HEMOGRAM IN AVTOMATIZIRANA DKS – IZKUŠNJE SNEQAS (SLOVENIAN NATIONAL EXTERNAL QUALITY ASSESSMENT SCHEME)

1. SREČANJE SNEQAS V ORGANIZACIJI DLM-KIKKBLJUBLJANA, MAJ 2010

Doc.dr. Milan Skitek, EurClinChem

1. Uvod3. Razvoj SNEQAS-H4. Kontrolne krvi in evaluacija5. Logistika sheme presoje 1 vzorca (single

challenge EQAS) 7. Rezultati medlaboratorijskih primerjav 8. Zaključki, predlogi za izboljšave.

Uvod

SNEQAS-H je po obsegu majhna shema z veliko ambicijo povezati laboratorije v

nacionalnem in mednarodnem prostoru s ciljem dvigovanja nivoja laboratorijske

hematologije.

Razvoj

Od 1978 do 1992 SNEQAS-H vključuje le presojo hemoglobina z lastnim hemolizatom živalske ali humane krvi

1991/92 pilotna študija z lastno, stabilizirano kontrolno krvjo (SKK: kombinacija klinično neuporabne humane krvi negativne na hepatitis B, C in HIV, njeni stabilizirani/fiksirani derivati in fiksirani piščančji eritrociti za simulacijo humanih levkocitov) za hemogram analizatorjev na Coulter principu (cca 60 laboratorijev)

Od 1993 redna uporaba SKK za hemogram in neobarvanih razmazov krvi za presojo ročne DKS (4 krat letno, > 150 laboratorijev

Od 2004 minimalno obdelana sveža kri (MOSK) donorjev na transfuziji zbrana v CPDA in uporabljena za hemogram in avtomatizirano DKS

Od 2007 uporabljeni tudi komercialni kontrolni materiali krvi za hemogram in avtomatizirano DKS (avto-DKS).

Evaluacija

Lastni kontrolni materiali alikvotirani po 2.0 ml v vakumske epruvete

Testiranje homogenosti: prvi, srednji, zadnji vzorec in 2 dodatna v vsaki seriji na določenem analizatorju.

Kriterij sprejemljivosti: znotraj serijska neponovljivost ≤ Lkci (2.0 %), Erci (1.0 %) and Tromb (3.5 %).

Skitek M. Practical assessment of the suitability of IQC control materials in haemocytometry based on biologic goals. Accred Qual Assur 2003; 8:514-1.

Evaluacija-nad.

Sprejemljivi in primerljivi matriks efekti med 4 “referenčnimi laboratoriji” z določenimi analitskimi sistemi pod najboljšimi rutinskimi pogoji, vključenimi v 2 mednarodni EQAS: KV% za Lkci ≤ 5.0 %, Erci in Hb ≤ 3.0 %, MCV ≤ 3.5 %, Plt ≤ 10.0% in MPV ≤ 5.0 %.

Ciljne vrednosti (CV): mediana vsaj 4 “ref” laboratorijev v 2 dnevnem testiranju izven serij (10-20 krat) ali celokupna povprečna vrednost po izločitvi ubežnikov (± 3SD).

Meje sprejemljivosti (MS) od CV (± %): do 2000 spremenljive meje glede na neparametrično obdelavo rezultatov 4 “ref.“

laboratorijev: MS = 2.5 X Q1-Q2/1.35 Zadnjih 10 let fiksne MS na podlagi modela bioloških variabilnosti znotraj in med

osebki ter izračunov celostne napake v preprosti presoji 1 vzorca: WBC 8.0

(10.0), RBC in Hb 3.0 (4.0), Ht 5.0 (7.0), MCV 3.0 (5.0), Tromb 10.0 (20.0) in MPV 5.0

(10.0) %.

Skitek M. Ten years experience of home made haemocitometry control for complete blood count in

Slovenian national external quality assessment scheme. EQAnews 2002; 13/3:29-31.

Skitek M. Acceptability limits based on biology goals in haematology EQAS. Accred Qual Assur 2005; 10/ 3: 112-15.

Evaluacija-nad.

