10
Villous sprouting: fundamental mechanisms of human placental development M.Castellucci 1,* , G.Kosanke 2 , F.Verdenelli 1 , B.Huppertz 2 and P.Kaufmann 2 1 Institute of Normal Human Morphology, Faculty of Medicine, Ancona, Italy and 2 Department of Anatomy, University of Technology, Aachen, Germany There is increasing evidence that maldevelopment of the placental villous tree can play an important role in the pathogenesis of various pregnancy diseases. In this review we present the most recent advances of cellular and molecular mechanisms involved in the early formation of chorionic villi. In particular we focus our attention on the structural events during early villous sprouting leading to the formation of the mesenchymal villi which are the forerunners of all other villous types, i.e. immature intermediate villi, stem villi, mature intermediate villi and terminal villi. Early villous sprouting starts as `hot spots' which are circumscribed areas consisting of highly proliferating cytotrophoblastic and stromal cells. The post-proliferative cytotrophoblastic cells fuse with the overlying syncytium leading to the formation of the trophoblastic sprouts. When villous mesenchyme invades the trophoblastic sprouts, the latter are transformed into villous sprouts. The vascularization of the villous sprouts leads to the formation of the mesenchymal villi, the most basic villous type. This process is repeated throughout pregnancy. We analyse the in¯uence of various extracellular matrix molecules, e.g. tenascin and hyaluronic acid, on the formation of hot spots and mesenchymal villi as well as the transformation of the latter in other villous types. We present a critical survey on the data on vessel formation related to villous sprouting and morphogenesis of mesenchymal villi as well as the expression of various angiogenic factors and their receptors. Key words: angiogenesis/chorionic villi/extracellular matrix/growth factors/placenta TABLE OF CONTENTS Introduction Villous sprouting: the key event for placental development Structural events during early villous sprouting Extracellular matrix Angiogenesis, growth factors and growth factor receptors Heterogeneity of mesenchymal villi Conclusions Acknowledgements References Introduction Recent advances in non-invasive obstetric diagnostics such as Doppler ultrasound have increased understanding in the patho- genesis of pregnancy diseases. It has been shown that several of these conditions resulting in poor neonatal outcome are aetiologically closely related to maldevelopment of the placental villous trees Macara et al., 1995, 1996; Fox, 1997; Kingdom and Kaufmann, 1997; Kingdom, 1998; Benirschke and Kaufmann, 2000). This progress in clinical knowledge has raised urgent demands for a better knowledge of the mechanisms of human placental villous development. The most important data concerning the morphology of the various types of villi and their differentiation pathways have been obtained by combinations of various techniques such as light and electron microscopy, morphometry, immunohistochemistry and in-situ hybridization. Experiments in animal models are com- pletely missing. The reasons for this are the great structural differences between the human placenta and those of most other mammals. The only exceptions are some higher primates which, however, are not easily available for obvious reasons. As a consequence of this situation, experimental data concerning speci®c villous functions and regulation of villous development are largely lacking. This is deplorable since ~10% of human pregnancies suffer from pregnancy complications associated with unexplained villous maldevelopment, ®nally resulting in fetal and neonatal problems ranging from untimely birth, via intrauterine growth restriction, partly with mental retardation, to intrauterine and neonatal death Macara et al., 1996; Todros et al., 1999; Benirschke and Kaufmann, 2000). There is increasing evidence that some of these fetal problems, e.g. intrauterine growth retardation, can play an important role in the development of various diseases in later adult life Barker, 1992; Barker et al., 1993; Purdy and Metzger, 1996; Kadyrov et al., 1998). * To whom correspondence should be addressed at: Institute of Normal Human Morphology, Faculty of Medicine, Via Tronto 10/A, I-60131 Ancona, Italy. Tel: ++39-071-2206086; Fax: ++39-071-2206087; E-mail: [email protected] Human Reproduction Update 2000, Vol. 6, No. 5 pp. 485±494 Ó European Society of Human Reproduction and Embrology

Villous sprouting: fundamental mechanisms of human placental

  • Upload
    hahuong

  • View
    230

  • Download
    4

Embed Size (px)

Citation preview

Page 1: Villous sprouting: fundamental mechanisms of human placental

������� �������� ������� ��������� � ���� ������� ���������

����������� � ���������� ������������� ���������� ��� ����������

���������� �� �� �� �� �������� ������� ��������� ������ ����� ��� ������� ��� ���� �� ����������

��������� ������� �� ���

!��� �� ��������" �#����� �!�� �����#�������� �� �!� �������� #����� ���� �� ���$ �� ��������� ���� �� �!����!�"������ �� #����� ���"���$ ��������� %� �!�� ��#��& &� ������� �!� ���� ����� ��#���� �� ������ ���������� ��!������ ��#��#�� �� �!� ����$ ��������� �� !������ #����� %� �������� &� ��� �� ��������� �� �!�������� �#���� ����" ����$ #����� �������" ������" �� �!� ��������� �� �!� �����!$��� #���� &!�! ��� �!����������� �� ��� ��!�� #����� �$��� ���� ������� ������������ #���� ���� #���� ����� ������������ #���� ����������� #����� '���$ #����� �������" ������ �� (!�� �����) &!�! ��� ������*�� ����� ��������" �� !�"!�$������������" $������!�*����� ��� ������� ����� !� ����+�����������#� $������!�*����� ���� ��� &��! �!��#���$��" �$�$��� ������" �� �!� ��������� �� �!� ����!�*����� ������� ,!�� #����� �����!$�� ��#���� �!�����!�*����� ������ �!� ������ ��� ����������� ���� #����� ������� !� #������������ �� �!� #����� ������ ������� �!� ��������� �� �!� �����!$��� #���� �!� ���� *��� #����� �$��� !�� ������ �� �������� �!��"!�� ���"���$�,� ����$�� �!� ��-��� �� #����� �.��������� �����. ������� ��"� ������� ��� !$������ ��� �� �!���������� �� !�� ����� ��� �����!$��� #���� �� &��� �� �!� �������������� �� �!� ������ �� ��!�� #����� �$���� ,�������� � ������ ��#�$ �� �!� ���� �� #����� ��������� ������� �� #����� �������" ��� ����!�"������ �������!$��� #���� �� &��� �� �!� �.�������� �� #����� ��"��"��� ������ ��� �!��� ���������

��� ����� �����������!������� �����!�"����������� ����"!��#�� �����!��������

����� �� ��������

���������������� � ������� ��� ��� ����� ��� �������� ������ �������������� ������ ����� ����� ������ � ������������������� ���������������� ������ ������� ��� ������ ������ ���� ���������������� �� ����������� ����������������������������� ���������

��������

$����� �������� �� ��%�������� &������� ���������� ���� ��

������ ��������� ���� ��������� ������������� �� ��� ����%

������� ��������� ��������' �� ��� &��� ��#� ���� �������

����� �������� ��������� �� �� ������� ��� � ���

������������ ������ ������� � �������� ��� ��� ���������

������ ����� (������ � ��'� �))*� �))+, �"� �))-, .���� ���

.�� ���� �))-, .���� � �))/, 0�������1� ��� .�� ����

�2223' ���� ������� �� �������� 1�#����� ��� ������ ������

�� ���� � � &����� 1�#����� ��� ������� � �� ��

��������� ������ ������ ���'

��� �� � ������ ���� ��������� ��� ������ ���

������ ����� ����� ��� ����� ������������ ����#��� ���� &���

&������ &� � &������� ������ ������4��� ���� �� ����� ���

������� �������� ��� ����� � ��������� ����� ���

��%���� ��&����5����' 6"���� ���� �� ��� �� ���� ��� � %

������� ������' ��� ������ � ���� ��� ��� ����� ����������

��������� &��#��� ��� �� �� �������� ��� ���� �� ����

� ���' ��� ��� �"������� ��� � � ������ ��� ���� #�����

�#����� ��� �� ������ ������&�� � &���� ������' �� �

����4����� ���� ��������� �"���� ����� ���� ���������

�����7� ������ ������� ��� ��������� ������ ������ ���

��� ������� ���1���' ���� �� ������&�� ����� 8�29 �� ��

����������� ���� � ��������� � ��������� ��������� #���

���"������� ������ �������� ���� 7����� ��������� �� ���� ���

������� ��&�� � ������� � ���� ��� &����� ��� ������������

��#�� ����������� ������ #��� ����� ����������� � ������������

��� ������� ����� (������ � ��'� �))+, ���� � ��'� �))),

0�������1� ��� .�� ���� �2223' ����� �� ���������� ��������

���� � � ����� ���� ��&�� �� �'�' ������������ ��#��

����������� ��� ���� �� � ������ ��� �� ��� ������ ���

������ �������� �� ����� ����� ��� (0��1��� �))�, 0��1�� � ��'�

�)):, ;���� ��� ���5���� �))+, .����� � ��'� �))/3'

