Embed Size (px)
Citation preview
UJI TOKSISITAS AKUT
SEDUHAN DAN HASIL FRAKSI TEH HITAM (Camellia sinensis L.)
DENGAN METODE BRINE SHRIMP LETHALITY TEST (BSLT)
SKRIPSI
diajukan sebagai salah satu syarat penyelesaian Program Sarjana (S1) pada Jurusan Farmasi
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Al-Ghifari
Oleh:
ENUNG RATNENGSIH
(DIA140958)
UNIVERSITAS AL-GHIFARI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
JURUSAN FARMASI
BANDUNG
2018
LEMBAR PENGESAHAN
JUDUL : UJI TOKSISITAS AKUT SEDUHAN DAN HASIL FRAKSI
TEH HITAM (Camellia sinensis L.) DENGAN METODE
BRINE SHRIMP LETHALITY TEST (BSLT)
PENYUSUN : ENUNG RATNENGSIH
NIM : DIA140958
Setelah membaca skripsi ini dengan seksama, menurut pertimbangan kami telah memenuhi
persyaratan ilmiah sebagai suatu skripsi
Bandung, Oktober 2018
Menyetujui,
Pembimbing I, Pembimbing II,
Dytha Andri Deswati, M.Si., Apt Dr. Dadan Rohdiana
KATA PENGANTAR
Puji syukur penulis haturkan kepada Allah SWT atas segala rahmat,
karunia dan nikmat yang diberikan-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan
penulisan skripsi ini. Penulis mengucapkan terima kasih kepada semua pihak yang
telah memberikan bantuan, baik moril maupun materil dari awal sampai akhir
penyelesaian skripsi ini. Pada kesempatan ini penulis mengucapkan terima kasih
dan memohon doa kepada Allah SWT agar diberikan balasan pahala yang
sebesar-besarnya kepada :
1. Bapak H. Dr. Didin Muhafidin Selaku Rektor Universitas Al-Ghifari
2. Bapak Ardian Baitariza, M.Si.,Apt selaku Dekan Fakultas Matematika dan
Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Al-Ghifari.
3. Ibu Ginayanti Hadisoebroto, M.Si.,Apt selaku Ketua Jurusan Farmasi
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Al-Ghifari
4. Ibu Dytha Andri Deswati M.Si.,Apt selaku Dosen Pembimbing I yang
sekaligus sebagai penasihat akademis yang dengan sabar telah memberikan
bimbingan, nasihat, petunjuk dan motivasi dalam penyusunan skripsi ini.
5. Bapak Dr.Dadan Rohdiana selaku Dosen Pembimbing II yang telah
memberikan waktu dan kesempatan selama proses bimbingan, arahan, nasihat
dan motivasi dalam penyusunan skripsi ini.
6. Bapak dan Ibu Dosen di lingkungan Fakultas Farmasi Universitas Al-Ghifari,
khususnya Dosen Jurusan Farmasi yang telah memberikan pengajaran dan
pemahaman yang tulus sehingga menambah wawasan dan pengetahuan
penulis.
7. Seluruh anggota laboran jurusan Farmasi.
8. Keluarga tercinta, yang telah memberikan kasih sayang yang tulus, motivasi,
nasihat, doa dan dukungan baik moril maupun materil.
9. Tim penelitian yang mempunyai solidaritas tinggi, yang telah memberikan
banyak dukungan dan semangat.
Penulis menyadari sepenuhnya bahwa skripsi ini masih jauh dari sempurna.
Untuk itu kritik dan saran dari semua pihak demi perbaikan skripsi ini sangat
diharapkan. Penulis berharap semoga skripsi ini bermanfaat bagi pembaca, sekian
dan terima kasih.
Bandung, November 2018
Penulis
i
ABSTRAK
Teh merupakan minuman yang paling sering dikonsumsi oleh sebagian besar
penduduk di dunia dengan rata-rata konsumsi 120 ml/hari. Penelitian terbaru
menyatakan bahwa teh hitam memiliki efek antiobesitas, antikolesterol, proteksi
lambung dan meningkatkan sistem imun tubuh.Tujuan penelitian ini untuk
melihat nilai LC50 untuk menetapkan batas keamanan dari fraksi dan seduhan teh
hitam. Metode yang digunakan adalah Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
dengan menggunakan larva udang (Artemia salina Leach) berjumlah 20 ekor tiap
perlakuan. Dari hasil pengamatan didapatkan hasil LC50 fraksi etanol ( 65,52
mg/L), fraksi etil asetat (20,17 mg/L) dan fraksi n-heksana ( 78,18 mg/L).
Sedangkan untuk seduhan teh hitam LC50 seduhan 2 gr (52,69 mg/L), seduhan 4 g
(30,96 mg/L), seduhan 6 g (21,73 mg/L), seduhan 8 g (9,28 mg/L) seduhan 10 g
(4,70 mg/L). Fraksi etil asetat teh hitam bersifat sangat toksik dibandingkan fraksi
lainnya.
Kata kunci:Teh Hitam (Camellia sinensis L.), Toksisitas, BSLT, LC50.
ii
ABSTRACT
Tea is the most commonly consumed beverage by most of the world's population
with an average consumption of 120 ml / day. Recent research shows that the
effects of antiobesitas, antikolesterol, protection, and improve the body's immune
system. The purpose of this study is to see the value of LC50 to establish the limits
of fraction and steeping of black tea. The method used is Brinish Shrimp Lethality
Test (BSLT) using shrimp larvae Artemia salina Leach Comfortable 20 tails each
treatment. From the observation result showed LC50 ethanol fraction (65,52 mg /
L), ethyl acetate fraction (20,17 mg / L) and n-hexane fraction (78,18 mg / L). As
for steeping black tea LC50 sediment 2 g (52,69 mg / L), sediment 4 g (30,96 mg /
L), sediment 6 g (21,73 mg / L), sediment 8 g (9,28 mg / L) sediment 10 g (4,70mg
/ L). the ethyl acetate fraction of black tea is very dangerous to other fraction.
Keywords: Black Tea (Camellia sinensis L.), toxicity, BSLT, LC50.
iii
DAFTAR ISI
ABSTRAK .............................................................................................................. i
ABSTRACT ............................................................................................................ ii
DAFTAR ISI ......................................................................................................... iii
DAFTAR TABEL ................................................................................................ vi
DAFTAR GAMBAR ........................................................................................... vii
DAFTAR LAMPIRAN ...................................................................................... viii
BAB I PENDAHULUAN ....................................................................................... 1
1.1 Latar Belakang .............................................................................................. 1
1.2 Rumusan Masalah ......................................................................................... 4
1.3 Tujuan Penelitian .......................................................................................... 4
1.3.1 Tujuan Umum .................................................................................... 4
1.3.2 Tujuan Khusus .................................................................................... 5
1.4 Manfaat Penelitian ........................................................................................ 5
1.5 Waktu Dan Tempat Penelitian ...................................................................... 5
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ............................................................................ 6
2.1 Teh................................................................................................................. 6
2.1.1 Aspek Botani ...................................................................................... 7
2.1.2 Kandungan Kimia .............................................................................. 8
2.1.3 Khasiat Teh ........................................................................................ 9
2.1.4 Teh Hitam ......................................................................................... 10
2.2 Ekstraksi ...................................................................................................... 12
2.2.1 Definisi ............................................................................................. 12
2.2.2 Mekanisme Kerja Ekstraksi ............................................................. 12
2.2.3 Tujuan Ekstraksi ............................................................................... 12
2.2.4 Maserasi ........................................................................................... 14
2.3 Fraksinasi .................................................................................................... 16
iv
2.4 Uji Toksisitas .............................................................................................. 16
2.5 Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) ............................................................ 17
2.6 Artemia salina Leach .................................................................................. 20
2.6.1 Klasifikasi ......................................................................................... 20
2.6.2 Morfologi ......................................................................................... 20
2.6.3 Habitat A. salina Leach. ................................................................... 22
2.6.4 Perkembangan dan Siklus Hidup ..................................................... 22
2.6.5 Perilaku A. salina Leach. .................................................................. 24
2.7 Lethal Concentration – 50 .......................................................................... 24
BAB III METODOLOGI PENELITIAN .......................................................... 26
3.1 Bahan Dan Alat .......................................................................................... 26
3.1.1 Bahan Penelitian ............................................................................... 26
3.1.2 Alat Penelitian .................................................................................. 26
3.2 Prosedur Penelitian..................................................................................... 27
3.2.1 Penyiapan Bahan Tanaman .............................................................. 27
3.2.2 Penetapan Kadar Air Daun Teh Hitam ( Camellia sinensis L.) ...... 27
3.2.3 Ekstraksi Teh Hitam ( Camellia sinensis L.) secara Maserasi ....... 27
3.2.4 Skrining Fitokimia ............................................................................ 28
3.2.5 Fraksinasi Teh Hitam Dengan Metode Ekstraksi Cair-Cair ........... 29
3.2.6 Pembuatan Air Laut Buatan ............................................................. 29
3.2.7 Penyiapan Larva Udang ................................................................... 30
3.2.8 Penyeduhan Teh Hitam .................................................................... 31
3.2.10 Pembuatan Konsentrasi Uji Fraksi Teh Hitam ............................... 31
3.2.11 Pelaksanaan Uji Toksisitas Akut .................................................... 32
3.2.12 Analisis Data .................................................................................. 33
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................. 34
4.1 Hasil Penetapan Kadar Air .......................................................................... 34
4.2 Hasil Ekstraksi dan Fraksinasi .................................................................... 34
4.3 Skrining Fitokimia ...................................................................................... 35
4.4 Pengujian BSLT .......................................................................................... 36
BAB V SIMPULAN DAN SARAN ..................................................................... 44
5.1 Simpulan ..................................................................................................... 44
v
5.2 Saran ............................................................................................................ 44
DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................. 6
LAMPIRAN .......................................................................................................... 10
vi
DAFTAR TABEL
Tabel 2.1: Klasifikasi teh varietas Camellia sinensis ............................................. 25
Tabel 2.2: Komposisi kimia daun teh dan teh hitam .............................................. 25
Tabel 3.2 : Penyiapan Air Seduhan Teh Hitam ...................................................... 30
Tabel 4.1 : Hasil Skrining Fitokimia ...................................................................... 35
Tabel 4.2 : Hasil Uji BSLT Fraksi Teh Hitam ........................................................ 37
Tabel 4.3 : Hasil BSLT Seduhan Teh ..................................................................... 38
Tabel 4.4 : Kategori Toksisitas ............................................................................... 41
vii
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1 : Teh (Camellia sinensis L) ................................................................ 19
Gambar 2.2 : Artemia salina Leach ....................................................................... 22
Gambar 4.1 : Grafik Hubungan Kematian Larva dengan Kosentrasi Fraksi ......... 39
Gambar 4.2 : Grafik Hubungan Kematian Larva dengan Kosentrasi Seduhan ..... 39
Gambar 4.3 : Tingkat % Kematian Larva udang terhadap kosentrasi Fraksi ........ 40
Gambar 4.4 : Tingkat % Kematian Larva udang terhadap kosentrasi Seduhan .... 40
viii
DAFTAR LAMPIRAN
LAMPIRAN I :Skrining Fitokimia ........................................................................ 49
LAMPIRAN II :Proses Penelitian ......................................................................... 54
LAMPIRAN III :Analisis Probit ........................................................................... 55
1
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Kanker merupakan suatu penyakit yang dianggap sebagai masalah besar
didunia. Organisasi kesehatan dunia menyatakan, pada tahun 2015 diperkirakan
ada 9 juta orang yang meninggal karena kanker dan pada tahun 2030 diperkirakan
meningkat sebesar 11,4 juta orang yang meninggal karena kanker. Jumlah
kematian akibat kanker lebih besar daripada total jumlah kematian akibat TBC,
HIV, dan malaria. World Health Organization mengungkapkan terjadi peningkatan
jumlah penderita kanker setiap tahunnya hingga mencapai 6,25 juta orang dan dua
pertiganya berasal dari negara berkembang termasuk Indonesia (Depkes RI, 2010).
Beberapa usaha pengobatan kanker telah dilakukan dengan cara seperti
pembedahan, radiasi, pemberian obat anti kanker atau kemoterapi (Sukardja, 2000).
