7/29/2019 Determinacin semicuantitativa de lectinas en leguminosas
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DETERMINACIN
SEMICUANTITATIVA DELECTINAS EN
LEGUMINOSAS
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LECTINAS
Son glicoprotenas de origen no inmune quereconocen de manera especfica carbohidratosde la superficie celular o en suspensin;
aglutinan clulas y precipitan glicoconjugados.
Se han llamado tambin aglutininas,fitohemaglutininas, hemaglutininas, fitoaglutininaso protectinas.
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LECTINAS COMO FACTORES TXICOS
Se han descrito como molculas altamente txicas; causan un daoirreversible en el intestino delgado, que es su rgano blanco.
La toxicidad de las lectinas se caracteriza por la capacidad de inactivarlos ribosomas.
Las lectinas se unen a grupos glicosdicos de las membranas de lasclulas epiteliales del tracto digestivo, impidiendo la absorcin denutrientes, llegando a una necrosis intestinal.
No califican como factores antinutricionales debido a que no se unen aun nutriente especfico impidiendo su absorcin.
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ESPECIFICIDAD DE LAS LECTINAS
Todas las lectinas poseen dos o ms tipos deunin a carbohidratos, siempre y cuando las
estructuras sacridas sean semejantes osimilares; dicha especificidad entonces, estdada por el grupo glucosdico que poseen las
lectinas.
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SENSIBILIZACIN DE ERITROCITOS
Para que la reaccin de aglutinacin se lleve acabo de manera ms rpida, es necesario elevarla afinidad de las lectinas a los eritrocitos, por loque al sensibilizar, se busca exponer la parteglucosdica de las membranas celulares de loseritrocitos, modificando la carga de estas, para
que de esta manera las lectinas reconozcan msrpido al carbohidrato.
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SENSIBILIZACIN DE ERITROCITOS; TRIPSINA
Al ser una proteasa, la tripsina rompe los enlacespeptdicos de las protenas de la membranacelular de los eritrocitos, de modo que el residuo
glucosdico queda expuesto.
Otras enzimas que podran utilizarse seran otras
proteasas: bromelina, ficina, papana, pronasa yneurominidasa.
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FUNDAMENTO DE LA METODOLOGA
Se basa en el reconocimiento de los carbohidratos presentes enlas membranas de los eritrocitos, de modo que las lectinas que losreconozcan provocarn su aglutinacin; cuantificando la cantidadmnima de lectinas para causar aglutinacin gracias a la
preparacin de diluciones sucesivas de muestra a las que seaadirn los eritrocitos sensibilizados.
Se observar la reaccin de aglutinacin de los carbohidratos
presentes en las membranas celulares de los eritrocitos por accinde las lectinas.
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AGENTES IMPORTANTES EN LA METODOLOGA
Solucin salina isotnica: le dar estabilidadosmtica al medio.
Solucin de tripsina: se utiliza para llevar a cabo lasensibilizacin de eritrocitos.
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RESULTADOS
Eq. Muestra Peso (g) Titulo Cantidad de muestranecesaria para causaraglutinacin (g)
1 Frijol de soya crudo 1.1846 10 23.095
2 Frijol de soya tostado 1.0235 - -
3 Carne de soya (guten) 5.45 4 6812.5
4 Frijol peruano crudo 0.9801 10 19.14
5 Frijol peruano crudo 1.0054 10 19.63
6 Frijol negro crudo 1.0176 10 19.875
7 Frijol negro cocido en lata 5.0614 6 1581.68
8 Frijol negro cocido en casa 5.7225 6 1788.28
9 Garbanzo cocido 5.0057 2 25028.5
10 Garbanzo crudo 0.9764 2 4882
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CLCULOS
Frijol de soya crudo
Tubo 1 2 3 4 5 6 10
Cantidadinicial 23650 11825 5912.5 2956.25 1478.12 739.06 46.19
Cantidadfinal
11825 5912.5 2956.25 1478.12 739.06 369.53 23.09
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0
5
10
15
20
25
Frijol desoya crudo
Frijol desoya
tostado
Frijolperuano
crudo
Frijolperuano
crudo
Frijol negrocrudo
Cantidad de muestra para causar aglutinacin (g)
Cantidad de muestra paracausar aglutinacin (g)
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
Carne desoya
(guten)
Frijol negrococido en
lata
Frijol negrococido en
casa
Cantidad de muestra para causar aglutinacin (g)
Cantidad de muestra paracausar aglutinacin (g)
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ANLISIS DE RESULTADOS
Se determin semicuantitativamente la cantidadnecesaria para causar aglutinacin en diferentesleguminosas ya sea con un tratamiento trmico
previo o simplemente no se realiz este. se muestra que las leguminosas que han sufrido un
tratamiento previo; la cantidad necesaria para laaglutinacin es alta comparando la cantidad que se
requiere para las leguminosas sin tratamientotrmico.
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Esto se debe a que al ser unas protenas (las lectinas),se desnaturalizan por calentamiento, por lo quedesaparecen, si las leguminosas se han cocinadocorrectamente, Ahora bien, un tratamiento trmicoinadecuado (a una temperatura del orden de los 80 C)
se dice en algunos casos que puede potencializar suefecto txico. En el caso del frijol de soya tostado elcual no se obtuvo ttulo para la determinacin delectinas puede deberse a que posteriormente del
proceso trmico que se pudo haber realizado, eltostado pudo influir an ms para la eliminacin delectinas.
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La destoxificacin de los alimentos que
contienen lectinas es por medio de tratamientotrmico, ya que son de origen protenico. Conlos mtodos tradicionales de coccin casero, se
puede obtener una adecuada inactivacin deestas protenas txicas; sin embargo, se deberecordar que en regiones de altitud elevada, elpunto de ebullicin se abate y puede ser una
limitante en el proceso de inactivacin.