2. Besar Sampel Uji 2 Mean

8/16/2019 2. Besar Sampel Uji 2 Mean

1/9

17

17

BAB 4

METODE PENELITIAN

4.1 Jenis Penelitian

Penelitian yang dilaksanakan merupakan penelitian eksperimen laboratoris

dengan rancangan post test only control group design.

4.2 Sampel Penelitian

4.2.1 Kriteria Sampel

Sampel yang digunakan sesuai dengan kriteria ADA-12 (2008) yaitu tidak

porus, tidak memiliki defek permukaan, permukaannya rata, dan warnanya

homogen.

4.2.2 Besar Sampel

Besar sampel minimum ditentukan dengan rumus sebagai berikut

(Lemeshow, 1991):

Keterangan:

n = jumlah sampel tiap kelompok

σ = standar deviasi outcome (SD)

Z1-α = nilai pada distribusi normal standar yang sama dengan tingkat

kemaknaan α (untuk α = 0,05 adalah 1,96)Z1-β = nilai pada distribusi normal standar yang sama dengan kuasa

sebesar diinginkan

μ1 = rerata respon kelompok tidak terpapar

μ2 = rerata respon kelompok terpapar

Berdasarkan rumus tersebut besar sampel minimum per perlakuan adalah 7

sampel.

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

SKRIPSI EFEK SEDUHAN BUNGA ROSELLA ... ASHRI RATNASARI


2/9

18

18

4.3 Variabel Penelitian

a) Variabel bebas : konsentrasi seduhan bunga rosella sebesar 20%,

30%, dan 40%.

b)

Variabel terikat : jumlah koloni Candida albicans (cfu/ml).

c)

Variabel kendali : resin akrilik tipe heat-cured , bentuk dan ukuran

resin akrilik heat-cured, proses pembuatan

seduhan bunga rosella, media Sabouraud

Dextrose Agar (SDA), saliva steril, suhu, serta

lama perlakuan.

4.4 Definisi Operasional

a) Pembuatan seduhan bunga rosella dengan cara: bunga rosella kering

dihaluskan menjadi bubuk. Konsentrasi yang digunakan adalah 20%,

30%, dan 40%. Konsentrasi ini digunakan karena pada uji coba

pendahuluan telah menunjukkan efek dalam menghambat

pertumbuhan koloni Candida albicans pada resin akrilik. Konsentrasi

20% dibuat dengan komposisi 60 gram bubuk bunga rosella kering dan

300 ml akuades steril. Konsentrasi 30% dibuat dengan komposisi 90

gram bubuk bunga rosella kering dan 300 ml akuades steril.

Konsentrasi seduhan 40% dibuat dengan komposisi 120 gram bubuk

bunga rosella kering dan 300 ml akuades steril.

b) Resin akrilik tipe heat-cured adalah resin akrilik yang polimerisasinya

memerlukan pemanasan dalam water bath selama 90 menit pada suhu

70°C dan diikuti dengan pemanasan pada suhu 100°C selama 30 menit

(Bhat and Nandish, 2006).




3/9


4/9

20

20

- vaselin

- bahan separasi (cold mould seal )

-

saliva

- suspensi Candida albicans

- akuades steril

-

larutan Phosphat Buffer Saline (PBS)

- Sabouraud Dextrose Agar

- Sabouraud Broth

4.6.2 Alat Penelitian

-

blender, mortar dan pestle

-

malam merah dengan ukuran 10x10x1 mm

- pot porselen, pisau malam

- kertas selopan, kuas

- bowl dan spatula gips

- kuvet besar, press

- kompor pemanas, panci, spring clamp

- thermometer ukur

-

stopwatch

- amplas

- gelas ukur, tabung reaksi, filter unit minipore 0.2 mm, ose

- syringe injeksi 5 cc, syringe tuberculin 1 cc

- spreader, spiritus brander, petri disc

- alat sentrifugasi, autoklaf

-

vibrator, inkubator




5/9

21

21

Gambar 4.1 Bahan dan alat penelitian: a. Bunga rosella kering; b. aquadest;c. Sabouraud dextrose broth; d. Sabouraud dextrose agar ; e. kuvet; f. press; g. autoklaf;

h. inkubator; i. liquid & powder akrilik heat-cured ; j. sampel akrilik 10x10x1 mm;

k. ose steril; l. spiritus brander




6/9

22

22

4.7 Prosedur Penelitian

4.7.1 Tahap Pembuatan Sampel

Pembuatan sampel dimulai dari persiapan mould. Kemudian dibuat master

model dari malam merah dengan ukuran 10x10x1 mm. Setelah itu dibuat adonan

gips lunak dengan perbandingan air : bubuk = 15 ml : 50 gr, diaduk menggunakan

spatula di atas vibrator selama 30 detik, kemudian dimasukkan ke dalam kuvet

bagian bawah. Master model dari malam merah diletakkan di atas adonan gips

dengan posisi di tengah kuvet dan mendatar sampai tertanam separuh bagian.

Masing-masing kuvet diisi 7 model master kemudian didiamkan hingga mengeras

( setting ) selama kurang lebih 15 menit.

Setelah gips mengeras, permukaan gips diulasi vaselin dan kuvet bagian

atas dipasang dan diisi adonan gips keras dengan perbandingan air : bubuk sesuai

aturan pabrik yaitu 30 ml : 100 gram. Kuvet kemudian ditekan dengan press dan

dimasukkan dalam panic berisi air mendidih untuk mencairkan malam merah.

Setelah 30 menit, pres dan kuvet diangkat, dibuka, kemudian sisa malam merah

dibuang.