Namun usaha ini belum memperoleh hasil memuaskan, bahkan efek dari kegagalan
pembedahan dapat menyebabkan kanker menyebar ke bagian tubuh yang lain
dengan kondisi yang parah (Nafrialdi dan Gunawan, 2007). Salah satu metode
pengobatan anti kanker yang telah ada dan masih terus berkembang adalah agen
anti kanker dari bahan alam. Penggunaan bahan alam relative lebih aman karena
efek samping yang relative kecil. Apabila digunakan dengan tepat agen antikanker
dari bahan alam mampu mengobati pada sumber penyakit dengan memperbaiki
sel-sel, jaringan dan organ tubuh yang rusak dengan meningkatkan sistem
2
kekebalan tubuh (Kamubabwa et al, 2000). Salah satu bahan alam yang diduga
sebagai antikanker adalah teh hitam (Camellia sinensis L.).
Tanaman teh (Camellia sinensis) merupakan tanaman yang banyak ditanam di
berbagai negara di dunia sejak zaman dahulu. Tanaman teh dapat tumbuh dengan
baik di daerah yang beriklim sejuk. Keadaan geografis di Indonesia yang sebagian
terdiri dari pegunungan merupakan daerah yang cocok untuk pertumbuhan
tanaman teh, maka tidaklah mengherankan bila produksi teh dijadikan industri
rumah tangga (home industry) ataupun industry besar di Indonesia (Antoni Ludfi
Arifin, 2007). Teh dikelompokan berdasarkan cara pengolahannya yang dilakukan
dengan cara oksidasi, yaitu teh hijau, teh oolong, dan teh hitam. Ketigannya berasal
dari daun teh yang sama, namun karena cara pengolahannya berbeda, maka
memiliki komposisi kimia dan rasa yang berbeda (Arif Hartoyo, 2003).
Teh atau seduhan teh kering merupakan minuman kedua yang paling banyak
dikonsumsi didunia setelah air mineral (Fanaro et al, 2009). Produksi teh kering
(termasuk yang digunakan untuk membuat seduhan teh) diperkirakan mencapai 1,8
juta per tahun dan sanggup menyediakan 40 liter seduhan teh perkapita di dunia
(Cheng et al, 2008).
Teh merupakan minuman yang paling sering dikonsumsi oleh sebagian besar
penduduk di dunia dengan rata-rata konsumsi 120 ml/hari. Teh hitam umumnya
dikonsumsi di Eropa, bagian utara Amerika dan bagian utara Afrika (kecuali
Morroco), sedangkan teh hijau di konsumsi di daerah Asia, teh oolong banyak
dikonsumsi di China dan Taiwan (Wildman, 2001).
3
Teh hitam berdasarkan proses pengolahannya, merupakan teh fermentasi
penuh atau oksidasi enzimatis. Ada beberapa tahap pembuatan dari daun teh
menjadi teh hitam yaitu daun teh yang telah dipetik dibiarkan layu sebentar,
kemudian daun teh tersebut digiling hingga kandungan cairan dalam teh keluar.
Daun teh dibiarkan teroksidasi enzimatis seluruhnya, kemudian teh tersebut
dikeringkan (Port, 2007). Teh hitam atau black tea secara kimia banyak
mengandung senyawa-senyawa unggul yang sangat berperan dalam kesehatan. Teh
hitam memiliki dua kandungan yang paling signifikan salah satunya yaitu
theaflavin, dimana diketahui bahwa theafalvin hanya terdapat pada teh hitam atau
teh yang mengalami oksimatis, kekuatan theaflavin dianggap setara dengan katekin
sebagai anti oksidan alami yang sangat potensial sebagai penangkal radikal bebas
(Winarsi, 2007).
Lazimnya setiap bahan alam yang diduga berpotensi sebagai obat maupun
secara empiris telah digunakan masyarakat sebagai obat, diawali dengan uji pre-
klinis toksisitas untuk memprediksi tingkat keamanannya, kemudian dilanjutkan
dengan uji farmakologi lainnya. Salah satu metode toksisitas in vitro yang sering
digunakan adalah metode Brine Shrimp Letality Test (BSLT) ( Frenky, 2014).
Uji toksisitas pada ekstrak tanaman biasanya dilakukan dengan untuk
mengetahui keamanan suatu ekstrak. Dimana pengujian toksisitas biasanya dengan
menggunakan hewan uji. Salah satu hewan uji yang sesuai adalah brine shrimp
(udang laut) A. salina Leach, sejenis udang-udangan primitive dan pertama kali
ditemukan di Lymington, Inggris pada tahun 1755 dan termasuk family crustaceae
tingkat rendah dari phylum arthropoda (Sukandar, et al., 2007).
4
Uji toksisitas akut adalah tata cara tertentu yang dirancang untuk menentukan
dosis letal median (LC50) suatu zat dan kemungkinan mekanisme kerja dan target
organnya. LC50 didefinisikan sebagai dosis atau konsentrasi yang diberikan sekali
(tunggal) atau beberapa kali dalam 24 jam dari satu zat yang secara statistik
diharapkan dapat mematikan 50% hewan coba (Priyanto. 2010).
Brine Shrimp Lethality Test (BSLT), pertama kali diperkenalkan oleh Michael,
dkk pada tahun 1956. Metode pengujian ini didasarkan pada bahan senyawa aktif
dari tumbuhan yang bersifat toksik dan mampu membunuh larva Artemia salina
Leach. dan dapat digunakan sebagai uji praskrining aktivitas antikanker (Sukandar,
et al. 2007).
Berdasarkan hal tersebut, maka dilakukanlah uji toksisitas akut yang diukur
dengan penentuan LC50 seduhan teh hitam dan ekstrak etanol daun teh hitam
(Camellia sinensis L.) terhadap larva udang Artemia salina Leach.
1.2 Rumusan Masalah
Apakah seduhan dan hasil fraksi teh hitam (Camellia sinensis L.) bersifat
toksik dengan menggunakan metode Brine Shrimp Letality Test (BSLT) ?
1.3 Tujuan Penelitian
1.3.1 Tujuan Umum
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui toksisitas dari seduhan dan hasil
fraksi teh hitam (Camellia sinensis L.) menggunakan metode Brine Shrimp
Letality Test (BSLT).
5
1.3.2 Tujuan Khusus
a. Mengukur presentase kematian larva udang Artemia salina Leach setelah
pemberian seduhan dan ekstrak etanol teh hitam (Camellia sinensis L.)
b. Menentukan nilai LC50 larva udang Artemia salina Leach setelah
pemberian seduhan dan ekstrak etanol teh hitam (Camellia sinensis L.)
1.4 Manfaat penelitian
Manfaat dari penelitian ini yaitu sebagai skrining awal toksisitas dari seduhan
dan hasil fraksi teh hitam (Camellia sinensis L.) menggunakan metode Brine
Shrimp Letality Test (BSLT) asal Gambung dan menunjukan bahwa teh hitam asal
Gambung merupakan tanaman yang potensial untuk dikembangkan dalam terapi
antikanker.
1.5 Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Mei 2018 sampai dengan Juli 2018 di
Laboratorium Farmakologi Fakultas MIPA jurusan Farmasi Universitas Al-
Ghifari Bandung
6
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Teh
Teh adalah suatu tanaman yang berasal dari famili theaceae, memiliki daun
berwarna hijau dengan tinggi pohon 10 - 15 meter di alam bebas dan tinggi 0,6 -
1,5 meter jika dibudayakan sendiri. Daun dari tanaman ini berwarna hijau muda
dengan panjang 5 - 30 cm dan lebar sekitar 4 cm. Tanaman ini memiliki bunga
yang berwarna putih dengan diameter 2,5 - 4 cm. Buahnya berbentuk pipih, bulat
dan terdapat satu biji dalam masing-masing buah dengan ukuran sebesar
kacang.(Biswas,2006)
Teh merupakan tanaman yang secara komersial tumbuh di daerah tropis dan
sub tropis. Teh pertama kali masuk ke Indonesia tahun 1686 sebagai tanaman
hias. Tahun 1728 pemerintah Belanda mulai mendatangkan biji-biji teh dari
Negara Cina untuk dibudidayakan di Pulau Jawa, tetapi usaha perkebunan teh
Gambar 2.1 : Teh (Camellia sinensis)
Sumber : https://id.wikipedia.org/wiki/Camellia_sinensis
7
pertama baru berhasil pada tahun 1828 (Artanti dan Hanafi, 2002).
Perkebunan teh Indonesia mencapai 157.000 Ha terdiri atas 54% perkebunan
rakyat, 24% perkebunan besar Negara dan 22% perkebunan besar Swasta
(Yulianto, Dkk., 2007). Hampir 100% tanaman teh di Indonesia adalah Camellia
sinensis varietas assamica. Varietas ini mempunyai kandungan polifenol yang
lebih tinggi dibandingkan dengan varietas sinensis yang dibudidayakan di 14
Jepang, China dan Taiwan sehingga potensinya sebagai antioksidan lebih baik
(Rohdiana dan Widiantara, 2004).
Disemua negara, teh berasal dari tanaman yang hampir sama yaitu Camellia
sinensis. Perbedaan diantara jenis teh tersebut dikarenakan perbedaan cara
produksi, iklim lokal, tanah dan kondisi pengolahan. Ada kira-kira 1500 tanaman
teh yang berda-beda dan kira-kira 2000 campuran yang mungkin. Tanaman ini
dapat tumbuh subur di daerah dengan ketinggian 200-2000 m di atas permukaan
laut, dimana semakin tinggi letak daerahnya, semakin menghasilkan mutu teh
yang baik, misalnya teh Darjeeling dari India, terletak di atas ketinggian 1500 m
(Spillane, 2002).
2.1.1 Aspek Botani
Salah satu dari beberapa minuman penyegar yang terkenal di Indonesia
adalah teh. Teh (Camellia sinensis) merupakan tanaman asli Asia Tenggara dan
kini telah ditanam di lebih dari 30 negara. Menurut Herbal (2008), tanaman teh
dapat tumbuh dengan baik di daerah pegunungan beriklim sejuk pada ketinggian
lebih dari 1.800 meter di atas permukaan laut (dpl). Saat ini sudah ada 3000 jenis
teh yang berasal dari satu jenis tanaman dengan hasil perkawinan silangnya
8
(Pambudi, 2004). Varietas teh yang terkenal adalah Camellia sinensis var.
Assamica. Pengklasifikasian teh varietas Assamica dapat dilihat pada Tabel 2.1.
Divisi Spermatophyta
Sub Divisi Angiospermae
Kelas Dicotyledoneae
Sub Kelas Dialupetalae
Ordo (Bangsa) Guttiferales (Clusiales)
Familia (Suku) Camelliaceae (Theaceae)
Genus (Marga) Camellia
Spesies (Jenis) Camellia sinensis
Varietas Assamica
Sumber : Tuminah, 2004
2.1.2 Kandungan Kimia
Nasution dan Tjiptadi (1975) menyatakan bahwa pada dasarnya daun teh
mengandung air dan bahan-bahan selain air atau sering disebut bahan-bahan
kering. Komposisi kimia daun teh sangat berpengaruh terhadap bubuk teh yang
dihasilkan. Hal ini adalah sebagai akibat dari pengaruh reaksi-reaksinya selama
proses pengolahan. Komponen-komponen ini berpengaruh langsung terhadap
strength, warna, flavour, 4 rangsangan seduhan teh tersebut. Presentase komposisi
kimia daun teh dan teh hitam dapat dilihat pada Tabel 2.2
Tabel 2.1 : Klasifikasi Teh Varietas Camelliaia sinensis
9
Tabel 2.2 : Komposisi kimia daun teh dan teh hitam
2.1.3 Khasiat teh
Penelitian terbaru menyatakan bahwa teh hitam memiliki efek antiobesitas
dengan cara menghambat enzim pankreas lipase. (Glisan et al. 2017).
Mengkonsumsi dapat menjaga kesehatan kardiovaskular melalui efek
antikolesterol oleh fitosterol pada teh hitam (Orem et al. 2017). Teh hitam juga
memiliki efek perlindungan pada saluran cerna dengan cara melindungi mukosa
lambung dan mengurangi lesi lambung akibat etanol (Scoparo et al. 2016).
Seduhan teh hitam juga sudah diteliti memiliki aktivitas antioksidan dengan nilai
IC50 sebesar 97,00 μg/ml (Sudaryat et al. 2015). Selain itu, pemberian seduhan teh
hitam dapat meningkatkan fagositosis makrofag pada mencit dengan dosis
pemberian 12 dan 24 mg/ml/hari selama 14 hari (Pantas, 2009).
