naivanje razgradnih proizvoda fibrina i/ili fibrinoge na

Aparat za merenje krvnog pritiska sa manžetnom.


Test Test kapilarnekapilarne otpornostiotpornosti ((RumpelRumpel --LeedovLeedov testtest ))

POTREBAN MATERIJALPOTREBAN MATERIJAL

IZVOIZVOĐĐENJEENJE

Na nadlaktici pancijenta naduvati manžetnu i držati je 5 minuta izme đu prose čnog sistolnog i dijastolnog pritiska.Nakon toga skinuti manžetnu i pošto se uspostavi re cirkulacija i povu če venska staza, pregleda se koža podlaktice i utvr đuje se prisustvo i brojnost petehija (sitnih, ta čkastih krvarenja)

TUMAČENJE NALAZATUMAČENJE NALAZA

Ako je otpornost kapilara normalna, primeti ćemo 0-10 tačkica.Pojava ve ćeg broja petehija ukazuje na vaskularni hemoragijsk i sindrom (infektivni, purpure, skorbut, smanjen broj i porem ećena funkcija Tr)

Aparat za merenje krvnogh pritiskaLancetaFiltar papirŠtoperica


OdreOdređđivanje vremena krvarenja po Ajviju (Ivy)ivanje vremena krvarenja po Ajviju (Ivy)




Staviti manžetnu na nadlakticu i uspostaviti pritis ak od 40 mm Hg (5,2kPa).Zatim se sa volarne strane ekstremiteta izvrši čišćenje alkoholom i ubode sterilna lanceta u potkožje, paze ći da se ne povrede krupniji krvni sudovi (vene) i u klju či se štoperica. Pažljivo se, zatim, svakih 15 sekundi fi ltar-papirom upija krv koja spontano teče iz uboda. Ova procedura se ponavlja dok krvarenje ne prestane. Tada se štoperica isklju či i očita proteklo vreme.

Normalno vreme krvarenja je 2-7 minuta.Produženo vreme krvarenja: smanjen broj tr., poreme ćena fja tr., poreme ćena kontraktilnost krvnih sudova, vWB.

!!!!!!Ovaj test daje normalne vrednostiOvaj test daje normalne vrednosti

u poreme ćajima koagulacionog sistema,u poreme ćajima koagulacionog sistema,jer je za hemostazu iz sitnijih krvnih sudova važnajer je za hemostazu iz sitnijih krvnih sudova važna

funkcionalnost k.s. i stvaranje funkcionalnost k.s. i stvaranje trombocitnog čepa trombocitnog čepa

Satelitizam Tr.

Morfologija:Platele su grupišu oko neutrofila.

Nalaz u:EDTA in vitro


Pregled razmaza krviPregled razmaza krvi

Gigantske platele

Morfologija:Platele ve će od Er

Nalaz u:Mijeloproliferativni i Mijelodisplasti čni poreme ćaji



Large Platelets

MorfologijaManji od Er ali ne manji od 1/3 veličine Er

Nalaz u:Mijeloproliferativni i mijelodisplastični sindromGrey platelet syndrome



Mikro grudvice

Morfologija:Fibrinski filamenti, platele i leukociti zajedno nagomilani

Nalaz u:In vitro artefakt uzrokovan venesekcijomSmanjenom broju Er, Leu i Tr (jer su vezani)



Nagomilavanje platela

Morfologija:Male gomilep platela

Nalaz u:In vitro artefakti uzrokovani sa EDTA

Teška venesekcija



Wiskott Aldrich Syndrome

Morfologija:male platele.

Patognomonično



Grey Platelet sindrom

Morfologija:Degranulisane platele.

Nalaz u:Kardio-pulmonarni bajpas, Leukemije, In vitro




Pregled razmaza koštane sržiPregled razmaza koštane srži



• Megakariociti čine 1-5% svih mladih ćelija trombocitne loze, a zreli megakariociti čine i do 70% ćelija trombocitne loze.

• Povećan broj elemenata trombocitne loze nalazi se u trombocitozama, a umereno povećan ili normalan broj razvojnih elemenata sreće se u izvesnim trombocitopenijama (idiopatska trombocitopenijska purpura).

• Snižen broj megakariocita ili njihovo odsustvo je karakteristika amegakariocitnih trombocitopenija.




