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UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO
FACULDADE DE SAÚDE PÚBLICA
Investigação de fontes alimentares de culicídeos coletados
em parques municipais de São Paulo pela técnica de
Reação em Cadeia da Polimerase (PCR)
Gabriela Cristina de Carvalho
Dissertação apresentada ao
Programa de Pós-Graduação
em Saúde Pública para
obtenção do título de Mestra
em Ciências.
Área de Concentração:
Epidemiologia.
Orientador: Dr. Mauro
Toledo Marrelli.
São Paulo
2013
Investigação de fontes alimentares de culicídeos coletados
em parques municipais de São Paulo pela técnica de
Reação em Cadeia da Polimerase (PCR)
Gabriela Cristina de Carvalho
Dissertação apresentada ao
Programa de Pós-Graduação
em Saúde Pública para
obtenção do título de Mestre
em Ciências.
Área de Concentração:
Epidemiologia.
Orientador: Dr. Mauro
Toledo Marrelli.
São Paulo
2013
É expressamente proibida a comercialização deste documento tanto na sua
forma impressa como eletrônica. Sua reprodução total ou parcial é
permitida exclusivamente para fins acadêmicos e científicos, desde que na
reprodução figure a identificação do autor, título, instituição e ano da tese/
dissertação.
DEDICATÓRIA
A meu namorado e melhor amigo
Leandro Ucela Alves por todo
apoio, carinho, atenção e amor.
AGRADECIMENTOS
A Deus por todos os momentos.
Ao Professor Dr. Mauro Toledo Marrelli pela amizade, orientação e confiança.
Aos Doutores Paulo Roberto Urbinatti e Walter Ceretti Junior, pela amizade,
companheirismo e ensinamentos tanto acadêmicos como para a vida, desde a
época da FUNDAP.
Ao Professor Délsio Natal, pelas contribuições no período de exame de
qualificação, bem como pelas excelentes aulas ministradas e a amizade
construída.
A Doutora Rosely dos Santos Malafronte e à Mestre Lícia Natal Fernandes,
pelas fundamentais contribuições para a realização desse trabalho, bem como
a paciência e amizade nascida durante as etapas de bancada no laboratório.
A Doutora Ana Maria Duarte Ribeiro, pelas excelentes contribuições á esse
trabalho, desde o período da qualificação, pré-banca e defesa.
A Doutora Marcia Bicudo de Paula, pelas contribuições dadas á esse trabalho
no período de pré-banca e defesa, além da enorme paciência em me ensinar a
identificar as fêmeas de mosquitos, assim como ao senhor Aristides
Fernandes, o meu muito obrigada!
Agradeço enormemente as contribuições do Doutor Andrey Andrade pelo
auxílio em analisar e discutir meu trabalho, incrementando-o com ideias e
críticas construtivas, assim como a amizade construída.
Aos meus amigos de aulas do departamento de Epidemiologia ingressos em
2011, pela amizade, por alegrar os momentos tensos e difíceis, em especial a
Denise Cristina Sant’Anna, Érika Flauzino, Lilian Dias Orico , Márcia Taiul,
Naiá Ortelan e Silvania Caribé Andrade, pelo companheirismo em todas as
horas e ocasiões.
Aos meus amigos de laboratório, Antônio Ralph Medeiros de Souza, Claudia
Scinachi, Daniel Pagotto Vendrami, Marcio Lage e Marco Marchi, pelas
horas de descontração, pela amizade e alegria constante, pelo auxilio,
compreensão e encorajamento sempre!
As amigas Natasha França e Fernanda Maria Braga de Mello pela amizade
construída, as divertidas histórias de bandejão e de noites do pijama!
As minhas florzinhas do Laboratório de Protozoologia IMT-USP, Karina
Sant´Anna e Lívia Rocha, pela amizade, apoio e auxilio durante as etapas de
PCR e géis, sem contar nos inúmeros momentos divertidos e legais no
laboratório e fora dele!
A todas as pessoas da equipe do Centro de Controle de Zoonoses (CCZ) e
da equipe do Depave-03 pela colaboração nas coletas
Ressalto aqui também, meu agradecimento a Doutora Carmen Beatriz Taipe-
Lagos da Costa, que desde a época da graduação sempre me incentivou a
seguir os caminhos da Entomologia Médica, o meu imenso obrigada!
A meus pais Sandra e Wagner, e ao meu irmão Anderson pelo apoio e
presença constante em minha formação profissional e como pessoa.
A minha avó Maria Vitório da Matta, a qual é um dos meus maiores exemplos
de como ser uma grande pessoa, e a quem sempre me apoiou, vibrou e me
ilumina rumo às minhas conquistas.
Ao meu namorado e melhor amigo Leandro Ucela Alves, por sua atenção,
companheirismo, paciência, por sorrir e chorar comigo em todas as etapas,
além do encorajamento sempre!
A Faculdade de Saúde Pública e ao Instituto de Medicina Tropical,
representando todos os professores, alunos e funcionários que conviveram
comigo durante um longo período de tempo.
A CAPES e a FAPESP pela bolsa de pós-graduação e por financiarem os
recursos necessários para a pesquisa.
Enfim, a todos os mencionados ou não, que ajudaram e contribuíram para a
realização desse trabalho, seja de forma a dar ideias, a conversar sobre PCR’s,
ou nos momentos de descontração, aqui fica o meu imenso e sincero muito
obrigada !
Um beijo a todos e obrigada por tudo!
O Mosquito Escreve
O mosquito pernilongo
trança as pernas, faz um M,
depois treme, treme, treme,
faz um O bastante oblongo,
faz um S.
O mosquito sobe e desce.
Com artes que ninguém vê,
faz um Q,
faz um U, e faz um I.
Este mosquito esquisito
cruza as patas, faz um T.
E aí,
se arredonda e faz outro O,
mais bonito.
Oh!
Já não é analfabeto,
esse inseto,
pois sabe escrever seu nome.
Mas depois vai procurar
alguém que possa picar,
pois escrever cansa,
não é, criança?
E ele está com muita fome.
Cecília Meireles. Poesias Completas. Rio de Janeiro
Editora Nova Aguillar, 1994.
CARVALHO, G C. Investigação de fontes alimentares de culicídeos
coletados em parques municipais de São Paulo pela técnica de Reação
em Cadeia da Polimerase (PCR). São Paulo, 2013. [Dissertação de Mestrado-
Faculdade de Saúde Pública da Universidade de São Paulo–FSP/USP]
RESUMO
O estudo das fontes alimentares em culicídeos possui evidentes significados ecológicos e epidemiológicos, pois auxilia na identificação de animais possivelmente envolvidos na manutenção de surtos epidêmicos das doenças transmitidas por vetores, oferecendo informações para a indicação de potenciais reservatórios de patógenos. Entre os métodos utilizados para avaliar o possível grau de atração exercido por certas fontes de alimentação em relação às fêmeas de culicídeos, a técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) se destaca como sendo uma das técnicas mais eficientes na detecção de repastos sanguíneos devido à alta sensibilidade e especificidade. O objetivo desse estudo foi descrever o perfil alimentar das fêmeas de culicídeos capturadas nos parques Alfredo Volpi, Anhanguera, Carmo, Chico Mendes, Ibirapuera, Santo Dias e Shangrilá, situados na cidade de São Paulo, investigando possíveis associações entre as espécies de mosquitos e suas respectivas fontes alimentares, analisando assim o comportamento no âmbito alimentar dessas espécies em diferentes localidades da cidade, durante os meses de Fevereiro de 2011 à Fevereiro de 2012. A identificação do repasto sanguíneo foi realizada por meio da técnica de PCR para os seguintes hospedeiros: aves, cães, gatos, humanos, primatas (não humanos) e roedores em 510 fêmeas ingurgitadas distribuídas em 14 espécies capturadas pelas técnicas de aspiração, CDC copa, CDC solo e armadilha de Shannon. Dos vertebrados, apenas o hospedeiro gato não foi encontrado como sendo fonte de repasto, as demais têm sido utilizadas como fontes de alimentação para os culicídeos nos parques estudados. Baseando-se em testes estatísticos não se encontrou nenhuma tendência de associação entre as espécies de culicídeos capturadas ingurgitadas e as fontes utilizadas para repasto, evidenciando assim, padrões aleatórios por parte dos mosquitos em se alimentarem de fontes sanguíneas mais abundantes ou mais fáceis de serem abordadas, reforçando a característica oportunista das fêmeas de culicídeos em busca das suas fontes de alimentação sanguíneas. Sendo de fundamental importância tais informações em contexto epidemiológico, afim de, identificar novos possíveis hospedeiros e reservatórios de patógeneos em cadeias de transmissão de doenças transmitidas por culicídeos.
Palavras-chave: Repasto alimentar, culicídeos, hospedeiros, PCR,
epidemiologia.
CARVALHO, G C. Investigation of blood meal sources of mosquitoes
collected in Municipal Parks of São Paulo, by Polymerase Chain Reaction
(PCR) technique. São Paulo, 2013. [Dissertação de Mestrado- Faculdade de
Saúde Pública da Universidade de São Paulo–FSP/USP]
ABSTRACT
The study of the blood meal sources in culicids has evident ecological and
epidemiologic meanings, because assists in the identification the possible
animals involved in maintenance of epidemic outbreaks of the vector-borne
diseases, offering information to indicate the potential pathogen reservoirs.
Among the methods used to evaluate the possible degree of attraction
exercised by certain source of meals relative to culicid females, the Polymerase
Chain Reaction (PCR) stands out, because it is a more efficient technique in
blood meals detected, due to the high sensitivity and specificity. The aim of this
study was to describe the food profile of culicid females captured in the Alfredo
Volpi, Anhanguera, Carmo, Chico Mendes, Ibirapuera, Santo Dias and
Shangrilá parks, located in São Paulo city, investigating possible associations
between mosquito species and their blood meal sources, analyzing the feeding
behavior of these species in different localities of city, during the months
February 2011 and February 2012. The identification of blood meals was
realized by PCR technique for the following vertebrate hosts: avian, dogs, cats,
humans, primates (non-human) and rodents in 510 engorged females
distributed in 14 species captured by aspirator technique, cup CDC, soil CDC
and Shannon trap. Of vertebrates, only cats were not found as source of meal,
while the others have been used as blood meals for mosquitoes in the parks.
Based in statistical tests, there was no trend of association between culicid
engorged species captured and sources of meals, thus evidencing random
patterns of mosquitoes to feed on blood meal sources more abundant or easiest
to be addressed, reinforcing the opportunistic characteristic of the mosquito
females in searching blood meals. Being of fundamental importance such
information in epidemiological context, in order to identify new hosts and
pathogen reservoirs in chains of transmission of vector borne diseases.
Descriptors: Blood meals, culicids, hosts, PCR, epidemiology.
ÍNDICE
1 Introdução 11 1.1 Culicídeos e a urbanização 12 1.1.1 Os parques municipais inseridos na cidade de São Paulo 14 1.2 Culicídeos e a investigação do hábito alimentar 17 1.3 Alimentação e metabolismo das fêmeas adultas de mosquitos 19 1.4 Idade cronológica e idade fisiológica 21 1.5 Determinação da fonte alimentar de insetos hematófagos 21
2 Objetivos 24 2.1 Objetivo Geral 24 2.2 Objetivos Específicos 24
3 Material e Métodos 25 3.1 Local de estudo 25 3.1.1 Caracterização dos parques estudados 27 3.2 Coleta de culicídeos 33 3.2.1 Técnicas de capturas e identificação morfológica dos espécimes 34 3.3 Extração de DNA em fêmeas ingurgitadas 36 3.3.1 Reação em Cadeia da Polimerase 37 3.4 Eletroforese em gel de agarose 39 3.5 Análise estatística 40 3.5.1 Teste de qui-quadrado 40 3.5.2 Análise de Cluster 41
4 Resultados 43 4.1 Parque Alfredo Volpi 44 4.2 Parque Anhanguera 46 4.3 Parque do Carmo 49 4.4 Parque Chico Mendes 51 4.5 Parque Ibirapuera 53 4.6 Parque Santo Dias 56 4.7 Parque Shangrilá 58 4.8 Todos os parques estudados 61
5 Discussão 66
6 Conclusões finais 82
7 Referencias 84
Anexos 98
LISTA DE FIGURAS
Figura 1: Imagem de satélite mostrando os sete fragmentos de área verde 26 Figura 2: Município de São Paulo com a indicação dos setes parques estudado 26 Figura 3: Trilha inserida na Alameda do Parque Alfredo Volpi 27 Figura 4: Área de recreação próxima à administração no Parque Anhanguera 28 Figura 5: Lago represado no Parque do Carmo 29 Figura 6: Trilha em meio à mata no Parque Chico Mendes 30 Figura 7: Alameda central no Parque Ibirapuera 31 Figura 8: Trilha inserida na mata do Parque Santo Dias 32 Figura 9: Vegetação existente no Parque Shangrilá 33 Figura 10: Técnicas utilizadas para captura dos culicídeos 35 Figura 11: Aparência externa do abdome de fêmeas ingurgitadas 36 Figura 12: Esquematização da leitura do Cluster 42 Figura 13: Frequência relativa da contribuição de cada técnica de captura para o parque Alfredo Volpi
45
Figura 14: Cluster para o Parque Alfredo Volpi 45 Figura 15: Frequência relativa da contribuição de cada técnica de captura para o parque Anhanguera
46
Figura 16: Cluster para o Parque Anhanguera 47 Figura 17: Frequência relativa da contribuição de cada técnica de captura para o parque do Carmo
49
Figura 18: Cluster para o Parque do Carmo 50 Figura 19: Frequência relativa da contribuição de cada técnica de captura para o parque Chico Mendes
51
Figura 20: Cluster para o Parque Chico Mendes 52 Figura 21: Frequência relativa da contribuição de cada técnica de captura para o parque Ibirapuera
54
Figura 22: Cluster para o Parque Ibirapuera 54 Figura 23: Frequência relativa da contribuição de cada técnica de captura para o parque Santo Dias
56
Figura 24: Cluster para o Parque Santo Dias 57 Figura 25: Frequência relativa da contribuição de cada técnica de captura para o parque Shangrilá
58
Figura 26: Cluster para o Parque Shangrilá 59 Figura 27: Contribuição de cada parque e de cada técnica de captura em relação à quantidade de ingurgitadas
61
Figura 28: Distribuição da frequência das espécies de culicídeos durante o período de estudo
62
Figura 29: Distribuição da frequência dos hospedeiros fontes de alimentação durante o período estudado
63
LISTA DE TABELAS
Tabela 1: Ordem específica dos grupos de primers e espécies usadas em identificação do repasto alimentar
38
Tabela 2: Reagentes utilizados na PCR para identificação do repasto alimentar de culicídeos (25 μl).