��� ���� ������� �� ���� � � � ��� ������� �� ������ ����� ����������� ������� �� � ����� ��� ������ � !"� �#$ �%� "�����������& ��� ''%(# )�#** $ +$, ��-� ''%(# )�#** $ +), .#����� �&���������/�����&�����&��

���� /��������� 0����� �111 ���� 2 3�� 4 ��� 5647585 � ������� ������ �� ����� ����������� ��� ��������

Page 2: Villous sprouting: fundamental mechanisms of human placental

������� �������� �� �! ��� �� ����������������

<����� ������ ��� ��� �� �� �������� ������ &��#��� ����

�� ��� �/ ��� �������� (�'�'3' ��� ������ ����&������

���&������ ��� ��������� ������ ����� � ���������� � ���

7����%��1� ����&������ ��������� (��� ��� �����3 ��� ���

������� &�� ���������� ��� ����&������ ���&������ (0��

��� �� ����� �)-23' =��� � ���� ����� � &����� ���������

������ ������� � ��� �"���%� &����� ������� � (6�����

��� .���� �)//3 ������� ����� ������ ������ ��� ��� ��� �%

������ �������� �����' 0�������� &��#��� ���� �/ ��� �2 �'�'� ���

7��� ���� ����������� ��� &� &������ �� ���� ������� � (.����

�)/-, �� �� � ��'� �)/)3' 0� ��7������ ��� ����������

����������� �� ��� ������ ��� � ��1� ��� ������ ��� �%

������ �������� ����� (0�� ��� �� ����� �)-23� ��� 7���

��������� #���� ��� ��� ������� �� ����� (>���������� ���

.�� ���� �)/�, >���������� � ��'� �))2, 0�������1� ���

.�� ���� �2223' ��� ������ ��� ��� 7��� ���������� ��������

��� ��������� �����4������� � �� ������� �����%����

�"������ ���������� ����� ��� #���� ��&�������' ��������

����� 7��� ���������� ������� �� ����� &��#��� ���������

���� �2 ��� ?� &� ������� ������� (�� �� � ��'� �)/)3 ���

>�:? � ��������� ����� (.�� ��� ��� .���� � �2223

�������� ������������� (��%�� � ���� ����������� ��

������� �� �������� ������ ��� &��#3 �� ��� ����������

������� ������ � ����'

��� �� � ������ ����� ����� ���� ���� � ��� � ����

������� �� ������ �� ��� ����&������ ��������� ������� ��

������� ��� ���� ���� ������������ ��� �������� ��������

��������� �� ��� �� ��� ������ ����� �"���� &� ������ ��������'

>���4������� ����� �� � � ���� ��������5�� ������ �����

���� ���� � ��� �� ������� �� �����' 0������ �����

��� � ���� ������� �� ����� ����� � 1�� ��� � ���

������ ��� ��� ������ �����'

��� � ������� ������� �� ����� � ��� �������������

������ ������ ��� ��� �������� ��� �� ������ ���������� &�

��� ��� ���� ���� �������� � ���������� ��� ����������� ��� �

������� ��������5�� ������ ������ �'�' � ����� ����� ������

������ ��� ������ ����� ����� ������ ������ ��� ��� ���� �����

(������ �3 (.�� ��� � ��'� �)-), >���������� ��� .�� ����

�)/�, >���������� � ��'� �))2, .�� ��� ��� >����������� �))*,

0�������1� ��� .�� ���� �2223'

�� � �&�� ��� *�� #��1 �'�'� ��� ��������� ����� &���� � ���

������� �� ���� (>���������� � ��'� �))23' ���������� ��

���������� �� &�� ����� ����� ��� ������ �� ��� � �����

����� ������ ����� (������ �3 #���� ��� ����������5�� &� ��

� �������� �������� �� ������ ��� ���� ��� &� ��� ��������

�� ���� ������������� ������� ��� �� �������� (>����������

��� .�� ���� �)/�3' ����� � ����� ����� ������ ����� ���

7����� ������ �� ��� ��� ����� (������ ��3 &� ���� �

��� �� 7&���� �������� ����� ��� ��������� �������� ����

������� #���� �� ��� �� � �� � ��� ������ �� ��� �������� ���

����� (������ �&3' ��� �������� ��� ������� �� ���

� ����� ����� ������ ����� � ��� &���7� ��� ����� ��

� �������� &� �������� �������� ������� �� ����� ����

��� ������� ��� ������� �� ��� � ����� ����� ������ �����

(������� �� �� :3' �� ���� #�� � ����� �������� ���� ������ ���

��� ���� �����%���� �"������ ������ �� �������'

@������� #��� ��� �:�� #��1 �'�'� � 1�� ����� �� ���������

������ ��� ��1�� �����' ��� ������ ��#�� �#������A ������%

� �� ����� ����� ������ ��� ��� ����� ����� ������ ����� ������

���� ��� � ����� ��� (������ �3 (>���������� � ��'� �))23' ���

����� ����� ������ ����� ���� � ����� � ����� �����������

�� ��� &� ��� �&����� ��� �� ��������� �#�� �������%

&������ ������� ��� &����� ���� ���������5����� &�� ��� &� ��� ���

���� ���� � �� ����� � ��� �����' $������ ���� ����� �������

���� ������ ����� �� &��� ������ ���������5�� ��� ���� �����

(������ �&3 #���� ��� ��� �� ������� ���������� � �����%

���� �������� �"������ (>���������� � ��'� �))2, 0�������1�

��� .�� ���� �2223' ��# �� ������ ������� �� ���

� ����� ����� ������ ����� ��� ������ �� ��� ������� ���

������ ������ #���� ���� � � 1��� ���� ������������

��#�� �������' ��� ������������ ������� �� ����� ���

����� ����� ������ ����� ��1�� ����� � �&�� #��1 �: �'�'

����� ��� (������ �3'

������� �#������� �#���� ����� ����� ������ ����� �� #���

���� � ��� ���� ������ ������� �� ��� � �����

����� ������ ������ � ���� ���� ��#�� ������ ����� ��� � ��

�"��� ��� ����� &�� �������������� ��������� #���� �� ������%

���� ����7�����' ���� �������� �� ��������� ��������� #��� ��������

������� ���� �� $����� ��� ����&����� � ���������� ������

� ������� �� ���% ����� ���������� ��� ������ �������� �� ����

��������� #��� ������������ ��#�� ���������� (0�������1� ���

.�� ���� �2223'

0� �������� � ����� �#������� �#���� ��� ����� �����%

������ ����� ����� � ���� ��� ��� ������ ��#�� &��

��� ����� ������������' ��� ��������� �������� �� ���������

� ��� ��� ������� ��� ������ ������������ ������ �� �� ������

����� �"������ ������' ������� �"� ���� � ����� �������

������� ��������� (0��1��� �)/�3� ����� ������� (@��������

�)+/3� ��� ����������� � �������� #��� ������������ ��#��

���������� #��� ������ ���� ���������� ����" �� ��� � &������

�������� (������ � ��'� �))*� �))+, ���� � ��'� �)))3' �����

����� ������ �������� ��� ��� � �' ���� ��� ������

�� ��������� ��� � �� �� ������� ��� � (.���� ���

.�� ���� �))-3'

��� ����� � ����� ����� ������ �������� ��� ��� &�

����� �� �&�� �� ������ ��� ������� �� ����� ���!�

�&�� �� ����� ��� ������ ����� �#���� �#���� ��� �� �

��� ���� ���� ����� ������ �����' ��� ����� ���� �#���� ��

����� � ������' 0� �������� ��� ���� ��� &��� &������ � ���

������ ����� ������ ������ �������� �� � ���� �#����'