OdreOdređđivanje broja trombocitaivanje broja trombocita

1% rastvor amonijum1% rastvor amonijum --oksalata (profiltriran i potpuno bistar)oksalata (profiltriran i potpuno bistar)Melanžer za brojanje leukocitaMelanžer za brojanje leukocitaNeubauerova komoraNeubauerova komoraPetrijeva šolja sa vlažnom hartijomPetrijeva šolja sa vlažnom hartijomMikroskopMikroskop


IZVOIZVOĐĐENJEENJEU melanžer uvu ći rastvor oksalata do oznake 0,5. Potom uvula čitiU melanžer uvu ći rastvor oksalata do oznake 0,5. Potom uvula čiti krv dok nivo oksalata ne krv dok nivo oksalata ne dostigne nivo 1. Potom se u melanžer uvla či rastvor oksalata do dostigne nivo 1. Potom se u melanžer uvla či rastvor oksalata do oznake 11. oznake 11. Potom se tri minuta meša melanžer i napuni se komor ica. NapunjenPotom se tri minuta meša melanžer i napuni se komor ica. Napunjen a komorica se postavlja u a komorica se postavlja u Petrijevu šolju, da bi se TR istaložili, a vlažna h artija spre čaPetrijevu šolju, da bi se TR istaložili, a vlažna h artija spre čava isušivanje komorice i deformaciju va isušivanje komorice i deformaciju TR.TR.Na kraju se uz spušten kondenzator broje trombociti u 80 polja. Na kraju se uz spušten kondenzator broje trombociti u 80 polja. Izračunavanje:Izračunavanje:

N/80x400x10x20 x10N/80x400x10x20 x10 ^̂6/6/L = L = Br.tr.xBr.tr.x 10^9 /L10^9 /L

U U trombocitopatijamatrombocitopatijama jeje brojbroj trombocitatrombocita najčešće najčešće nepromenjennepromenjen !!!!!!

BrojBroj tr. u tr. u jednomjednom poljupolju

1 1 poljepolje jeje 1/400mm1/400mm ²²Broj tr. u Broj tr. u 11mm²mm²

Br. tr. u Br. tr. u 1mm1mm ³³

RazblaženjeRazblaženje

Br.tr. / LBr.tr. / L

SkalpelPribor za brojanje trombocita


OdreOdređđivanje adhezivnosti trombocita in vivoivanje adhezivnosti trombocita in vivo



Broj trombocita se najpre odredi u venskoj krvi koj a se, nakon što je isteklo prvih 2-3 ml krvi, direktno uliva u plasti čnu ili silikonsku epruvetu.Zatim se nanadlakticu drugog ekstremiteta postavlja manžetna aparata za merenj krvnog pritiska i podesi se na 40 mm Hg, i na čistoj podlaktici se napravi rez skalpelom dužine 10 mm i dubine 1mm.Iz svake kapi krvi koja se pojavi na mestu reza uzm e se uzorak u melanžer i odre đuje broj trombocita. Upoređivanjem broja trombocita u poslednjem melanžeru sa brojem trombocita u venskoj krvi izračunava se % adhezivnosti:


% ADHEZIVNOSTI TR. = % ADHEZIVNOSTI TR. = X100X100Broj tr.u venskoj krvi Broj tr.u venskoj krvi –– Broj tr. u zadnjem uzorkuBroj tr. u zadnjem uzorku

Broj tr. u venskoj krviBroj tr. u venskoj krvi

Broj tr u venskoj krvi je za 30% viši u odnosu na i spitivani poslednji uzorak. Dakle adhezivnost tr je preko 30%. % adhezivnosti u vWB trombocitopatijama 5-10%Povišene vrednosti mogu ukazivati na trombofiliju.

Plazma sa i bez trombocitarastvor ADP agregabilnog činioca (1-5 µM/ml)Agregometar


Ispitivanje agregabilnosti trombocitaIspitivanje agregabilnosti trombocita




Iz krvi, koja je uzeta sa antikoagulansom pripremit i plazmu bogatu trombocitima i plazmu bez trombocita (koja se dobija nakon centrifugiranja na 3000 obrtaja tokom 30 minuta).