39
Tabela 3: Valores observados para a coleta de culicídeos (sem a técnica de Armadilha de Shannon) e suas respectivas fontes alimentares investigadas no Parque Anhanguera
48
Tabela 4: Valores observados para a coleta de culicídeos (sem a técnica de Armadilha de Shannon) e suas respectivas fontes alimentares investigadas no Parque Chico Mendes.
53
Tabela 5: Valores observados para a coleta de culicídeos (sem a técnica de Armadilha de Shannon) e suas respectivas fontes alimentares investigadas no Parque Ibirapuera
55
Tabela 6: Valores observados para a coleta de culicídeos (sem a técnica de Armadilha de Shannon) e suas respectivas fontes alimentares investigadas no Parque Santo Dias.
58
Tabela 7: Valores observados para a coleta de culicídeos (sem a técnica de Armadilha de Shannon) e suas respectivas fontes alimentares investigadas no Parque Shangrilá.
60
Tabela 8: Valores observados para a coleta de culicídeos (sem a técnica de Armadilha de Shannon) e suas respectivas fontes alimentares investigadas nos parques estudados
64
11
1 INTRODUÇÃO
Até o início do século XIX, os mosquitos foram encarados apenas como
seres desagradáveis. Porém, desde os séculos XVII e XVIII, a sua existência
mereceu atenção por ser comumente encontrada no ambiente humano. A partir
do século XIX foram levantadas as primeiras hipóteses sobre o papel desses
insetos como transmissores de doenças. Assim, o papel epidemiológico dos
culicídeos como vetores biológicos teria sua primeira comprovação com as
observações de Manson, em 1877 na China, quando descobriu o crescimento
e desenvolvimento de vermes nematóides de Wuchereria bancrofti no interior
de mosquitos fêmeas que haviam realizado repasto sanguíneo em seres
humanos infectados, caracterizando assim a filariose bancroftiana, como uma
doença a qual o patógeno é veiculado por mosquitos do gênero Culex. Com
isso, teve-se o nascimento, como ciência, da entomologia médica
(CLEMENTS,1992 ; FORATTINI, 2002).
Os culicídeos são insetos pertencentes à ordem Diptera, sub-ordem
Nematocera, família Culicidae, conhecidos também como mosquitos,
pernilongos, muriçocas ou carapanãs. Os adultos são alados, possuem pernas
e antenas longas, enquanto que as fases imaturas são aquáticas (SOUTO &
PIMENTEL, 2005).
Atualmente, reconhece-se a existência de cerca de 3600 espécies de
mosquitos, as quais se acham distribuídas por aproximadamente 40 gêneros
(SOUTO & PIMENTEL, 2005).
A ampla diversidade desse táxon sugere alta adaptabilidade das
espécies aos diferentes ambientes, desde florestas até áreas urbanizadas.
12
Muitos estudos trazem fatores contribuintes ao conhecimento de mosquitos no
Brasil, um exemplo é o de FORATTINI et al. (1986a) que relacionam seus
hábitos com o desmatamento. FALAVIGNA- GUILHERME et al. (2005)
relacionam os hábitos com a formação de açudes para fins de geração de
energia. Há ainda, de acordo com estudos de TADEI et al. (1998), TADEI &
TATCHER (2000), CASTRO et al. (2006), e de VITTOR et al. (2006), relações
entre a forma de utilização do espaço pelo homem e a adaptação dos vetores,
destacando minerações, rodovias e os processos de urbanização.
1.1 Culicídeos e a urbanização
Nos últimos 50 anos, o Brasil apresentou intensas modificações em
relação ao seu estabelecimento de moradia. Como consequência da alta
migração da população de ambientes rurais para aglomerados urbanos houve
alterações no espectro de doenças, tais como a redução de endemias rurais e
o aumento da frequência de agravos das sociedades modernas. Esses
problemas incluem cardiopatias, neoplasias, problemas secundários à poluição,
acidentes e violência, podendo também destacar doenças cujos agentes
etiológicos são veiculados por vetores biológicos (CHAIMOWICZ, 1997).
A crescente urbanização devido à expansão das cidades, geralmente
com sérios problemas de planejamento e saneamento, tem gerado grande
influência sobre a domiciliação de insetos evidenciando o caráter eclético da
maior parte dos artrópodes. Eles podem adaptar-se ao ambiente urbano,
dispersando-se, tornando-se pragas, provocando incômodos ou transmitindo
agentes causadores de doença (TAIPE-LAGOS & NATAL, 2003).
13
De acordo com NEVES (2005), o crescimento das áreas urbanas e a
consequente diminuição das áreas de mata preservada fortalecem a
sinantropia de diversas espécies de insetos, inclusive os culicídeos, os quais
são animais de fácil adaptação e de grande variabilidade genética, o que
auxilia na dispersão por diferentes regiões.
As alterações causadas pela ação do homem no ambiente natural tende
a gerar um ecossistema artificial, o qual pode ser enriquecido por novas
introduções, como de animais sinantrópicos, a qual possui grande proximidade
e interação com o homem (URBINATTI et al., 2001).
Destacando as doenças urbanas, tem-se a febre amarela, tendo como
agente o vírus amarílico, que circulava nas cidades até a década de 40 do
último século e refugiou-se na floresta em outros reservatórios. Seu vetor
urbano Aedes aegypti, considerado erradicado na época, voltou a se dispersar
pelas cidades passando a veicular o vírus da dengue a partir dos anos 80,
representando hoje, no Brasil, grande desafio para a Saúde Pública (MONDET
et al., 1996, MONDET, 2001, LOURENÇO-DE-OLIVEIRA et al., 2004). Outra
doença de destaque é a filariose, que traz a Wuchereria bancrofti como seu
agente etiológico, sendo esse verme veiculado pelo mosquito Culex
quinquefasciatus, o qual está associado às águas residuais poluídas por
matéria orgânica, o mesmo é referido como um fator de incômodo à população
das grandes cidades na atualidade, como no caso da cidade de São Paulo
(NATAL et al., 1991, LAPORTA et al., 2006, MORAIS et al., 2006).
Ao se refletir sobre tais situações, fica patente a importância da
Entomologia Médica Urbana. São necessárias, na atualidade, pesquisas sobre
vetores que se concentrem no ambiente urbano e focalizem espécies
14
relacionadas à transmissão de patógenos. Ainda que possa se contar com
estudos produzidos a respeito de mosquitos exóticos como Aedes aegypti,
Aedes scapularis e Culex quinquefasciatus, pouco se conhece sobre culicídeos
urbanos autóctones no Brasil (TAIPE-LAGOS & NATAL, 2003).
1.1.1 Os parques municipais inseridos na cidade de São Paulo
A cidade de São Paulo tem atualmente a população estimada em 11,2
milhões de habitantes. Ao se considerar os municípios que compõem a Grande
São Paulo, sua população alcança a cifra de 20,5 milhões de habitantes nesta
metrópole (IBGE, 2011).
Em São Paulo há parques municipais que preservam resquícios da
vegetação original, comportam lagos e servem de abrigo para aves e
mamíferos. Esses pontos são visitados continuamente pela população como
ambientes de lazer (MEDEIROS et al., 2013). Estes parques, “ilhas verdes”,
inseridas na metrópole têm condições de manter populações de algumas
espécies de mosquitos e servem de refúgio para espécies exóticas que
infestam as áreas densamente habitadas da malha urbana como o Aedes
aegypti e o Culex quinquefasciatus (NATAL et al., 1991).
Devido à pressão cada vez mais intensa do homem sobre os ambientes
naturais, há um crescente risco de contato com agentes patogênicos
provenientes desses meios. As arboviroses estão entre os agravos que mais
ameaçam as áreas urbanas, como o ocorrido no passado com a febre amarela
urbana e com a dengue no presente (PEREIRA et al., 2001).O vírus do Nilo
Ocidental (VNO) emergiu nos Estados Unidos da América em 1999,
15
apresentando casos em humanos em áreas densamente povoadas no Estado
de Nova Iorque. A partir daí, dispersou-se por todo o território americano e,
para o norte em direção ao Canadá e ao sul para a América Central (NATAL &
UENO, 2004). Foram registrados surtos da doença por esse vírus em cavalos
na Argentina (MORALES et al., 2006) e na Colômbia (MATTAR et al., 2005),
indicando a possibilidade do vírus se dispersar para o território brasileiro.
A preocupação com arboviroses emergentes e sua circulação em
ambiente antrópico, juntamente com o papel desempenhado por mosquitos na
veiculação destes agentes, justificam o desenvolvimento de estudos sobre a
fauna de culicídeos associada às áreas verdes utilizadas para lazer no interior
da malha urbana. Reforça-se que a Mata Atlântica brasileira, região onde está
inserida a cidade de São Paulo, é incluída entre os 25 “hotspots” do planeta,
locais que devem ser prioritariamente investigados (MYERS et al., 2000).
Apesar dos poucos estudos feitos sobre a fauna de mosquitos da cidade
de São Paulo, trabalhos em áreas periféricas indicam abundância destes em
parques (NATAL et al., 1991).
Estudos feitos no Parque Ecológico do Tietê mostram que a partir de
53.496 exemplares coletados identificou-se 25 espécies, destacando-se Aedes
scapularis, Culex quinquefasciatus e Culex declarator (TAIPE-LAGOS &
NATAL, 2003). Estudos nos contornos urbanos na Serra da Cantareira
identificaram 11 gêneros comportando 21 espécies (MONTES, 2005).
Como a problemática da proliferação do Culex quinquefasciatus nas
águas ricas em material orgânico, como as águas do Rio Pinheiros, há um
sério problema a ser enfrentado por órgãos responsáveis pelo controle (Centro
de Zoonoses da Prefeitura de São Paulo-CCZ). Muitos estudos investigativos
16
estão voltados a essa espécie (NATAL et al., 2004 LAPORTA et al., 2006,
MORAIS et al., 2006,).
Pesquisas da década de 1970 sobre mosquitos Culex na cidade de São
Paulo, coletados em oito pontos que representam áreas distintas do município
constataram, além de Culex quinquefasciatus, as seguintes espécies: Culex
chidesteri, Culex dolosus e Culex bidens (FORATTINI et al., 1973). Atualmente,
de acordo com dados não publicados do CCZ, nas rotinas de vigilância de
culicídeos em vários pontos da cidade, contatou-se a presença de outras
espécies, além dos conhecidos mosquitos urbanos exóticos, sendo
identificadas por esse serviço: Aedes fluviatilis, Aedes scapularis, Culex bidens,
Culex chidesteri, Culex lygrus, Coquillettidia venezuelensis, Anopheles
evansae, Mansonia spp. e Uranotaenia spp. Esses registros de serviços nunca
foram analisados sob o ponto de vista epidemiológico ou ecológico, mas
sugerem que os mosquitos tenham subsistido ao processo de urbanização na
Grande São Paulo.
Segundo o site da Secretaria Municipal do Verde e do Meio Ambiente, o
programa “100 Parques para São Paulo”, lançado em 2008, fez um
levantamento das áreas a serem transformadas em parques em diversas
regiões da cidade. A cidade apresentava 34 parques em 2005 (15 milhões de
m² de área protegida municipal), passando para 60 parques em 2009 (24
milhões de m²), sendo a meta chegar em 100 parques por toda a cidade de
São Paulo (50 milhões de m²), com o intuito de preservar a diversidade do
ambiente natural na cidade paulistana (PORTAL DA PREFEITURA DE SÃO
PAULO, 2012).
17
1.2 Culicídeos e a investigação do hábito alimentar
Segundo LEITE (2007), uma apropriada interpretação das variáveis
ecológicas relacionadas aos culicídeos desponta como temática de suma
importância na atualidade em função do caráter antropofílico de alguns insetos,
das transformações antrópicas que modificam o ambiente, das grandes
variações climáticas e também em função do papel relevante que o estudo
deste assunto faz presente na elaboração dos Programas Nacionais de Saúde
Pública. Isso ocorre em função de alguns culicídeos serem veiculadores de
agentes patogênicos ao homem que acabam por causar grandes transtornos à
sociedade, gerando epidemias, como as que ocorrem com a dengue, endemias
de malária, filarioses e encefalites. Doenças essas, que vitimam um grande
contingente de pessoas proporcionando prejuízos pessoais e gastos
exorbitantes do ponto de vista de Saúde Pública (FORATTINI, 2002).
Considerando que as doenças podem se espalhar de um continente a
outro e que os culicídeos estão relacionados a essa difusão, evidencia-se a
importância de conhecer seus hábitos e traçar uma relação entre esses
costumes e a transmissão de agentes causadores de zoonoses. Segundo
MARASSÁ et al. (2008) é importante estudar os comportamentos alimentares
de mosquitos, pois suas refeições são parâmetros significantes para a
determinação de suas adaptações, para a avaliação da capacidade vetorial e
para a compreensão do ciclo de transmissão de parasitoses. GARCEZ-REJON
et al. (2010) e LOROSA et al. (2010), concordam com essa visão e a
complementam quando colocam que o conhecimento do hábito alimentar
18
possibilita o monitoramento de vetores e o planejamento de estratégias
eficientes no seu controle.
A fonte alimentar dos culicídeos dependerá do ambiente em que se
encontram e da densidade de hospedeiros disponíveis (KELLY, 2001;
FORATTINI, 2002). Mudanças no comportamento alimentar de mosquitos
explicam-se pela pressão de seleção e a tentativa de adaptação para localizar,
discriminar e obter sucesso frente a novos hospedeiros (EDMAN, 2003).
Assim como MARASSÁ (2009a), MURIU et al. (2008) traça um paralelo
entre a alimentação e os parâmetros de adaptações. A escolha da fonte
alimentar pode ser feita de acordo com fatores ambientais, podendo variar com
as exigências nutricionais, densidade de vetores, disponibilidade de
hospedeiros e suas necessidades intrínsecas.