�������� ���� ����� ����! ������� �������

0�������� ����� ��� -�� #��1 �'�'� ��� � ���� ��#

������� �� ����� �� � ����� �������� � ��� �������

&���������� ���&������ ����� ����� ��� ������� ������ �� ���

�����' $������ ��� ������� ������� �"������ ������� �� �����

��� ����� � ����� ����� ������ ��������� ��������� ��� ������

� ��#�� �������� ����� (������ �3' ��� ����� ���������� ���������

���� ������ ��� ����� ����&�� ������ ��� �%������ B�� ����C

(������� �� ?�3 (.���1�� �))?3' @������������ ����� ��� ����%

������5�� &� ��&����&������ ���� ������ �������� ��� �� ���

��� �� ��������� � ��� �� ��������� � ��� �� ������

��� � &� �� ��� ����� &��� ���������' ��� ����&����

������� ����� ��� �� ���� ��#� ��������� �� &���

562 ���������� �� ���

Page 3: Villous sprouting: fundamental mechanisms of human placental

����&���� �����' ���������� ���������� ��1��� ���� �� .�%

+- ��� ����������� ���� ������� ������� (;>��3 ����� �

D:�E��$ ���������� ������� ���� ����� ����� ��� ����������5��

&� ��������� ����&������ ���������� ����� (������ ?�3' @ �

����� ����� ��&�&�� ����� ������ ������ ���� �����������

��# ���� ��� �� ���������� #���� �"����� ���� ���

���������� ������ ��� � &� �� ���� �229' B�� ����C

�������� �������� �� ������� ��� ������� ���������� �����

��� �� ��� ������ ����� (��&�� �3 (.���1�� �))?, .���1� �

��'� �))*3'

�� ������ ������� ������� ������ ����� ������

B�� ����C �� &�� �� ������� ���� ���� ��������� ��� 7���

������ �������� ������� �� �����' �� �� &���� ����

�������� ������� ������ ��#�� �������� &�� ������

� ������� ����� &�� ����&���� ��� ��� � ��# ���������

����������� ��������' ��� ���%����������� ����&���� �����

��� #��� ��� �������� ������� � ��� � ���� ������

�����������&������ ����#���� ��� �%������ ����&������

������ (0�� ��� �� ����� �)-23' �� � ��"� ����� ������

����������� ����&���� ������ ��#�� &� ��� ������ ����%

������� ������� �� ������ ����� ����&������ �������

������ ��� ��� ��� ������ ������' ��� 7��� ���� ����

������� �'�' ��� � ���� �����������5�� ������ �������

��� &��� �������� � ��1�� �� ����' F� ���� ����� ���

0�F �� �� ���������� � ���� ���� &������� ��� ����

�>� #���� �� �� �������� ��� ������ ��������� �� ���������

#��� �� �� ������ �������&���� (>����� ��� � ��'� �))+3'

@������� ����� � ���� ����&���� ����� �������� �� �����%

�� ������� �������%� ���� ��� �� ��# ��� ����&������

����#�� (�'>���������� � ��'� ����&������ &���������3' >%

������� � ������ �>� ����� #��� ���� 7&�&����� ��������

�� � ���� �������� ��������� � 7&�&������ ���'

6 &����� �� ������� ���� �� ����� �������� �������

������%��1� ����#��� #��� � 7&�&������ ���' > ����&��

����&������ ����#��� #��� ������� #��� �>� ��������

#��� �������� �� ��� �������� 7&�&����%���������

���� ' ����� ���� ������� ���� �������� ������� ����

7&�&����� ������ ����&������ ��� ������ ��������'

��"�� �� @��� ���� ������������� ��� � ���� ��� ������������ ��������� ����� ������ ����� ��� ���� ���������' (���7�� � >���������� � ��'� �))2�#��� ��� �����'3 (�3 ������ ����� ����#�� ��������� ����� ������ ��� ��� ��� ��� ��� ����� (����� ���3 �� � ����� � ��� :�� ��� ����� (�#�� ���3' F�������#�A ������ ����� ����� ������ ������������, &���1 ���#�A � ���� ��# ����� �� ��� ������ ���%�"������ ���' ������ ��� 7��� ��� ����� ��� ��������������� �� ��� ������ ������� �� ��� � ����� ����� ������ ������ �� ���� ��� ��&��4������ ����&������ ������ ��� � �� ���� 7��� ����������� ��������� ������ ��� 7����� ��� ��# ������� �� �����' ��� ������ ������ ��� � ����� ����� ������ ����� ��� 7����� ��� ��� �����' �� ��� &�������� �������� ��� ������ ������� �� ����� ������������� ����������� ��� ����� ����� ������ �����' ��� ������ ��� ������ �� ��������� �������� &� ��������� �������� ���� ����������� ��������� �� �������� ��� ���� �����' ��� ������ ��� ������ ��������5�� ������ �����%���� �"������' ������ ���� ��� ������� �� ����� ��� � ����� ����� ������ ����� �� ������� &��1�� �� ��� ����� ��� ����� ��������' ��� �� ������ � ����� ����� ������ ����� �������������� ��� �����' 0������ ����� ��� &��� � ��� � ���� ��# ������ �� ������� ��� ��� ��#�� �������� ��� ������ ����� ��#� �#�' (*3 ������������������������� ��� ������ ������ ����� ��� ����� ������� ����������� ������������' ��� ��� ���� ��� ������ ���������� ��� 7��� ��� ����� ��� ������ �������� ���� ���������� ��� ����� ��� �����' ��� ��� � ����� ����� ������ ������ (���3 ��#��� � B�� ���C #���� ��&��4������ (�� ��� ��� ������3 ������� �������&������ ��� ������ ������ ��� � ��# ������� �� ������' �� ���� ������������� ��1 ��� ����� ����� ������ &��������'

������ �������" �� �������� ��#�������� 569

Page 4: Villous sprouting: fundamental mechanisms of human placental

0� ��7������ ��� ���������5���� � ������ ����� ����� � ���

� ���� � ������� �� ������� ��� �� &���� ������ ����

(������ ?&3 (>���������� � ��'� �))2, 0�������1� ��� .�� ����

�2223' ��������� ���������5���� ��� &� �������� &� �����

������� ������� � ($���� ��� G� �� �)//3A (�3 ���������%

���� (��%�� � ���� ��������� � ������� ��

���������3� (��3 &�������� � �������� ����������� (��������

&����%������ ������������ ���������� � ���%�"������ ��������

��&�� �� ��� �����&����� �������3� (���3 ��%�������� �������%

��"�� �� @������� ������� �������� ��� ���� ������ ����&��������� ������ ������ (��� ����1%������ ����������3� �������� � ��� ������ �� � ����� ����� ������ ������ (&��#3' 0�� H �2� '

��"�� :� @� �%���� ������ ���� � 7��� ��� ����� ������ �� ��������� ������������ � ��� ������ (�#�� ����� ���� ��� ��������3 � �� %&�������� � ����� ����� ������ ������ (������� ���� ��� ��������3� #������������ ��� � ������� �� ������ (��� ���� ��� ��������3' ��������� ����� ��������� ��� ��� ��� �� ��������������� ��� ����� ����������� ��� ������� �� ���� �������' 0�� H ?2� ' (�� >���������� � ��'� �))2�#��� ��� �����'3

��"�� 5� � ���������� ��������� ������ #��� ��� ���������� ��1����0%�' ��� ��0%� ������ ����&�� (� ������ >'� ���������� ������3������ #��� �� �� ��� ��� &����� .�%+- ������� ���� ����������%����������������' (�3 @����� �� � ����� ����� ������ ������' ��� ������� ���1����0%�%������� �������&������ ������ ������ &��#��� ��� �����������%&���� ��� ��� ��� �� �������� (@>3 ��1 � B�� ���B� ��� 7��� ���� � ��#����������� ������� �� ������' 0�� H �2� ' (*3 ���������� ������ � ������� �� ������' ��0%�%������� ����� ��� ����� ������ �� ��� &��� ��� ������� �� ������ ��� �� ��� ���� ��� ������ ������ #��� � ��� ����1%��1�� ������ ����&������ ����� (I3' ��� ��� ������� &��#��� ��� � ������� �� ������������ ��� ������� �� ������ ��� ��� ����� ����������� � ��� � ����� ����� ������ ������' 0�� H �2� ' @������ #���� ��������� &� ������%&���� � ���" ����'