10
2.1.4 Teh hitam
Teh hitam merupakan hasil pengolahan melalui proses fermentasi. Teh
hitam banyak digunakan untuk keperluan ekspor. Berdasarkan pengolahaan teh
hitam dibedakaan menjadi dua yaitu teh ortodoks dan teh Crushing, Tearing,
Curling (CTC). Pengolahan teh CTC adalah suatu cara penggulungan yang
memerlukan tingkat layu sangat ringan, dengan sifat penggulungan yang sangat
ringan. Ciri fisik yang terdapat pada teh CTC antara lain ditandai dengan
potongan-potongan yang keriting. Teh CTC memiliki sifat cepat larut, air seduhan
berwarna lebih tua dengan rasa lebih kuat, sedangkan teh ortodoks mempunyai
kelebihan dibagian quality dan flavour (Soedradjat, 2003).
Pengolahan teh hitam dimulai dari proses pelayuan dan kedua penggulungan
pucuk layu dan fermentasi, ketiga tahap pengeringan hasil penggulungan dan
keempat tahap sortasi kering, penyimpanan dan pengepakan (Soedradjat, 2003)
Mutu teh hitam yang ditunjukan untuk ekspor dibedakan menjadi 3 jenis
yaitu: mutu khusus, mutu I, dan mutu II. Berdasarkan pada kenampakan teh,
warna, aroma dan rasa dari seduhan teh terdapat pula perbedaan mutu dalam
beberapa jenis. Rumusan untuk mutu teh dan jenis mutu berikut:
1. Mutu Khusus
Teh mutu khusus mempunyai kenampakan dengan bentuk besar, kurang
besar atau kecil menurut jenisnya dan mengandung tip (pucuk daun), warna daun
kehitam-hitaman. Air seduhan berwarna merah kekuning-kuningan, aroma harum
11
dan rasanya kuat. Ampas seduhan tehnya berwarana merah tembaga kehijauan
dengan aroma (Soedradjat, 2003).
2. Mutu I
Teh mutu I mempunyai kenampakan bentuk besar, kurang besar, kecil
menurut jenisnya dengan persentase daun lebih banyak, warna merah kekuning-
kuningan, aroma harum dan rasa kuat (Soedradjat, 2003).
3. Mutu II
Teh mutu II mempunyai kenampakan bentuk besar, kurang besar, kecil
tergantung dari jenisnya dengan persentase daun lebih sedikit, warna kemerah-
merahan dan kurang rata. Air seduhan teh berwarna kuning merah, aroma kurang
harum dan ras kurang kuat. Ampas kehitam-hitaman dan aromanya kurang harum
(Soedradjat, 2003).
Menurut Herawati (1994), teh hitam hasil pengolahan secara CTC
(Crushing, Tearing, Curling), dan digolongkan pada 28 jenis mutu. Hasil
pengolahan teh hitam secara CTC lebih dari 75% cuplikan lolos ayakan mesh 16
dan tertahan pada ayakan mesh 24 dan memiliki partikel yang berbentuk butiran
agak bulat. Sedangkan teh hitam hasil pengolahan secara ortodoks termasuk jenis
teh bubuk yang dalam proses sortasinya lolos dari ayakan mesh 7 dan tertahan
oleh ayakan mesh 20 serta memiliki bentuk agak kecil, bagian-bagiannya pendek,
12
hitam terpilin, terutama berasal dari daun muda, mengandung sedikit pucuk atau
tanpa pucuk tapi lebih banyak mengandung serat.
2.2 Ekstraksi
2.2.1 Definisi
Ekstraksi adalah penyarian zat-zat berkhasiat atau zat-zat aktif dari bagian
tanaman obat, hewan dan beberapa jenis akan termasuk biota laut. Zat-zat aktif
tersebut terdapat di dalam sel, namun sel tanaman dan hewan berbeda demikian
pula ketebalannya, sehingga diperlukan metode ekstraksi dan pelarut tersebut
dalam mengekstraksi (Depkes, 1986).
2.2.2 Mekanisme Kerja Ekstraksi
Proses terekstraksinya zat aktif dalam tanaman adalah pelarut organik akan
menembus dinding sel dan masuk ke dalam rongga sel yang mengandung zat
aktif, zat aktif akan terlarut sehingga terjadi perbedaan konsentrasi antara larutan
zat aktif didalam sel dan pelarut organik diluar sel. Maka larutan terpekat akan
berdifusi keluar sel, dan proses ini akan berulang terus sampai terjadi
keseimbangan antara konsenterasi zat aktif di dalam dan di luar sel (Alam, 2008).
2.2.3 Tujuan Ekstraksi
Tujuan ekstraksi adalah untuk menarik komponen-komponen kimia yang
terdapat dalam simplisia, proses ekstraksi ini didasarkan atas perpindahan massa
komponen-komponen zat padat dari simplisia kedalam pelarut, setelah pelarut
13
menembus permukaan dinding sel, kemudian berdifusi sehingga terjadi perbedaan
tekanan diluar dan didalam sel (Depkes, 1986).
Secara umum terdapat empat situasi tujuan ekstraksi:
a. Secara kimia telah diketahui identitasnya untuk di ekstraksi dari
organisme. Dalam kasus ini, prosedur yang telah dipublikasikan dapat diikuti dan
dibuat modifikasi yang sesuai untuk mengembangkan proses atau
menyesuaikannya dengan kebutuhan pemakai.
b. Bahan diperiksa untuk menemukan kelompok senyawa kimia tertentu,
misalnya: alkaloid, flavonoid atau saponin meskipun struktur kimia walaupun dari
senyawa ini, bahkan keberadaannya belum diketahui dalam situasi seperti
ini,metode umum yang digunakan untuk senyawa kimia yang di minati dapat
diperoleh dari pustaka.
c. Organisme (tanaman atau hewan) digunakan dalam pengobatan
tradisional dan biasanya dibuat dengan berbagai cara misalnya tradisional Chinese
medicine (TCM) sering kali membutuhkan herba yang dididihkan dalam air dan
dekok dalam air untuk diberikan sebagai obat. Proses ini harus ditiru sedekat
mungkin jika ekstrak akan melalui kajian ilmiah biologi atau kimia lebih lanjut,
khususnya jika tujuannya untuk menvalidasi penggunaan tradisional.
d. Sifat senyawa yang akan diisolasi belum ditentukan sebelumnya dengan
cara apapun. Situasi ini (utamanya dalam program skrining) dapat timbul jika
tujuannya adalah menguji organisme, baik yang dipilih secara acak atau
14
didasarkan pada penggunaan tradisional untuk mengetahui adanya senyawa
dengan aktivitas biologi tertentu (Alam, 2008).
2.2.4 Maserasi
Maserasi merupakan cara penyarian yang sederhana, yang dilakukan
dengan cara merendam serbuk simplisia dalam cairan penyari. Cairan penyari
akan menembus dinding sel dan masuk ke dalam rongga sel yang mengandung zat
aktif. Zat aktif akan larut dan karena adanya perbedaan konsentrasi antara larutan
zat aktif didalam sel dan diluar sel, maka larutan yang terletak didalam akan
terdesak keluar. Peristiwa tersebut terulang terus hingga menjadi keseimbangan
konsentrasi antara larutan diluar sel dan didalam sel. Simplisia yang akan
diekstraksi diserbukkan dengan derajat tertentu lalu dimasukkan ke dalam bejana
maserasi. Simplisia tersebut direndam dengan cairan penyari, setelah itu dalam
waktu tertentu sesekali diaduk. Perlakuan tersebut dilakukan selama 5 hari
(Depkes, 1986).
Keuntungan cara penyarian dengan maserasi adalah cara pengerjaan dan
peralatan yang digunakan sederhana dan mudah di usahakan. Maserasi dapat
dilakukan dengan modifikasi, misalnya:
a. Digesti
Digesti adalah cara maserasi yang mengandung pemanasan lemah, yaitu
pada suhu 40 – 50◦C. Cara maserasi ini hanya digunakan untuk simplisia yang zat
aktifnya tahan terhadap pemanasan.
b.Maserasi dengan menggunakan mesin pengaduk
15
Penggunaan mesin pengaduk yang berputar terus menerus, waktu
proses maserasi dapat dipersingkat menjadi 6 sampai 24 jam.
c. Remaserasi
Cairan penyari dibagi 2 Seluruh serbuk simplisia dimaserasi dengan
cairan penyari pertama, sesudah dienap tuangkan dan diperas, ampas dimaserasi
lagi dengan cairan penyari yang kedua.
d. Maserasi melingkar
Penyarian yang dilakukan dengan cairan penyari yang selalu bergerak
dan menyebar sehingga kejenuhan cairan penyari dapat merata.
Maserasi umumnya dilakukan dengan cara: Memasukkan simplisia yang
sudah diserbukkan dengan derajat halus 4/8 sebanyak 10 bagian kedalam bejana
maserasi yang dilengkapi pengaduk mekanik, kemudian ditambahkan 75 bagian
cairan penyari, ditutup, dan dibiarkan selama 5 hari pada temperatur kamar
terlindung dari cahaya sambil berulang-ulang diaduk. Setelah 5 hari, disaring
kedalam wadah penampungan kemudian ampasnya diperas dan ditambah cairan
penyari secukupnya dan diaduk kemudian disaring lagi hingga diperoleh sari
sebanyak 100 bagian. Sari yang diperoleh ditutup dan disimpan pada tempat yang
terlindung dari cahaya selama 2 hari, endapan yang diperoleh dipisahkan dan
filtratnya dipekatkan (Depkes, 1986).
16
2.3 Fraksinasi
Fraksinasi pada prinsipnya adalah proses penarikan senyawa pada suatu
ekstrak dengan menggunakan dua macam pelarut yang tidak saling bercampur.
Pelarut yang umumnya dipakai untuk fraksinasi adalah n-heksan, etil asetat, dan
metanol. Untuk menarik lemak dan senyawa non polar digunakan n-heksan, etil
asetat untuk menarik senyawa semi polar, sedangkan metanol untuk menarik
senyawa-senyawa polar. Dari proses ini dapat diduga sifat kepolaran dari senyawa
yang akan dipisahkan. Sebagaimana diketahui bahwa senyawa-senyawa yang
bersifat non polar akan larut dalam pelarut yang non polar sedangkan senyawa-
senyawa yang bersifat polar akan larut dalam pelarut yang bersifat polar juga
(Mutiasari, 2012).
2.4 Uji Toksisitas
Toksisitas adalah suatu keadaan yang menandakan adanya efek toksik/racun
yang terdapat pada bahan sebagai sediaan single dose atau campuran. Toksisitas
akut ini diteliti pada hewan percobaan yang menunjukkan evaluasi keamanan dari
kandungan kimia untuk penggunaan produk rumah tangga, bahan tambahan
makanan, kosmetik, obat-obatan (Donatus, 2005)
Uji toksisitas dilakukan untuk mendapatkan informasi atau data tentang
toksisitas suatu bahan (kimia) pada hewan uji. Secara umum uji toksisitas dapat
dikelompokkan menjadi uji toksisitas jangka pendek/akut, dan uji toksisitas
jangka panjang. Uji toksisitas akut dimaksudkan untuk mendapatkan informasi
tentang gejala keracunan, penyebab kematian, urutan proses kematian dan rentang
dosis yang mematikan hewan uji (Lethal dose atau disingkat LD50) suatu bahan.
17
Uji toksisitas akut merupakan efek yang merugikan yang timbul segera sesudah
pemberian suatu bahan sebagai dosis tunggal, atau berulang yang diberikan dalam
24 jam (Donatus, 2005).
Berikut merupakan jenis dari uji toksisitas :
A. Akut : pemaparan bahan kimia selama kurang dari 24 jam
B. Sub akut : pemaparan berulang terhadap suatu bahan kimia untuk jangka
waktu 1 bulan atau kurang
C. Subkronik : pemaparan berulang terhadap suatu bahan kimia untuk jangka
waktu 3 bulan.
D. Kronik : pemaparan berulang terhadap bahan kimia untuk jangka waktu
lebih dari 3 bulan(Priyanto, 2010).