Apesar das variações ambientais negarem padrões, existem
características que podem ser destacadas. Diante de observações científicas
da fauna culicidiana, evidenciou-se que a evolução proporcionou apenas as
fêmeas a hematofagia e que algumas espécies possuem “preferências”
alimentares por determinados hospedeiros. Tal “preferência” inclui ainda
horários de alimentação e pode ser influenciada pelos hábitos dos hospedeiros
vertebrados (GUIMARÃES, 1997).
Desta forma, a identificação do repasto alimentar de insetos
hematófagos fornece informações dos hospedeiros em condições naturais. A
relação antropofílica (porcentagem de repastos realizados em humanos) é um
componente essencial para avaliar a capacidade vetorial, além de fornecer o
conhecimento de outros hospedeiros, os quais podem participar como
reservatórios de determinados patógenos (BOAKEY et al., 1999).
19
Sendo assim, o estudo do comportamento do padrão do hábito alimentar
do artrópode pode mostrar a evolução entre a especificidade dos hospedeiros
vertebrados e de seus ectoparasitas, bem como a “escolha” do inseto
hematógafo pelo sangue do hospedeiro, o que influenciará diretamente na
transmissão de patógenos, além de impactos econômicos e na Saúde Pública
(WELLS & STEVENS, 2008).
1.3 Alimentação e metabolismo das fêmeas de mosquitos adultos
As fêmeas de mosquitos se alimentam de sangue pra obterem proteínas
para o desenvolvimento do ovário, porém ressalta-se que ambos os sexos
requerem o néctar vegetal como fonte de energia, sendo este a maior fonte de
alimento para os mosquitos (CLEMENTS, 1992).
O sangue ingerido pelas fêmeas de mosquitos é usado principalmente
para produção dos ovos e há evidências que esta também sirva como fonte
energética. A relação entre o desenvolvimento dos ovos e o sangue se dá
devido à função proteica do sangue. A produção de ovos não é aumentada ou
melhor viabilizada quando há apenas a adição na dieta alimentar de vitaminas,
ácidos nucleicos ou esteróis. Porém, a adição de íons de potássio e sódio pode
levar ao dobro da produção de ovos quando são incluídos na alimentação
(CLEMENTS, 1992).
Estudos indicam a necessidade de pelo menos dez aminoácidos
essenciais na dieta para que ocorra a produção normal de ovos: arginina, L-
isoleucina, leucina, lisina, fenilalanina, treonina, triptofano, valina, histidina e
metionina (CONSOLI & LOURENÇO DE OLIVEIRA, 1994).
20
Segundo CLEMENTS (1992), para a espécie Aedes aegypti, o
aminoácido L-isoleucina é um fator limitante para a produção de ovos, quando
o mesmo ingere sangue de certos vertebrados, como de bovinos ou ovelhas,
pois esses hospedeiros apresentam a L-isoleucina em baixa quantidade. Para
outros mosquitos e diferentes hospedeiros vertebrados, existem outros
aminoácidos que podem ser limitantes.
Há indícios de que em algumas espécies de mosquitos o tipo de sangue
ingerido pode influenciar o tamanho da desova (CONSOLI & LOURENÇO DE
OLIVEIRA, 1994).
Muitas espécies de culicídeos se alimentam em mamíferos e aves, mas
pequena parcela regularmente faz seus repastos em répteis, anfíbios e peixes
(CLEMENTS, 1992), sendo que os gradientes de temperatura e/ou a umidade
de extrema importância para determinar o local onde o mosquito irá pousar no
hospedeiro para se alimentar (GILLOTT, 2005).
Em geral, as fêmeas de mosquitos ingerem mais sangue que o próprio
peso, podendo consumir de duas a quatro vezes o peso do próprio corpo, de
acordo com a espécie de mosquito, o que em microlitros representa valores
entre 5-9 µl (GILLOT, 2005).
Na ausência de repasto sanguíneo, geralmente ocorre uma parada no
desenvolvimento do ovaríolo (diapausa ovariana) sendo o crescimento
retomado após o repasto sanguíneo, que funciona como fator estimulante
(CONSOLI & LOURENÇO DE OLIVEIRA, 1994).
21
1.4 Idade cronológica e idade fisiológica
Define-se a idade cronológica pelo intervalo de tempo, medido em dias,
vivido pelo inseto. Vários métodos, tais como as medidas de desgaste das asas
ou da escamação do corpo podem ser descritas para avaliação da sobrevida
na natureza. A idade fisiológica das fêmeas é avaliada pela pariedade das
mesmas e pela observação das características das traquéias ovarianas e dos
ovaríolos, onde se é possível observar a idade fisiológica a nível populacional,
constituindo um dado importante na determinação do potencial vetorial de uma
população de mosquitos (CONSOLI & LOURENÇO DE OLIVEIRA, 1994).
Assim, quando existe concordância gonotrófica e um intervalo de tempo
razoavelmente constante entre os repastos sanguíneos e as posturas, pode-se
calcular a idade cronológica aproximada a partir da idade fisiológica (CONSOLI
& LOURENÇO DE OLIVEIRA, 1994).
1.5 Determinação da fonte alimentar de insetos hematófagos
A habilidade para identificar o repasto sanguíneo em artrópodes
hematófagos revolucionou o entendimento da interação hospedeiro-vetor e a
ecologia das doenças infecciosas (KENT et al, 2009).
Existem várias técnicas para identificação do hábito alimentar de insetos,
dentre elas destacam-se: a reação de precipitina, a cristalização da
hemoglobina, as reações de aglutinação, o teste de hemaglutinação passiva e
o método imunohistoquímico de imunofluorescência e a reação da cadeia da
polimerase (PCR) (DEUS, 2011; BOAKEY et al., 1999).
22
O teste de reação de precipitina consiste em uma reação direta do
sangue ingerido, suspenso em um diluente, com um antisoro, entretanto, é uma
técnica que oferece diversas limitações, principalmente a baixa sensibilidade e
a necessidade de grandes quantidades de amostras (TEMPELIS, 1975).
O teste imunoenzimático ELISA consiste em um ensaio heterogêneo que
detecta antígenos ou anticorpos através de uma coloração medida em
absorbância por espectrofotômetro (BEIER et a.l,1988). Tal método pode ser
realizado de duas formas: sendo o método direto, mais rápido e permite que
um grande número de amostras sejam processadas (EDRISSIAN et al.,1985) e
o método indireto, mais complexo, requerendo da utilização de um anticorpo
para cada hospedeiro testado (BEIER et al.,1988).
Técnicas moleculares, como a PCR, foram adaptadas à identificação
das possíveis fontes alimentares de insetos vetores, dentre eles, os culicídeos
(KENT & NORRIS, 2005). A PCR que utiliza marcadores de genes
mitocondriais, tais como o gene CYTB que codifica a proteína citocromo b, para
detecção de hábito alimentar de vários vetores tem a vantagem destes estarem
localizados no genoma mitocondrial (que não sofre recombinação), tendo uma
taxa de evolução lenta, além da disponibilidade de sequências completas no
“Genbank” (www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank/), que permite uma comparação
extensa entre as espécies (CHOW et al.,1993), apontando, por vezes,
reservatórios não esperados (CHOW et al., 1993; HAOUAS et al., 2007).
Nesse sentido, a identificação de repastos sanguíneos de fêmeas
ingurgitadas pela PCR é eficiente, pois permite que os genes sejam clonados
direta e rapidamente, sem que haja a necessidade da construção de bibliotecas
de DNA. A técnica apresenta vantagens em relação à sua rapidez e
23
sensibilidade, pois utiliza poucas horas para sua efetividade e pode detectar
uma única molécula de DNA em uma amostra (WALTER, 2006).
Diante do exposto, justifica-se a realização de estudo da “preferência”
alimentar da fauna urbana de culicídeos associadas às áreas protegidas
utilizadas para lazer na cidade de São Paulo, pois a identificação do sangue
ingerido por vetores hematófagos é importante no estudo da disseminação de
antropozoonoses endêmicas e emergentes. Investigando os aspectos
ecológicos e epidemiológicos de possíveis organismos envolvidos nos ciclos
das doenças transmitidas por patógenos, os quais são carreados por vetores
biológicos.
Salientando-se que os resultados obtidos poderão contribuir para as
possíveis ações de controle e monitoramento em ações epidemiológicas, uma
vez que essa pesquisa pode servir como apoio e referência para futuros
trabalhos nesta linha.
24
2 OBJETIVOS
2.1 Objetivo geral
Estudar a fauna Culicidae nos parques: Alfredo Volpi, Anhanguera,
Carmo, Chico Mendes, Ibirapuera, Santo Dias e Shangrilá na cidade de São
Paulo e descrever o comportamento alimentar das espécies de culicídeos
capturadas.
2.2 Objetivos Específicos
Identificar os espécimes de culicídeos coletados;
Detectar o repasto sanguíneo em fêmeas ingurgitadas pela técnica da
PCR;
Investigar se há associação entre as espécies de mosquitos e as fontes
alimentares por meio do teste de qui-quadrado;
Agrupar as espécies de fêmeas ingurgitadas em relação ao repasto
alimentar por meio da ferramenta “cluster”;
Verificar o método de captura de fêmeas ingurgitadas mais eficiente.
25
3 MATERIAL E MÉTODOS
3.1 Local de estudo
Foram estudados sete parques distribuídos pela cidade de São Paulo.
A seleção dos parques baseou-se em facilidade de acesso á localidade
e nos aspectos de riqueza, diversidade, abundância e dominância das espécies
de culicideos presentes no ambiente (MEDEIROS et al., 2013).
Dessa forma, os parques estudados foram: Anhanguera, Shangrilá,
Santo Dias, Alfredo Volpi, Chico Mendes, Carmo e Ibirapuera.
Tais parques estão inseridos na malha urbana da cidade de São Paulo,
com exceção do Parque Anhanguera, localizado na região rural do município.
Estes parques servem como áreas de lazer, recreação e cultura á população
(Figura 1).
Destaca-se que esses parques estão distribuídos por todas as zonas
regionais da cidade de São Paulo (Figura 2).
26
Figura 1: Imagens de satélite mostrando sete fragmentos de área verde (parques) situados na cidade de São Paulo: A = Anhanguera, B = Shangrilá, C = Santo Dias, D = Alfredo Volpi, E = Chico Mendes, F = Carmo e G = Ibirapuera. Fonte: Google Earth™, 2012.
Figura 2: Município de São Paulo com indicações dos sete Parques Municipais referenciados como potenciais pontos de coleta de mosquitos. Fonte: Prefeitura do Município de São Paulo, Secretaria do Verde e do Meio Ambiente, 2007. (Adaptado).
27
3.1.1 Caracterização dos parques estudados
Parque Alfredo Volpi: Ocupa a área de 142,4 km². Foi criado em 02 de
Abril de 1971 (CENTRO DE PESQUISAS DE HISTÓRIA NATURAL-CPNH-,
1985-88) e é um remanescente da área verde de Mata Atlântica em estágio
médio de sucessão, que preservou o capão de mata de gleba. Apresenta
relevo de declividade acentuada formando um pequeno vale, onde existem
pequenos lagos e uma nascente. Toda área é recoberta por denso bosque
implantado e áreas ajardinadas. A fauna existente no parque foi relatada em
110 espécies de vertebrados (PREFEITURA DO MUNICÍPIO DE SÃO PAULO-
SECRETARIA MUNICIPAL DO VERDE E DO MEIO AMBIENTE, 2007).
Na Figura 3 é possível visualizar um trecho de trilha inserida no parque,
utilizado para caminhadas pela população, local onde foram realizadas
algumas aspirações para o presente trabalho.
Figura 3: Trilha inserida nas alamedas do Parque Alfredo Volpi. Foto: Maria Helena Silva Homem de Mello, 2011.
Parque Anhanguera: Com 9.500 km² de área, situa-se entre os
quilômetros 25 e 29 da Rodovia Anhanguera, tendo como limites os municípios
28
de Cajamar e Caieiras. Eucaliptos ocupam 39% da área, plantados pelo Grupo
Abdala para comercialização até 1964 (CPHN, 1985-88). Além de eucaliptos e
Pinus sp., existem espécies nativas da flora em remanescentes de vegetação
ripária, existindo o plano de recomposição que pretende substituir
gradualmente, por espécies autóctones, o eucaliptal. Atualmente, pode-se
observar que espécies nativas formaram um variado sub-bosque sob os
eucaliptos e remanescentes de Mata Atlântica ao longo do curso d’água. O
Parque encontra-se próximo a duas zonas núcleos da Reserva da Biosfera do
Cinturão Verde do Estado de São Paulo, a Serra da Cantareira, distando 5 km,
e a Serra do Japi, distando 20 km. A fauna consiste em 230 espécies de
vertebrados relatadas, das quais 146 são aves. O Parque Anhanguera abriga o
Centro de Reabilitação de Animais Silvestres (PREFEITURA DO MUNICÍPIO
DE SÃO PAULO- SECRETARIA MUNICIPAL DO VERDE E DO MEIO
AMBIENTE, 2007).
Na Figura 4 é possível observar a área de recreação do parque com
quiosques para uso da comunidade, sendo essa margeada de eucaliptos.
Figura 4: Área de recreação próxima a administração do Parque Anhanguera. Foto: Paulo R. Urbinatti, 2011.
29
Parque do Carmo: Inaugurado em setembro de 1976, foi instalado nas
antigas terras desapropriadas da Fazenda do Carmo, ocupando uma área de
2.388,9 km². Na área do Parque as inúmeras nascentes foram represadas,
formando um grande lago, com 15 km² de superfície. Predominam áreas
gramadas, remanescentes de Mata Atlântica e mata ciliar, campos antrópicos e
brejos, sendo que o pequeno vale na porção oeste é ocupado por
reflorestamento de eucaliptos. Sobre a fauna existente no parque foram
relatadas 135 espécies de vertebrados. (PREFEITURA DO MUNICÍPIO DE
SÃO PAULO- SECRETARIA MUNICIPAL DO VERDE E DO MEIO AMBIENTE,
2007).
A Figura 5 mostra parte do lago represado no Parque do Carmo, bem
como o remanescente de mata instalada no parque.