566 ���������� �� ���

Page 5: Villous sprouting: fundamental mechanisms of human placental

���� (�������� ���������� ��&�� &� ��������������� �������%

��� #��� ��&��4���� �������� � ������ �� ��� ��� ������

�����3' ��������������� �������� (�� �� � ��'� �)/)3 ���

� ��������� ����� ����� >�:? ����&���� ��� ����������

��1��� (.�� ��� ��� .���� � �2223 ��#�� �&�����

������� ��� ����&������ ����� &�� �������� ������ &����%

������ ��&�� #��� ���������� �����' ����� ���� ����

�������� ����������� �� ��� ���������� ������� � ��������%

��"�� �# !������� ������ �� ���������� ����� �� �������� ������ �� �� ��� ������ ��������

������� ��"���� ������

#��$ �� %�&'(' ����� #��$ �� %�&'(' ���������� �� ())�� ����� �� *)))��*

"���� �����+ ������� ����+

���� ��� #(�� ��������+ ($*( #� )$*,+ )$-) #� )$).+

���� ��� #-�� ��������+ )$/, #� )$0)+ )$*0 #� )$(*+

�������� ���������� ��� ($,1 #� )$/(+ )$-. #� )$(1+

#(�� ��������+

2��� � ���3 �� ������� ���������� *$/, #� ($)-+ ($(/ #� )$-/+

��� #(�� ��������+

%���������� ��� #(�� ��������+ *$1* #� ($),+ ($44 #� )$/,+

%����� ���������� ��� )$.0 #� )$-(+ )$.4 #� )$-1+

#-�� ��������+

5������ ��� #-�� ��������+ )$,) #� )$44+ ($.1 #� ($4/+

6��� ���� ����� "� ��������� �� ���������������� �������� �� ������ ������� ���"������� ��� ���������� ������ %�&'( #���� � �6+$ 5�� ��"����� ��"����� � ������� �� ())����� ��"����� "���� ���"����� ������� ��"����� � ������� �� *)))��* ������� ����$ �� ��� ��� 2���� ���3� ����� ���� ���� ����� �� "� ��� ���� �������� �� ��� 2��� � ���3 �"������ � ������������� �� ������� ���������� ���$ !��� ��� ��� ������ �� ���������� ������ � "���������� ��"����� ��� ������� ����� �� ����������� ��� ��� 2��� � ���3$

��"�� 4� @������� ������� �������� � ������ ���� (������� ��J�����3 � ������� �� ������ �� �/ #��1� ��� ��������' ��� ��� ���%��1�������� ��� ����������� ��������� � &�������� ����������� ��� ���&����%������ ����������� ���� ��� ������ ��� ������������ ��#�� ��������������� ������' 0�� H �?� '

��"�� 2� ��� ��������' >���%������ � ������ ����� #���� ������������5�� &� ����� ���������� ��������� ������ ����� (>=3 ��� ���������������' ��� ������ ������ ������� ���1�� ���������� ����� (63� ��������#��� ���� ���� &� ����� J�������� ��#��� � � ��� ��� �� �� ��� (�����3��� ��������� &� &���� �� ����' ��� ������ � ��� �� � ����1��������� (���#�3' 0�� H :� , ����� &�� H �� ' (�� �� �� � ��'��)/)� #��� ��� �����'3

������ �������" �� �������� ��#�������� 568

Page 6: Villous sprouting: fundamental mechanisms of human placental

�5���� �� ��� ������� �� ����� � ��� -�� #��1 �'�' �#����'

��� �"������� �������� ���������� ��#�� ���� (<6 �, �

����� ��� ����� �������� �����������3 �� ����&������

������ (@�������� � ��'� �))+3 ���������� ���� ����' 0����

7&�&���� ��#�� ���� (&� �3 ��� �"������� �� ��� �����&��%

��� ��� � (��K�������� � ��'� �))+3 �� ������ ���� ������ &�

��� ������� ���������� ���������� (@������#�� � ��'� �))�3

���!� &� ���������� ��������� ������������ ����� � �"������

��� �������� &��'

��� ������� �� ����� ��� ����� ���&&� ���������� �"�������

������������ �� � ��� %����1%��1� ������ �����������&������

��"�� 9� ���������� ������ � 7��� ��� ����� �������� � ��������� ��������� ����� ������ 0>%? ����&�� (>���������� � ��'� �))�3 #����������5�� �� ������ #����� ��� 6 �%��1� ��4����� ��� �������� ������'0>%? ������5�� ��� ������� 1�#� �������� ��� �' � ���������� &�������������%&����' �� ��� ������ ��� �������� ��� ��� � � ������� �� ������ �� ��������� ��&�����' ��� ��� � ��� � ���������� ������ ����� (���3 �� � ���������� � ���� �"����������� ����" ������' 0�� H +2� '

��"�� 6� @������� � ��������� ���� �� 7��� ��� ����� ������� ����� &� �&������ ��&� ��������� � &���������� � ��� ����������%&������� ���" (&%; 3' ��� ������� ������ �� ���� ������ #����� ��� ��� � ��� ������� �� ����� (���#�3 ��� �� ��� #��� ��� ���� ������� ��� � ���������� ������ ������ (��<3' �� ��� ������� �� �� ��� ������� &������ �������&������ ������� (���#�����3 #���� ����������� ��� ���������������#�1 ��� �������' ��� ��� �&����� �������� �� �� ��� ��� � ��������� ��� ��� � ����� ����� ������ ������' 0�� H *2� '

��"�� 8� �������� �� ������ ��� 7��� ��� ����� �������� &�������� � �� � ����� ����� ������ ������ (�#�� ���3 � ��������� � &� ������ � ��&&�� �������� ����&�� ������� ������� &���� &���� &� � (0������0�%��������� ="��� �.3 ��� ������%&����%���"����� � ���"' @����� ������������ �� ������� �� ��� ����&������ �������' ��� ������ ��� ���#� � ������� ������� ��� �� ��� ������ ��� ��� ������� �� �������#����� �������� � ��K�������� � ��' (�))+3� ������� �������� ������������ �%�����5��' 0�� H �2� ' (�� ��K�������� � ��'� �))+� #��� ��� �����'3

��"�� 9�

��"�� 6�

��"�� 8�

581 ���������� �� ���

Page 7: Villous sprouting: fundamental mechanisms of human placental

����#�� (������� �� :� ?&3' ��� ���������� �����

����&���� ������� � ������� � ����� ����� �������&����

&������ ��� �����������&������ ������ ����� (>���������� � ��'�

�))23' >������&������ ���������� �� ����� ��� ���� ���

������ ��� (������ ?&3 ��� �� ��� &��� ��� ������ #���� ���

��������� �������� ����� ������ �� � ����������� ��������

(.���1�� �))?, ��K�������� � ��'� �))+3' ��� ��� � �������

������������� �������� �������� &������� ����������� ������%

������ ������ &������ �� � ���� ���������� ���������� �����

(������� *� +3' 6��������� ����� ��� ������ ������&���� ��� ���

����� ����������� (.���1�� �))?3'

�$���������� ����$

�� ��� &��� #��� ����&������ ���� �"����������� ����" (6>�3 �����

� ������ ��� �� ������������ ������������ ��� ������

�� ������� (���� �))�3' ������� �� ��� ���� ������� ����"

�������� ���1 ��� 6>� � ��� ���� �������, ��� ���&��� ���

��� ��� ����� ��� ������ ��� ��� ��� ��������� ��� �������

��� ���������� ������� � ��� ��������� � ��� � ������ ���

�����5���� ��� ����" (���� �))�3' >���4������ ����������

�������� ��� &��� ������ � ��� ����� 6>� �������

������������� �� ������ ������������ ��� ����������' ���� ��

��� � ������ &������ ��� ������ ������ ����� ���� �����

��������� ��������� ����� ��� �� ���� (��� �&��3� ��L������

��������� �� ������&���� 6>� �������'

$����� ���� ���� ��#� ���� �����7� 6>� ������� ���

������������� �"������� �� ��� ��� � ��� ������� �� �����'

