Bioaktív komponensek kimutatása növényi
mintákból
Dr. Remenyik Judit PhD(Kertészettudományi és Növényi
biotechnológia TanszékBiokémiai és molekuláris diagnosztikai
laboratórium)
Mérés menete
Mintavétel
Minta tárolás
Minta előkészítés
Mérés
Mintavétel
Adott fajra, fajtára jellemző legyen
Adott termőhelyre jellemző legyen
1. Nagy számú/ nagy tömegű egyed gyűjtése
2. Homogenizálás
3. A minta tárolása
4. A minta szállítása
A minta tárolása
Minden esetben a mérendő komponenstől függ!
1. +8 °C
2. -20°C
3. Liophilizálás
4. - 70 °C
A minta előkészítése
Homogenizálás
Feltárás
Kioldás
Szűrés , tisztítás
Bioaktív komponensek
Cukor tartalom- egyszerű cukrok (glükóz, fruktóz szacharóz )
Savtartalom (almasav, citromsav)
Fehérje tartalom
Rost tartalom (oldhatatlan, oldható)
Szárazanyag
Nitrát tartalom
Bioaktív komponensek
Antioxidáns sűrűség meghatározás
Vízoldékony- és zsíroldékony antioxidánsok
1. Vízoldékony antioxidánsok:
a. C-vitamin
b. Antioxidáns fehérjék (enzimek)
c. Vízoldékony színanyagok (antocianinok, flavonoidok)
d. B-vitaminok
e. Galluszsav
Bioaktív komponensek
2. Zsíroldékony antioxidánsok
a. Karotinoidok
b. Tokoferolok
c. Szabad zsírsavak
d. Izoprén származékok
e. Klorofollok
f. Polifenolok
g. A-vitamin
Laboratoriumunkban vizsgált komponensek
Laboratoriumunkban vizsgált komponensek
Laboratoriumunkban vizsgált komponensek
HO
HOOH
ORO
OR
ORO
O
C
COO
OHHO
HO
OC
ORO
OR
ORO
HOOH
OH (Gs)
RO
OHO
OHOH
HO
HOOH
O OC
C
O
OR
OR
ROO
OHHO
HO OHHO
HO
OH
O
OH
(katechin egység)n
OH
OH
H (OH)
O
HO
OH
(katechin egység)n
gallotanninok ellagitanninok
komplex tanninok kondenzált tanninok
Laboratoriumunkban vizsgált komponensek
O
* *
CH3
*
CH3
CH3
CH3CH3
R1
R3
HO
R2
α-tokoferol: R1,R2,R3=CH3ß-tokoferol: R1,R3=CH3; R2=Hγ-tokoferol: R2,R3=CH3; R1=Hδ-tokoferol:R3=CH3; R1,R2=H
Antioxidáns kapacitás mérése kemiluminométerrel
A mérés elve
1.A fotoérzékeny vegyületet hν energiával besugározzuk.
S+ hv→ S.+ + O2.-
A O2.- reagálnak a minta antioxidáns anyagaival.
2.A detektor vegyület lép ezután reakcióba a maradék O2.- .
O2.- + D → hv
3. A kisugárzott energiát méri a detektor.
Minták adatanalízise (ACW)
Minták adatanalízise (ACL)
Spektrofotometria
A fényintenzitás változását mérjük. Az UV-VIS tartományban az anyagok szelektíven adszorbeálják a fényt.A= ε*c*l A mérést minden estben az adszorpciós maximumon mérjük.Hibalehetőségek: Fényszóródás, oldószerpárolgásA ε nem helyes meghatározása .
Mérés 1.C-vitamin tartalom meghatározása
3.4. A C-vitamin (L-aszkorbinsav)
A mérés alapja
Erősen redukáló hatásúFe3+ → Fe2+
Fe2+ színes komplexet képeznek az α,α, dipiridil reagenssel
Fotometriás meghatározás1. Látszólagos C-vitamin tartalom2. Reduktonok3. Valódi C-vitamin tartalom
NAGYHATÉKONYSÁGÚ FOLYADÉKKROMATOGRÁFIANAGYHATÉKONYSÁGÚ FOLYADÉKKROMATOGRÁFIAMŰSZERMŰSZER oszlop:oszlop:(kolonna)(kolonna)
felépítésefelépítése: : mintaminta
detektordetektor
szűrőszűrőelőelőkolonnakolonna: :
főfőkolonnakolonna
töltet: töltet: szilikagél (módosított),szilikagél (módosított),adszorbens, ioncserélő, gél,… adszorbens, ioncserélő, gél,…
hőfok: hőfok: szobahőmérséklet (!) szobahőmérséklet (!) 25 25 °°CC
mozgófázismozgófázis::
oldószerek, oldószer-keverékekoldószerek, oldószer-keverékek folyadékfolyadék
HPLC-készülék felépítése:HPLC-készülék felépítése:
pumpa:pumpa:
mintabevitmintabevitel:el:
detektor:detektor:
nagy nyomás biztosításáhoznagy nyomás biztosításához „„pulzálás-mentes” pulzálás-mentes” (több pumpa)(több pumpa)
fecskendőfecskendő szelepes megoldásszelepes megoldás
UV spektrofotometriás,UV spektrofotometriás,fluoreszcencia, fluoreszcencia, vezetőképességi, vezetőképességi, tömegspektrometriás,..tömegspektrometriás,..
UV-detektorUV-detektor
3. mintaadagoló3. mintaadagoló(minta)(minta) 4. oszlop 5. detektor1. eluens
(mozgófázis)2.2.
pumpapumpa6.
rekorder
I.I. oszlopkromatográfia:oszlopkromatográfia: 1. klasszikus, 2. GC, 1. klasszikus, 2. GC, 3. HPLC3. HPLC, 4. ionkr., 4. ionkr.II. rétegkromatográfia : II. rétegkromatográfia : 1. papírkr. 2. vékonyrétegkr. 1. papírkr. 2. vékonyrétegkr.
A kromatogram értékelése
Recommended