Figura 5: Lago represado no Parque do Carmo, em destaque a vegetação de mata ciliar e trecho de mata, locais onde foram realizadas aspirações. Foto: Paulo R. Urbinatti, 2011.
Parque Chico Mendes: Foi criado em junho de 1989, em área
desapropriada em 1988, na antiga Chácara Figueira-Grande, tendo em vista a
30
preservação de uma mata natural remanescente. O Parque possui 61,7 km²,
com topografia acidentada (desnível de 8%), abrigando um vale, um córrego e
um pequeno lago. Um bosque de eucaliptos, maciço de frutíferas e
ornamentais foram plantados pelos antigos proprietários. A área verde ocupa
cerca de 80% do terreno. A fauna foi relatada com 26 espécies de vertebrados,
nas quais 40 são aves (PREFEITURA DO MUNICÍPIO DE SÃO PAULO-
SECRETARIA MUNICIPAL DO VERDE E DO MEIO AMBIENTE, 2007).
Na Figura 6 pode-se visualizar uma trilha existente no parque em meio a
vegetação.
Figura 6: Trilha em meio a mata no Parque Chico Mendes. Foto: Paulo Roberto Urbinatti, 2011.
Parque Ibirapuera: Teve sua construção iniciada nas primeiras décadas
do século XX, nos campos alagadiços da várzea Santo Amaro.O Parque ocupa
1.584 km², e a área dos quatro lagos interligados corresponde a
aproximadamente 157 km² (CPHN, 1985-88). Apresenta diversos tipos de
vegetação, como bosque de eucaliptos, bosques plantados de espécies nativas
e exóticas, áreas gramadas e jardins. Ressalta-se que o Parque Ibirapuera é o
principal parque da cidade recebendo em média 1 milhão de visitantes por
31
mês. Em relação á fauna foram relatadas 183 espécies de vertebrados no
parque (SÃO PAULO, 1998a; PREFEITURA DO MUNICÍPIO DE SÃO PAULO-
SECRETARIA MUNICIPAL DO VERDE E DO MEIO AMBIENTE, 2007).
A Figura 7 ilustra uma das alamedas do Parque, local de lazer e de
práticas de esporte para a população.
Figura 7: Alameda central no Parque Ibirapuera. Foto: Paulo R. Urbinatt, 2011.
Parque Santo Dias: Foi implantado em novembro de 1992. Com área de
134 km², abriga remanescentes de mata do cinturão verde ao redor de São
Paulo. A topografia é de acentuada declividade, recoberta por mata, e uma
clareira central, com revestimento de capoeira baixa (área de 17,5 km²). O
Parque faz divisa com conjuntos habitacionais (Cohab), a Industria Superbom,
do Instituto Adventista de Ensino, e um córrego (TAKAHASHI et al., 1993).
Abrigando uma nascente em suas dependências, no Parque foram relatadas
84 espécies de vertebrados, dentre as quais 75 são aves (PREFEITURA DO
MUNICÍPIO DE SÃO PAULO- SECRETARIA MUNICIPAL DO VERDE E DO
MEIO AMBIENTE, 2007).
A Figura 8 ilustra a vegetação inserida no parque.
32
Figura 8: Trilha inserida na mata existente no Parque Santo Dias. Foto: Paulo R. Urbinatti, 2011.
Parque Shangrilá: Implantado próximo a Represa Billings, o Parque fica
dentro da Área de Proteção Ambiental Bororé-Colônia. Objetivando preservar o
patrimônio ambiental da cidade a partir da aquisição de áreas verdes potenciais
e estratégicas, implantando um sistema de gestão adequado, preservando e
enriquecendo a biodiversidade da cidade e protegendo a represa, dentro da
Operação Defesa das Águas. A fauna é bastante heterogênea, composta de
109 espécies, distribuídas entre invertebrados (mosquitos, borboletas e
aranha), anuros e répteis, marsupiais e primatas e 90 espécies de aves. A
vegetação é composta por áreas ajardinadas e eucaliptal com sub-bosque
onde foi realizado plantio de mudas de árvores (PREFEITURA DO MUNICÍPIO
DE SÃO PAULO- SECRETARIA MUNICIPAL DO VERDE E DO MEIO
AMBIENTE, 2007).
Na Figura 9 se visualiza uma parte da mata existente no Parque.
33
Figura 9: Vegetação existente no Parque Shangrilá (local onde foram realizadas as aspirações). Foto: Paulo R. Urbinatti, 2011.
3.2 Coleta dos culicídeos
O período estudado compreendeu coletas mensais entre Fevereiro de
2011 à Fevereiro de 2012, realizando-se 13 coletas em cada parque.
Para a realização das coletas, foi feita uma parceria entre os
pesquisadores do Departamento de Epidemiologia da Faculdade de Saúde
Pública da Universidade de São Paulo (FSP-USP), a equipe do Departamento
de Parque e Áreas Verdes-3 da Secretaria do Verde e do Meio Ambiente da
cidade de São Paulo (DEPAVE-3) e o Laboratório de Fauna Sinantrópica do
Centro de Controle de Zoonoses da Prefeitura do Município de São Paulo
(CCZ- PMSP). Este apoio técnico do DEPAVE-3 e CCZ facilitou o trabalho de
campo, como o acesso aos parques, permitindo a coleta do material biológico.
Todos os culicídeos obtidos nas coletas foram acondicionados
adequadamente, em caixas entomológicas com sílica para o transporte até o
laboratório para identificação.
34
3.2.1 Técnicas de capturas e identificação morfológica dos
espécimes coletados
Mosquitos adultos foram capturados no interior dos parques, mediante o
uso de aspiradores, armadilhas automáticas do tipo CDC e armadilhas de
Shannon (BUSTAMANTE & PIRES 1951, GOMES et al., 1985), como mostra a
Figura 10.
Os culicídeos foram coletados com o auxílio de aspiradores movidos a
baterias (12 V), à luz do dia em áreas de vegetação, as quais servem de abrigo
às fêmeas de mosquitos que estão em repouso após a realização da
hematofagia (FORATTINI, 2002), perfazendo um total de três aspirações
distribuídas nos períodos matutino e vespertino, como descrito por NASCI
(1981).
As armadilhas do tipo CDC com luz, acrescidas de gelo seco como
atrativo, foram instaladas nos ecótopos: área construída, área aberta e área
com cobertura arbórea, sendo instaladas tanto em copas das árvores quanto
no solo (altura de 1 metro), compreendendo seis armadilhas instaladas. Essas
armadilhas foram acionadas no início do crepúsculo vespertino e mantidas por
três horas.
Simultaneamente à operação das armadilhas CDC, foi instalada, em
local definido, uma armadilha de Shannon com luz de lampião a gás e com três
indivíduos coletores, iniciando a captura no horário do crepúsculo vespertino e
mais duas horas pós-crepusculares. Os coletores, munidos de aspiradores
elétricos manuais (6 V) ou tubos mortíferos contendo clorofórmio, efetuaram a
captura nas superfícies da armadilha.
35
Figura 10: Técnicas utilizadas para a captura de culicídeos. A: CDC luminosa na copa; B: CDC luminosa no solo, C: Aspiração e D: Armadilha de Shannon. Foto: Paulo R. Urbinatti, 2011.
A identificação e catalogação de espécies de mosquitos foram feitas no
Laboratório de Culicidologia da FSP-USP. A identificação morfológica foi feita
em microscopia esteroscópica realizada segundo FORATTINI (2002) e
CONSOLI & LOURENÇO-DE-OLIVEIRA (1994).
As espécies nesse presente trabalho identificadas como Culex (Cux.)
spp., na realidade tratam-se de espécies que formam o complexo críptico da
subespécie Culex, não sendo possível a identificação à nível de espécie
apenas com a fêmea ingurgitada.
Todas as fêmeas que continham em seu abdome vestígio parcial ou
completo de sangue, o que denotava ter realizado repasto sanguíneo, foram
identificadas com no prazo máximo de 24 horas após coleta e colocadas em
36
álcool isopropílico (C3H8O), tendo suas respectivas identificações anotadas em
microtubos e banco de dados.
Sendo estabelecido o tempo, em horas, do repasto sanguíneo das
ingurgitadas por meio da quantidade de sangue contida no abdome de cada
fêmea, padronizado segundo CHRISTOPHERS (1911) (Figura 11).
Figura 11: Aparência externa do abdome de fêmea de
mosquito mostrando os diferentes estádios de desenvolvimento
dos ovos.
Fonte: Christophers, 1911.
3.3 Extração de DNA em fêmeas ingurgitada e identificação do repasto
sanguíneo
A extração do DNA genômico foi realizada com o Kit “DNeasy Blood and
Tissue Handbook” (Quiagen©), utilizando o protocolo de Purificação de DNA de
sangue ou fluídos corpóreos (Spin Protocol), seguindo recomendações do
fabricante.
37
Ressalta-se que a extração foi realizada individualmente para cada
espécime de mosquito coletado, tendo no final da extração 25 μl de solução
(Buffer solution) contendo DNA diluído.
As fêmeas ingurgitadas foram processadas para determinação do
repasto sanguíneo pela técnica de PCR no Laboratório de Protozoologia do
Instituto de Medicina Tropical da Universidade de São Paulo (IMT-USP).
3.3.1 Reação em Cadeia da Polimerase (PCR)
Para a escolha dos primers a serem utilizados no presente trabalho, foi
realizada uma pesquisa sobre a fauna de vertebrados existente em cada
parque estudado. Dessa forma a investigação para o repasto sanguíneo dos
mosquitos abrangeu os seguintes grupos de animais: aves, cão, gato, humano,
primatas e roedores (PREFEITURA DO MUNICÍPIO DE SÃO PAULO-
SECRETARIA MUNICIPAL DO VERDE E DO MEIO AMBIENTE, 2007).
O diagnóstico do repasto alimentar foi realizado utilizando a técnica de
PCR com primers especifícos para cada espécie estudada, os quais
amplificaram o gene CYTB (CHANG et al., 2008). Dessa forma, foi possível a
determinação de repastos sanguíneos realizados pelo mesmo mosquito em
diferentes hospedeiros.
Para a validação da amplificação do material gênico provindo do repasto
sanguíneo do mosquito, foi utilizado em cada reação um controle positivo
extraído do sangue do hospedeiro a ser investigado e um controle branco (com
água ao invés do DNA) para eliminar o viés de contaminação de reagentes.
38
A Tabela 1 descreve as sequências específicas utilizadas nos primers
utilizados bem como a temperatura de hibridação envolvida e o tamanho da
amplificação do produto (pb) (CHANG et al., 2008).
Os reagentes necessários para a mistura de PCR (mix) podem ser vistos
na Tabela 2.
Os parâmetros para o termociclador (Mastercycler Gradient, Eppendorf®)
consistem nas seguintes etapas: as reações iniciaram-se com uma
desnaturação inicial de 94ºC por 02 minutos; seguidas por 35 ciclos (exceto
para a investigação de repasto em aves, que foram utilizados 30 ciclos)
constituídos de desnaturação a 94ºC por 30 seg, hibridação a 60-74ºC por 30
seg (variando de acordo com cada primer, como descritos na Tabela 1) e
extensão a 72ºC por 30 seg; seguido de extensão final a 72ºC por 10 min.
Tabela 1: Ordem específica dos grupos de primers e espécies usadas em identificação do repasto alimentar
Animal
testado
Sequência do primer
(5’ – 3’)
Temp. de
hibridação
(ºC)
Produto da
amplificação
(pb)
AVE F: CAAATATCNTTCTGAGGNGCYAC
R: GGGTGTTCDACDGGTTGGCTNCC 64 508
CÃO F: GAACTAGGTCAGCCCGGTACTT
R: CGGAGCACCAATTATTAACGGC 67 153
GATO F: TTCTCAGGATATACCCTTGACA
R: GAAAGAGCCCATTGAGGAAATC 72 180
HUMANO F: TTCGGCGCATGAGCTGGAGTCC
R: TATGCGGGGAAACGCCATATCG 70 228
PRIMATA F: AGTTGCYCACATYACCCG
R: GTRTARTAGGGRTGRAATC 72 480
ROEDOR F: CGGCCACCCAGAAGTGTACATC
R: GGCTCGGGTGTCTACATCTAGG 60 196
Fonte: CHANG et al., 2008 (adaptado).
39
Tabela 2: Reagentes utilizados na PCR para identificação do repasto alimentar de culicídeos (25 μl).
Reagentes Quantidade (μl)
Água de injeção (estéril) 13,8
Tampão (Buffer) 10X 2,5
Cloreto de Magnésio (MgCl) à 50Mm 1,5
Dntp’s à 10mM 0,5
Iniciador (Primer foward) à 10mM 0,75
Iniciador (Primer reverse) à 10mM 0,75
Platinum Taq DNA polimerase (Invitrogen) 0,2
DNA 5
Fonte: CHANG et al., 2008 (adaptado).
Salienta-se a modificação do primer de primatas, o qual foi desenhado
para primatas do novo mundo (sequência essa descrita na Tabela 1),
substituindo a sequência de primers para primatas do velho mundo
desenhadas por CHANG et al., (2008).
Após o termino da reação de PCR, os produtos foram armazenados em
freezer -20ºC, até a sua visualização por meio de eletroforese em gel de
agarose.
3.4 Eletroforese em gel de agarose
O produto da PCR foi submetido a eletroforese em gel de agarose a 2%
preparado com tampão Tris-Borato-EDTA (TBE). O gel foi coberto com tampão
TBE e corado em brometo de etídeo. Utilizou-se de 2µl de tampão carregador
de amostra (glicerina e azul de bromofenol) para cada amostra a ser analisada.
Pipetou-se 10µl de amplicon em cada poço do gel. Utilizou-se o marcador de
40
massa molecular 100 pb DNA Ladder (Invitrogen) e intensidade de corrente de
124 mA e tensão de 6v/cm.
Os géis foram visualizados utilizando o transiluminador em fonte de luz
ultravioleta de 302 nm. A captura da imagem foi realizada com o programa
“Alpha Imager”. As amostras que apresentaram os produtos de amplificação
mencionados na Tabela 1 foram consideradas positivas para a presença de
sangue dos respectivos hospedeiros animais.
3.5. Análise estatística
A busca por associação entre os culicídeos e a fonte alimentar foi
realizada pelos métodos de qui-quadrado (Item 3.5.1) e pela análise de cluster
(Item 3.5.2).