=�� ����� 6>� ������� �� �������� (������ -3 (>���������� �

��'� �))�3 #���� ��� &��� ��#� � &� ��������� #��� ����

���������� ��� �������� �'�' �� #��� ������� ��� �� ��

��������� (����� ��� � ��'� �))*, �1��� � ��'� �))*,

��������� ��� 0����� �))+, G���J���#��� � ��'� �))+,

$���� � ��'� �))/3' ��� �� ���� ���� ��������� � �������� ���

��� ����&���� 7&������� ������� ���� ������� (>��4���%

6���� �� � ��'� �)//3 ��� ��������� ���� ��������� ��1� @;�$>

(�������� ������ ������ ��� ���� �� ��������3 ��� ��� &�������

�� �� ����%������� ����" ������ (@��� ��� 0�������� �))�3' ��

����&�� ������� ��&������ ������ ��� ������ ��� �����������

��� ���������� �������� ������� �&��� ������� � ������

��� �� ���� ������� ��� ������ �� ������� (>���������� � ��'�

�))�, ������%������� � ��'� �))�, ��������� ��� 0�����

�))+3' ����� ��� �������� �������� ������ �"��������� �� ���

��� � ������� �� ����� (������ -+3 �������� � ������� ���

���� ������ �� ��#��� ��� �� �� ������� ��� �����������

���� �������� ��� ���� ������ �����' �� ��� &��� ������ �

��������� ��� ������� �������&����� 7&�&����� ���

��������� � ��� #���� ��� ��������� � ������� �� ������

��#�� (>���������� � ��'� �))�3'

��������� ���� (��3� � ���� ������� ��� ��������������

�� � ������ � ������ 6>� ������ #���� ����� � ������� ��� ��

�� ���� ���������� �������� ���� �� ���� �������

���������� ��� ���� ����" ������� (G������ ��� �������

�))�3' ��� &������� �������� �� ������� &� �� �������� ����

��� ������� � ��� ���� ������ ( ���� � ��'� �)//, ����������

�))�3' ����� �������� &���� � (�3 ��� ���������� � ���

>�??� #���� ���������� � ���� ����� � &���� �������

(���������� �))�3 ��� ��� ��&�&�� � (��3 ��� $���� (�������

� ���������% ������� ������3 � ��� �������� (�������

�))�3' �� ������� � ��� ��%&������ ��������� >�?? �� �������

�� ��� ���������� �� &� �������% ������� ���������5����

���� ��&��4������� &� ��� �������� ���� ��������� (>���� � ��'�

�))�, ���������� �))�3' 0� �������� ��� ����� ������� �����

$���� �� &� ������� �� ��% ������� ���� �� ���

(������� �))�3'

�� ��� &��� ��� � &� �"������� �� ���� 4��������� �� ���

������ ��� � ������� �� ����� �������� ��� 7��� ���

�������� (������ /3' �� ������� ��� ���� ������ ����� �� ���

� ����� ����� ������ ����� #��� ������� � �� ��� ����� ���

������ #���� ��� ����� &������ ��� ����&������ ���� (������ /3

(�'>���������� � ��'� ����&������ &���������3' ���� ��&����%

&������ �"������� �� �� � ����� ����� ������ ����� �� �������

� ��� B�� ����C ������������ ����� ���� ����&������ ���

��� �� ���������� ����� (.���1�� �))?, .���1� � ��'� �))*3'

����� ����� ��� ������� �� ��� �������� ��%���� ������%

� � ��� ��#�� � �� ����&������ ������� ���� ����������� ���

� ���� ������� �� ����� ������� � ��� � �����

����� ������ ��� (�'>���������� � ��'� ����&������ &�����%

����3' �������������� �� ��� 7��� ��� ����� >�?? #�� ���

�"������� �� �# ���� ��������� (�&���� �����3 �� ����������

����� ������� �� �����' ���������� ���� ������ �����

#��� ����� ��������' �������������� �"������� ��� ����� ��

������� � ���� $����� ��� �� ��� &��� �������' ��1��

�������� ����� ����� ����� ���� ��� �� ����� ��� #��� �������

������ ���������� ���� ��� �"������� �� �� ���������

��������� #��� ��� �������� >�?? �� � � ��������� �����

(��������� � ��'� �)):3' ����� �� �� �������� ����� ��

����� ��� #��� ��� ���#� ��������� &� ��� (�))�3 �� ����

� &����� �������� ��� ����� � ���� �� ��� #����� ���

������� �� ����� ��� �����&����� ����� � ����� �����%

������ ����� ��� ��4����� �� � ���� ������ #���� ������%

� �� ����� ��� &�� ������� ������'

����������% ���&� ����� �� ���&� ������������

� ������� ���� �� ����� �� �� �������� �� ��� ����&���� ��� ��

�7����� ��������%#���� �"������ &��#��� ���� ��� �������

&�� ����������' �������� � ���� ��# ������� �� �

���� ����� ������ ��� ������ ��� ��� �������� ��� ��

���������� �� ��� ���������� ��� ������� �� �����'

������� ���������� ����� � ��������� ������� ��� &���

�������� �������� (G���� � ��'� �))?3' ����������� � ��%����

���� ��� ������&�� �� ������� � ��� ���������� �����������

���� ���������� ����� #��� ���� �������� � ������ ���

������� ������' �#����� � � ���������������� � ������%

��� ���� ��� ��%���� ��&����5���� ������� � ��������� �������

���� &��� ��&������ � ��������� �������� �� ��� �������

�����' �� �� ��� �%#�1��� (�)/)3 ������7�� ��� ����&������

����� ������������� �� ��������� ����� �� ��� �� �'�'� ����������

� ������� �� ���������' � ��������� ������ �����

����� ���� &��� ������7�� ����� ����&���� ������� >�:?

(.�� ��� ��� .���� � �2223' ����� ����� ��� �� ���� ������

������ � ���� ����� � ��� ������� �������� � ���%��1�

������� #���� ��� ��������� � &� ��� ��������� ��� ���������

��������� ' @��� ����� ���������� ��������� ���� &���

��� � &� ������� ���� ��� ���� ��� ������� �� ����� (������

+3 (�� �� � ��'� �)/)3'

������ �������" �� �������� ��#�������� 58�

Page 8: Villous sprouting: fundamental mechanisms of human placental

� ������ ����� &� ��K�������� � ��' (�))+3 ��� � �����5��

����� ����' ����� ������ �� ������� ���� &���� 7&�&���� ��#��

���� (&� �3� �� ��������� ���� ������� �� ��� ������� ���

��� ��������� �������� ������ �� �%������&���� #��� ��� �#

�7���� ������� ������� �������� (�@; 3 �� ��� ������ ���� ���

������� �� ������ ��� � (������ )3 #������ �� ���� ������

����� ���� �%������&���� �� ��� ��� �� ��� ������ #����' �����

���� ��� ���������� �������� &������ ���� &� �%�@; �%

������&���� ��������� � ��� ����� #���� &������ ������

��������� ������ #��� ��� (������� *� +3' �������������� &������

&� � � �@; �� ��������� � ��� &������ ���� ��#��

���� � ��� ���� �7���� 7&�&������ ��#�� ���� �������

(� �%$3 ��� � ��� ������� �������� (M��� � ��'� �))�,

����&��� � ��'� �))�, ������ �)):3' ������� &� � &��� �

�@; �� �������� � ��������� ���������� ��� ������� ����

�� � 1��� ��#�� ���� �������� �� ��� 6>� (@�1���� � ��'�

�)//, $����� ��� ���������� �))�3'

@�������� � ��' (�))+3 ��#�� ���� �������� ���������� ��#��

���� (<6 �3 �� �� ��������� �"������� �� ��� �����������%

&���� ������ ������� �'�' �� ��� 7��� ����� ������ ��������'

�� ����� ��� #��� ��� �������� ������ �������� #���

��������� ���������� <6 � �"������� ��������� ����� ��� (G�

� ��'� �))*3' ����1� &� �� <6 � �������� � ������ ������� �

�������� (@����� � ��'� �)/:, >����� � ��'� �)/), ������� � ��'�

�))�3' G�1� &� �� �� �� ������ � &� ������&�� &� ���"��

(� ��� � ��'� �))*, >� � ��'� �))+3' ���� �� ����������

�������� &������ �� ��� �� �� �������� �# �������������� "����

������� �������� ��� &��� ��� �� ���� ������ ���������

($����� � ��'� �))�3 ��� �� ���� ����� (@���� ��� � ��'� �)//,

0�������1� ��� .�� ���� �2223 #���� ������ �������� ���

������� �� ����� �������' ��� ��� ������� ���� ���"�� �

&�������� ����������� �� ��� �������� ��� &��� �����

�"���� ������� (@����� � ��'� �))23 �� #��� �� &� ��������

���������� ����� ��� (.����� � ��'� �))/3'