Setelah itu dibuat adonan resin akrilik dengan cara bubuk dan cairan

diaduk dalam pot porselen dengan perbandingan volume bubuk : cairan = 5.75 :

2.5 (Bhat and Nandish, 2006). Setelah adonan mencapai bentuk dough,

dimasukkan ke dalam mould pada kuvet yang permukaannya telah diulasi cold

mould seal kemudian ditutup dengan kertas selopan dan kuvet atas dipasang.

Kuvet ditutup kemudian ditekan dengan press. Kuvet dibuka, kelebihan

akrilik dibuang, kemudian proses dengan press diulang kembali. Kuvet kemudian

dipindahkan ke panci. Dilakukan proses curing selama 90 menit pada suhu 70°C




7/9

23

23

kemudian suhu dinaikkan hingga 100°C selama 30 menit kemudian dibiarkan

hingga suhunya sama dengan suhu kamar (Bhat and Nandish, 2006).

Setelah dingin, kuvet dibuka, hasil akrilik diambil, kemudian dihaluskan

dengan amplas di bawah air mengalir, lalu dikeringkan.

4.7.2 Tahap Pembuatan Seduhan Bunga Rosella

Bunga rosella kering dihancurkan menggunakan blender, kemudian

dihaluskan menggunakan mortar dan pestle. Seduhan bunga rosella dibuat dengan

komposisi tiap 100 gram bunga rosella kering ditambah 100 ml akuades steril

yang telah dididihkan. Seduhan dibiarkan selama 3 menit agar mencukupi

terjadinya ekstraksi kandungan yang lengkap (Tsai et al., 2002).

Seduhan bunga rosella 40% dibuat dengan menyeduh 120 gram bubuk

bunga rosella kering dengan 300 ml akuades steril yang telah dididihkan. Seduhan

bunga rosella 30% dibuat dengan menyeduh 90 gram bubuk bunga rosella kering

dengan 300 ml akuades steril yang telah dididihkan. Seduhan bunga rosella 20%

dibuat dengan menyeduh 60 gram bubuk bunga rosella kering dengan 300 ml

akuades steril yang telah dididihkan. Seluruh seduhan dibiarkan selama 3 menit.

4.7.3 Tahap Penghitungan Candida albicans

Saliva diambil dari mahasiswa coba yang memiliki oral hygiene baik,

tidak menggunakan antibiotik, dan tidak terpapar penyakit periodontal. Saliva

dikeluarkan tanpa rangsangan, dikumpulkan dan dilakukan sentrifugasi selama 20

menit pada 2000 rpm untuk mendapatkan supernatan (Muhammad, 2004).

Sterilisasi pada supernatan saliva dilakukan dengan cara saliva dimasukkan dalam

syringe injeksi 5 ml, disaring dengan filter unit Millipore 0.2 pm yang dipasang

pada tempat jarum syringe. Saliva steril dimasukkan dalam tabung reaksi steril.




8/9

24

24

Sterilisasi lempeng akrilik dilakukan dengan menggunakan autoklaf 121°C

selama 18 menit. Lempeng akrilik kemudian dimasukkan ke dalam saliva steril

selama 1 jam pada suhu 37°C agar terbentuk pelikel. Lempeng akrilik diambil dan

dibilas dengan larutan PBS dua kali untuk membersihkan dari kotoran yang

menempel. Lempeng akrilik kemudian dikontaminasikan dengan Candida

albicans dengan cara dimasukkan ke dalam tabung yang berisi suspensi Candida

albicans sesuai dengan standar McFarland yaitu 108 cfu/ml lalu diinkubasi selama

24 jam pada suhu 37°C. Sampel dikeluarkan dan dibilas dengan PBS dua kali

(Tantri dkk., 2011).

Sampel direndam dalam seduhan bunga rosella 20%, 30%, dan 40%

selama 30 menit. Sampel kelompok kontrol direndam dalam tabung reaksi

akuades steril. Sampel kemudian dikeluarkan, dibilas dengan PBS dua kali,

kemudian dimasukkan ke dalam Sabouraud broth 10 ml lalu divibrasi dengan

vibrator selama 30 detik.

Pada masing-masing Sabouraud broth kemudian diambil 0.1 ml suspensi

Candida albicans menggunakan syringe tuberculin 1 cc, diteteskan pada

Sabouraud Dextrose Agar, dilakukan spreading , kemudian diinkubasi selama 48

jam pada suhu 37°C. Setelah itu dilakukan penghitungan jumlah koloni Candida

albicans dengan satuan cfu/ml.

4.8 Pengolahan dan Analisis Data

Data yang diperoleh dari hasil penelitian dianalisis menggunakan

Kolmogorov-Smirnov Test , Levene’s Test , One Way ANOVA dan Least Significant

Difference (LSD) Test .




9/9

25

25

4.9 Alur Penelitian

Sampel akrilik disterilkan dalam autoklaf 121°C 18 menit

Direndam dalam saliva steril selama 1 jam

Direndam

dalam

seduhan

bunga

rosella 20%

selama 30

menit

Direndam

dalam

akuades

(sebagai

kontrol)

selama 30

menit

Dibilas dengan PBS dua kali

Dimasukkan dalam tabung berisi suspensi Candida albicans, diinkubasi 37°C, 24 jam

Direndam

dalam

seduhan

bunga

rosella 30%

selama 30

menit

Masing-masing dibilas larutan PBS 2 kali

Dimasukkan dalam Sabouraud Broth 10 ml, divibrasi 30 detik

Ditanam dalam Sabouraud Dextrose Agar selama 48 jam, 37°C

Koloni Candida albicans dihitung (cfu/ml)

Direndam

dalam

seduhan

bunga

rosella 40%

selama 30

menit



Documents

2. Besar Sampel Uji 2 Mean