2.5 Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
Penelitian fitokimia saat ini lebih ditekankan pada penelitian untuk
mendapatkan senyawa bioaktif. Uji hayati yang digunakan untuk tujuan ini
sebaiknya sederhana, cepat, ekonomis, dan memiliki korelasi statistik yang valid
dengan bioaktivitas yang diinginkan (Anderson, 1991). Menurut Meyer et al.,
(1982), salah satu uji bioaktivitas yang mudah, cepat, murah dan akurat yaitu
dengan menggunakan larva udang Artemia salina Leach dikenal dengan istilah
Brine Shrimp Lethality Test(BSLT). Uji mortalitas larva udang merupakan salah
satu metode uji bioaktivitas pada penelitian senyawa bahan alam. Penggunaan
18
larva udang untuk kepentingan studi bioaktivitas sudah dilakukan sejak tahun
1956 dan sejak saat itu telah banyak dilakukan pada studi lingkungan, toksisitas
dan penapisan senyawa bioaktif dari jaringan tanaman. Uji ini merupakan uji
pendahuluan untuk mengamati aktivitas farmakologi suatu senyawa. Adapun
penerapan untuk sistem bioaktivitas dengan menggunakan larva udang tersebut,
antara lain untuk mengetahui residu pestisida, anastetik lokal, senyawa turunan
morpin, mikotoksin, karsinogenitas suatu senyawa dan polutan untuk air laut serta
sebagai alternatif metode yang murah untuk uji sitotoksisitas (Hamburger &
Hostettmann 1991).
Senyawa aktif yang memiliki daya bioaktivitas tinggi diketahui berdasarkan
nilai Lethal Concentration 50% (LC50), yaitu suatu nilai yang menunjukkan
konsentrasi zat toksik yang dapat menyebabkan kematian hewan uji sampai 50%.
Data mortalitas yang diperoleh kemudian diolah dengan analisis probit yang
dirumuskan oleh Finney (1971) untuk menentukan nilai LC50 pada derajat
kepercayaan 95%. Senyawa kimia memiliki potensi bioaktif jika mempunyai nilai
LC50 kurang dari 1.000 µg/ml (Meyer et al., 1982). Uji BSLT dengan
menggunakan larva udang Artemia salina dilakukan dengan menetaskan telur-
telur tersebut dalam air laut yang dibantu dengan aerasi. Telur Artemia salina
akan menetas sempurna menjadi larva dalam waktu 24 jam. Larva Artemia salina
yang baik digunakan untuk uji BSLT adalah yang berumur 48 jam sebab jika
lebih dari 48 jam dikhawatirkan kematian Artemia salina bukan disebabkan
toksisitas ekstrak melainkan oleh terbatasnya persediaan makanan (Meyer et al.,
1982). Kista ini berbentuk bulatan-bulatan kecil berwarna kelabu kecoklatan
19
dengan diameter berkisar 200-300 μm. Kista berkualitas baik, apabila diinkubasi
dalam air berkadar garam 5-70 permil akan menetas sekitar 18-24 jam. Artemia
salina yang baru menetas disebut nauplius, berwarna orange, berbentuk bulat
lonjong dengan panjang sekitar 400 mikron, lebar 170 mikron dan berat 0,002 mg.
Nauplius berangsur-angsur mengalami perkembangan dan perubahan morfologis
dengan 15 kali pergantian kulit hingga menjadi dewasa. Pada setiap pergantian
kulit disebut instar (Mudjiman 1995). Keunggulan penggunaan larva udang A.
salina untuk uji BSLT ini ialah sifatnya yang peka terhadap bahan uji, waktu
siklus hidup yang lebih cepat, mudah dibiakkan dan harganya yang murah. Sifat
peka A. salina kemungkinan disebabkan oleh keadaan membran kulitnya yang
sangat tipis sehingga memungkinkan terjadinya difusi zat dari lingkungan yang
mempengaruhi metabolisme dalam tubuhnya. A. salina ditemukan hampir pada
seluruh permukaan perairan di bumi yang memiliki kisaran salinitas 10 - 20g/l,
hal inilah yang menyebabkannya mudah dibiakkan. Larva yang baru saja menetas
berbentuk bulat lonjong dan berwarna kemerah-merahan dengan panjang 400 μm
dengan berat 15 μg. Anggota badannya terdiri dari sepasang sungut kecil
(anteluena atau antena I) dan sepasang sungut besar (antena atau antena II). Di
bagian depan di antara kedua sungut kecil tersebut terdapat 21 bintik merah yang
berfungsi sebagai mata (oselus). Di belakang sungut besarnya terdapat sepasang
mandibula (rahang) yang kecil, sedangkan di bagian perut (ventral) sebelah depan
terdapat labrum (Mudjiman 1988).
20
2.6 Artemia salina Leach
2.6.1 Klasifikasi (Wibowo, 2013)
Filum : Arthopoda
Class : Crustaceae
Subclass : Branchiopoda
Bangsa : Anostraca
Famili : Artemiidae
Suku : Artemia
Jenis : Artemia salina Leach
2.6.2 Morfologi
Artemia salina Leach atau Brine Shrimp merupakan zooplankton dan
tergolong udang primitif. Nama Artemia diberikan untuk pertama kali oleh
Shlosscer yang menemukannya di suatu danau asin pada tahun 1755. Artemia
semula diberi nama Cancer salina oleh Linnaeus pada tahun 1778 melengkapi
jasad renik ini menjadi Artemia salina Leach (Harefa, 2003). Klasifikasi Artemia
Gambar 2.2 : Artemia salina Leach
Sumber : https://en.wikipedia.org/wiki/Brine_shrimp
21
salina dalam sistematika hewan adalah sebagai berikut (Bougis, 1979 dalam
Fathiyawati, 2008)
Artemia salina L. termasuk crustaceae yang ukurannya mencapai 12 cm.
Dapat ditemukan pada air yang salinitasnya tinggi, seperti danau asin, air laut,
tidak dapat hidup di air tawar. Daur hidup Artemia salina L. memerlukan waktu
25 hari (Kristanti, dkk., 2008). Penetesan telur Artemia salina L. yang baik perlu
memperhatikan beberapa faktor yaitu: hidrasi dari kista-kista, aerasi, penyinaran,
suhu, derajat keasaman (pH), dan kepadatan telur dalam media penetesan
(Hendrawati, 2009). Telur Artemia salina L. dapat bertahan dalam kondisi kering
dan dapat disimpan cukup lama. Telur ini bila diberi air laut pada suhu 23 ºC
maka ia akan menetes dalam 1 2 hari dan dapat langsung digunakan dalam uji
toksisitas. Uji toksisitas pada hewan uji dimaksudkan untuk ekstrapolasi hasil
terhadap manusia untuk mencari dosis yang aman. Parameter yang digunakan
dalam uji ini adalah efek toksikan (respon) terhadap hewan uji. Respon tersebut
dapat dilihat hanya berupa immobilisasi ke dalam tiap tabung berisi konsentrasi
toksikan yang berbeda dimasukkan 10 ekor hewan uji, disertai dengan tabung
kontrol. Immobilisasi ini sudah dianggap sebagai kematian untuk hewan uji
seperti Artemia salina Leach. Nilai LC50 diperoleh dengan ekstrapolasi kurva
(Soemirat, 2005).
Penetasan telur dilakukan dengan memasukkan telur Artemia salina Leach
ke dalam air laut sambil diaerasi untuk mengontakkan dengan udara selama 4 jam.
Proses penetasan Artemia salina Leach ada beberapa tahapan yaitu tahap hidrasi,
22
pecahnya cangkang dan tahap payung atau tahap pengeluaran. Tahap hidrasi
terjadi penyerapan air sehingga telur yang diawetkan dalam bentuk kering tersebut
akan menjadi bulat dan aktif bermetabolisme. Tahap selanjutnya yaitu tahap
pecahnya cangkang yang disusul dengan tahap pecahnya payung yang terjadi
beberapa saat sebelum naupli (larva) keluar dari cangkang (Isnanstyo,1995 dalam
Farihah, 2008)
2.6.3 Habitat A. salina Leach.
A. salina Leach. memiliki resistensi luar biasa pada perubahan dan mampu
hidup pada variasi salinitas air yang luas dari seawater (2.9- 3.5%) sampai the
great salt lake (25-35%), dan masih dapat bertoleransi pada kadar garam 50%
(jenuh). Beberapa ditemukan di rawa asin hanya pada pedalaman bukit pasir
pantai, dan tidak pernah ditemui di lautan itu sendiri karena di lautan terlalu
banyak predator. A. salina Leach. juga mendiami kolom-kolom evaporasi buatan
manusia yang biasa digunakan untuk mendapatkan garam dari lautan. Insang
membantunya agar cocok dengan kadar garam tinggi dengan absorbsi dan
ekskresi ion-ion yang dibutuhkan dan menghasilkan urin pekat dari glandula
maxillaris. Hidup pada variasi temperatur air yang tinggi pula, dari 6-37°C dengan
temperatur optimal untuk reproduksi pada 25°C (suhu kamar). Keuntungan hidup
pada lokasi berkadar garam tinggi adalah sedikitnya predator namun sumber
makanannya sedikit (Emslie, 2003).
2.6.4 Perkembangan dan Siklus Hidup
A. salina Leach. dibedakan menjadi dua golongan berdasarkan cara
berkembangbiaknya, antara lain perkembangbiakan secara biseksual dan
23
partenogenetik. Keduanya dapat terjadi secara ovipar maupun ovovivipar. Pada
jenis A. salina Leach. ovovivipar, anakan yang keluar dari induknya sudah berupa
arak atau burayak yang dinamakan nauplis, sehingga sudah langsung dapat hidup
sebagai A. salina Leach. muda. Sedangkan pada cara ovipar, yang keluar dari
induknya berupa telur bercangkang tebal yang dinamakan siste. Proses untuk
menjadi nauplis masih harus melalui proses penetasan terlebih dahulu. Kondisi
ovovivipar biasanya terjadi bila keadaan lingkungan cukup baik, dengan kadar
garam kurang dari 150 per ml dan kandungan oksigennya cukup. Oviparitas
terjadi apabila keadaan lingkungan memburuk, dengan kadar garam lebih dari 150
per mil dan kandungan oksigennya kurang. Telur ini memang dipersiapkan untuk
menghadapi keadaan lingkungan yang buruk, bahkan kering. Bila keadaan
lingkungan baik kembali, telur akan menetas dalam waktu 24-36 jam (Mudjiman,
1995; Kanwar, 2007).
A. salina Leach. yang sudah dewasa dapat hidup sampai enam bulan.
Sementara induk-induk betinanya akan beranak atau bertelur setiap 4-5 hari
sekali, dihasilkan 50-300 telur atau nauplius. Nauplis akan dewasa setelah
berumur 14 hari, dan siap untuk berkembang biak (Mudjiman, 1995). A. salina
Leach. dapat diperjualbelikan dalam bentuk telur istirahat yang disebut kista.
Kista ini berbentuk bulatan-bulatan kecil berwarna kecoklatan dengan diameter
berkisar 200-300 mikron. Kista yang berkualitas baik akan menetas sekitar 18-24
jam apabila diinkubasi air yang bersalinitas 5-70 permil. Ada beberapa tahapan
pada proses penetasan A. salina Leach. ini yaitu tahap hidrasi, tahap pecah
cangkang dan tahap payung atau tahap pengeluaran. Tahap hidrasi terjadi
24
penyerapan air sehingga kista yang diawetkan dalam bentuk kering tersebut akan
menjadi bulat dan aktif bermetabolisme. Tahap selanjutnya adalah tahap pecah
cangkang dan disusul tahap payung yang terjadi beberapa saat sebelum nauplius
keluar dari cangkang (Isnansetyo dan Kurniastuty, 1995)
2.6.5 Perilaku A. salina Leach.
A. salina Leach. bersifat fototaksis positif yang berarti menyukai cahaya, di
alam hal tersebut dibuktikan dengan adanya gerakan tubuh menuju ke permukaan
karena sinar matahari sebagai sumber cahaya secara alami, dimana akan selalu di
permukaan saat siang hari dan tenggelam pada malam hari. Intensitas cahaya yang
terlalu tinggi dapat pula mengakibatkan respon fototaksis negatif sehingga ia akan
menjauhi cahaya. A. salina Leach. yang baru menetas mempunyai perilaku
geotaksis positif, hal ini terjadi ketika nauplius tenggelam ke bawah setelah
menetas akibat efek gravitasi. Gerakan phyllopodia mendorong makanan bergerak
ke anterior (lokomosi). Gerakan anggota tubuhnya untuk mendorongnya menuju
arah sumber makanan (Emslie, 2003).