�������������� <��1��� � ��' (�))+3 ������7�� .�$� �� ���

�# <6 � ��������� �� ��� �� ���������� ����� &�� ��� ��

���������� ���� ��������' ���� �� �������� ���� ���������5����

������ ������ �� �� ��� &���� � ���������� ����������

(�����������3 &�� ����������� �������� &� ������� ���

���������� ������� �� ����� (�������������3'

�� ������� � .�$� L�%�� ��� ����� <6 � �������� ��� &���

������7�� �� �� �� ��������� �����������, �������� �

>����� ��� � ��' (�))*3 �� �� �"������� �������� ���������'

@������ �������� &� F������ � ��' (�))*��&3� � ��� ������%

������ � &���� ��� ����1�� ���� ��#� ���� <6 �

��� ������ ���������� ����� #���� �"����� L�%� ��� L1%�

(��� ��%�� �� ������� .�$3 ������� �� &��������

����������� ��� � ���� ��������� ���#�1�� �� ���� �

���� &������ &� �� �� � ����� ����� ������ ����� ��� �����

������� �� ���������' �� ������� ��� ������ ������� ��������%

������� ��#�� ���� (;� �3� ������ ������ L�%� �������� ��

�#�%��������� ����� ���"�� �������� (@��� � ��'� �))-3 ���

�� ��� �� ��� ����� &�������� ����������� (F������ � ��'�

�))*&3' � �#���� � &�������� � ��%&�������� �����������

�� ��� �� �� ��������� ����� ����� �� �������� (.�� ��� ���

.���� � �2223 ��� �� ���� #��� ���������� �"������� <6 �

(G� � ��'� �))*3 ��� .�$ (<��1��� � ��'� �))+3� &�� ����������

;� � �"������� (>����� ��� � ��'� �))*, .����4 � ��'� �))+3'

������� ��������%������� ��#�� ���� 0 (;� �%03 #��

��������� � &� ������� �� ��������� �����������' �� ���� ���

�%#�1��� (�))�3 ������� ���� �� ��������� ���������� �����

��#�� � �� ����� �%�"����� ���� ������� ��#�� ���� ���

;� �%� �������' ���� &�������� �������� ���� ;� �%0 ��

������� �� ��������� ����������� &� � ��� ������ ������

��� �� ��������� ���������� ����� �� ���� ���� ����������'

G��� &�� �� ������ ������� ��� � � &� ������ ������� � ������

������ ���' �������� ��� 7��� ��� ������ ������� ������� ��

�"������� ���� ��� ������ ����&������ ������ #���� �� �"����

� ��� ������� &��� ���� ������� �� ������ ��� ������� ��

����� (����� � ��'� �))?3' ����� ��� ��� ���������� ���� ��� �����

�������&�� � ������ ��#�� �� ���� ����� ���������' �� ���

����� ��� ����� ��� ����� ��������� #��� ��� ���� ��������

������ ������� �������� ��� #��� �"������ ��� ������ ����� ��

���� &���� � ����������� ��#�� ��� ������ ����

������������ ������� ������� �"������� �#������ � ��� �� ����

������� ���� ����������� (����� � ��'� �))?3 ���������� ����

� ���� ����� �#���� ��� ���� ������� �� ������� �� ���

����� ��������� �����������'

<�����&����� � ��' (�)/)3 ���� ��#� ���� ��� �%��� ���%

������� #���� ������ � ������������ ����� �� ������

�"������� #����� ���������� ����� ������ &�� ������ � ����'

0���� � ����� ���� F������ � ��' (�))�3 ������� ��� �"�������

�%��� ������ ����������� ����� ������� �������� �� �� ��

�������' ����� ������� �"������� �%��� ��� #���� �����������

#�� ���� ��� �'�' �� ���������� ������' ����� ���� � �����5� ���

������ ��� �%��� �� ����� �����������' = ���������� ��������

�� ��� ��� ���� �%���� ������� ��� ������� �� ��� ��������� ���

������������ ����"%��������� ������� ����� (F������ � ��'�

�))�3' ��� �"������� ��� ������ �� ��������� � ������ ���

� ���� ��# &�� ������� (�������� � ��'� �)/), �������

� ��'� �))2, �������� �))�, F������ � ��'� �))�3' <������

����� �� �� ��������� ����� ��� �"����� �%���� (F������ � ��'�

�))�, G��� � ��'� �))-3' ���� � �����5�� ��� ��� ����"

��������� �������� �� ������ ����������� ��� ��������'

'��������! � ������!��� �����

0� ��7������ ����� � ��� ��� ���� ������ (����&�� N�22� 3&�������� ��� ����� ����&�� � ����� ����� ������ ����� �� �

������� �� ������ (>���������� � ��'� �))23' 0������ ��� �����

�������� ������&�� �&��� �# ���� ��������� ��� &� ���'

G������ �������� &������ �� �� ������� �� �����

��#��� ��� ���������� ��������������� �� ������&�� ����������

��� &� ���' ���� � �� ��# ����� ���������� �

�"������� �������� �� ��� ���� ������� ���������

�&�� (>���������� � ��'� �))�, .���1� � ��'� �)):, .���1��

�))?, ��K�������� � ��'� �))+3' =�� ����&�� �"�������� � ����

���� ��� �� ���� ����� ��� ������� ������ ��������� ����

���������� ���� ������ ������������ ��� ������ ��� � ��

���� ���� ������� �� ����� ������� �� ������ ��� �� �����

������ ����' �������� �������� ��� &�������� �������� ���

������ ���� ��� �� �������� ��� ���� ������ &��������

��������' ���� ��� ���� #�� ����������� �� � ������

���������� ��#�� ������� �� ����� (.���1� � ��'�

�)):3'

������� ����� ������� �� ����� ��� &� ��� #���� ���

������ &� ������� ������������ ����&����� ��� �������%

58� ���������� �� ���

Page 9: Villous sprouting: fundamental mechanisms of human placental

&���� � ������ ���� � &����� �� 7&�����' ����� ��# � ������

�������� 7&��� ��� � �"�������� ���� ������������

�������� (>���������� � ��'� �))�3� &�� � �������� ��� ��

� ����&������ ���������� (.���1�� �))?3' ���� ��������

������� �� ����� �� ��&�&�� ��� � � ���� �����������

������ ���� ���� ���������� ��L����� ��� ���������� �������

&�� L# ������� ���&������ � ������ �� ��� ���� ������� &��

����������' �� ���� ����� �������� #��� ��&��4���� �"������

��� ������ ����� ��� ������� ��� ����������� ����� ��� � �

��1� ����� �� � ���%���������� ������ �� ��� ��#��� ��� �����

��� ���� ��������� (0�������1� ��� .�� ���� �2223'

���������

��� ���� ��������� �&�� ���� ����� �������� � ��� ������� ���

������ ��� ������� �� ����� � ��#�� ��� ������������

��� ������ ����' F� ���� ��������� ������ �������� ���� ���

����� ������������ ������� �� ����� ��� � �����

����� ������ ����� � ��� ����� ����� ������ ����� ������� ���

��� &������ &��#��� ��#�� ��� �������� ��� ��������' F�

��� J��� &�������� � ���������� � � ��� �������

������� � ��������� ���� �#����' 0������ �� ��� ���� ������

�29 ��� ����������� ���� � ������� ����� ������

�������� ��� ��������� �� �� �������� ��� ����� �������

��� � #��� ��� ��� ����� ���%��� �� � ���� (0��1���

�))*, .���� �))/, 0�������1� ��� .�� ���� �2223� � &�����

������������� ��� ����������� ������� � ������ �����%

��� ��� �������� ��� �� �������� ��4�����'

