Desarrollo de un medio de cultivo
Marlene Rubí Pérez MartínezMicrobiología
Introducción
Conjunto de componentes que crean las condiciones
necesarias para el desarrollo de microorganismos.
ELABORACION DE MEDIO DE CULTIVO
TEORIAEl medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el crecimiento de los microorganismos.La composición precisa dependerá de la especie que se quiera cultivar, porque las necesidades nutricionales varían considerablemente. Hay microorganismos muy poco exigentes y microorganismos muy exigentes que necesitan determinadas sustancias como vitaminas, suero o sangre para crecer.
Los medios de cultivo poseen una serie de componentes:
• 1. Indispensables: Entre los primeros se incluye el agua, nutrientes orgánicos (hidratos de carbono, aminoácidos, vitaminas, etc) y nutrientes inorgánicos (P, Fe, N, Mg, S, etc)
• 2. Alternativos: sustancias isosmotizantes (NaCl), agente solidificante (agar-agar), tampones, indicador de pH, etc.
OBJETIVOS• Preparar medios de cultivo como soporte y fuente de nutrientes para el
desarrollo de los microorganismos in vitro.
• Manejar los instrumentos de uso rutinario, a la vez que imprescindibles, en el laboratorio de microbiología.
• Adquirir la idea de la importancia del trabajo en condiciones de esterilidad y las técnicas más comunes para realizarlo.
• Desarrollar una curva de crecimiento bacteriano para shigella sonei
INVESTIGACIÓN (fundamento del agar)En el medio de cultivo, el caldo de res, aporta los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, la leche en polvo es el hidrato de carbono fermentable, y las fresas serán el indicador de pH, con la adición de clara de huevo, el medio es útil tanto para el aislamiento y cultivo de microorganismos nutricionalmente exigentes.
Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del color del indicador de pH
Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.
MATERIALES • Caldo de res
• Leche en polvo
• Fresas
• Clara de huevo
• agar
• Balanza • Varilla de vidrio
• Cacerolas limpias y desinfectadas
• Estufa• Cajas Petri estériles
PROCEDIMIENTO
Desinfectar el área donde se trabajara
Hervir las fresas hasta obtener un caldo color rosa, agregar el agar y el caldo de res agitar constantemente evitar llegar a la ebullición integrar
la leche en polvo
Dejar enfriar hasta que la temperatura sea soportable por la mejilla agregar la clara de huevo
Verter en las cajas Petri y cerrar inmediatamente, dejar solidificar
AGAR BRUNCH
FORMULA EN GRAMOS POR LITRO
Caldo de res 500 ml
Leche en polvo 10.00
fresas 500 ml
Clara de huevo 30 ml
Agar 20.00
SIEMBRA DE BACTERIAS
METODO DE SIEMBRA• SIEMBRA MASIVALa gota de muestra liquida se esparce con un hisopo grueso embebido de un cultivo liquido, procediendo a su deslizamiento sobre toda la superficie de una placa de agar.
Shigella soneiShigella pertenece a la familia Enterobacteriaceae que son bacilos Gram negativos, anaerobias facultativas, no espuruladas, inmóviles, catalasa positivo, oxidasa negativo, no fermentan la lactosa Mínima dosis infectante: 10 a 100 bacterias dependiendo de la edad y condición del huéspedTiempo de generación: Entre 20 a 60 minutosTiempo de generación: 12-50 horas dependiendo de los parámetros ambientales temperatura, acidez (pH), actividad del agua (Aw), potencial redox y nutrientes.
Necesidades de oxigeno: Al ser bacterias anaerobias facultativas pueden usar el oxigeno pero si no hay pueden seguir su supervivencia al utilizar aceptores de electrones.
pH aproximado optimo: 5-9Son bacterias mesófilas cuya temperatura de crecimiento es de 10 a 45°C.
Modo de incubación• Para que se diera un mejor desarrollo de la bacteria se hizo una
especie de incubadora con:
• Termo• Parilla • Un trapo humedecido con agua hirviendo• Bolsas de nailon• Termómetro de mercurio
ELABORACION DE CURVA DE
CRECIMENTO BACTERIANO
INTRODUCCIONEl concepto asociado al crecimiento microbiano, corresponde al aumento poblacional de una especie microbiana en un medio de cultivo provisto de todas las necesidades del microorganismo.
Crecimiento
Medios de cultivo
Agua
Fuentes de energía
Fuentes de carbono
Fuentes de N, C y otros
elementos
Micronutrientes
Factores de crecimientos
Condiciones de cultivo
Temperatura
pH
Luz
Aireación
Actividad de agua
Potencial redox
Horas (13 pm) UFC logaritmos
1 0 0
2 0 0
3 0 0
4 1 0
5 2 0.301
6 4 0.602
7 8 0.903
8 16 1.204
9 32 1.505
10 64 1.806
11 128 2.107
12…. 128 2.107
18 128 2.107
24 128 2.107
30 32 1.505
36 16 1.204
48 8 0.903
1 4 5 6 7 8 9 12 18 24 30 36 480
0.5
1
1.5
2
2.5
logaritmico
logaritmico
conclusiones• Se logro hacer crecer la bacteria en el medio de cultivo • Al sembrarse dos placas y dejar una expuesta a temperatura ambiente
se demostró la importancia de la temperatura en el crecimiento bacteriano• También se dejo expuesta una placa al intemperie y en ella crecieron
microorganismo variados, por lo que cabe recalcar la importancia de trabajar en condiciones de esterilidad para que estos no interfieran en los resultados• Falto realizar las mediciones adecuadas para crear la correcta curva
de crecimiento
Evidencia fotográfica del crecimiento
Agar bronch 1 hora después de la siembra
Agar bronch 4 horas después de la siembra
Agar bronch 8 horas después de la siembra
Agar bronch 12 horas después de la siembra
Agar bronch 24 horas después de la siembra
Agar bronch 36 horas después de la siembra
Agar bronch 48 horas después de la siembra
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