2.7 Lethal Concentration – 50 (LC-50)
Uji toksisitas merupakan uji hayati yang berguna untuk menentukan tingkat
toksisitas dari suatu zat atau bahan pencemar. Suatu senyawa kimia dikatakan
bersifat racun akut jika senyawa tersebut dapat menimbulkan efek racun dalam
jangka waktu singkat, dalam hal ini 24 jam, sedangkan jika senyawa tersebut baru
menimbulkan efek dalam jangka waktu yang panjang, disebut racun kronis
(karena kontak yang berulang-ulang walaupun dalam jumlah yang sedikit)
(Harmita, 2009). LC50 (Median Lethal Concentration) yaitu konsentrasi yang
25
menyebakan keatian sebanyak 50% dari organisme uji yang dapat diestimasi
dengan grafik dan perhitungan pada suatu waktu pengamatan tertentu, misalnya
LC50 24 jam, LC50 48 jam, LC50 96 jam (Dhahiyat dan Djuangsih, 1997) sampai
waktu hidup hewan uji. Selanjutnya pengujian efek toksik dihitung dengan
menentukan nilai LC50. Untuk mendapatkan nilai LC50, terlebih dahulu
menghitung mortalitas dengan cara: akumulasi mati dibagi jumlah akumulasi
hidup dan mati (total) dikali 100%. Grafik dibuat dengan log konsentrasi sebagai
sumbu x terhadap mortalitas sebagai sumbu y. Nilai LC50 merupakan konsentrasi
dimana zat menyebabkan kematian 50% yang diperoleh dengan memakai
persamaan regresi linier y = a + bx. Suatu zat dikatakan aktif atau toksik bila nilai
LC50< 1000 µg/ml untuk ektrak dan < 30 µg/ml untuk suatu senyawa (Juniarti et
al., 2009). Selanjutnya Meyer (1982) mengklasifikasikan tingkat toksisitas suatu
ekstrak berdasarkan LC50, yaitu kategori sangat tinggi / highly toxic apabila
mampu 22 membunuh 50% larva pada konsentrasi 1 – 10 µg/ml, sedang / medium
toxic pada konsentrasi 10 – 100 µg/ml, dan rendah / low toxic pada konsentrasi
100 – 1000 µg/ml.
26
BAB III
METODOLOGI PENELITIAN
3.1 Bahan Dan Alat
3.1.1 Bahan Penelitian
a. Bahan penelitian
Teh hitam yang digunakan diperoleh dari Pusat Penelitian Teh dan Kina
(PPTK), Gambung, Pangalengan, Jawa Barat.
b. Hewan uji
Hewan uji yang digunakan dalam penelitian ini adalah larva udang Artemia
Salina Leach yang dipelihara dalam wadah yang berisi air laut bersih dengan pH
yang dikondisikan 7-8 dibawah cahaya lampu dan suhu 25OC dibiarkan selama 48
jam.
c. Bahan Lain
Bahan lain yang digunakan yaitu NaCl, MgSO4, MgCl2, CaCl2, KCl,
NaHCO3, etanol 96%, n-heksana, etil asetat, aquadest, kertas saring, air laut.
3.1.2 Alat Penelitian
Bejana erlenmeyer, cawan porselen, water bath, pipet volume, pipet tetes,
labu takar, timbangan, tabung uji (vial), wadah bening, aerator, lampu, batang
pengaduk, corong, gelas ukur 10 ml, mikropipet, neraca analitik, pipet tetes,
27
tabung reaksi beserta rak nya, seperangkat alat penetasan telur (wadah plastik dan
sterofoam), cawan penguap, labu ukur.
3.2 Prosedur Penelitian
3.2.1 Penyiapan Bahan Tanaman
Bahan tanaman yang digunakan pada penelitian ini adalah teh hitam
diperoleh dari Pusat Penelitian Teh dan Kina (PPTK), Gambung, Pangalengan,
Jawa Barat.
3.2.2 Penetapan Kadar Air Daun Teh Hitam ( Camellia sinensis L.)
Sebanyak 5 gram simplisia dimasukkan kedalam oven dengan suhu 1050C
selama 5 jam. Simplisia ditimbang kembali untuk mengetahui bobot akhir
simplisia.
3.2.3 Ekstraksi Teh Hitam ( Camellia sinensis L.) secara Maserasi
Pembuatan ekstrak teh hitam dilakukan secara maserasi. Sebanyak 250
gram simplisia daun teh hitam ditambah 1,5 liter etanol 96% dalam bejana
tertutup selama 24 jam. Selanjutnya disaring dan diperas, ampas ditambahkan
etanol 96% lagi hingga terendam, perendaman dan penyaringan dilakukan selama
3 hari dengan 3 kali penggantian pelarut, Maserat yang diperoleh kemudian
disatukan, diuapkan d iatas penangas air hingga menjadi ekstrak kental.
28
3.2.4 Skrining Fitokimia
a. Uji Flavonoid
Identifikasi flavonoid dilakukan dengan cara ditambahkan serbuk Mg dan 2
ml HCl 2N pada 2 ml larutan ekstrak. Senyawa flavonoid akan menunjukkan
warna jingga sampai merah (Harbone 1987, dalam Sukandar dkk, 2008).
b. Uji Alkaloid
Identifikasi Alkaloid dilakukan dengan cara 3 ml larutan ekstrak ditambahkan
denagn 1 ml HCl 2N dan 6 ml air suling, kemudian dipanaskan selama 2 menit,
didinginkan dan disaring. Filtrat dengan perekasi Mayer terbentuk endapan putih
(Padmasari, 2013).
c.Uji Saponin
Identifikasi saponin dilakukan dengan sampel ditambahkan aquadest.
Kemudian dikocok vertical selama 10 detik. Hasil uji positif jika timbul busa
stabil selama 10 menit (Harbone 1987, dalam Sukandar dkk, 2008).
d. Uji Tanin
Identifikasi tanin dilakukan dengan cara sebanyak 1 ml larutan ekstrak uji
direaksikan dengan FeCl3 10% adanya tanin ditunjukkan dengan terbentuknya
warna biru tua atau hitam kehijauan (Padmasari, 2013).
29
3.2.5 Fraksinasi Teh Hitam Dengan Metode Ekstraksi Cair-Cair
Ekstrak etanol teh hitam dimasukkan kedalam corong pisah kemudian
ditambahkan pelarut n-heksana perbandingan 1:2, lalu didiamkan hingga memisah
menjadi dua lapisan.
Fraksinasi dengan n-heksana dilakukan sampai n-heksana berwarna bening
mendekati semula (±3x). Warna bening menunjukkan kalau semua senyawa non
polar telah tertarik ke fraksi n-heksana yang keluar dari corong pisah kemudian
ditampung dalam Erlenmeyer dan digabungkan, sedangkan fraksi etanol
difraksinasi kembali dengan etil asetat 1:2. Fraksinasi dengan etil asetat ini
dilakukan untuk menarik senyawa semipolar yang ada dalam daun teh hitam (
Camellia sinensis L.).
Fraksinasi dengan corong pisah akhirnya diperoleh tiga fraksi, yakni: fraksi
n-heksana, etil asetat, dan etanol. Ketiga fraksi ini kemudian diuapkan pelarutnya
hingga diperoleh fraksi berupa serbuk/padatan untuk kemudian masing-masing
diuji toksisitasnya.
3.2.6 Pembuatan Air Laut Buatan
Bahan yang digunakan untuk pembuatan air laut buatan berkadar garam 5
per mil yaitu 5 g natrium klorida; 1,3 g magnesium sulfat; 1 g magnesium klorida;
0,3 g kalsium klorida; 0,2 g kalium klorida; dan 2 g natrium bikarbonat dicampur
dalam 1 liter aquadest. Bahan-bahan sebagian dilarutkan dalam sebagian aquadest
dalam labu takar 1 liter. Khusus untuk magnesium sulfatdilarutkan dalam air
panas, sedangkan natrium bikarbonat dilarutkan dengan air bebas karbon dioksida.
Lalu ditambah aquadest sampai volume 1 liter.
30
Bahan-bahan yang digunakan untuk pembuatan air laut buatan:
Tabel 3.1: Bahan-bahan pembuatan air laut buatan
No Bahan Jumlah (g)
1 NaCl 5,0
2 MgSO4 1,3
3 MgCl2 1,0
4 CaCl2 0,3
5 KCl 0,2
6 NaHCO3 2,0
7 Aquadest Sampai 1 liter
(Mudjiman,1988)
Bahan-bahan tersebut ditimbang, lalu dilarutkan dalam sebagian aquadest
pada labu takar 1 liter. Khusus untuk magnesium sulfat dilarutkan dengan
menggunakan air panas dan natrium klorida dilarutkan dalam air bebas karbon
dioksida, kemudian ditambahkan aquadest sampai volume tepat 1 liter. Air laut
buatan berkadar garam 5 per mil dan pH antara 7,3-8,4 merupakan media hidup
yang sesuai untuk larva Artemia.
3.2.7 Penyiapan Larva Udang
Penyiapan telur Artemia salina dilakukan dengan cara merendam sebanyak
50 mg telur Artemia salina dalam wadah berupa aquarium yang telah dibagi 2
ruang yaitu ruang gelap dan ruang terang. ruang gelap adalah aquarium yang
dilapisi pelapis berwarna hitam, sedangkan ruang terang adalah aquarium tanpa
pelapis gelap, kemudian pasanglah penyekat dari sterofoam yang tengahnya telah
diberi lubang diantara sisi terang dan gelap, pasanglah lampu pijar 5 watt pada
bagian atas aquarium sisi yang terang (tanpa pelapis), isi aquarium dengan air
laut buatan, kemudian masukan telur Artemia salina pada bagian gelap aquarium,
apabila telur Artemia salina telah menetas, secara naluriah/alami dia akan
31
bergerak menuju sisi terang dari aquarium tersebut, telur Artemia salina akan
menetas dan menjadi larva setelah 24 jam.
Larva Artemia salina yang baik digunakan untuk uji BSLT yaitu yang
berumur 48 jam sebab jika lebih dari 48 jam dikhawatirkan kematian Artemia
salina bukan disebabkan toksisitas melainkan terbatasnya persediaan makanan.
3.2.8 Penyeduhan Teh Hitam
Timbang seksama 2, 4, 6, 8, 10 gram daun teh hitam kering, kemudian
masing-masing ditambahkan 100 ml air suling 90°C dan diaduk selama 5 menit,
didinginkan. Diambil larutannya kemudian disentrifus dengan kecepatan 5500
rpm selama 15 menit, diambil larutan jernihnya.
Tabel 3.2 : Penyiapan Air Seduhan Teh Hitam
Bahan Konsentrasi Air Seduhan Teh
T1 T2 T3 T4 T5
Daun Teh Hitam (g)
Air (g) 2
100
4
100
6
100
8
100
10
100
3.2.10 Pembuatan Konsentrasi Uji Fraksi Teh Hitam
Konsentrasi larutan uji untuk BSLT adalah 1000 μg/mL, 125 μg/mL
l00 μg/mL,75 μg/mL,10 μg/ml, dan 1 μg/mL serta konsentrasi 0 µg/ml
(sebagai kontrol negatif). Untuk pembuatan larutan stok ekstrak kental
etanol 96% ditimbang sebanyak 100 mg, kemudian dilarutkan kedalam air
laut sebanyak 100 mL, hingga diperoleh konsentrasi larutan stok 1000
μg/ml.
32
a. Larutan konsentrasi 1000 µg/ml dibuat dengan cara menimbang 50
mg Fraksi teh hitam dan dimasukkan ke dalam 50 ml air laut.
b. Larutan konsentrasi 100 µg/ml dibuat dengan cara diambil 1 mL
larutan 1000 µg/mL dan dimasukkan ke dalam 10 ml air laut.
c. Larutan konsentrasi 75 µg/ml dibuat dengan cara diambil 0,75 mL
larutan 1000 µg/mL dan dimasukkan ke dalam 40 ml air laut.
d. Larutan konsentrasi 10 µg/ml dibuat dengan cara diambil 1mL
larutan 100 µg/mL dan dimasukkan ke dalam 40 ml air laut.
e. Larutan konsentrasi 0 µg/ml dibuat dengan cara diambil 10 mL air
laut.
3.2.11 Pelaksanaan Uji Toksisitas Akut
Pada uji toksisitas akut masing-masing konsentrasi dilakukan tiga kali
pengulangan dengan tiap kelompok memiliki 10 ekor larva Artemia salina.