Koriste ći 0,45 ml palzme sa/bez tr izvrši se baždarenje agr egometra na minimalnu odnosno maksimalnu vrednost svetlosne transparencije.

Nakon ovoga plazmi koja je bogata trombocitima doda je se ADP ili neko drugo agregiraju će sredstvo u koli čini od 0,05ml i u razli čitim koncentracijama, i registruje se kriva promene svetlosne propustljivosti u ispitivanom uzorku olaz me koja je direktni pokazatelj brzine i stepena agregabilnosti in vitro.

Kod ljudi stepen agregabolnosti iznosi 50-70% (misl i se na % svetlosne propustljivosti).

SMANJENA: vWB, aspirin, fenil-butazon.

POVIŠENA: U svim stanjima koja se karakterišu ranim i brzim razvojem makro i mikroangiopatija (diabetes mellitus, hiperlipoprote inemija, arterijska hipertenzija).

U CILJU DETALJNIJEG U CILJU DETALJNIJEG ISPITIVANJA TR,ISPITIVANJA TR,

DANAS SU RAZVIJENEDANAS SU RAZVIJENEMETODE ZA METODE ZA ISPITIVANJE ISPITIVANJE

TROMBOCITNIH GRANULATROMBOCITNIH GRANULA

Vreme koje je potrebno za zgrušavanje plazme, pod u slovom da su svi koagulacioni činioci prisutni u dovoljnoj koli čini i da su normalne aktivnosti, u direktnoj zavisn osti od brzine aktivisanja faktora XII. Ovaj test je grupni test z a procenu koagulacione aktivnosti, pa će sniženje koncentracije i izmenjena biološka aktivno st bilo kog od činilaca unutrašnjeg sistema aktivacije protrombina i zajedni čkog koagulacionog puta, dovesti do produženja vremena koagulacije.


Aktivisano parcijalno tromboplastinsko vremeAktivisano parcijalno tromboplastinsko vreme(Kaolin(Kaolin --cefalinsko verme koagulacije)cefalinsko verme koagulacije)



Citratna plazma, Rastvor kaolina (5mg/ml fiziološkog r astvora),Rastvor cefalina ili neke druge zamene za fosfolipi d trombocita,0,025 M rastvor CaCl 2

0,1 ml citratne palzme i 0,1 ml rastvora cefalina u lije se u epruvetu, izmeša i ostavi jedan do dva minuta u vodenom kupatilu da se mešavina zagrej e.Nakon toga se dodaje 0,1 ml suspenzije kaolina i po sle 2 minuta, uz povremeno nežno mešanje dodaje se 0,1 ml 0.025 M CaCl 2, uz istovremeno pokretanje štoperice.Epruveta se nežno naginje u intervalima od 5-10 sek undi i odredi vreme koagulacije.

Normalne vrednosti APTT se kre ću u rasponu od 35-75 sekundi, zavisno od vrste reag ensa koriš ćenih kao zamena za trombocitni fosfolipid.

Produžene patološke vrednosti se javljaju zbog nedo statka ili gubitka Fletcherovog ili Fitzgeraldovog činioca, faktora XII, XI,IX, VIII,V, X i protrombina , kod teške hipo i dosfibrinogenemije, prisustva heparina i visoke kon centracije razgradnih proizvoda fibrina.Jedino vrednosti faktora VII i XIII ne uti ču na rezultate ovoga testa.

Na modifikaciju APTT zasnivaju se i jednostavni tes tovi za odre đivanje faktora VIII i faktora IX, a jednostavnim sistemom mešanja ispitivane plaz me i plazme bolesnika sa hemofilijom A i B, i nakon toga izvo đenjema APTT dobijaju se preliminarni podaci o tipu poreme ćaja, koji eventualno postoji kod bolesnika. Ako dodatak iste koli čine (obi čno 1/10 dela) normalne plazme plazmi hemofili čara A dovede do istovremene korekcije produženog AP TT, dijagnoza hemofilije u ispitivanom uzorku se može isklju čiti.

APTT se može koristiti i u pra ćenju efekta le čenja heparinom.


