Aflatoxin A

Aflatoxinas

UNIVERSIDADE FEDERAL DO MARANHÃOCENTRO DE CIENCIAS SOCIAIS, SAUDE E TECNOLOGIA – CCSST

DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA DE ALIMENTOSDISCIPLINA: ANÁLISE DE ALIMENTOS

BRUNA BRITOJAM BARBOSAPOLYANA CARREIRO

Aspergiluus flavus Aspergiluus pararasiticus

São um grupo de compostos tóxicos; produzidos por certas cepas Aspergiluus flavus e A. pararasiticus;

As mais conhecidas são: B1 e B2A produção é favorecida em temperaturas de 23° a 26°

Aflatoxinas

e G1 e G2

Os alimentos estão constantemente expostos à diversos tipos de contaminação;

Representa um problema de saúde pública; As contaminações ocorrem com maior intensidade

em nozes, amendoins e outras sementes oleosas, incluindo milho e sementes de algodão;

Esta contaminação geralmente está relacionada aos grãos armazenados e rações dadas aos animais,podendo ocorrer desde o processo de germinação até o armazenamento.

Aflatoxinas

Merecem especial atenção por parte da indústria dos alimentos.

As aflatoxinas pode permanecer no alimento após a morte do fungo que as produz, podendo apresentar-se em alimentos onde não são verificadas alterações visíveis.

A exposição a altas concentrações de aflatoxinas produz graves danos

Colônia de Aspergillus flavus em cultivo em uma

placa de Petri.

Aflatoxinas

Possuem importância toxigênica conhecida;

O melhor método para controlar micotoxinas em alimentos: Prevenir.

Aspergillus flavus em grãos de amendoim

Aflatoxinas

DETERMINAÇÃO DE AFLATOXINA

A cromatografia envolve uma série de processos de separação de misturas.

Classificação das técnicas cromatográficas

oDe acordo com o sistema cromatográfico;

oDe acordo com a fase móvel;

oDe acordo com a Fase Estacionária;

oDe acordo com o modo de separação;

As técnicas mais usadas para a quantificação de micotoxinas:

Cromatográficas

o Cromatografia em Camada Delgada (CCD);

o Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE);

o Cromatografia Gasosa acoplada a Espectrometria de Massa (CG/MS).

DETERMINAÇÃO DE AFLATOXINA

FE camada fina aplicada sobre o vidro (sólido)

FM solvente com afinidade contrária a da FE (líquido)

Semelhante à cromatografia em papel, porém mais rápida e com melhor resolução

Técnica

Preparação das placas cromatográficas

Seleção da fase móvel

Revelação dos cromatogramas

adsorventes mais usados: sílica gel G e

alumina G

Aplicação das amostras nas cromatoplacas

Cromatografia em camada delgada

DETERMINAÇÃO DE AFLATOXINA

Cromatografia em camada delgada

DETERMINAÇÃO DE AFLATOXINA

Cromatografia em camada delgada

DETERMINAÇÃO DE AFLATOXINA

Materiais e métodos

• Reagentes: metanol, clorofórmio, KCl e CuSO4;• Na eluição: ácido fórmico, acetato de etila e tolueno e placas cromatográficas de sílica gel;• 36 amostras, sendo 21 de amendoins e 15 de paçoca;• B1, B2, G1 e G2• cromatografia em camada delgada: sistema solvente de eluição: (60:30:10), tolueno, acetato de etila e ácido fórmico;• detecção por comparação visual da fluorescência, frente a luz UV.

Cromatografia em camada delgada

DETERMINAÇÃO DE AFLATOXINA

Segue o fluxograma da técnica de separação, extração e purificação para determinação de aflatoxinas B1, B2, G1 e G2 em amostras de amendoim e paçoca.

Cromatografia em camada delgada

DETERMINAÇÃO DE AFLATOXINA

+150mL de CuSO4+5g de celite-agitar e filtrar

Funil de separação+150mL de H2O+10mL de clorofórmio-agitar por 3 min

+270mL de metanol+30mL de KCl 4%-liquidificador por 5 min-filtrar

+10mL de clorofórmio-agitar por 3 min

Banho de H2O a 80°C até a secura-ressuspender em 500uL de clorofórmio

50g de amostra

150ml do filtrado

150ml do filtrado

5ml da fase clorofórmica

150ml da fase aquosa

5ml da fase clorofórmica

CCD

Cromatografia em camada delgada

DETERMINAÇÃO DE AFLATOXINA

Cromatografia em camada delgada

Discussão

• O método analítico constituído pela cromatografia em camada delgada, com prévia extração líquido-líquido, mostrou-se satisfatório para a determinação de aflatoxinas em amendoim e paçocas;

• Os resultados obtidos nesse estudo confirmam a necessidade do freqüente monitoramento das micotoxinas, especialmente as aflatoxinas, visto que estas são substâncias potencialmente carcinogênicas.

DETERMINAÇÃO DE AFLATOXINA

Cromatografia Líquida de Alta Eficiência

Cromatografia com fase líquida

O termo cromatografia com fase líquida têm sido usado para descrever vários sistemas cromatográficos, incluindo as cromatografias líquido-líquido, líquido-sólido, por troca iônica e de exclusão por volume, que empregam todas uma fase líquida móvel.

DETERMINAÇÃO DE AFLATOXINA

Cromatografia Líquida de Alta Eficiência

o O uso de pressões elevadas ;

o O uso de partículas menores;

o O sítio de adsorção, maior ;

o Uso de colunas menores;

o Volumes menores de amostras;

o Gasto menor de fase móvel;

o Trabalha-se na faixa dos microlitros (µL).

DETERMINAÇÃO DE AFLATOXINA

DETERMINAÇÃO DE AFLATOXINA

Artigo: Determinação de aflatoxina B1 em rações e aflatoxina M1 no leite de propriedades do Estado de São Paulo.

*Autores: (Carlos Augusto Fernandes de OliveiraI; Luciana Soares SebastiãoI; Helena FagundesI; Roice Eliana RosimI; Andrezza Maria FernandesII)

Cromatografia Líquida de Alta Eficiência

DETERMINAÇÃO DE AFLATOXINA

Cromatografia Líquida de Alta Eficiência

A análise de aflatoxinas :

• colunas de imunoafinidade para purificação dos extratos

Quantificação realizada :

• cromatografia líquida de alta eficiência

DETERMINAÇÃO DE AFLATOXINA

Cromatografia Líquida de Alta Eficiência

A AFB1

40% das rações em níveis de

1,0 a 19,5 μg.kg-1

A AFM1

36,7% de amostras de leite positivas variou

de 0,010 a 0,645 μg.L-1

(0,5 μg.L-1) para AFM1

Apenas uma amostra de leite estava acima do limite de tolerância adotado no Brasil.

OBRIGADA!

“Jesus, fala – me da coragem e sobretudo, dá – me coragem. Talvez seja o que mas me falte ainda que me falta tanta coisa.”