3.5.1 Teste Qui-quadrado (teste associativo)
Foi realizado o teste de qui-quadrado para os parques, de forma
individual e coletivamente, a nível de significância de α de 0,05, um teste não
paramétrico para dados qualitativos, sendo aplicável para análise de pequenas
amostras (n<30) onde se considerou as hipóteses: H0, como não havendo uma
“predileção” por sangue de determinado hospedeiro pelas as espécies de
mosquitos, sendo de caráter aleatório e H1; como havendo uma associação
entre determinada espécie de mosquito e sua fonte alimentar (FONSECA &
MARTINS, 2011; MARASSÁ, 2009a), utilizando-se das ferramentas do
programa EXCEL 2010.
41
Esse teste preconiza que para uma associação melhor fundamentada
entre suas variáveis, o ideal é que os valores inferior a 5 não totalizem menos
que 20% das caselas na tabela dos valores esperados. Ressalta-se que para
nossa análise isso não foi possível, devido que nosso n amostral não foi o
mesmo para todas as espécies coletadas (FONSECA & MARTINS, 2011).
Porém, o cálculo foi realizado para a maioria dos parques, mesmo com tais
limitações, para averiguar alguma tendência entre fonte alimentar e
determinada espécie de culicídeo.
3.5.2 Análise de Cluster
A análise de cluster foi realizada para cada parque afim de, constituir
grupos em que os elementos sejam os mais próximos entre si e entre os mais
distantes entre si, utilizando-se do programa estatístico PAST (Palaeontological
Statistics) na versão 2011, um programa de download gratuito na internet,
fornecido por HAPPER et. al (2012).
A leitura do cluster é dada de forma agrupada, sendo que na árvore
onde se encontra as fontes alimentares se tem o valor atribuído de quantas
vezes tal hospedeiro foi tido como fonte de alimentação por determinado
mosquito.
Na árvore inferior onde se há o agrupamento entre as espécies de
mosquitos, as espécies que formam o mesmo clado estão agrupadas pois
tiveram as mesmas fontes alimentares, as espécies que estão mais distantes
na árvore tiveram apenas um hospedeiro em comum ou uma fonte alimentar
diferente dos demais culicídeos (HAPPER et al., 2001).
42
Uma maneira ilustrativa de como compreender a leitura dos clusters é
mostrada na Figura 12.
Figura 12: Esquematização de como se é realizada a leitura dos clusters.
43
4 RESULTADOS
Os resultados da padronização do repasto alimentar dos culicídeos
capturados nos sete parques estudados compreendeu o total de 510 fêmeas
ingurgitadas de 17106 mosquitos capturados durante o estudo. Foi possível a
detecção do repasto alimentar em 447 das amostras processadas, tendo como
amostras de repasto misto (dois ou mais hospedeiros na mesma fêmea
ingurgitada) em 109 fêmeas, salientando-se que os repastos mistos variaram
entre humanos, aves, roedores e cães.
Do total de amostras processadas, 63 foram dados inconclusivos, não
havendo amplificação alguma do material genético para as fontes alimentares
estudadas, tal indicativo pode ser interpretado pelo fato das fêmeas
ingurgitadas terem sido colocadas no álcool com o tempo superior à 24 horas,
ou na realidade, o vestígio de sangue, proveio de outra fonte alimentar que não
foi abrangida nessa pesquisa.
Ressalta-se que o vertebrado “gato”, foi excluído das análises de cluster,
pois não houve nenhum resultado positivo nas amostras processadas.
Para a análise do qui-quadrado, as amostras que foram positivas,
provindas de coletas pela armadilha de Shannon, foram retiradas da análise,
na tentativa de se eliminar o viés existente de que o sangue humano
identificado não seja o sangue dos próprios capturadores durante a coleta.
Por considerar a abordagem de cluster de maneira descritiva, aqui foram
considerados os resultados positivos provindos da captura da armadilha de
Shannon.
44
A apresentação dos resultados obtidos se encontra de forma separada
por parque e depois uma análise geral, a qual une todos os parques como
sendo um “ecótopo” único, com o intuito de se analisar as áreas de inserção de
vegetação em meio à cidade de São Paulo e a influência sobre a dinâmica dos
mosquitos e os respectivos repastos alimentares.
Ao se desconsiderar as características intrínsecas de cada parque,
salienta-se que tanto o Parque Anhanguera quanto o Parque Shangrilá,
obtiveram maiores valores em relação à variedade de fontes para repastos e
em número de fêmeas ingurgitadas por se tratarem de ambientes mais
diferenciados em questão de vegetações e presença da represa (no caso do
Shangrilá). Podendo ser locais que apresentam melhores adaptações para a
instalação e manutenção da biologia dos culicídeos, sendo áreas que
apresentam certo potencial de disponibilidade de fontes alimentares.
4.1 Parque Alfredo Volpi.
No Parque Alfredo Volpi, foram coletadas nove fêmeas ingurgitadas de
um total de 1151 mosquitos coletados. A eficiência de cada técnica de captura
utilizada pode ser vista na Figura 13.
45
Figura 13: Frequência relativa da contribuição de cada técnica de armadilha utilizada no Parque Alfredo Volpi.
É visível que a maior parte das fêmeas ingurgitadas capturadas no
Parque Alfredo Volpi foram coletadas pela técnica de Shannon, representando
90% da coleta.
Foram capturadas duas espécies de culicídeos, sendo essas distribuídas
em dois gêneros. As espécies ingurgitadas, bem como o hospedeiro utilizado
para o repasto sanguíneo são observadas na Figura 14.
Figura 14: Cluster para o Parque Alfredo Volpi, agrupando as duas espécies de culicídeos e os dois hospedeiros que foram detectados como fonte para o repasto sanguíneo.
46
Aedes fluviatilis e Culex (Mel.) seção Melanoconion tiveram o humano
como fonte de alimentação, sendo que um espécime de Ae. fluviatilis realizou
repasto em cão.
Para as amostras coletadas no Parque Alfredo Volpi não foi detectado
repastos mistos e nenhum dado foi inconclusivo.
Como o número de ingurgitadas capturadas no Parque Alfredo Volpi foi
pequeno durante o período estudado e a técnica de captura mais efetiva para a
coleta foi à armadilha de Shannon, para esse parque não foi calculado valores
de qui-quadrado, de forma a não superestimar os valores reais encontrados.
4.2 Parque Anhanguera
No Parque Anhanguera foram capturadas 144 fêmeas ingurgitadas do
total de 3631 mosquitos capturados. A eficiência de cada técnica de captura
utilizada pode ser vista na Figura 15.
Figura 15: Frequência relativa da contribuição de cada técnica de armadilha utilizada no Parque Anhanguera.
47
É visível que a maior parte das fêmeas ingurgitadas capturadas no
Parque Anhanguera foram coletadas pela técnica de aspiração, sendo essas
capturadas em repouso no ambiente.
Foram capturadas oito espécies, distribuídas em três gêneros, de
mosquitos ingurgitadas durante o período de estudo. As espécies de
mosquitos, bem como seus hospedeiros utilizados para o repasto, podem ser
observados na Figura 16.
Figura 16: Cluster para o Parque Anhanguera, agrupando as oito espécies de culicídeos e os cinco hospedeiros que foram detectados como fonte para o repasto sanguíneo.
Dentre tais espécies, destacamos que apenas o Aedes albopictus não
se alimentou de sangue humano. Nota-se que o comportamento tanto do Culex
nigripalpus quanto do Culex quinquefasciatus tiveram o mesmo padrão,
alimentando-se de humanos, cães, aves e roedores.
Os primatas serviram como fonte alimentar para as espécies de Culex
(Cux.) spp. e de Psorophora ferox, no parque em questão, pois foram coletados
48
próximos ao Centro de Reabilitação de Animal Selvagem (CRAS), no qual
existem macacos bugios (Alouatta alouatta) em recintos de reabilitação.
O hospedeiro humano serviu como fonte alimentar para praticamente
todas as espécies de mosquitos, sendo fonte alimentar exclusiva das espécies
Aedes scapularis e Culex (Cux.) gp. Coronator.
Entre as 144 fêmeas ingurgitadas, foram identificados 215 repastos
sanguíneos, dos quais 69 repastos foram mistos variando entre humanos e
roedores, humanos e cães e humanos e aves, não tendo dados inconclusivos.
Objetivando encontrar a associação entre a espécie de mosquito e sua
fonte alimentar, o uso do qui-quadrado pode ser analisado na Tabela 3.
Tabela 3: Valores observados para a coleta de culicídeos (sem a técnica de Armadilha de Shannon) e suas respectivas fontes alimentares investigadas no Parque Anhanguera.
Espécies AVE CÃO HUMANO ROEDORES PRIMATAS TOTAL
Ae. albopictus 0 1 0 0 0 1
Ae. scapularis 0 0 3 0 0 3
Ae. serratus 1 0 1 0 0 2
Cx. nigripalpus 17 15 44 11 0 87
Cx. (Cux.) spp. 5 4 26 10 4 49
Cx. quinquefasciatus 2 12 45 3 0 62
Ps. ferox 0 2 4 0 1 7
TOTAL 25 34 123 24 5 211
O qui-quadrado para as amostras capturadas no Parque Anhanguera,
teve o resultado de p=0,07875. Ao se considerar a representação de α=0,05,
podemos inferir que há aleatoriedade em relação à oferta de repasto sanguíneo
e o culicídeo ingurgitado capturado.
Como os valores de repastos em primatas foram inferiores ao número de
repastos realizados em outras fontes alimentares, e essa fonte alimentar foi
49
exclusiva do Parque Anhanguera, realizou-se um qui-quadrado, excluindo o
hospedeiro primata, assim como as espécies de culicídeos, as quais tiveram
apenas um espécime capturado, afim de, encontrar algum padrão associativo
entre as espécies de mosquitos e as outras fontes alimentares. Porém
novamente não se teve nenhum padrão associativo entre os parâmetros, sendo
que o valor de p encontrado foi de 0,17871, demonstrando novamente
aleatoriedade entre mosquito e fonte de alimento (baseado em α=0,05).
4.3 Parque do Carmo
No Parque do Carmo foram capturadas 12 fêmeas ingurgitadas do total
de 837 mosquitos coletados. A eficiência de cada técnica de captura utilizada
pode ser vista na Figura 17.
Figura 17: Frequência relativa da contribuição de cada técnica de armadilha utilizada no Parque do Carmo.
Assim como no Parque Alfredo Volpi, o Parque do Carmo teve a maioria
das fêmeas capturadas pela técnica de armadilha de Shannon, representando
75% das amostras coletadas.
50
Foram capturadas durante o período de coletas quatro espécies,
representadas em três gêneros. A relação entre as espécies de mosquitos
fêmeas ingurgitadas e os hospedeiros, fonte do repasto sanguíneo, está
representado na Figura 18.
Figura 18: Cluster para o Parque do Carmo, agrupando as quatro espécies de culicídeos e os três hospedeiros que foram detectados como fonte para o repasto sanguíneo.
Como nos parques acima mencionados, no Parque do Carmo também é
visível à presença de sangue humano no repasto sanguíneo por parte das
espécies de culicídeos.
Culex quinquefasciatus foi a única espécie capturada tendo sua fonte
alimentar realizada em humanos somente, as demais espécies, como o Culex
(Cux.) spp. e Coquillettidia venezuelensis, foram evidenciadas de se
51
alimentarem de humanos e cães. A espécie Aedes scapularis, dentre os dados
obtidos, foi à espécie com o comportamento mais eclético, realizando repastos
em humanos, cães e aves.
Das 12 espécimes de culicídeos capturadas no Parque do Carmo, não
foi detectado nenhum repasto misto, e nenhum dado inconclusivo.
Como o número de ingurgitadas capturadas no Parque do Carmo, assim
como o do Parque Alfredo Volpi, foi pequeno durante o período estudado e a
técnica de captura mais efetiva para a coleta foi à armadilha de Shannon, para
esse parque não foi calculado valores de qui-quadrado, de forma a não
superestimar os valores reais que encontramos.
4.4 Parque Chico Mendes
No Parque Chico Mendes foram capturadas 42 fêmeas ingurgitadas de
4416 mosquitos coletados. A eficiência de cada técnica de captura pode ser
vista na Figura 19.
Figura 19: Frequência relativa da contribuição de cada técnica de armadilha utilizada no Parque Chico Mendes.
52
É notável que no Parque Chico Mendes as armadilhas de Shannon e
aspiração tiveram quase a mesma eficiência em capturar as ingurgitadas (45%
e 50% respectivamente), tendo também a participação das CDC tanto de copa
quanto de solo nas capturas.
Um total de cinco espécies, distribuídas em três gêneros, foram
coletadas no Parque Chico Mendes. A relação entre a espécie de culicídeo
capturada e o seu referente hospedeiro pode ser vista na Figura 20.
Figura 20: Cluster para o Parque Chico Mendes, agrupando as cinco espécies de culicídeos e os três hospedeiros que foram detectados como fonte para o repasto sanguíneo.
Aedes scapularis e Culex quinquefasciatus tiveram comportamento
alimentar semelhantes, se alimentando de humanos e cães. Culex (Cux.) spp.,
foi a espécie que teve os hábitos alimentares mais ecléticos, fazendo repastos
em três hospedeiros diferentes, humanos, cães e roedores. Duas espécies
53
coletadas fizeram o repasto em apenas um hospedeiro sendo o Anopheles
strodei em cães e o Aedes fluviatilis em humanos.
Dos 42 espécimes capturados, foi detectado 37 repastos alimentares,
tendo quatro repasto mistos (entre humanos e cães) e seis dados
inconclusivos.
Objetivando encontrar a associação entre a espécie de mosquito e sua
fonte alimentar, o uso do qui-quadrado pode ser analisado na Tabela 4.
Tabela 4: Valores observados para a coleta de culicídeos (sem a técnica de Armadilha de Shannon) e suas respectivas fontes alimentares investigadas no Parque Chico Mendes.
Espécies CÃO HUMANO TOTAL
Ae. scapularis 1 9 10
Cx. (Cux.) spp. 2 8 10
Cx. quinquefasciatus 1 2 3
TOTAL 4 19 23
O teste de qui-quadrado para as amostras capturadas no Parque Chico
Mendes, teve o resultado de p=0,987413. Ao se considerar a representação de
α=0,05, podemos inferir que há aleatoriedade em relação à oferta de repasto
sanguíneo e o culicídeo ingurgitado capturado.