�� �&��������

���� �����# �� &���� � ��J���� #���� #��� �������� &� ������ � ��� ������� �������� ���������� ��� @������7� $������� (��$@�3���� ���������� ������ ��� �������� ����������� �������� (�� 3���� <���� ;���� ��� ��� 0� �� � ����� ��� 6������> �����'

(� ������

0��1��� �'O' (�))�3 ��� ���� ������ �������� �� ���' ��' �' ����' ���'�52 (@����' :3� @:%)'

0��1��� �'O' (�))*3 ������������ ����� ��� ����� �������' ��' ��'!���� �� ?�/P?�:'

0��1��� �'O'� ���1 ��� ;'�'� ����� .'�' � ��' (�)):3 ����� �������� ���������������� ������� �� ����� ���' "����� :5�� ):/P)?�'

0��1��� <' (�)/�3 ����� ���� ��� ���5����� ;������� ��� ;��5����' ��0��1��� <'� @����&���� �'�' ��� .�&��� �' (���3� #�� $��%��� ��� ����&��' ���� �� @��������� ��' �*�P:):'

0�������1�� .' ��� .�� ���� ;' (�2223 !&� $�&����� �� &� �����$������� ?�� ���' @�������� ��# M�1'

0��� O'�' ��� �� ����� F'O' (�)-23 !&� ����� $������' �����>� &�����'

>�� M'� G����� ;'� @�� �� �' � ��' (�))+3 '� ���� ��������� �������� ������"�� �������� ������� ��� �������� ��#�� ����!������������������ ��#�� ����' �' ����' '����'� 86� �*2-P�*��'

>����������� �' ��� .�� ���� ;' (�)/�3 � �����%�� ������� ����� ����� �� �� �� ��������� ������ ���' ��' @�� �� ������������' $������� :��+)P�/+'

>����������� �'� @������� �'� @������ �' � ��' (�))23 ��� ������ ��� ����� �� ��������� ������ ����' (��' ������'� �6�� ��-P��/'

>����������� �'� >������%G��1�� �'� ��K��������� O' � ��' (�))�3 ��� �� ����������A � ��� � �������� �"�������' �����&������� 84� ??)P?*/'

>��4���%6���� ���� $'� .����� ;'� ;������ >'�' � ��' (�)//3 ����������������� #��� 7&������� �����' ����� 4:� :/:P:)2'

>������ �'�'� ������ ��� �'�'� ������ $' � ��' (�)/)3 �� � ��������

��� ��&����� ���� ��� ������ ���������� ���� ��#�� ��� �����������' �'����' '����'� 65� �?-2P�?-/'

>����� ���� >'� ���5���� �'� ;������ �' ' � ��' (�))*3 6"������� &� �� ;� � ��� ����� �������� �� ��� �� �� ��������' $������� �2� ��:'

>����� ���� >'� ������� O'�'� ���� �' � ��' (�))+3 >����� ���������� � ����� ��#� ���� ������� ��������� #��� �"���������� ��������� ���������� �' ��' ���� ���'� ��9� �?2P�*�'

>����� �'� ������� �'�' ��� ���������� >'0' (�))�3 ��� ��������� �������(>�??3 ������������ �� ��� ����1� ��� ���������� ���������' �' ����)���'� ��2� �2**P�2+�'

������ ' (�)):3 �������� � &���� ������� ������ �����������' *(� ) �'�9� �2�:P�2:2'

�� ��� $'� .�� ���� ;'� >����������� �' � ��' (�)/)3 ����� ���������������� ����������� �� �� �� ��������� �����' (�� (��'� �:2� �)2P�2:'

���������� 6'�' ��� 0����� �'�' (�))+3 �������� ������� �� �� ��� ����� ������� ��� ������� ���� ������� � 7&�������' �' ���� ���'��18� +?:P+*�'

������ '� ���� ���� �'� 0�������5� �' � ��' (�))?3 ������� �������� �������������&���� ��� ���� ��������� �� �� ��������'� ��������� ���� �������� � ������ ����� ������� ��������&���� �������' �����&������� �1�� �--P�/*'

6������ �'>' ��� .���� 0'�' (�)//3 �� ���� ��� ������������ �"���� &����� ����� �� ��� ������ �1��' (�' �' (��'� �6��:�-P:?2'

�������� �'� ���1� .'�'� O�1� ��� G'0' � ��' (�))�3 �������� ���&������� ��������� ��� �������� ���������� ��#�� ���� � ��� �������' �������� ���'� �:� �/P:�'

�"� �' (�))-3 $�&����� �� &� $������� ��� ���' @�������� G���' ����� @'O'� ������ ' ��� ���������� >'0' (�)//3 ������&���� ����������

�������� �� ��� ����� ����' �' ���� ���'� 68� �?*P�*+'���� 6'�' (�))�3 ���� )������ �� ����������� ����� ��� ���' ;���� ;�����

��# M�1'����� ���� @'� Q����� G'� @���� �' � ��' (�))*3 6"����������� ����" ������� ��

�������� ������ ��' 6"������� �������� ��� 7&������� ��� �'"��' '����'� 9:� �-�P�/�'

�� ����� G'� ������ �'� ;����%=������ @' � ��' (�))�3 ����������������� �� �� �"���� &����� ������ ��� ������� ��� ������� ��������� ;� � ������ ��� ������� ���� �"�������' #���������� ��:�-?)P-*?'

�1���� M'� ���� �'� .�J��� �� .' � ��' (�))*3 � ��������� �����"������� �������� �� �� �� �� ��� ������� ������� ������ �� ���������� ������ � �� �� �� ����' )�' �' ������� 9�� �/)P�)�'

.������ �'� .���1�� '� .���� � O'>' � ��' (�))/3 ��������� ���������������������� ������ 7��� ��� ����� �� ���� �� # ��' "����� :4�� �-?-P�-?)'

.�� ���� ;'� @��� �'.' ��� @��#��1����� ' (�)-)3 >�����7����� �� ����������� �����' �' �������' ���� !����� ���'� �11� ?2)P?�:'

.�� ���� ;' ��� >����������� �' (�))*3 ������ ��� ��� ���� � �����������' �� �"� �' ��� F����� �' (���3� ������ ��� !�����+� ,����������� -������������� $�&�����' >�������� G���������� 6���&����� ��'�?:-P�?-+'

.�� ���� ;' ��� .���� � O'>' (�2223 ������ ��� ��� �������� ����� �� ��� ��������' �� $����� F' ��� $�&����� ' (���3� ���&�������� �� ���&�����' ���#�� � ������ � ��' �**P�-*'

.����4� �'� G�� R'�'� @�� �� �' � ��' (�))+3 G��������� �������� ��#������ (;� �3 �� �� �� ��� ��������' -���& *������ �:� �?:P�*2'

.���� 0'�' (�)/-3 ��������������� ������������ ��� �� ��� ��������� ������ �� ����� ���4�� ��������� �����' (�' �' (��'� �96� :2P??'

.���� � O'>' (�))/3 ;�������� ������� �� &��������A ��������� � ������ ��� ������ ����S $������� �8� :?-P:*�'

.���� � O'>' ��� .�� ���� ;' (�))-3 ="���� ��� ��������� ������������ ���A ������ ���� ���"��' $������� �6� +�:P+�+'

.���1�� ' (�))?3 $������������ .��&��� ��� #�������%������ ���/�����0��� ��� �����&���&�� $������' @��1�� ;�&�������� ������'

.���1�� '� >����������� �'� .�� ���� ;' � ��' (�)):3 0�������� �������� �� �� ��������� ������ �����A ;����������� �������� ��������'$������� �5� *)�P+2?'

.���1�� '� .��� �'� .����� ' � ��' (�))*3 �#�� 5��� ��� �� ����������� ������ �����' $������� �2� � :/'

G���J���#���� �'�'� 0������� �'� <�� 0������ 0'�' � ��' (�))+3 ���������"������� ������ #��� ������� �� �� �� �1��' �' $�&��'� �96� :2P:*'

G������� �'>' ��� ������� O'$' (�))�3 ���������' *(� ) �'� 2� �:)-P�?2?'G����� G'� 0������ M'� >���1� ;' � ��' (�))?3 ������� ���������� ����� �

�� �� ��� ��������� ����� ����� � �� ������� &����' $������� �4�:**P:+?'