Logistika

Vakumske epruvete s krvno kontrolo odposlane udeležencem z redno pošto v skladu s priporočili in zakonodajo

Razvit računalniški program za obdelavo rezultatov, ki so prikazani številčno in diagramsko za vse laboratorije in posameznega udeleženca (koda) za določen parameter hemograma in avtomatizirane DKS. Obdelava rezulatov je parametrična in neparametrična z izračunom mediane za vse laboratorije ne glede na analitski sistem.

Logistika-nad.

Končno poročilo vsebuje celosten histogram znotraj katerega je označen rezultat in odstopanje udeleženca od CV (aktualno in zadnjih 9 SNEQAS). Prikazane so tudi MS in osnovna statistika vseh udeležencev (X, Mediana, SD in KV%).

Automatizirana DKS se izraža v % in izračunava s (ne)parametrično statistiko po anlitskih sistemih, rezultati pa so prikazani po razredih (10). Ciljni razred (CR) se določi glede na X vrednost vseh udeležencev, ki je lahko drugačna od mediane. Sprejemljivost rezultata je določena s CR ± 1 razred in prikazana grafično (smejčki).

Preglednica prikazuje koeficiente variacij KV(%) vseh Preglednica prikazuje koeficiente variacij KV(%) vseh osmih serij povzetkov rezultatov kontrol pri sveži krvi in osmih serij povzetkov rezultatov kontrol pri sveži krvi in

izračuni, , SD in KV(% ) celokupne vrednosti.izračuni, , SD in KV(% ) celokupne vrednosti.

REZULTATI: REZULTATI: Preglednica 1: KV(%) osmih serij kontrol sveže krvi Preglednica 1: KV(%) osmih serij kontrol sveže krvi (obdobje 2006 do 2009)(obdobje 2006 do 2009)

Erci Lkci Tromb Hb MCV

KV(%) 2,22 6,67 11,34 1,97 2,33

KV(%) 2,18 7,79 12,48 2,23 3,03

KV(%) 2,33 8,65 18,49 2,56 1,98

KV(%) 2,85 7,21 19,00 2,49 3,59

KV(%) 2,24 9,58 13,67 2,37 2,19

KV(%) 2,35 5,90 12,57 2,00 2,32

KV(%) 2,80 7,82 12,35 2,00 2,68

KV(%) 2,48 8,12 15,05 2,27 2,27

N 8 8 8 8 8

X 2,43 7,72 14,37 2,24 2,55

SD 0,260 1,145 2,914 0,230 0,530

KV (%) 10,70 14,83 20,28 10,27 20,78

..

Preglednica 2: KV(%) osmih serij povzetkov rezultatov kontrol stabilizirane Preglednica 2: KV(%) osmih serij povzetkov rezultatov kontrol stabilizirane krvi (obdobje 2006 do 2009)krvi (obdobje 2006 do 2009)

Erci Lkci Tromb Hb MCV

KV(%) 2,56 9,13 8,65 2,22 2,46

KV(%) 2,34 3,97 9,56 2,63 2,41

KV(%) 2,48 9,97 9,97 2,52 2,62

KV(%) 2,63 7,39 10,20 2,42 3,34

KV(%) 2,36 3,65 9,30 2,16 2,53

KV(%) 2,34 4,45 7,75 1,86 2,76

KV(%) 2,35 13,78 8,79 2,12 3,13

KV(%) 2,33 5,32 8,72 2,19 2,80

N 8 8 8 8 8

X 2,42 7,21 9,12 2,27 2,76

SD 0,117 3,563 0,800 0,247 0,329

KV (%) 4,8 49,42 8,77 10,87 11,94

..

Preglednica 3: Primerjava povprečnih vrednosti koeficientov variacij KV (%) Preglednica 3: Primerjava povprečnih vrednosti koeficientov variacij KV (%) 8 kontrol sveže in stabilizirane krvi z izračunom F in t vrednosti s 8 kontrol sveže in stabilizirane krvi z izračunom F in t vrednosti s pripadajočimi p vrednostmi za vse preiskave.pripadajočimi p vrednostmi za vse preiskave.

Erci Lkci Tromb Hb MCV

F (p) 4,9383(0,026)

9,6832(0,004)

13,2678 (0,001)

1,1533 (0,428)

2,5951 (0,116)

t (p) 0,099(0,9224)

0,385(0,7057)

4,914(0,0002)

0,251(0,8051)

0,952(0,3572)

..

