BIOMOLECULAR AND
RECOMBINANT TECHNOLOGY
GENETIC INFORMATION
Kromosom tanpa histon
RECOMBINANT(GENE CLONING)
PENGKLONAN:Perbanyakan suatu bahan (hayati) yang menghasilkan bahan yang identik dengan bahan asalnya
Klon:sekumpulan individu (bahan) identik yang diperbanyak dari individu (bahan) yang sama
PENGKLONAN GEN
TUJUAN KLONING GEN
1. Mendapatkan gen sebagai penelusur
2. Mendapatkan gen untuk dianalisa urutan
nukleotidanya
3. Mendapatkan gen untuk diekspresikan di sel
inang
TAHAPAN KLONING GEN
1. Isolasi asam nukleat (gen)
2. Penyisipan asam nukleat ke dalam sistem vektor vektor rekombinan
3. Introduksi vektor rekombinan yang membawa sisipan ke dalam sel inang
KROMOSOM EUKARIOTIKNucleus
Chromosome
ENZIM PENGKLONAN GEN
1. ENZIM RESTRIKSIenzim yang berfungsi untuk memotong DNA secara spesifik Enzim Restriksi Endonuklease
2. ENZIM LIGASEenzim yang berfungsi untuk menyambung potongan DNA
ENZIM RESTRIKSI (contoh)Hae III (Haemophilus aegyptius)5’…GGCC…3’3’…CCGG…5’
Hinf I (Haemophilus influenzae)5’…GANTC…3’3’…CTNAG…5’
Mbo I (Moraxella bovis)5’.…GATC….3’3’.…CTAG….5’
Sticky end
Blunt end
Situs pengenalan enzim restriksi
PALINDROM
bila kedua utas DNA tsb masing- masing
dibaca dengan arah yang berbeda akan
memberikan urutan nukleotida yang
sama
ISOLASI cDNA
cDNA (DNA komplementer) :DNA yang dibuat berdasarkan mRNA
sebagai hasil transkripsi gen yang akan ditranslasikan ke dalam bentuk protein
cDNA merupakan refleksi gen secara langsung
mRNA diisolasi ----- dipisahkan dari tRNA dan rRNA
Polyadenin [poly(A)] pada ujung 3’OH
Separasi oligo(dT)
Recommended