4.5 Parque Ibirapuera
No Parque Ibirapuera foram capturadas 39 fêmeas ingurgitadas de 552
mosquitos coletados. A eficiência de cada técnica de captura utilizada pode ser
vista na Figura 21.
54
Figura 21: Frequência relativa da contribuição de cada técnica de armadilha utilizada no Parque Ibirapuera.
Assim como no parque Anhanguera, o Parque Ibirapuera teve sua
maioria das fêmeas ingurgitadas capturadas pela técnica de aspiração
(perfazendo 72% das coletas).
Foram capturadas sete espécies, distribuídas em dois gêneros no
Parque Ibirapuera. A relação entre a espécie de culicídeo capturada e o seu
referente hospedeiro pode ser vista na Figura 22
Figura 22: Cluster para o Parque Ibirapuera, agrupando as sete espécies de culicídeos e os quatro hospedeiros que foram detectados como fonte para o repasto sanguíneo.
55
Culex (Cux.) spp. foi a espécie que teve o padrão mais eclético em
relação ao seus repastos, se alimentando dos 4 hospedeiros encontrados,
humanos, cães, aves e roedores. As espécies Culex quinquefasciatus, Aedes
scapularis e Culex nigripalpus tiveram as mesmas fontes de alimentação sendo
elas: cães, aves e humano e as espécies Aedes scapularis, Aedes albopictus e
Culex chidesteri, tiveram apenas o humano como fonte alimentar.
Entre os 39 espécimes capturados, foi possível a detecção de 49
repastos alimentares, sendo assim, 10 repastos mistos (entre humanos e cães,
humanos e aves e humanos e roedores) e nenhum dado inconclusivo.
Assim como feito no Parque Anhanguera e Chico Mendes, o emprego do
qui-quadrado para o Parque Ibirapuera pode ser observado na Tabela 5.
Tabela 5: Valores observados para a coleta de culicídeos (sem a técnica de Armadilha de Shannon) e suas respectivas fontes alimentares investigadas no Parque Ibirapuera.
Espécies AVE CÃO HUMANO ROEDORES TOTAL
Ae. albopictus 0 0 1 0 1
Ae. fluviatils 1 0 5 0 6
Ae. scapularis 0 0 2 0 2
Cx. nigripalpus 1 1 6 0 8
Cx. (Cux.) spp. 2 2 12 2 18
Cx. quinquefasciatus 1 3 4 0 8
Cx. chidesteri 0 0 1 0 1
TOTAL 5 6 31 2 44
O qui-quadradro para as amostras capturadas no Parque Ibirapuera teve
o resultado de p=0,999582. Ao se considerar a representação de α=0,05,
podemos inferir há aleatoriedade em relação à oferta de repasto sanguíneo e o
culicídeo ingurgitado coletado.
56
4.6 Parque Santo Dias
No Parque Santo Dias foram capturadas 23 fêmeas ingurgitadas do total
de 1563 mosquitos coletados. A eficiência de cada técnica de captura utilizada
pode ser vista na Figura 23.
Figura 23: Frequência relativa da contribuição de cada técnica de armadilha utilizada no Parque Santo Dias.
Assim como nos Parques Anhanguera e Ibirapuera, a captura realizada
com aspiradores foi maior no Parque Santo Dias, com 74% dos espécimes
capturados no parque. Evidencia-se também a captura feita por CDC copa
registrando 13% da coleta.
No Parque Santo Dias foram capturadas quatro espécies de culicídeos,
distribuídas em dois gêneros. A relação entre a espécie de culícideo capturada
e o seu referente hospedeiro pode ser vista na Figura 24.
57
Figura 24: Cluster para o Parque Santo Dias, agrupando as quatro espécies de culicídeos e os dois hospedeiros que foram detectados como fonte para o repasto sanguíneo.
Apenas duas fontes alimentares foram detectadas no Parque Santo
Dias, humanos e aves. Culex nigripalpus e Aedes scapularis realizaram seus
repastos em humanos somente, sendo que Culex (Cux.) spp. e Culex
quinquefasciatus, tiveram dois hospedeiros como fonte de alimentação:
humanos e aves.
Dos 23 espécimes coletados, conseguiu-se a identificação de 19
repastos alimentares, tendo quatro dados inconclusivos e dois repastos mistos
(entre humanos e aves).
O emprego do qui-quadrado para os valores amostrais obtidos no
Parque Santo Dias, pode ser visualizado na Tabela 6.
58
Tabela 6: Valores observados para a coleta de culicídeos (sem a técnica de Armadilha de Shannon) e suas respectivas fontes alimentares investigadas no Parque Santo Dias.
Espécies AVE HUMANO TOTAL
Ae. scapularis 0 3 3
Cx. (Cux.) spp. 1 11 12
Cx. nigripalpus 0 1 1
Cx. quinquefasciatus 1 2 3
TOTAL 2 17 19
O qui-quadrado para as amostras capturadas no Parque Santo Dias,
teve o resultado de p=0,974672. Ao se considerar a representação de α=0,05,
podemos inferir que há aleatoriedade em relação à oferta de repasto sanguíneo
e o culicídeo ingurgitado capturado.
4.7 Parque Shangrilá
No Parque Shangrilá foram capturadas 241 fêmeas ingurgitadas de um
total de 4946 mosquitos coletados. A eficiência de cada técnica de captura
utilizada pode ser vista na Figura 25.
Figura 25: Frequência relativa da contribuição de cada técnica de armadilha utilizada no Parque Shangrilá.
59
Praticamente todas as fêmeas coletadas na amostragem do Parque
Shangrilá provieram da técnica de aspiração, representando 96% do total de
todas as ingurgitadas coletadas no parque.
Foram coletadas dez espécies de mosquitos, compreendidas em quatro
gêneros. A relação entre a espécie de culícideo capturada e o seu referente
hospedeiro pode ser vista na Figura 26
Figura 26: Cluster para o Parque Shangrilá, agrupando as dez espécies de culicídeos e os quatro hospedeiros que foram detectados como fonte para o repasto sanguíneo.
Entre os sete parques estudados, o Parque Shangrilá foi o que teve
maior diversidade de espécies ingurgitadas coletadas. Aedes scapularis foi a
espécies que fez repasto alimentar em três hospedeiros diferentes, exceto em
aves e em primatas. Culex (Cux.) spp. e Culex nigripalpus tiveram os mesmos
padrões alimentares, utilizando de fontes como: humanos, cães, aves e
60
roedores (sendo as espécies com as condições alimentares mais ecléticas).
Culex quinquefasciatus se aproxima ao ramo do Culex (Cux.) spp. e do Cx.
nigripalpus, por sua alimentação ser realizada em humanos e cães. Aedes
fluviatilis, Aedes albopictus, Anopheles strodei e Psorophora ferox, foram
espécies as quais fizeram repasto exclusivamente em humanos. Por fim, as
espécies Aedes crinifer e Culex chidesteri, mantiveram como fonte alimentar
humanos e aves.
Dos 241 espécimes capturados, foi possível a identificação de 188
repastos alimentares tendo 24 repastos mistos (entre humanos e cães,
humanos e aves e humanos e roedores) e 53 dados inconclusivos.
O emprego do qui-quadrado para os valores amostrais obtidos no
Parque Shangrilá, pode ser visualizado na Tabela 7.
Tabela 7: Valores observados para a coleta de culicídeos (sem a técnica de Armadilha de Shannon) e suas respectivas fontes alimentares investigadas no Parque Shangrilá.
Espécies AVE CÃO HUMANO ROEDORES TOTAL
Ae. albopictus 0 0 2 0 2
Ae. crinifer 1 0 1 0 2
Ae. fluviatilis 0 0 4 0 4
Ae. scapularis 0 1 1 1 3
An. strodei 0 0 1 0 1
Cx. (Cux.) spp. 6 15 102 2 125
Cx. chidesteri 1 0 0 0 1
Cx. nigripalpus 1 2 30 1 34
Cx. quinquefasciatus 0 2 6 0 8
Ps. ferox 0 0 1 0 1
TOTAL 9 20 148 4 181
O qui-quadrado para as amostras capturadas no Parque Shangrilá, teve
o resultado de p=0,160844. Ao se considerar a representação de α=0,05,
61
podemos inferir que há aleatoriedade em relação à oferta de repasto sanguíneo
e o culicídeo ingurgitado capturado.
4.8 Todos parques estudados
No total foram capturados 510 fêmeas ingurgitadas distribuídas em sete
parques, como mostra a Figura 27 A. Em B, a representatividade de cada
técnica de captura utilizada em todos os parques.
Figura 27: Em A: a contribuição em espécimes de fêmeas ingurgitadas de cada parque estudado. Em B: a contribuição das técnicas utilizadas na captura nos parques estudados.
A
B
62
O Parque Shangrilá foi o local onde houve a maior contribuição com as
fêmeas ingurgitadas, representando 241 fêmeas, sendo o Parque AlfredoVolpi
o local onde menos se coletou fêmeas ingurgitadas, com nove espécimes.
Em relação às técnicas para captura, ressalta-se que a técnica de
aspiração foi a mais representativa, capturando 84% das amostras.
No total, 14 espécies de culicídeos foram capturadas nos parques
espalhados pela cidade de São Paulo. A distribuição dessas espécies segundo
os 13 meses de coleta (Fevereiro de 2011 à Fevereiro de 2012) podem ser
visto na Figura 28.
Figura 28: Distribuição da frequência das espécies de mosquitos ingurgitados em relação aos meses de coleta, Fevereiro de 2011 à Fevereiro de 2012.
Em relação aos meses de coleta, é visível a presença de mosquitos nos
parques pelo ano (calendário) inteiro. Nota-se a frequência maior de espécies
63
em meses como Março e Maio de 2011, bem como nos meses de Outubro de
2011a Fevereiro de 2012.
A espécie Culex (Cux.) spp. foi a mais abundante tanto em número de
espécimes coletados, estando presente em praticamente todos os meses de
coletas, seguida do Culex nigripalpus e Culex quinquefasciatus.
A relação do hospedeiro, fonte de alimentação e os meses durante a
coleta pode ser visualizada na Figura 29.
Figura 29: Distribuição da frequência dos hospedeiros,fonte de repasto sanguineo em relação aos meses de coleta, Fevereiro 2011 à Fevereiro 2012.
O hospedeiro humano foi fonte alimentar para as fêmeas ingurgitadas
nos parques em todos os meses de captura. Sendo muitas vezes fonte
exclusiva (Fevereiro e Março de 2011) ou a mais frequente (Maio, Agosto
Outubro, Dezembro de 2011 e Janeiro a Fevereiro de 2012).
Assim como feito separadamente em cada Parque, alvo de estudo, o
cálculo do qui-quadrado foi realizado para todos os parques em conjunto,
considerando um único ecótopo (parques em geral). Para realizá-lo, somou-se
as mesmas espécies coincidentes nos sete parques diferenciados, bem como
64
suas respectivas fontes alimentares, sendo excluído os dados referentes às
capturas de espécimes pela técnica Shannon (Tabela 8).
Tabela 8: Valores observados para a coleta de culicídeos (sem a técnica de Armadilha de Shannon) e suas respectivas fontes alimentares investigadas nos parques estudados.
Espécies AVE CÃO HUMANO
ROEDORES PRIMATAS TOTAL
Ae. albopictus 0 1 3 0 0 4
Ae. crinifer 1 0 1 0 0 2
Ae. fluviatilis 1 0 8 0 0 9
Ae. scapularis 0 2 15 1 0 18
Ae. serratus 0 0 1 0 0 1
An. strodei 0 0 1 0 0 1
Cx. (Cux.) spp. 14 24 163 14 4 219
Cx. chidesteri 1 0 1 0 0 2
Cx. nigripalpus 17 17 74 12 0 120
Cx. quinquefasciatus 4 18 60 3 0 85
Cx. (Mel.)sç Melanoconion 0 0 1 0 0 1
Ps. ferox 0 2 5 0 1 8
TOTAL 38 64 333 30 5 470
O qui-quadrado para as amostras capturas em todos os parques, teve o
resultado de p=0,83495. Ao se considerar a representação de α=0,05,
podemos inferir a existência de aleatoriedade em relação à oferta de repasto
sanguíneo e o culicídeo ingurgitado.
Da mesma forma como feito com os dados do Parque Anhanguera,
alguns dados (menos expressivos) foram retirados da análise, afim de,
encontrar alguma associação entre a espécie de culicídeo ingurgitado e sua
fonte alimentar. Retirou-se o hospedeiro primata da análise (por só ter sido
constatado no Parque Anhanguera), além de excluir espécies de mosquitos
que não tiveram mais que 09 exemplares coletados (dessa forma, conseguiu-
se perfeitamente utilizar o que preconiza o conceito do qui-quadrado, onde no
65
máximo 20% das caselas do valor esperado fiquem inferiores a 5), mas mesmo
com esses atributos descritos acima o valor foi de p=0,26178, indicando
aleatoriedade entre a oferta do repasto e o culicídeo.
66
5 DISCUSSÃO
Nos últimos anos, as mudanças ecológicas produzidas por atividades
humanas são apontadas como uma das causas que contribuem para a
expansão geográfica de vetores e arboviroses (DASZAK et al., 2001;
VASCONCELOS et al., 2001; KRUSE et al., 2004; PATZ et. al., 2004;
SUTHERST, 2004; MARASSÁ, 2009a). Com base nisso, para a cidade de São
Paulo, um grande centro urbanizado, temos os parques, como locais de lazer à
população paulistana, bem como sendo um “refúgio” remanescente da flora e
da fauna local, destacando-se, os culicídeos.
Recentemente MEDEIROS et al. (2013) investigaram a diversidade de
culicídeos, que habitam essas áreas, bem como o papel epidemiológico de tais
espécies com a transmissão de patógenos. PEREIRA et al.(2001), isolaram o
arbovírus Ilhéus com potencial de infectar humanos, o qual pode ser
transmitidos por potenciais espécies de culicídeos, em área densamente
habitada, representada pelo Parque Ecológico do Tietê na cidade de São
Paulo.