������ �������" �� �������� ��#�������� 58:

Page 10: Villous sprouting: fundamental mechanisms of human placental

G�� R%�'� F������� �'O' ��� �� ��� �' (�))*3 G����5���� ������������������ ��#�� ���� ��� ��� ������� �� ���������' $������� �2��?�'

G���� �'� @�&��� ='� =���� O'�' � ��' (�))-3 ��� �%���� ��������� ���"������� �� �� �� ����&���� ������ ��� 7��� ��� ����� ���������' ���� ���' #��'� 59� �?-P�*+'

������� G'� .���� � O'>'� .����� ' � ��' (�))*3 6��&����� ��� ������ ������� �� ��#�� ���������� ����������� #��� �&�� �� � &������������ ������ #���� �' )�' �' ,���' -�������'� �1�� /2-P/��'

������� G'� .���� � O'>'� .�� ���� ;' � ��' (�))+3 @��������� �������� ��������� ��� ���� ����� � ��#��%���������� ����������� #��� �&�� ��� &������ ������ ������ #���� �' $������� �9� :-P?/'

��������� ;'� ���&�� $'� $&&���� 6' � ��' (�)/)3 '� ���� ����������� � ����� �� � ����� � &����A ��4���� ��� � &���� 7&�&���� ��#������%������� ����������' �' ����' )���'� �16� +-�P+/�'

�������� $' (�))�3 $�������� ����������� �� ����' ��' �' ����' '����'���� *2?P*�*'

�������� $'� ;������ �'@'� ����%@��������� �' � ��' (�))23 ������������������ �������� �� �������&�� � ��� �&������ ���������� &������ ���������� ����� �"�������� ��� ����� � ������' ����� 2�� ?:*P??*'

��K��������� O'� ���5���� �'� ������ �' � ��' (�))+3 >������&���� &����7&�&���� ��#�� ���� ��� ������� ������ ���������� �� ��� ��#��5��� ��� �� �� ��������' ���� !����� ���'� �64� �2�P�2-'

������%�������� O'6'� G�������� <'�'� ��1���� �' � ��' (�))�3 ���� ���������������� �� �#���������� &� ��� ������������� ������� � ��� �� ����������' �' ���� )���'� ��4� ���-P��:+'

� ���� �'� M� ������� @'� ������� @' � ��' (�))*3 ;���&�� ������������ �������� ��� ��������� �������� ���������� ��#�� ����� �� ���"��%������� ���������� ���������� ����� ��� ���������' �' )���' �&��'��91� �/:�+P�/:�?'

;����� G';' ��� ���5���� 0'6' (�))+3 ��L������ ��� ������������ ���&��������� ��� � ����� �������A #��� �� #� ���� � ��5� �� &����S#����������� :8� ���+P��:2'

$����� @'� .�� �� �'� �������� �' � ��' (�))/3 ������ �������� > �������� ��L� ���� ��� ��������� �������� ��� ����� &#��' #��' ����������� 5�� /+P)�'

$����� F' ��� G� �� <' (�)//3 >������ �� ��� �������� �"����������� ����" ������ � &����� ������������� ��� �����������' #��' )���'���4� ??�P?*2'

$������ �'� @� �� ;'� ������ >' � ��' (�))�3 ="���� ������ ���� ����� ������ ��� ����&������ ������� ������ ����� ���������' ,���'-������'� 61� �/:P�/*'

$������ �' ��� ���������� �' (�))�3 0���� 7&�&���� ��#�� ���� �����������5�� ������ &�� �������% ������� ��� ������� ������% ������� ������� �' �' )���' �&��'� �29� ���*+P���+�'

@���� 6'�' ��� 0�������� ;' (�))�3 6"����������� ������� ���� ������ ����% ����" �����������' �' )���' �&��'� �22� �?/:�P�?/:?'

@�1����� ='� ���������� �'� @ ��� �' � ��' (�)//3 6��������� ����%�������������� ������ &���� &���� 7&�&���� ��#�� ���� ��� ������� �� � ��������� ����������' �' ���� )���'� �19� -?:P-*�'

@�������� >'�' (�)+/3 ��� �������� �� ����� �"� ��' � � �������� �����'(�' �' ,���' -������'� �1�� :?-P:*:'

@������ �'� .�� ���� ;'� ;���������� G' � ��' (�))23 ���������� ��� ������������� &�� �� ��� ������ ��� �������� ��#��� ���%��� ���"��' ��

;������ O'� ������1� �'.' ��� ������ �' (���3� ,����� !������� � !������1''' ;���� ;����� ��# M�1� ��' --)P-)2'

@���� ���� $'� @�5� �' ��� ������ �' (�)//3 ���� ����� ������������� ������������ ( �����%���� ���������� �����3 �� �� ���������'!���&����� ���'� :� :P�+'

@������ �'$'� ����� @'O'� ����1� �'�' � ��' (�)/:3 �� � ����� ������� ��������� ��� ��&����� ���� ���� �� ��� ���� ������ ������� L���'�������� ��8� )/:P)/*'

@��������� @'� ��1���#�� .'� .���1�#�� �' � ��' (�))+3 � ��������� ���������5���� �������� ���������� ��#�� ���� �� ��� �� �� ��������'$������� �9� ���P���'

@���� <'�'� F���� �'�'� F���� >'G' � ��' (�))-3 <������� ������������#�� ����� �������� ��#�� ���� ��� ����� �������� �� ��������� �� ����&����' $������� �6� +*-P++*'

@������#��� $'� =��#� @'� >55���� �' � ��' (�))�3 ������������ ��� ����������� ��������� ������ ���%��� ���"��A ���������� �� ������#��� ������ ��� ��&������ ��� ���� ������ �������� ���������' �'���� $&�����'� �5+� /P�-'

����� �'� @�������� �'� ;������ 6' � ��' (�)))3 � &������ ������#���� � ��� ��������� ������ ����������� �� ����������� � ��������&� ���� ��#�� ����������' ,���' -������'� 8:� ?))P*2:'

���� 0';' (�))�3 ;���������� ��� ��������� �� ���������� ���������������' �� ���� 6'�' (��'3� ���� )������ �� ����������� ����';���� � ��# M�1� ��' :2*P:?�'

������� 6'�' (�))�3 ��������� ��� ���� �� ���' ������ ������� ���'���� ��P:2'

����&���� O'6'� ������� �' '� .�� M' � ��' (�))�3 ������7����� ��� &����7&�&���� ��#�� ���� &������ ��4����� �� 7&�&���� ������� ������' �')���' �&��'� �29� �2::-P�2:?�'

���������� >' (�))�3 >�??A ��� ��������� �������' �' ���� ���'� �1:� �):P�)/'

���������� >'0'� ������� �'�'� @��5���� �' � ��' (�)):3 >�?? ������� ��������� ��1� �� ��������� ������ ���� ������ ���' #��' )���'��44� :�?P::+'

<�����&������ 0'� ;��������� G'� O����� �' � ��' (�)/)3 > ��� �������������� �"������� �%��� �� �% �& ��� �% �� �� ��� &��%� �������� ��� ����1 � &��' #���������� �19� �+*P�-?'

<��1���� �'� ;������ O'� ��� ��� 0'�' � ��' (�))+3 6"������� ����������� ���������� ��#�� ���� �������� .�$� �� �� �� ��������' �'(��'� �66� :+�P:++'

F������� �'� $���� �'0'� G�������� ;' � ��' (�))�3 �%���� ���%������ �� ������������� ���� �"������� �� ���������� ����� ������ �� ����������5���� ��� ���� � � ����������� �� �� ���' (�' �'$�&��'� �51� ��)P��-'

F������� O'� 0����%@�&���� 0'� ������ $' � ��' (�))*�3 ��������� �������� ��� ����� � ���' #��' #��'� �1�� �+*P�-�'

F������� O'� 0����%@�&���� 0'� .��5� �' � ��' (�))*&3 ������ ��� ���� &����� �������� ����� ' ����' ��' )���' ���'� 5�� ��)P�:�'

M���� �'� .����&���� �'� 6�1� O'�' � ��' (�))�3 >��� ������� �������%��1� ������� ��� ��4����� � &������ &���� 7&�&���� ��#�� ���� � ������� �7���� �������' ����� 25� /?�P/?/'

�������� �� ������� 234 25556 ������� �� ���� �74 2555

585 ���������� �� ���