Disiapkan wadah pengujian untuk masing-masing konsentrasi ekstraksampel
membutuhkan 3 wadah dan 1 wadah sebagai kontrol untuk masing-masing
pengulangan. Selanjutnya, pada tiap konsentrasi larutan dimasukkan 10 ekor larva
Artemia salina. Pengamatan dilakukan selama 24 jam terhadap kematian larva
Artemia salina, dimana setiap konsentrasi dilakukan 3 pengulangan dan
dibandingkan dengan kontrol. Kriteria standar untuk menilai kematian larva
Artemia salina yaitu bila larva tidak menunjukkan pergerakan selama beberapa
detik observasi.
33
3.2.12 Analisis Data
Data yang dikumpulkan adalah data primer yang dihasilkan dengan
menghitung persentase kematian larva Artemia salina Leach pada tiap
konsentrasi. Data hasil penelitian akan diolah dan disajikan dalam bentuk table
dan grafik. Data dari uji toksisitas akan di analisis dengan analisis regresi linier
menggunakan spss versi 16 untuk menentukan nilai LC50.
34
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil Penetapan Kadar Air
Tujuan dari penetapan kadar air yaitu untuk mengukur kandungan air yang
terkandung dalam simplisia, serta memberikan batasan minimal rentang besarnya
kandungan air dalam bahan. Kadar air dari simplisia teh hitam kering yaitu 3,9 %
hal ini telah memenuhi syarat kadar air yang telah ditetapkan bahwa kadar air
untuk simplisia < 5% (Agoes., 2007).
4.2 Hasil Ekstraksi dan Fraksinasi
Pada penelitian ini, metode ekstraksi yang digunakan adalah maserasi.
Metode tersebut dipilih karena merupakan metode yang paling sederhana dengan
peralatan yang relatif mudah untuk didapatkan. Selain itu maserasi dilakukan
tanpa adanya tahap pemanasan sehingga dapat menghindari terjadinya kerusakan
komponen senyawa-senyawa pada teh hitam yang tidak tahan panas. Hasil
maserasi sampel dengan pelarut etanol diperoleh sekitar 10,52 gram dengan
rendeman sekitar 10,52 %. Ekstrak berbentuk cairan kental dan berwarna hitam.
Esktrak kemudian di fraksinasi menjadi fraksi etanol, N-heksana dan etil asetat.
Fraksinasi dilakukan berdasarkan prinsip perbedaan kelarutan dari setiap
komponen esktrak teh hitam menggunakan corong pisah kemudian kembali
dipekatkan.
35
4.3 Skrining Fitokimia
Skrining fitokimia dilakukan terhadapt simplisia, ekstrak dan fraksi untuk
hasil lengkap dapatt dilihat pada tabel 4.1 di bawah ini :
Tabel 4.1 : Hasil Skrining Fitokimia
Simplisia Ekstrak
Fraksi
Etanol Etil
Asetat
N- Heksana
Flavonoid + + + - -
Tanin + + + + +
Saponin + + + - -
Alkaloid + + + + +
Steroid + + - + +
Hasil skrining fitokimia atau uji pendahuluan dari simplisia dan ekstrak teh
didapatkan hasil bahwa simplisia dan ekstak teh hitam mengandung alkaloid,
flavonoid, saponin, steroid dan tanin. Sedangkan fraksi etanol teh hitam
mengandung semua metabolit sekunder yang diujikan kecuali steroid, hal ini
terjadi karena steroid merupakan metabolit sekunder non polar terbukti dengan
adanya steroid pada fraksi N-Heksana. Fraksi etil mengandung tanin, alkaloid dan
steroid, hal ini wajar karena etil merupakan pelarut semi polar sedangkan alkaloid
biasa terdapat dalam pelarut semi polar sedangkan untuk tanin yang bersifat polar
bisa saja terdapat dalam fraksi non polar begitu juga dengan steroid. Sedangkan
untuk fraksi N- heksana terdapat steroid, tanin, dan alkaloid. Dengan banyak nya
komponen senyawa ini memungkinkan adanya aktifitas biologis oleh karena itu di
lanjutkan ke pengujian BSLT.
36
4.4 Pengujian BSLT
Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui derajat toksisitas sehingga
menetapkan batas keamanan dan melihat potensi sebagai senyawa antioksidan
dari ekstrak teh hitam (fraksi etanol,N-heksana dan etil asetat) dan seduhan teh
hitam yang banyak dikonsumsi di masyarakat.
Penelitian terbaru menyatakan bahwa teh hitam memiliki efek antiobesitas
dengan cara menghambat enzim pankreas lipase. (Glisan et al. 2017).
Mengkonsumsi dapat menjaga kesehatan kardiovaskular melalui efek
antikolesterol oleh fitosterol pada teh hitam (Orem et al. 2017). Teh hitam juga
memiliki efek perlindungan pada saluran cerna dengan cara melindungi mukosa
lambung dan mengurangi lesi lambung akibat etanol (Scoparo et al. 2016). Selain
itu, pemberian seduhan teh hitam dapat meningkatkan fagositosis makrofag pada
mencit dengan dosis pemberian 12 dan 24 mg/cc/hari selama 14 hari (Pantas
2009). Sehingga dengan banyak nya manfaat dari seduhan teh hitam dirasa perlu
untuk menentukan batas keamanannya dengan nilai LC50 agar tidak terjadi
toksisitas.
Uji toksisitas dilakukan dengan metode BSLT (Brime Shirmp Lethality Test)
yang diujikan dengan larva udang Artemia salina Leach.digunakan sebagai hewan
uji karena pertumbuhan sel dari larva A.salina hampir sama dengan pertumbuhan
sel kanker. Ekstrak sampel bersifat toksik apabila mempunyai nilai LC50<1000
ppm (Meyer et al.1982). Berdasarkan uji aktivitas antioksidan yang dilakukan
dengan metode DPPH, nilai aktivitas antioksidan dikatakan sangat kuat apabila
37
nilai LC50<50 μg/mL dan dikatakan sangat lemah apabila nilai LC50>150 μg/mL
(Ariyanto, 2006)
Tabel 4.2 : Hasil Uji BSLT Fraksi Teh Hitam
Sampel
Kosentrasi
Akumulasi
Hidup
Akumulasi
Mati
Mortalitas
(%)
LC50
(ppm)
Fraksi
Etnanol
1000 ppm 0 60 100
65,52
100 ppm 14 46 76.66667
75 ppm 49 11 18.33333
10 ppm 50 10 16.66667
1 ppm 60 0 0
Blanko 60 0 0
Fraksi N-
Heksana
1000 ppm 0 60 100
78,18
100 ppm 23 37 61.66667
75 ppm 56 4 6.666667
10 ppm 35 25 41.66667
1 ppm 44 16 26.66667
Blanko 60 0 0
Fraksi Etil
Asetat
1000 ppm 0 60 100
20,17
100 ppm 2 58 96.66667
75 ppm 38 22 36.66667
10 ppm 37 21 35
1 ppm 43 17 28.33333
Blanko 60 0 0
38
Tabel 4.3 : Hasil BSLT Seduhan Teh
Sampel Kosentrasi Akumulasi
Hidup
Akumulasi
Mati
Mortalitas
(%)
LC50
(ppm)
2 gr(100ml)
1000 ppm 0 60 100
52,69
100 ppm 17 43 71.66667
75 ppm 41 19 31.66667
10 ppm 50 10 16.66667
1 ppm 56 4 6.666667
Blanko 60 0 0
4 gr (100
ml)
1000 ppm 0 60 100
30,96
100 ppm 13 47 78.33333
75 ppm 38 22 36.66667
10 ppm 44 16 26.66667
1 ppm 53 7 11.66667
Blanko 60 0 0
6 gr (100
ml)
1000 ppm 0 60 100
21,73
100 ppm 12 48 80
75 ppm 31 29 48.33333
10 ppm 36 24 40
1 ppm 53 7 11.66667
Blanko 60 0 0
8 gr (100
ml)
1000 ppm 0 60 100
9,28
100 ppm 7 53 88.33333
75 ppm 18 42 70
10 ppm 32 28 46.66667
1 ppm 47 13 21.66667
Blanko 60 0 0
10 gr (100
ml)
1000 ppm 0 60 100
4,70
100 ppm 9 51 85
75 ppm 7 53 88.33333
10 ppm 22 38 63.33333
1 ppm 44 16 26.66667
Blanko 60 0 0
39
Gambar 4.1 : Hubungan Kematian Larva Dengan Kosentrasi Fraksi Teh
Hitam
Gambar 4.2 : Hubungan Kematian Larva Dengan Kosentrasi Seduhan Teh
Hitam
0
10
20
30
40
50
60
70
FRAKSI ETANOL FRAKSI ETIL ASETAT
FRAKSI N- HEKSANA
JU
ML
AH
KE
MA
TIA
N
1000 ppm
100 ppm
75 ppm
10 ppm
1 ppm
Blanko
0
10
20
30
40
50
60
70
SEDUHAN 2 g SEDUHAN 4 g SEDUHAN 6 g SEDUHAN 8 g SEDUHAN 10 g
JU
ML
AH
KE
MA
TIA
N
1000 ppm
100 ppm
75 ppm
10 ppm
1 ppm
Blanko
40
Gambar 4.3 : Tingkat Kematian Larva Udang Terhadap Konsentrasi Fraksi
Teh Hitam
Gambar 4.4 : Tingkat Kematian Larva Udang Terhadap Konsentrasi
Seduhan Teh Hitam
Dari hasil uji BSLT pada fraksi ekstrak teh hitam didapatkan hasil bahwa
terdapat hasil yang tidak sesuai dengan teori dimana seperti pada fraksi etil asetat
0
20
40
60
80
100
120
Blanko 1 ppm 10 ppm 75 ppm 100 ppm 1000 ppm
% M
ort
ali
tas
Kosentrasi
Fraksi Etanol
Fraksi N-Heksana
Fraksi Etil Asetat
0
20
40
60
80
100
120
Blanko 1 ppm 10 ppm 75 ppm 100 ppm 1000 ppm
% M
OR
TA
LIT
AS
KOSENTRASI
SEDUHAN 2 g
SEDUHAN 4 g
SEDUHAN 6 g
SEDUHAN 8 g
SEDUHAN 10 g
41
dan N-heksana jumlah hewan uji yang mati antara kosentrasi 10 ppm dan 75 ppm
lebih banyak pada 10 ppm sedangkan pada fraksi etanol sama. Hal ini dapat
terjadi karena banyak faktor seperti perbedaan fisiologis dari hewan uji serta
kesalahan pengamatan karena kecilnya ukuran hewan uji yang memungkinkan
terjadinya kesalahan.
Mekanisme kematian larva juga berhubungan dengan fungsi senyawa
alkaloid dan tanin dalam teh hitam yang dapat menghambat daya makan larva
(antifedant). Menurut Cahyadi (2009) Cara kerja senyawa-senyawa tersebut
adalah dengan bertindak sebagai stomach poisoning atau racun perut. Oleh karena
itu, bila senyawa-senyawa ini masuk ke dalam tubuh larva, alat pencernaannya
akan terganggu. Selain itu, senyawa ini menghambat reseptor perasa pada daerah
mulut larva. Hal ini mengakibatkan larva gagal mendapatkan stimulus rasa,
sehingga tidak mampu mengenali makanannya sehingga larva mati kelaparan.
Tabel 4.4 : Kategori Toksisitas
Dari analisis probit dengan sppss versi 16 didapatkan hasil LC50 fraksi
etanol ( 65.52 mg/L), fraksi etil asetat (20,17 mg/L) dan fraksi N-heksana ( 78,18
mg/L). Dapat disimpulkan bahwa fraksi etil asetat teh hitam lebih toksik
Kategori LC50 (ppm)
Sangat toksik <30
Toksik 30-1000
Tidak toksik >1000
42
dibandingkan fraksi etanol dan fraksi n-heksana. Ketiga fraksi ini termasuk
kedalam kategori toksik bahkan pada fraksi etil asetat bersifat sangat toksik.