A investigação das fontes alimentares dos culicídeos capturados em
parques urbanizados, como é o foco do presente estudo, se faz necessária
para o entendimento das possíveis redes de transmissão de certas doenças
que podem ser instaladas no ambiente urbano.
A detecção de repastos sanguíneos em artrópodes hematófagos pode
ser desenvolvida por várias técnicas laboratoriais. Uma delas, que já foi
realizada com sucesso no passado, é a técnica de reação de complementos,
uma reação imunológica que consiste na determinação da presença ou na
67
quantidade de antígenos ou anticorpos, quando um dos elementos seja
conhecido (CANDEIAS et al., 1980, STAAK et al., 1981). Outra técnica
bastante usual nos laboratórios é a técnica imunoenzimatica ELISA indireta, na
qual consiste em detectar o sangue contido no abdome de fêmeas
ingurgitadas, por meio de anticorpos específicos produzidos pelo sistema
imunológico do animal picado pelo mosquito. No método, os anticorpos ligam-
se aos anticorpos adsorvidos à placa do teste e, após essa fase, anti-
imunoglobulinas marcadas com enzima ligam-se aos anticorpos específicos. A
reação da enzima degrada o substrato e realça a cor, que indica reação
positiva (CHOW et al., 1993; DEUS, 2011).
Muitos trabalhos de investigação de repastos alimentares de insetos
hematófagos foram realizados baseados no princípio da técnica ELISA indireta,
como a dissertação de LAPORTA em 2007, que estudou as fontes alimentares
de mosquitos Culex quinquefasciatus e Culex nigripalpus coletados no Parque
Ecológico do Tietê (região metropolitana da cidade de São Paulo), como um
dos parâmetros investigativos da ecologia dessas espécies em ambientes
antropizados, MARASSÁ em 2009a, padronizou e identificou os repastos
alimentares por técnicas de ELISA de algumas espécies dos gêneros Aedes,
Culex, Sabethes e Haemagogus coletados em área de epizootia de febre
amarela na região do Rio Grande do Sul. SEI em 2009, padronizou a técnica
para o encontro de 4 fontes alimentares distintas para averiguar os repastos de
espécies de flebotomíneos capturados nas regiões da Serra da Cantareira, no
município de Cotia e de Iporanga no Estado de São Paulo. Assim como DEUS
(2011) investigou o hábito alimentar das espécies Aedes aegypti e Culex
quinquefasciatus na região de Marília (interior do Estado de São Paulo).
68
Entretanto, HUNTER & BAYLY (1991) e BOAKEY et al., em 1999,
salientam que o métodos imunoenzimáticos requerem a preparação de um
soro estéril contra o sangue de cada espécie hospedeira em potencial, o que
pode ser uma dificuldade no processo laboratorial. Além, das etapas pré-
adsorção serem necessárias para a tentativa de se eliminar reações cruzada.
Assim, análises baseadas no DNA de espécies hospedeiras podem
fornecer maiores especificidades na abordagem da identificação do repasto
alimentar feita pelo culicídeo (GOKOOL et al., 1993; BOAKEY et al., 1999).
Para a realização desse presente estudo, os primers foram desenhados
segundo CHANG et al. (2008), com exceção do primer de primatas, o qual foi
modificado para primatas do novo mundo.
Em 13 meses de monitoramento em sete parques selecionados na
cidade de São Paulo, foram capturadas 14 espécies de fêmeas de culicídeos
ingurgitadas. Sendo a aspiração a técnica mais efetiva para as fêmeas de
mosquitos ingurgitadas, onde consistiu em capturar as mesmas na vegetação,
local de repouso do culicídeo após o repasto sanguíneo, corroborando a
mesma técnica de capturada feita por FORATTINI et al., em 1981 e em
FORATTINI et al. em 1989, no estudo de hábito alimentar de mosquitos
capturados no Vale do Ribeira.
Ao se tratar os dados descritivamente (uma vez que, o nosso n amostral
se diferencia para cada espécie de mosquito coletada nos parques) a espécie
Aedes albopictus, apareceu em três dos sete parques estudados, sendo que no
Parque Anhanguera e Shangrilá, a espécie realizou repasto alimentar em cães
e no Parque Ibirapuera em humanos. MARQUES & GOMES (1997) mostraram
certa atratividade da espécie por sangue humano em um estudo realizado na
69
região do Vale do Paraíba em São Paulo, sendo que, SULLIVAN et al. (1971) e
SAVAGE et al. (1993) demonstraram que no caso da alimentação a espécie
tende a ser eclética com características oportunistas, salientando a importância
da investigação do perfil biológico e ecológico do Aedes albopictus, uma vez
que essa espécie é o vetor principal do vírus da dengue na região asiática,
tendo sido registrado o primeiro encontro nas Américas do Aedes albopictus
naturalmente infectado com o vírus da dengue, durante um surto da doença no
México (IBANEZ–BERNAL et al., 1997; TAIUL, 2001). GOMES et al. (2008)
salientam a presença dessa espécie em regiões no sul do país, onde foram
registrados casos de febre amarela, elucidando a possível participação dessa
espécie como vetora.
A espécie Aedes crinifer, por sua vez, foi encontrada ingurgitada apenas
no Parque Shangrilá, tendo realizado seu repasto alimentar em humanos e
aves. SILVA & LOVEZEI (1998) em um estudo em Curitiba, Paraná, utilizando-
se de isca humana, verificou que Aedes crinifer foi à quarta espécie a
apresentar alta antropofilia. MARASSÁ et al. (2009b) descreveram repastos
sanguíneos nas fontes humanas, em aves e primatas em área de epizootia de
febre amarela na região sul do Brasil. LOPES & LOVEZEI (1995) e GOMES et
al. (2009) discutem sobre a pouca adaptação que essa espécie tem em
colonizar ambientes altamente antropizados, fato que colabora o encontro
dessa espécie apenas em um dos parques estudados.
Aedes fluviatilis foi capturada em 4 parques: Alfredo Volpi, Chico
Mendes, Ibirapuera e Shangrilá, sendo que em todos os parques, o sangue de
humano serviu de fonte de repasto, detectando no Parque Alfredo Volpi a fonte
de sangue de cães e no Ibirapuera detectou-se além de humanos, o sangue de
70
cães e aves. LOPES & LOVEZEI (1996) em um estudo utilizando iscas
humanas, discutem um baixo grau de antropofilismo por parte da espécie,
estudo esse realizado em uma área preservada de Londrina, Paraná. Tal
resultado se configura de forma antagônica com os nossos resultados, uma vez
que os humanos foram fontes exclusivas de alimentação em 2 parques
estudados e estiveram presentes em todos os parques onde tal espécie de
culicídeo foi capturada ingurgitada, isso talvez possa ser compreendido
baseando-se no aspecto oportunista por parte do culicideo em se alimentar das
fontes mais disponíveis no local, visto que, em todos os parques onde a
captura da espécie Aedes fluviatilis ocorreu, os mesmos estão inseridos em
uma área densamente habitada diferentemente do trabalho citado que ocorreu
em área menos povoada. Em relação à epidemiologia, existe a hipótese não
confirmada da atuação do Aedes fluviatilis na transmissão do vírus da febre
amarela na natureza (FORATTINI, 2002; PECOR et al, 2002; DIBO et al,
2011), uma vez que a capacidade vetorial do mesmo já foi comprovada em
laboratório (DEGALLIER et al., 2001), tendo eficácia pequena na transmissão
da dirofilariose canina e podendo infectar-se com plamódios aviários em
laboratório (DEGALLIER et al., 2001).
A espécie Aedes scapularis, nos parques Anhanguera, Ibirapuera e
Santo Dias apresentou perfil de se alimentar exclusivamente em humanos
(antropofílicos) tal como foi descrito por FORATTINI et al em 1989 sobre a
tendência em que o Aedes scapularis se alimenta de mamíferos de médio
porte, entre eles, a espécie humana. Já nos parques Chico Mendes, Shangrilá
e Carmo, além de repastos sanguíneos realizados em humanos, tal espécie foi
evidenciada se alimentando em cães, roedores e aves. Em contexto
71
epidemiológico, tal fato deve ser levado em consideração, uma vez que, a
presente espécie tem a competência em vincular e transmitir diversas
arboviroses (MITCHAEL & FORATTINI, 1984) e algumas filarioses
(LABARTHE et al., 1998), posto que, LOURENÇO DE OLIVEIRA & DEANE
(1995) encontraram larvas de Dirofilaria immitis, nos túbulos de Malpighi de Ae.
scapularis, sugerindo que tal mosquito seja o vetor primário da dirofilariose em
cães, na região litorânea do Rio de Janeiro. Em relação aos repastos em aves
e roedores, VICENTIN, em 2007, registrou tais hospedeiros em baixa
quantidade, no Parque Ecológico do Tietê. Além de reafirmar o indicativo que
TAIPE-LAGOS & NATAL em 2003, presenciaram no Parque Ecológico do
Tietê, sobre a adaptação dessa espécie em ambientes com impactos
antrópicos, desprovidos de vegetação arbórea primitiva (FORATTINI et al.,
1986b; FORATTINI et al., 1995). EDMAN (1985) considera tal espécie
oportunista, pois faz repastos alimentares em diversos animais domésticos,
além do homem.
A espécie Aedes serratus, foi capturada apenas no Parque Anhanguera,
onde foi possível a identificação de duas fontes alimentares, sendo essa em
aves e humanos. Fato que GUIMARÃES et al, descreveram em 1987 no
Parque Nacional da Serra dos Órgãos, no Estado do Rio de Janeiro, repastos
provindos de aves, como também foi encontrado por FORATTINI et al, em
1989, no Vale do Ribeira, os repastos em aves e humanos. O papel
epidemiológico do Aedes serratus ainda é pouco conhecido (CARDOSO et al.,
2010), porém, alguns encontros de infecção natural sugerem a competência
vetora dessa espécie para transmitir alguns arbovírus (VASCONCELLOS et al.,
1991). E há registros em condições naturais, o Aedes serratus infectado com o
72
vírus causador da encefalite de São Luis e Oropouche na Amazônia brasileira
(VASCONCELLOS et al., 1998).
Anopheles strodei foi a única espécie da subfamília Anophelinae
coletada ingurgitada, sendo a mesma capturada em dois parques: Chico
Mendes e Shangrilá, tendo sido encontrados os repastos em cães e humanos,
respectivamente. LOPES & LOVEZEI (1996) identificaram repastos em
humanos, provindos de coletas em iscas humanas e RACHOU (1958)
descreveu que Anopheles strodei é uma espécie não-domiciliada e embora,
zoófila, pode fazer repastos em humanos e pode ser encontrada
intradomiciliarmente. Em relação ao impacto epidemiológico dessa espécie em
ambiente urbano, como em cidades do Sudeste brasileiro, FORATTINI (2002) e
REZENDE et al.(2009) salientam o fato dessa espécie ser um vetor secundário
na transmissão de plasmódios causadores de malária.
A espécie Coquillettidia venezuelensis, foi capturada ingurgitada apenas
no Parque do Carmo, é interessante ressaltar que tal espécie possui
modificações estruturais esclerotizadas em seu sifão respiratório quando em
fase imatura (larva), o que permite a fixação da mesma no sistema respiratório
de plantas aquáticas, utilizando assim, o ar provindo dos parênquimas da
vegetação (CONSOLI & LOURENÇO-DE-OLIVEIRA, 1994) sugerindo assim,
que os lagos existentes no Parque do Carmo, possam servir de abrigo para
essa espécie de culicídeo. A fonte alimentar identificada na análise do repasto
sanguíneo foram em cães e humanos. Estudos de FORATTINI et al. (1987)
averiguaram os mesmos repastos alimentares realizados pela espécie,
encontrando também repastos mistos realizados em humanos e aves. Sob
contexto epidemiológico, no ano de 1955, o vírus Oropouche foi isolado em um
73
pool macerado de Coquillettidia venezuelensis, porém o papel como vetor
silvestre da espécie não foi esclarecido (ANDERSON et al., 1961; HENRIQUE;
2008), FORATTINI (2002) salienta que muitas espécies do gênero
Coquillettidia já foram encontradas infectadas por diversos arbovírus, entre os
quais, o da Encefalite Equina Venezuelana, do Oeste e do Leste. Tendo as
fêmeas, comportamento hematófago agressivo, o que auxilia as espécies
serem vetores competentes.
Dentre o gênero Culex, a espécie Culex chidesteri foi capturada
ingurgitada tanto no Parque Ibirapuera quanto no Parque Shangrilá, sendo
detectado o repasto alimentar em humanos para o Ibirapuera, enquanto que,
para o parque Shangrilá, as fontes hospedeiras de repasto foram humanos e
aves. ALMIRÓN & BREWER (1995) em um estudo de investigação alimentar
em culicídeos na cidade de Córdoba, Argentina, utilizando-se de iscas animais,
verificou certa relação de “preferência” entre as fontes alimentares
representadas por coelhos e galinhas por parte dos espécimes de Culex
chidesteri coletados, indicando que tal espécie se alimenta de aves e de
espécies de mamíferos, dentre os quais a espécie humana. GOMES &
FORATTINI (1990) descreveram que tal espécie é altamente adaptada em
ambientes urbanos. AHID & LOURENÇO-DE-OLIVEIRA (1999) em um estudo
no Maranhão, detectaram, nos poucos espécimes de Culex chidesteri
capturados, repastos sanguíneos feitos apenas em humanos.
A espécie Culex (Cux.) grupo Coronator assim como o Ae.serratus foi
capturada apenas no Parque Anhanguera, onde tal espécie se alimentou
exclusivamente de fonte humana, contrapondo os estudos de FORATTINI et al
(1986 a, 1986 b, 1987) na região do Vale do Ribeira, GOMES et al (1987)
74
também na região do Vale do Ribeira e LOPES & LOZOVEI (1995) na região
urbana de Londrina, no Paraná, onde a espécie apresentou padrões de
ornitofilia. Fato que merece atenção uma vez que, há espécies pertencentes ao
complexo do grupo coronator, responsáveis pela transmissão de algumas
arborviroses como o Vírus da Encefalite de São Luis e o Vírus da Encefalite
Equina Venezuelana (DIBO et al., 2011).
