16.08.20141 Presentazione per divulgazione Versione per presentazione PRESENTAZIONE Antibiogrammi:...

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Presentazione per divulgazione

Versione per presentazione

 PRESENTAZIONE

Antibiogrammi: principio ed esecuzione

Presentazione per divulgazione in microbiologia nell’ottica di collaborazioni a scopo didattico per le Scuole Medie Superiori.© TIBIO Sagl 2009

© TIBIO Sagl 2009

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 L’antibiogramma:

- Principio: prova di sensibilità (standardizzata) in vitro o in vivo di una specie o di una comunità batterica, ad uno o più prodotti antibiotici.

Specie isolate; Comunità isolate; Materiale biologico;

Viene osservata e testata la RESISTENZA o la SENSIBILITÀ all’antibiotico.

- Antibiotico: sostanza di varia natura chimica prodotta da microorganismi, quali muffe o batteri, o per sintesi, con potere battericida o batteriostatico. Prodotto anche da piante o animali (p.es. olii essenziali dei vegetali).

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RESISTENZA all’antibiotico:

La capacità di proliferazione ed il potere patogeno dei batteri non è influenzato dall’antibiotico (alle concentrazioni testate): l’antibiotico è inutile a fini terapeutici.

SENSIBILITÀ all’antibiotico:

La capacità di proliferazione e/o il potere patogeno dei batteri è influenzato dall’antibiotico (alle concentrazioni testate): l’antibiotico è utile a fini terapeutici.

L’effetto può essere (in funzione di molecola e concentrazione):

Battericida: l’antibiotico uccide le cellule batteriche.

Batteriostatico: l’antibiotico inibisce la crescita batterica.

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 L’antibiogramma:

METODI:

Metodo per diluizioni successive: valutare la sensibilità batterica ad un antibiotico a concentrazioni decrescenti (per MIC o MBC).

10 mg/ml 1 mg/ml 0.1 mg/ml 0.01 mg/ml

0.001 mg/ml

Figure da: www.servier.chServier Medical Art

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 L’antibiogramma:

METODI:

Etest: test epsilometrico: prova di sensibilità su terreno solido mediante inserzione di strisce di carta bibula contenenti concentrazioni scalari di antibiotico.

Figure da: www.servier.chServier Medical Art

10 mg/ml

0.001 mg/ml

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 L’antibiogramma:

METODI:

Metodo per diffusione: prova di sensibilità su terreno solido inoculato (Müller-Hinton agar). Per tutti i batteri di interesse medico (salvo specie esigenti). Per testare uno o più antibiotici.

10 mg/ml

Figure da: www.servier.chServier Medical Art

1 mg/ml

0.1 mg/ml

BIANCO

AA

BB

CC

DD

11.04.23 7Figure da: www.servier.chServier Medical Art

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METODO PER DIFFUSIONE

Protocollo da applicare (previsto per l’attività didattica del LiLu2 con la FASV, Olivone 2009)

Preparazione delle capsule:

Terreno solido (agar) di Müller-Hinton Agar II: 15 ml / capsula (omogeneo!)

Figure da: www.servier.chServier Medical Art

EBOLLIZIONEEBOLLIZIONE

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METODO PER DIFFUSIONE

Protocollo da applicare (previsto per l’attività didattica del LiLu2 con la FASV, Olivone 2009)

Antibiogramma (1):

Inoculo in ogni capsula di 100µl di LB con 104 cellule / ml (1)

Figure da: www.servier.chServier Medical Art

104 ¢ / ml

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METODO PER DIFFUSIONE

Protocollo da applicare (previsto per l’attività didattica del LiLu2 con la FASV, Olivone 2009)

Antibiogramma (2):

Inoculo in ogni capsula di 100µl di LB con 104 cellule / ml (2)

Figure da: www.servier.chServier Medical Art

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METODO PER DIFFUSIONE

Protocollo da applicare (previsto per l’attività didattica del LiLu2 con la FASV, Olivone 2009)

Antibiogramma (2):

Inoculo in ogni capsula di 100µl di LB con 104 cellule / ml (2)

Figure da: www.servier.chServier Medical Art

11.04.23 12Figure da: www.servier.chServier Medical Art

METODO PER DIFFUSIONE

Protocollo da applicare (previsto per l’attività didattica del LiLu2 con la FASV, Olivone 2009)

Antibiogramma (2):

Inoculo in ogni capsula di 100µl di LB con 104 cellule / ml (2)

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METODO PER DIFFUSIONE

Protocollo da applicare (previsto per l’attività didattica del LiLu2 con la FASV, Olivone 2009)

Antibiogramma (3):

Introdurre i dischi di carta imbevuti di olio essenziale e il controllo.

Figure da: www.servier.chServier Medical Art

15 µl di olio essenzialeØ 6 mm

15 µl di H2OØ 6 mmCONTROLLO

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METODO PER DIFFUSIONE

Protocollo da applicare (previsto per l’attività didattica del LiLu2 con la FASV Olivone 2009)

Antibiogramma:

Introdurre i dischi di carta imbevuti di olio essenziale e il controllo.

Figure da: www.servier.chServier Medical Art

15 µl di olio essenziale15 µl di olio essenziale

15 µl di H15 µl di H22OO

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METODO PER DIFFUSIONE

Protocollo da applicare (previsto per l’attività didattica del LiLu2 con la FASV, Olivone 2009)

Antibiogramma (4):

Incubazione a 37°C per 24 ore.

Figure da: www.servier.chServier Medical Art

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METODO PER DIFFUSIONE

Protocollo da applicare (previsto per l’attività didattica del LiLu2 con la FASV, Olivone 2009)

Antibiogramma (5):

Misurazione dell’anello di inibizione.

Figure da: www.servier.chServier Medical Art

15 µl di olio essenziale

15 µl di H2O

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METODO PER DIFFUSIONE

Confronto degli aloni di inibizione, considerare:

Peso molecolare della molecola di antibiotico:più leggera più diffusione.

Idrofobicità della molecola di antibiotico: l’agar è a base di acqua.

Confronto possibile solo tra molecole simili!

Confronto e risultati (protocollo standard):

Alone di ø 1 – 9 mm: specie resistente.specie resistente. Alone di ø10 – 18 mm: specie con resistenza intermedia.specie con resistenza intermedia. Alone di ø > 19 mm: specie sensibile. specie sensibile.

Figure da: www.servier.chServier Medical Art

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FINE PRESENTAZIONE

Grazie per l’attenzione