Aktivisano parcijalno tromboplastinsko vremeAktivisano parcijalno tromboplastinsko vreme(Kaolin(Kaolin --cefalinsko verme koagulacije)cefalinsko verme koagulacije)


Ovaj test služi za odre đivanje statusa spoljašnjeg sistema koagulacije (fak tora V,VII,X, fibrinogena i protrombina)


OdreOdređđivanje protrombinskog vremenaivanje protrombinskog vremena



Rastvor tkivnog tromboplastina,0,025M CaCl2, Citratna plazma,Epruveta, Vodeno kupatilo, Štoperica

Uzeti krvi i izmešati sa 3,8% rastvorom Na-citrata u odnosu 9:1.

Nakon 15 minuta centrifugiranja na 3000 obrtaja, uz ima se 0,1 ml citratne plazme, uliva se u suvu epruvetu i zagreva u vodenom kupatilu na 37°C.

Nakon toga se u epruvetu doda 0,1 ml rastvora tkivn og tromboplastina, zatim 0,1 ml rastvora CaCl2 i u tom momentu se uklju či štoperica.

Epruveta sa mešavinom se stalno naginje do momenta dok plazma ne koaguliše.U tom trenutku se isklju čuje se štoperica i ošita proteklo vreme.

Protrombinsko vreme se kre će od 11-20 sekundi zavisno od vrste aktivnosti tkiv nog ekstrakta koji se u testu koristi.

PRODUŽENO: U uslovima nedostatka ili smanjene aktiv nosti protrombina, faktora V, VII.X i fibrinogena.

S obzirom da se ovi činioci stvaraju u jetri, pa je potreban vitamin K ( osim za faktor V), pa je protrombinsko vreme produženo u insuficij enciji jetre ili nedovoljnoj/otežanoj reapsorpciji vitamina K.

Trovanje dikumarolom, dovodi do produženog protromb inskog vremena zbog inhibicije vitamina K. Kod ovog trovanja ili dikuma rolskog tretmana protrombinsko vreme je produženo 1,5-2 puta u odnosu na kontrolnu plazmu.

OdreOdređđivanje protrombinskog vremenaivanje protrombinskog vremena



Trombinsko vreme je vreme potrebno za koagulaciju p lazme nakon dodavanja određene koli čine egzogenog trombina.


OdreOdređđivanje trombinskog vremenaivanje trombinskog vremena



Rastvor trombina 10 jedinica/ml, Citratna plazma, V odeno kupatilo, Štoperica

U epruvetu koja se nalazi u vodenom kupatilu unosi se 0,2 ml plazme, a zatim se doda 0,05 ml rastvora trombina, i u tom momentu se uklju čuje štoperica i odre đuje se vreme kada dolazi do stvaranja koaguluma. Test s e izvodi sa uzorkom zdrave i sumnjive-bolesni čke plazme.

TUMAČENJE REZULTATATUMAČENJE REZULTATA

Normalna vrednos TV iznosi izme đu 15 i 20 sekundi.Vrednost koja je 1,5 put ve ća od trombinskog vremena normalne plazme, smatra se sigurnom patološkom vrednoš ću.PRODUŽENO: Lečenej heparinom, hipofibrinogenemija, disfibrinogene mija, u prisustvu specifi čnih antitrombina u imunološkim poreme ćajima i bolestima jetre i bubrega.

Prilikom delovanja trombina na fibrinogen izvesna k oličina molekula fibrin-monomera se ne polimerizuje nego stvara rastvorljive komplekse sa molekulima fibrinogena. Prisustvo pomenutih monomera i fibrinogena se dokazuje parakoagulacioni m testovima, koji se zasnivaju na činjenici da neke materije razlažu ove komplekse i izazivaju žel atinizaciju ispitivane plazme.


Parakoagulacioni testoviParakoagulacioni testovi



PROTAMIN-SULFATNI TEST: U jednu epruvetu uliti 0,5 ml ispitivane palzme, a u drugu 0,5 ml pozitivne kontrolne plazme, a zatim se u obe epruve te dodaje 0,5 ml rasvora protamin sulfata. Mešavine obe epruvete se bez pomeranja inkubiraju 3 0 min na 37°C.Pozitivan nalaz se obeležava sa + i predstavlja st varanje fine fibrinske mreže ili fibrinskih konaca.Prisustvo samo amorfnog materijala daje negativan n alaz, obeležen sa – .