Espécimes de Culex nigripalpus apresentaram quatro fontes para
alimentação no Parque Anhanguera e Shangrilá: roedores, aves, cães e
humanos, sendo que no Parque Ibirapuera, apenas o roedor não foi
identificado e no Parque Santo Dias, apenas o hospedeiro humano foi
encontrado. GUIMARÃES et al.(1987) constataram a presença de sangue de
aves e humanos nos repastos realizados pela espécie e LAPORTA (2007) em
um estudo no Parque Ecológico do Tietê, detectou o repasto da espécie Culex
nigripalpus em roedores e cães, similar aos resultados encontrados por nosso
grupo no Parque Anhanguera. Segundo LAPORTA et al. (2008), os roedores
são reservatórios potenciais de arbovírus como o Mucambo e São Luis o que
pode sustentar uma transmissão de arbovírus entre humanos e roedores, tendo
como vetor o Culex nigripalpus.
Com as mesmas fontes hospedeiras para repasto alimentar, o Culex
quinquefasciatus apresentou perfil alimentar idêntico ao Culex nigripalpus para
o Parque Anhanguera, se alimentando de quatro fontes hospedeiras (aves,
cães, humanos e roedores), sendo que no Parque Ibirapuera foram
identificadas três fontes alimentares (aves, cães e humanos), nos Parque Chico
Mendes e Shangrilá as fontes alimentares provindas de cães e humanos foram
detectadas e no Parque do Carmo apenas repastos em humanos Em 1987,
75
FORATTINI et al. detectaram as mesmas fontes alimentares para a referida
espécie de mosquito, ressaltando assim como MUTURI et al. (2008) um grau
de antropofilia pela espécie. ALMIRÓN & BREWER (1995) defendem que essa
espécie possui grande valência para se alimentar de diversas fontes
alimentares. Essa informação é válida, uma vez que, na cidade de São Paulo,
esta espécie tem grande sinantropia em ambientes urbanos, sendo fator de
incomodo à população (TAIPE-LAGOS & NATAL, 2003; MORAIS et al., 2007).
Espécimes que foram identificadas como Culex (Cux.) spp. estiveram
presente em praticamente todos os parques estudados (exceto no Parque
Alfredo Volpi) e foram os mosquitos que tiveram a maior abrangência nas
fontes de repasto sanguíneo, realizando-os nas seis fontes alimentares
identificadas nos parques (incluindo repastos sanguíneos em primatas no
Parque Anhanguera), assim como demonstra FORATTINI et al., em 1987, que
encontrou mosquitos fêmeas de Culex (Cux.) spp. ingurgitadas com sangue de
aves, humanos, cães e roedores, sendo que MARASSÁ em 2009a, verificou
repastos sanguíneos realizados em primatas. Epidemiologicamente, o grupo de
espécies de Culex (Cux.) spp. é um grupo de mosquitos o qual abrange
diversas espécies potenciais vetoras de arbovírus. Em geral, podem ter
padrões alimentares mais ornitofílicos, os quais podem veicular agentes virais
entre hospedeiros aviários e humanos. Existindo diferenças importantes, entre
a biologia do mosquito vetor e as condições ambientais, o que influencia
diretamente no papel transmissor do mosquito (FORATTINI et al., 1995).
A espécie Culex (Melanoconion) seção Melanoconion, foi encontrada
apenas no Parque Alfredo Volpi, sendo capturado apenas um espécime, tido o
respasto sanguíneo feito em humanos. FORATTINI et al, em 1991, descrevem
76
as observações de domiciliação de espécies desse complexo em áreas que
sofreram o impacto de alterações antrópicas, uma vez que tal espécie possui
associações em ambientes não–antropizados e preservados. Na região do
Vale do Ribeira, FORATTINI et al, em 1989, verificaram também repastos
dessas espécies realizadas em fontes humanas, assim como o nosso achado
no Parque Alfredo Volpi. A implicação epidemiológica desse achado, se dá pois
MITCHELL et al (1985; 1987) verificaram que algumas espécies pertencentes a
esse complexo, podem desempenhar possíveis papéis como vetores na
veiculação enzoótica de alguns arbovírus, entre os quais o vírus causador da
Encefalite Equina Venezuelana.
Psorophora ferox foi capturada nos Parques Anhanguera e Shangrilá,
sendo encontrado repastos em humanos nos dois parques e em cães e
primatas no Parque Anhanguera, dados que corroboram ao achado de
FORATTINI et al (1987), que descrevem a predileção de sangue de mamíferos
por parte dessa espécie. Atenção a isso deve ser dada uma vez que GOMES
et al. (2010) salientaram o registro das espécies Psorophora ferox e Aedes
scapularis infectados com vírus da Febre Amarela Silvestre, em áreas onde
ocorreram eventos epizoóticos, sem nenhuma investigação posterior dessas
espécies nos focos de Febre Amarela, tendo sido isolado também o vírus
Roccio em Psorophora ferox na Região do Vale do Ribeira (LOPES et al.,
1981) em época de surto dessa doença.
Dessa forma, é visível que as fontes alimentares encontradas em nossa
investigação nos sete parques espalhados pela cidade de São Paulo, já foram
constatadas na literatura como sendo fontes hospedeiras de repastos para tais
espécies de mosquitos mencionados.
77
Levando em consideração que a abordagem feita de forma descritiva
dos resultados foi de forma pontual e que o número de espécimes de cada
espécie não é igual ou não foram capturadas em todos os parques de forma
homogênea, foi realizado o teste estatístico de associação de Qui-quadrado,
afim de, tentar averiguar alguma associação estatística da “preferência” entre
as espécies de culicídeos e as fontes alimentares (hipótese 1 descrita no
subitem 3.5.1 dos Materiais e Métodos) ou se o fato do encontro das fontes
alimentares e o repasto sanguíneo são ao acaso, fortalecendo os princípios de
que as espécies de insetos hematófagos são ecléticas e oportunistas
(FORATTINI, 2002; DIAS-SVERSUTTI et al., 2007; ALENCAR et al., 2005).
Assim como já mencionado nos Resultados (tópico 4 desse trabalho),
para o cálculo de qui-quadrado foram estabelecidos critérios em relação a
técnica de captura do espécime ingurgitado (eliminando-se assim, dados
provindos de coletas da Shannon, onde o sangue dos capturadores podem
gerar um viés de amostragem em relação aos repastos em humanos) e foi
descartado os parques com um n amostral em que a maioria das capturas foi
realizada pela técnica de Shannon, motivo o qual tanto o Parque Alfredo Volpi
quanto o Parque do Carmo não possuem tal análise estatística.
Considerando o valor de α=0,05, o parque que mais se aproximou da
hipótese H1, foi o Parque Anhanguera com valor de p=0,07 quando analisamos
todas as fontes alimentares e as suas respectivas espécies de culicídeos, fato
o qual, pode ser explicado pela variável de repasto em primatas não humanos
que foi observada apenas nesse parque e por apenas duas espécies de
culicídeos, identificando cinco repastos, dos quais quatro foram de espécimes
de Culex (Cul.) spp. Porém mesmo assim, tal valor de “p” nos informa
78
aleatoriedade entre os repastos realizados pelas espécies e suas fontes,
entretanto, tal valor de “p” nos sugere que pode haver uma tendência
associativa entre Culex (Culex) spp. e primatas, mas é necessário coletar mais
espécimes para evidenciar alguma relação. Quando excluímos a variável fonte
de repasto primatas da análise, a mesma obtém o valor de p= 0,17, o que nos
reforça novamente aleatoriedade entre culicídeos e suas fontes de
alimentação.
O fato de 80% dos repastos feitos em primatas sejam da espécie Culex
(Cux.) spp., talvez seja explicada por esses macacos estarem presos em
recintos, sendo fontes mais fáceis de serem encontradas.
O Parque Shangrilá, o qual apresentou o maior número de fêmeas
ingurgitadas coletadas e além de ser o parque com maior número em espécies,
apresentou um valor de p= 0,16 mostrando também aleatoriedade entre o
repasto alimentar e a espécie de culicídeo, sendo o segundo valor mais baixo
encontrado entre os qui-quadrado.
Os Parques Chico Mendes, Ibirapuera e Santo Dias apresentaram os
valores de p=0,98, p=0,99 e p= 0,97, respectivamente, evidenciando a
aleatoriedade entre as espécies de mosquitos e as fontes alimentares, fatos
que corroboram com FORATTINI (1996) que salienta a condição oportunista
por partes de inúmeras espécies de mosquitos, baseando-se nos perfis
ecléticos do próprio culicídeo, entre eles, o horário da hematofagia, o tipo de
voo e a agressividade no ato do repasto.
Tendo o cálculo do qui-quadrado para todos os parques, considerando
os parques como sendo um ecótopo único, apresentou um valor de p=0,83,
79
mostrando que em tal ecótopo não há associação entre a fonte alimentar e a
espécie de culicídeo.
Os repastos mistos encontrados em nosso estudo foram identificados
entre humanos e aves, humanos e cães e humanos e roedores, o que EDMAN
& SCOTT (1987) e BRIGEL & HORLER (1993) consideram que os repastos
mistos podem ser resultantes do comportamento defensivo do hospedeiro e ou
do estado nutricional dos mosquitos. No que diz respeito ao comportamento
das fontes hospedeiras, as aves e roedores são mais propensos à frequentes
interrupções durante o repasto (FORATTINI et al., 1987).
A essas observações, de mais de uma fonte alimentar no trato
digestivo do mosquito, cabe indicar que ou essas espécies não apresentaram
concordância gonotrófica, ou que a ingestão de sangue foi interrompida por
reação defensiva provocada pela fonte alimentar. Ressalta-se que em todos
os repastos mistos foi obtido com a presença de sangue humano, o que
segundo FORATTINI et al. (1987) vêm demonstrar a importância desse
comportamento em estudos epidemiológicos. Tais resultados, também
corroboram com os achados de MARASSÁ (2009a).
É visível que, entre os culicídeos mais frequentes, a fauna na cidade de
São Paulo é homogênea, onde os parques servem de abrigo para as mesmas
espécies de mosquitos.
Em relação aos 13 meses de captura, é visível que em todos os meses
do ano há a presença de culicídeos em parques, tendo uma diminuição da
quantidade nos meses de Junho a Setembro de 2011, voltando a ter valores
mais altos nos meses que compreendem as estações mais quentes, tal fator é
referido às condições ambientais nos meses que compreendem o inverno,
80
onde baixas temperaturas, menor número de possíveis criadouros para as
larvas estão diretamente relacionados às condições da biologia do
desenvolvimento e a ecologia dos mosquitos (BARNES & RUPERT,1996;
CONSOLI & LOURENÇO–DE-OLIVEIRA,1994; FORATTINI, 2002; GILLOT,
2005).
Alguns picos em relação à quantidade de mosquitos capturados
ingurgitados foram notados em meses como Março, Maio e em Outubro de
2011,assim como um aumento gradual em Novembro de 2011 à Fevereiro de
2012 em algumas espécies de mosquitos, tais picos nos evidenciam
parâmetros ambientais propícios ao desenvolvimento e ao encontro de fontes
alimentares por parte dos culicídeos, uma vez que, ao se observar as fontes
alimentares em relação aos meses, os picos são coincidentes, sendo em
humanos a maioria dos repastos, fato explicado, pois em dias mais quentes a
quantidade de humanos utilizando os parques como locais de lazer é maior, o
que auxilia na oferta de alimentos por parte das fêmeas.
O Parque Anhanguera, localizado na região Norte da cidade de São
Paulo, entre os parques estudados, foi o que apresentou espécies de
mosquitos que fizeram seu repasto alimentar em seis fontes hospedeiras das
sete estudadas. Isso talvez possa ser entendido, pelo fato da localização do
parque ficar em área mais periurbana, não havendo tanta influência de casas e
presença de humanos no local, pois os demais parques estão inseridos em
áreas densamente urbanizadas, o que justifica em muitos meses ter sido
detectado apenas sangue provindo de humanos nos repastos analisados.
Segundo FORATTINI (2002), o raio de voo de um mosquito pode chegar a 01
quilometro de distância, o que nos sugere que os mosquitos podem estar
81
utilizando-se de hospedeiros que estão nas casas ao entorno do parque como
fontes de repasto e indo realizar a digestão e oviposição em abrigos e
criadouros existentes nos parques.
Desse modo, afirmamos que as espécies de culicídeos coletadas
durante os 13 meses de capturas realizadas nos parques Alfredo Volpi,
Anhanguera, Carmo, Chico Mendes, Ibirapuera, Santo Dias e Shangrilá são
espécies oportunistas em relação a sua fonte de alimentação, não havendo
nenhuma tendência em relação à “preferência” por hospedeiros fonte, fato que
merece atenção pois, mudanças na dinâmica de transmissão das doenças
transmitidas por mosquitos vetores podem ser desencadeadas com a
introdução de novos hospedeiros e reservatórios de patógenos na cidade de
São Paulo.
82
6 CONCLUSÕES FINAIS
1 Foram identificadas 14 espécies de culicídeos ingurgitadas nos 7 parques
estudados, mostrando um caráter homogêneo da distribuição das espécies
de mosquitos nas áreas verdes da cidade de São Paulo.
2 Em relação aos hospedeiros utilizados como fontes de alimentação,
destaca-se os humanos como sendo a principal fonte de alimentação dos
culicídeos durante o período estudado.
3 Entre a associação das espécies de culicídeos e suas respectivas fontes
alimentares, denotou-se aleatoriedade em todos os parques estudados,
não sendo encontrada nenhuma tendência em relação espécie de culicídeo
e a origem da fonte de repasto, demonstrando comportamento oportunista.
4 Espécies de gêneros diferentes de mosquitos possuem o mesmo perfil
alimentar entre si , assim como as mesmas espécies coletadas em parques
diferentes, tiveram como fonte alimentar hospedeiros semelhantes.
5 Dentre as técnicas de captura utilizada em parques, a nível individual ou
considerando os 7 parques como um ecótopo único, a mais efetiva em
capturar as fêmeas ingurgitadas foi a técnica de aspiração.
6 O estudo da investigação do perfil alimentar dos culicídeos em parques da
cidade de São Paulo pode auxiliar na compreensão e na detecção de
83
possíveis implicações epidemiológicas que podem ser instaladas em
ambiente urbano, bem como auxiliar em ações de práticas e manejos para
controle de vetores e de insetos causadores de incomodo a população.
84
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