Sedangkan untuk pengujian pada seduhan teh hitam dilakukan untuk
menentukan batas keamanan karena masyarakat mengkonsumsi teh hitam dengan
cara diseduh. Dari hasil penelitian untuk kosentrasi seduhan 2,4,6,8 dan 10 gram
teh hitam didalam 100 ml air panas suhu 90 derajat celcius yang diseduh selama 6
menit lalu di saring dan diujikan pada larva udang. Dari analisis probit dengan
spss versi 16 didapatkan hasil seduhan teh hitam LC50 seduhan 2 g (52,69 mg/L),
seduhan 4 g (30,96 mg/L), seduhan 6 g (21,73 mg/L), seduhan 8 g (9,28 mg/L)
seduhan 10 g (4,70 mg/L). Dapat dilihat semakin besar kosentrasi penyeduhan
maka semakin tinggi nilai LC50 seduhan teh. Hal ini terjadi karena semakin
banyak senyawa yang tertarik dari proses penyeduhan sehingga meningkatkan
aktivitas maupun toksisitasnya. Dari hasil didapatkan hasil bahwa seduhan teh
memiliki toksisitas yang tinggi karena LC50< 1000 mg\L. Hampir semua seduhan
teh memiliki aktivitas toksisitas yang tinggi ( LC50< 50 mg/L) . Sehingga perlu
edukasi kepada masyarakat untuk menyeduh teh di bawah 2 gram dalam 100 ml
air untuk alasan keamanan.
Jika dibandingkan antara ekstrak teh hitam dan seduhan teh hitam maka
disimpulkan fraksi teh hitam lebih bersifat toksik dibandingkan dengan seduhan
teh hitam. Hal ini kemungkinan terjadi karena komponen senyawa yang bersifat
sitotoksis banyak lebih terlarut pada fraksi etil asetat. Akan tetapi ada banyak
kemungkinan seperti rusaknya komponen senyawa sitotoksik senyawa teh hitam
akibat proses penyeduhan, maserasi dan fraksinasi seperti pada proses pemanasan
43
saat pengentalan ekstrak di water bath. Selain itu juga perbedaan fisiologis serta
kesulitan pengamatan akan berpengaruh pada hasil.
44
BAB V
SIMPULAN DAN SARAN
5.1 Simpulan
Dari hasil pengamatan didapatkan hasil LC50 fraksi etanol ( 65.52 mg/L),
fraksi n-heksana ( 78,18 mg/L) dan fraksi etil asetat (20,17 mg/L). Sedangkan
untuk seduhan teh hitam LC50 seduhan 2 g (52,69 mg/L), seduhan 4 g (30,96
mg/L), seduhan 6 g (21,73 mg/L), seduhan 8 g (9,28 mg/L) seduhan 10 g (4,70
mg/L).
5.2 Saran
Penelitian selanjutnya dapat dilakukan pengujian antioksidan karena nilai
LC50 fraksi dan seduhan teh hitam sangat toksik sehingga berpotensi menjadi
antikanker.
6
DAFTAR PUSTAKA
Agoes, G., 2007., Teknologi Bahan Alam., Bandung : Penertbit Institut
Teknologi Bandung., Hal 17
Alam, G., 2008, Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) sebagai bioassay dalam
isolasi senyawa bioaktif dari bahan alam, Majalah Farmasi dan
Farmakologi. 6(2):432-435.
Antoni Ludfi Arifin. 2007. Pengaruh Peningkatan Brand Awareness & Brand
Loyalty Terhadap Peningkatan Penjualan & Pangsa Pasar pada
Merek Teh Hijau: kasus teh hijau Green-T.
Ariyanto, R., 2006. Uji Aktivitas Antioksidan, Penentuan Kandungan
Fenolikdan Flavonoid Total Fraksi Kloroform dan Fraksi Air Ekstrak
Metanolik Pegagan (Centella asiatica L. Urban), skripsi. Fakultas
Farmasi Universitas Gadjah Mada.Yogyakarta.
Bougis, P. 1979. Marine Plankton Ecology. New York: American Elseiver
Publishing Company
Biswas, K.P, “Description Of Tea Plants” In: Encyclopaedia Of Medicinal
Plants, (New Delhi: Dominant Publisharers and Distributor, 2006), h.14
Cahyadi, R., 2009., Uji toksisitas akut ekstrak etanol buah pare (Momordica
charantia L) Terhadap larva Artemia salina Leach dengan metode
Brine shrimp lethality test (BLST)., Universitas Dipenogoro
Repository.5: 1-8
Cheng, Y., T. Huynh-Ba, I. Blank F. Robert, 2008, Temporal Changes In Aroma
Release of Longjing Tea Infusion: Interaction of Volatile and
Nonvolatile Tea Components And Formation of 2-Butyl-2-Octenal Upon
Aging, J. Agric. Food Chem, 56, pp.2160-2169.
Depkes RI, 1986, Farmakope Indonesia, Edisi III, Departemen Kesehatan
Republik Indonesia, Jakarta. 6-7, 93-94, 265, 338-339, 691.
Dhahiyat, Y. dan Djuangsih. 1997. Uji Hayati (Bioassay); LC50 (Acute Toxicity
Tests) Menggunakan Daphnia dan Ikan. PPSDAL LP Universitas
Padjadjaran, Bandung.
7
Donatus, I.A. 2005., Toksikologi Dasar. Laboratorium Farmakologi dan
Toksikologi. Yogyakarta. Fakultas Farmasi. UGM.
Emslie, S. 2003. Artemia salina Leach.-Brine Shrimp-Ses Monkeys.
http://www.animaldiversity.ummz.umich.edu/site/accounts/information/Ar
t emia_salina.html [28 JULI 2018]
Fathiyawati. 2008. Uji Toksisitas Ekstrak Daun Ficus racemosa L. terhadap
Artemia salina Leach dan profil Kromatografi Lapis Tipis. Tesis
(tidak dipublikasikan). Fakultas Farmasi UMS. Surakarta.
Franky., Roslizawaty., Pertiwi, D. 2014. Uji Toksisitas Ekstrak Etanol Sarang
Semut Lokal Aceh (Mymercodia sp.) Dengan Metode Bslt Terhadap
Larva Udang Artemia salina Leach. Jurnal Medika Veterinari. 8(1) :
60-62.
Glisan, Shannon L., Kimberly A. Grove, Neela H. Yennawar, and Joshua D.
Lambert. 2017. Inhibition of Pancreatic Lipase by Black Tea
Theaflavins: Comparative Enzymology and in Silico Modeling Studies.
Food Chemistry 216: 296–300.
http://dx.doi.org/10.1016/j.foodchem.2016.08.052.
Hamburger M and Hostettmann. 1991. Bioactivity in Plant: The Link Between
Phytochemistry and Medicine. Phytochemistry. 12: 3864-3874.
Harefa, F., 1987, Pembudidayaan Artemia salina untuk Pakar Udang dan
Ikan, Penerbit Swadaya, Jakarta.
Hartoyo, Arif. 2003. Teh dan Khasiatnya Bagi Kesehatan : Sebuah Tinjauan
Ilmiah. Kanisius. Yogyakarta
Hendrawati, A. R. E. 2009. Uji Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Daun Kemangi
(Ocimum sanctum Linn.) terhadap Larva Artemia salina Leach
dengan Metode Brime Shrimp Lethality Test (BSLT). Laporan Akhir
Karya Tulis Ilmiah. Semarang: Fakultas Kedokteran Universitas
Diponegoro Semarang.
Isnansetyo, A Dan Kurniastuty. 1995. Teknik Kultur Fitoplankton Dan
zooplankton. Kanisius. Yogyakarta.116 hal.
Kamuhabwa, A., Nshimo, C. 2000, Cytotoxcity of somo Medical Plant
EkstractsUsed In Tarzanian 12 Tradisional medicine. J.
Ethnopharmacol. 70: 143- 149.
Kristanti, A. N, dkk. 2008. Buku Ajar Fitokimia. Surabaya: Airlangga
University Press
8
Loomis, T.A. 1978. Toksikologi Dasar. Diterjemahkan oleh : Donatus, I.A.,
Edisi III. IKIP Semarang Press, Semarang.
Meiske., S., 2012., Uji Toksisitas dan Skining Fitokimia Tepung Gabah
Pelepah Aren (Arrenga pinnata)., Fakultas MIPA., Universitas
Samratulangi., Manado.
Meyer., 1982.”Brine Shrimp: A Covenient General Bioassay forActive Plant
Constituents”, Planta Medika 45:31-34.
Mudjiman, A. 1988. Udang Renik Air Asin (Artemia salina). Bhatara Karya
Aksara, Jakarta
Mudjiman, A. 1995. Udang Renik Air Asin (Artemia salina). Bhatara Karya
Aksara, Jakarta
Mutiasari, IR. Identifikasi Golongan Senyawa Kimia Fraksi Aktif; Journal.
Jakarta: FMIPA-UI. 2012.
Nafrialdi dan Gunawan, S.G., 2007, Antikanker, Farmakologi dan Terapi,
Edisi ke-5, Jakarta: Departemen Farmakologi dan Teurapeutik Fakultas
Kedokteran Uversitas Indonesia.
Nasution, M.Z. dan W. Tjiptadi. 1975. Pengolahan Teh. Departemen Teknologi
Hasil Pertanian, FATEMETA, IPB, Bogor.
\
Orem, Asım et al.,Cardio-Protective Effects of Phytosterol-Enriched Functional
Black Tea in Mild Hypercholesterolemia Subjects., Journal of Functional
Foods., 2017., 31: 311–19.
Padmasari, et al., 2013., Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol 70% Rimpang
Bangle (Zingiberis purpureum Roxb.)., Jurnal Farmasi Udayana., 2 (4).,
1-4
Pambudi, J. 2004. Potensi Teh Sebagai Sumber Zat Gizi dan Perannya dalam
Kesehatan. http://www.ipard.com/art_perkebun/Jul04-06_jp.asp 20 Juni
2018]
Pantas, Fm. 2009., Pengaruh Pemberian Seduhan Teh Hitam Dosis Bertingkat
Terhadap Aktivitas Fagositosis Makrofag Mencit Balb/C Yang
Diinokulasi Salmonella Typhimurium., UNDIP ., Semarang.
Priyanto., 2010., Toksikologi Ed:2. Depok: Leskonfi Lembaga Studi dan
Konsultasi Farmakologi.
9
Rohdiana, D. dan T. Widiantara. 2004. Aktivitas antioksidan beberapa klon teh
unggulan. Prosiding Seminar Nasional dan Kongres Perhimpunan Ahli
Teknologi Pangan Indonesia (PATPI). 17-18 Desember. Jakarta
Scoparo, Camila T, Louis.,Chemical Characterization of Heteropolysaccharides
from Green and Black Teas (Camelliaia Sinensis) and Their Anti-Ulcer
Effect.,International Journal of Biological Macromolecules., FEB 2016.,
86: 772–81
Soemirat, J. 2005., Toksikologi Lingkungan., Yogyakarta., Gadjah Mada
University Press
Sudrajat. 2012. Toksisitas Ekstrak Batang Kayu Bawang (Scorodocarpus
Borneensis Becc.) Fraksi Etanol-Air Terhadap Rayap Coptotermes Sp
(Isoptera : Rhinotermitidae). Mulawarman Scientifie 11 (1): 29-40.
Sukandar, D., Hermanto, S., dan Lestari, E. 2007. Uji Toksisitas Ekstrak Daun
Pandan Wangi (Pandanus amarylifolius Roxb.) Dengan Metode Brine
shrimp Lethality Test (BSLT). Penerbit UIN Hidayatullah: Jakarta.
Sukardja, I Dewa Gede., 2000. Onkologi Klinik. Surabaya : Airlangga University
Press.
Spillane DR, 2002, ”Ekonomi Pariwisata Sejarah dan Prospeknya”,
Yogyakarta: Kanisius.
Tuminah, S., 2004., Teh [Camellia sinensis O.K. var Assamica (Mast)] Sebagai
Sumber Antioksidan.http://www.kalbefarma.com/files/cdk/files/
144_16AntioxidantTea.pdf/144_16 AntioxidantTea.html [14 Juni 2018]
Wildman, REC (eds). 2001. Handbook of Nutraceuticals and Functional Food.
Boca Raton : CRC Press.
Wibowo, S., Bagus S. S. U., Th. Dwi S., dan Syamdidi. (2013). Artemia untuk
Pakan Ikan dan Udang, Penebar Swadaya Grup, Jakarta.
Winarsi, H., 2007, Antioksidan Alami dan Radikal Bebas, Sebuah tinjauan
Ilmiah Kanius, Yogyakarta. 11-139.
Yulianto RA, Isnaeni W & Susanti R. 2013. Pengaruh pemberian vitamin E
terhadap kualitas sperma tikus putih yang dipapar timbal. Unnes
Journal of Life Science 2(2): 92-99.