Preglednica 4: Preglednica prikazuje dosežene rezultate udeležencev pri levkocitih in Preglednica 4: Preglednica prikazuje dosežene rezultate udeležencev pri levkocitih in

trombocitih 8 kontrol sveže krvi z izračunom F vrednosti s pripadajočimi p vrednostmi.trombocitih 8 kontrol sveže krvi z izračunom F vrednosti s pripadajočimi p vrednostmi.

N: število vseh rezultatov udeležencevN-in: rezultati znotraj predefiniranih kriterijev odstopanj

LevkocitiN

LevkocitiN-in

TrombocitiN

TrombocitiN-in

Rang 149 - 167 112 - 141 149 - 167 71 - 105

X 159,125 123,875 158,875 87,625

SD 6,244 8,676 6,034 11,722

F (p) 1,931 (0,186) 3,774 (0,039)

..

Preglednica 5: Preglednica prikazuje dosežene rezultate udeležencev pri levkocitih in Preglednica 5: Preglednica prikazuje dosežene rezultate udeležencev pri levkocitih in

trombocitih 8 kontrol stabilizirane krvi z izračunom F vrednosti s pripadajočimi p vrednostmi.trombocitih 8 kontrol stabilizirane krvi z izračunom F vrednosti s pripadajočimi p vrednostmi.

N: število vseh rezultatov udeležencevN-in: rezultati znotraj predefiniranih kriterijev odstopanj

LkciN

LkciN-in

TrombN

TrombN-in

Rang 145 - 156 45 – 146 145 – 155 97 - 129

X 151,000 112,250 150,625 111,750

SD 3,295 37,617 3,42 10,011

F (p) 130,336 (< 0,001) 8,568 (0,003)

..

Slika 1: KV(%) za vse metode 5 preiskav pri vseh štirih serijah sveže krvi Slika 1: KV(%) za vse metode 5 preiskav pri vseh štirih serijah sveže krvi brez dodatka in seriji z dodatkom K3EDTAbrez dodatka in seriji z dodatkom K3EDTA . .

0102030405060708090

100KV% 07.09.2007 3/07

KV% 28.11.2007 4/07

KV% 06.03.2008 1/08

KV% 28.05.2008 2/08

KV% 01.09.2009 3/09

Zaključki

6 let izkušenj z minimalno obdelano svežo krvjo (MOSK) za hemogram in avto-DKS dokazuje sprejemljive in primerljive matriks efekte za različne analitske sisteme

Navkljub občasnim “izpadom MOSK” v poletnih obdobjih je doseganje kriterijev sprejemljivosti v povprečju za hemogram cca 85%. Problem so trombociti z doseganjem kriterijev cca 55% in višjo variabilnostjo med serijami kontrol v nasprotju s stabilizirano krvjo-SKK (70%). Nasprotno velja za levkocite, kjer dosegamo nižje variabilnosti in boljše doseganje kriterijev pri MOSK. Pri hemoglobinu in MCV ni bistvenih razlik med obema kontrolama.

Zaključki

Avtomatizirana DKS pri MOSK dokazuje stabilne rezultate znotraj celokupnih KV% (korigiranih za ubežnike +/- 3SD) na nivoju 10% za nevtrofilce, 15% za limfocite, 25% za monocite, 35% za eozinofilce in 70% za bazofilce. Razlike znotraj in med različnimi analitskimi sistemi so značilne. Z dodatkom EDTA ne izboljšamo rezultatov.

Obdelava rezultatov avto-DKS po razredih je bila uvedena v primerjavi z ročno-DKS, mediane in sprejemljivost kvantificiranega rezultata nista vedno skladni z “realnim stanjem”.

Izboljšave

Izboljšave na področju:

Stabilizacije, komutabilnosti kontrol in transporta,

Uskladitve kriterijev sprejemljivosti z mednarodnimi trendi in standardi, potrebujemo bolj definirane analitične cilje oz. kriterije sprejemljivosti tudi na podlagi kliničnih zahtev (EQAS → problemski EQAP),

Programske opreme in celostna obdelave podatkov z “odprtim in fleksibilnim” pristopom ter oceno uspešnosti laboratorija (tudi Web aplikacija),

Mednarodna povezava SNEQAS in akreditacija.