Citratna plazma, Pozitivna kontrolna plazma koja se priprema inkubac ijom tokom 30 minuta na 37°C 0,9ml normalne plazme kojojse dodaje 0,1 ml rastvora trombina (0,2 jed/ml), a stvoreni fibrinski konci tokom inkubacije se otklanjaju centrifugiranjem,1% (10g/l) rastvor potamin-sulfata i 50% rastvor 96% etanola u destilovanoj vodi

ETANOLSKI TEST: Na 0,5 ml ispitivane palzme u jedno j epruveti i 0,5 ml pozitivne kontrolne palzme u drugoj epruveti na sobnoj temperaturi (pri bližno 20°C) dodaje se po 0,15ml rastvora etanola. Sadržaj se pažljivo promeša i pregleda sva kog narednog minuta. Pozitivan nalaz predstavlja želatinizaciju plazme unutar tri minuta .


Parakoagulacioni testoviParakoagulacioni testovi



Pozitivan nalaza, kao posledica povišene trombinske aktivnosti, nalaze se u sindromu DIK, u teškim infekcijama kao i nakon ve ćih hirurških intervencija i predstavljaju zna čajan laboratorijski marker stimulisanosti koagulacionog sistema.

AT III je najzna čajniji prirodni inhibitor koagulacije krvi, koji sv oju inhibitornu aktvnost ostvaruje inaktivacijom trombina i aktivnih koagula cionih činilaca (Xa, IXa, XIa i XIIa).


OdreOdređđivanje funkcijske aktivnosti antitrombina IIIivanje funkcijske aktivnosti antitrombina III


Test-komplet za odre đivanje funkcijske aktivnosti AT III metodom hromoge nih supstrata.



Sa standardnom plazmom u kojoj se nalaze razli čite koncentracije AT III najpre se pripremi standardna kriva. Nakon toga se spektrofot ometrijskim odre đivanjem o čita vrednost AT III, tj. obojenog para-nitroanalina. Ap sorpcija para-nitroanalina merena na 405 nm opada linearno sa porastom koncentracija AT III u plazmi.

Normalne vrednosti AT III su 75-125 jed/dl, a izlag anjem uzorka razli čitim ekstremnim temperaturama izaziva snižavanje AT III. Kod osoba sa naslednim nedostatkom AT III uzimanje oralnih antikoagulanasa dovodi do porasta koncentracije AT III za prose čno 10 jed/dl.

Ovaj test se bazira na činjenici da euglobulinska frakcija plazme sadrži sv e bitne faktore neophodne za zgrušavanje i lizu koaguluma (fibrinog en, aktivatore plazminogena i plazminogen), ali je najve ći deo inhibitora plazmina uklonjen tokom pripremanj a plazme. Iz euglobulinskog precipitata stvoreni koagulum se tokom inkubacije n a 37°C spontano razlaže, a vreme za koje dolazi do kompletnog razaranja koaguluma zavisi od koncentracije prisutnih aktivatora plazminogena kao i samog plazminogena u ispitivanoj plazmi.


Euglobulinsko vreme lize koagulumaEuglobulinsko vreme lize koaguluma


1% RASTVOR SIRĆETNE KISELINE, RASTVOR BORATA (9g NaCl+1g Na-tetrab orata i destilovana voda do 1L), destilovana voda, 0,025 M CaCl2, voden o kupatilo, štoperica.


0,5 ml ispitivane oksalatne plazme se razblaži doda vanjem 8 ml destilovane vode i zakiseli sa 0,15 ml sir ćetne kiseline.Ova mešavina se drži 30 min na +4°C i nakon toga se centrifugira. Posle odvajanja supernatanta,

euglobulinski precipitat se rastvori u boratnom ras tvoru, a nakon dodatka 0,5 ml 0,025 M rastvora CaCl2 stvara se koagulum.Epruveta se inkubira na 37°C i beleži se vreme kada dolazi do kompletnog spontanog razlaganja stvorenog koaguluma.

Normalan koagulum se obi čno razliži za 2-4 sata.

Razlaganje koaguluma za manje od 2h ukazuje na pove ćanu fibrinoliznu aktivnost (ciroza jetre, leukemi čna stanja, maligni tumori pankreasa, karcinom prost ate, kao i sekundarno kod DIK-a).

Sniženje fibrinolizne aktivnosti (euglobulinsko vre me preko 4h) se dešava kod pretromboti čnih stanja ili stanja venske tromboze.


Euglobulinsko vreme lize koagulumaEuglobulinsko vreme lize koaguluma


Analiza se zasniva na pojavi ili odsustvu aglutinac ije čestica lateksa koje su obložene humanim At prema fragmentima E i D, dodatk om ispitivanog seruma.


Kvalitativno odreKvalitativno odre đđivanje razgradnih proizvoda fibrinai/ili fibrinogen aivanje razgradnih proizvoda fibrinai/ili fibrinogen a


Reagenski kompleta Thrombo-Wellco test

IZVOIZVOĐĐENJE ENJE

Po upustvu proizvo đača

TUMAČENJE NALAZA TUMAČENJE NALAZA

POVIŠENJE KONCENTRACIJE RAZGRADNIH PROIZVODA FIBRIN A:Primarna povišena fibrinolizna aktivnost u pulmonal noj emboliji, infarktu miokarda, u postopperativnom periodu, u bolestimaje tre i kod malignih bolesti, kod DIK-a.Uraditi druge parakoagulacione testove u dif.dg. (k oji su normalni u primarnoj povišenoj fibrinoliznoj aktivnosti).

DIFERENCIJALNE DIJAGNOZEDIFERENCIJALNE DIJAGNOZE

--++Formiranje spontanih kolonijaFormiranje spontanih kolonija

++--Povećani reaktanti akutne fazePovećani reaktanti akutne faze

--++Abnormalna citogenetikaAbnormalna citogenetika

--++Klasteri megakariocita u k.s.Klasteri megakariocita u k.s.

--++Retikulinska fibroza kostne sržiRetikulinska fibroza kostne srži

--++SplenomegalijaSplenomegalija

--++Tromboze ili krvarenjaTromboze ili krvarenja

++--Poznati uzrok sek. TrombocitozePoznati uzrok sek. Trombocitoze

--++Hroni čno uve ćan broj TRHroni čno uve ćan broj TR

REAKTIVNA REAKTIVNA TROMBOCITOZATROMBOCITOZA

ESENCIJALNA ESENCIJALNA TROMBOCITEMIJATROMBOCITEMIJA

TROMBOCITOZATROMBOCITOZA


++/-vWF

XIII

+VIII

+IX

+/-+Xi

+XII

++++Fibrinogen

++II

++V

++X

+VII

Vreme krvarenja

TCTaPTTPT

Izaziva produženje Nedostatak

PT- Protrombinsko vreme, aPTT-parcijalno tromboplast insko vreme, TCT-trombinsko vreme


SniženiSniženSniženSniženProduženoProduženoAKUTNI DIK

Normalni ili sniženi

NormalanSniženSniženProduženoProduženoNEDOSTATAK VITAMINA K

NormalniNormalanNormalanSniženNormalnoProduženoBOELSTI JETRE

TROMBOCITI

FAKTOR VIII

FAKTOR V

FAKTOR IIAPTTPTPOREMEĆPOREMEĆAJAJ


PozitivniPozitivniParakoagulacioni testovi

Razgradni proizvodi fibrina-fibrinogena

Fibrinogen

Trombinsko vreme

Protrombinsko vreme

Aktivisano parcijalno tromboplastinsko vreme

-- ,,Broj trombocita

N,N,Vreme krvarenja

Primarna patološka fibrinoliza

Sindrom DIKa


NegativnaNegativnaNegativnaPozitivnaProba otpornosti sudova

NormalanNormalanSmanjenNormalanBroj TR

ProduženoNormalno ili produženo

ProduženoNormalnoVreme krvavljenja

ProduženoProduženoNajčešće normalno

NormalnoVreme zgrušavanja krvi

Hipoprotrombinemija

HemofilijaTrombocitopenija

Hemoragi čne dijateze sudova

Proba

NADAM SE DA ĆE NADAM SE DA ĆE NEKO NEŠTO NEKO NEŠTO

PITATI?!.....PITATI?!.....

Documents

5 PATOFIZIOLOSKA DIJAGNOSTIKA HEMOSTAZNOG … PATOFIZIOLOSKA... · faktora, bolesti jetre, DIK, oralni antikoagulansi Sekundarna hemostaza Spoljašnji putevi Protrombinsko vreme (PT)