10
LAMPIRAN
LAMPIRAN I
SKINING FITOKIMIA
SIMPLISIA
Positif Flavonoid Positif Alkaloid Positif Tanin
Positif Saponin Positif Steroid
11
EKSTRAK
Positif Flavonoid
Positif Alkaloid Positif Tanin
Positif Saponin
Positif Steroid
12
LANJUTAN LAMPIRAN I
SKINING FITOKIMIA
FRAKSI ETANOL
Positif Alkaloid Positif Flavonoid
Positif Tanin
Positif Saponin
Negatif Steroid
13
LANJUTAN LAMPIRAN I
SKINING FITOKIMIA
FRAKSI ETIL ASETAT
Positif Alkaloid Negatif Flavonoid
Positif Tanin
Positif Steroid Negatif Saponin
14
LANJUTAN LAMPIRAN I
SKINING FITOKIMIA
FRAKSI N-HEKSANA
Positif Steroid Negatif Saponin
Positif Alkaloid Positif Tanin Negatif Flavonoid
15
LAMPIRAN II
PROSES PENELITIAN
LAMPIRAN IV
LAMPIRAN
Proses Maserasi Pengentalan Ekstrak Proses Fraksinasi
Penimbangan Bahan Seduhan Teh Hitam Pengambilan Larva Udang Pengujian BSLT
16
LANJUTAN LAMPIRAN III
ANALISA PROBIT
TEH HITAM ETANOL
Confidence Limits
Probability
95% Confidence Limits for
KOSENTRASI
95% Confidence Limits for
log(KOSENTRASI)b
Estimate
Lower
Bound
Upper
Bound Estimate
Lower
Bound
Upper
Bound
PROBITa 0.01 2.528 .267 7.013 .403 -.574 .846
0.02 3.701 .496 9.300 .568 -.305 .968
0.03 4.715 .733 11.135 .673 -.135 1.047
0.04 5.656 .984 12.760 .753 -.007 1.106
0.05 6.559 1.249 14.262 .817 .096 1.154
0.06 7.440 1.529 15.686 .872 .184 1.196
0.07 8.309 1.826 17.058 .920 .261 1.232
0.08 9.174 2.139 18.395 .963 .330 1.265
0.09 10.038 2.470 19.707 1.002 .393 1.295
0.1 10.904 2.818 21.003 1.038 .450 1.322
0.15 15.366 4.849 27.446 1.187 .686 1.438
0.2 20.181 7.421 34.149 1.305 .870 1.533
0.25 25.498 10.625 41.443 1.407 1.026 1.617
0.3 31.457 14.567 49.649 1.498 1.163 1.696
0.35 38.215 19.360 59.162 1.582 1.287 1.772
0.4 45.966 25.125 70.519 1.662 1.400 1.848
0.45 54.957 31.983 84.494 1.740 1.505 1.927
0.5 65.522 40.052 102.218 1.816 1.603 2.010
0.55 78.118 49.470 125.378 1.893 1.694 2.098
0.6 93.400 60.431 156.538 1.970 1.781 2.195
0.65 112.343 73.265 199.735 2.051 1.865 2.300
0.7 136.478 88.552 261.714 2.135 1.947 2.418
0.75 168.372 107.320 354.674 2.226 2.031 2.550
17
0.8 212.732 131.457 503.124 2.328 2.119 2.702
0.85 279.395 164.788 764.226 2.446 2.217 2.883
0.9 393.708 216.667 1306.984 2.595 2.336 3.116
0.91 427.712 231.179 1489.744 2.631 2.364 3.173
0.92 467.989 247.938 1718.125 2.670 2.394 3.235
0.93 516.668 267.645 2010.810 2.713 2.428 3.303
0.94 577.043 291.359 2398.256 2.761 2.464 3.380
0.95 654.559 320.793 2933.774 2.816 2.506 3.467
0.96 759.036 358.948 3720.174 2.880 2.555 3.571
0.97 910.599 411.773 4985.750 2.959 2.615 3.698
0.98 1159.926 493.627 7367.161 3.064 2.693 3.867
0.99 1698.578 655.497 13661.431 3.230 2.817 4.135
a. A heterogeneity factor is
used.
b. Logarithm base = 10.
18
LANJUTAN LAMPIRAN III
ANALISA PROBIT
TEH HITAM N-HEKSANA
Confidence Limits
Probability
95% Confidence Limits for
KOSENTRASI
95% Confidence Limits for
log(KOSENTRASI)b
Estimate
Lower
Bound
Upper
Bound Estimate
Lower
Bound
Upper
Bound
PROBITa 0.01 .003 .000 .214 -2.592 -16.618 -.669
0.02 .009 .000 .435 -2.066 -14.386 -.361
0.03 .019 .000 .684 -1.733 -12.972 -.165
0.04 .033 .000 .963 -1.482 -11.909 -.016
0.05 .053 .000 1.276 -1.278 -11.045 .106
0.06 .079 .000 1.622 -1.104 -10.311 .210
0.07 .112 .000 2.006 -.952 -9.667 .302
0.08 .153 .000 2.430 -.816 -9.092 .386
0.09 .203 .000 2.895 -.692 -8.569 .462
0.1 .265 .000 3.407 -.577 -8.088 .532
0.15 .785 .000 6.805 -.105 -6.106 .833
0.2 1.865 .000 12.187 .271 -4.544 1.086
0.25 3.916 .001 20.996 .593 -3.224 1.322
0.3 7.624 .009 36.580 .882 -2.067 1.563
0.35 14.134 .090 68.397 1.150 -1.044 1.835
0.4 25.391 .694 150.942 1.405 -.158 2.179
0.45 44.754 3.583 452.244 1.651 .554 2.655
0.5 78.176 11.795 2033.392 1.893 1.072 3.308
0.55 136.558 27.164 13069.637 2.135 1.434 4.116
19
0.6 240.692 50.861 107911.447 2.381 1.706 5.033
0.65 432.387 85.948 1082317.069 2.636 1.934 6.034
0.7 801.646 138.975 1.321E7 2.904 2.143 7.121
0.75 1560.686 222.899 2.059E8 3.193 2.348 8.314
0.8 3277.189 365.135 4.528E9 3.516 2.562 9.656
0.85 7781.234 632.733 1.704E11 3.891 2.801 11.232
0.9 23097.894 1235.026 1.675E13 4.364 3.092 13.224
0.91 30040.090 1447.807 5.085E13 4.478 3.161 13.706
0.92 39965.635 1719.211 1.701E14 4.602 3.235 14.231
0.93 54703.536 2074.796 6.422E14 4.738 3.317 14.808
0.94 77673.554 2556.978 2.835E15 4.890 3.408 15.453
0.95 1.159E5 3241.487 1.543E16 5.064 3.511 16.188
0.96 1.853E5 4277.701 1.132E17 5.268 3.631 17.054
0.97 3.302E5 6006.269 1.312E18 5.519 3.779 18.118
0.98 7.115E5 9409.381 3.419E19 5.852 3.974 19.534
0.99 2.386E6 19014.959 5.851E21 6.378 4.279 21.767
a. A heterogeneity factor is
used.
b. Logarithm base = 10.
20
LANJUTAN LAMPIRAN III
ANALISA PROBIT
TEH HITAM ETIL ASETAT
Confidence Limits
Probability
95% Confidence Limits for
KOSENTRASI
95% Confidence Limits for
log(KOSENTRASI)b
Estimate
Lower
Bound
Upper
Bound Estimate
Lower
Bound
Upper
Bound
PROBITa 0.01 .009 .000 .193 -2.033 -6.283 -.714
0.02 .023 .000 .352 -1.642 -5.445 -.453
0.03 .040 .000 .517 -1.394 -4.914 -.286
0.04 .062 .000 .691 -1.207 -4.515 -.161
0.05 .088 .000 .875 -1.055 -4.191 -.058
0.06 .119 .000 1.071 -.926 -3.916 .030
0.07 .154 .000 1.280 -.813 -3.675 .107
0.08 .194 .000 1.502 -.711 -3.459 .177
0.09 .240 .001 1.738 -.619 -3.263 .240
0.1 .292 .001 1.989 -.534 -3.083 .299
0.15 .657 .005 3.505 -.182 -2.341 .545
0.2 1.251 .018 5.561 .097 -1.756 .745
0.25 2.172 .055 8.369 .337 -1.260 .923
0.3 3.567 .151 12.263 .552 -.820 1.089
0.35 5.647 .379 17.810 .752 -.422 1.251
0.4 8.734 .882 26.027 .941 -.054 1.415
0.45 13.317 1.932 38.889 1.124 .286 1.590
0.5 20.169 3.985 60.534 1.305 .600 1.782
0.55 30.548 7.722 100.310 1.485 .888 2.001
0.6 46.578 14.017 180.800 1.668 1.147 2.257
0.65 72.033 23.943 360.394 1.858 1.379 2.557
0.7 114.045 39.051 803.656 2.057 1.592 2.905
21
0.75 187.247 62.183 2033.107 2.272 1.794 3.308
0.8 325.244 99.284 6008.921 2.512 1.997 3.779
0.85 619.037 164.434 22137.488 2.792 2.216 4.345
0.9 1391.238 299.174 118430.877 3.143 2.476 5.073
0.91 1691.780 344.340 178278.189 3.228 2.537 5.251
0.92 2092.292 400.645 278380.211 3.321 2.603 5.445
0.93 2642.941 472.593 455028.066 3.422 2.674 5.658
0.94 3430.901 567.496 788869.878 3.535 2.754 5.897
0.95 4620.096 698.085 1479944.048 3.665 2.844 6.170
0.96 6553.823 888.759 3105028.685 3.816 2.949 6.492
0.97 10073.196 1193.275 7738872.571 4.003 3.077 6.889
0.98 17836.756 1759.985 2.614E7 4.251 3.246 7.417
0.99 43896.391 3230.062 1.789E8 4.642 3.509 8.253
a. A heterogeneity factor is
used.
b. Logarithm base = 10.
22
LANJUTAN LAMPIRAN III
ANALISA PROBIT
SEDUHAN TEH HITAM 2 GRAM/100 ML
Confidence Limits
Probability
95% Confidence Limits for
KOSENTRASI
95% Confidence Limits for
log(KOSENTRASI)b
Estimate
Lower
Bound
Upper
Bound Estimate
Lower
Bound
Upper
Bound
PROBITa 0.01 .610 .023 2.561 -.215 -1.636 .408
0.02 1.029 .055 3.759 .012 -1.258 .575
0.03 1.433 .096 4.802 .156 -1.018 .681
0.04 1.839 .145 5.780 .265 -.839 .762
0.05 2.253 .203 6.726 .353 -.693 .828
0.06 2.677 .269 7.657 .428 -.570 .884
0.07 3.115 .345 8.584 .493 -.462 .934
0.08 3.567 .431 9.515 .552 -.365 .978
0.09 4.035 .528 10.453 .606 -.278 1.019
0.1 4.519 .635 11.404 .655 -.197 1.057
0.15 7.229 1.360 16.446 .859 .133 1.216
0.2 10.501 2.468 22.203 1.021 .392 1.346
0.25 14.465 4.076 28.995 1.160 .610 1.462
0.3 19.286 6.329 37.236 1.285 .801 1.571
0.35 25.176 9.403 47.519 1.401 .973 1.677
0.4 32.422 13.499 60.734 1.511 1.130 1.783
0.45 41.410 18.845 78.265 1.617 1.275 1.894
0.5 52.686 25.697 102.305 1.722 1.410 2.010
0.55 67.032 34.352 136.407 1.826 1.536 2.135
0.6 85.616 45.205 186.488 1.933 1.655 2.271
0.65 110.254 58.852 262.835 2.042 1.770 2.420
0.7 143.929 76.280 384.452 2.158 1.882 2.585
23
0.75 191.897 99.216 589.479 2.283 1.997 2.770
0.8 264.344 130.908 963.665 2.422 2.117 2.984
0.85 383.982 178.204 1734.229 2.584 2.251 3.239
0.9 614.216 258.781 3687.285 2.788 2.413 3.567
0.91 688.011 282.668 4432.192 2.838 2.451 3.647
0.92 778.262 310.927 5416.356 2.891 2.493 3.734
0.93 891.220 345.036 6757.117 2.950 2.538 3.830
0.94 1036.864 387.283 8656.914 3.016 2.588 3.937
0.95 1232.238 441.442 11493.425 3.091 2.645 4.060
0.96 1509.309 514.315 16050.587 3.179 2.711 4.205
0.97 1936.716 619.818 24229.347 3.287 2.792 4.384
0.98 2697.835 792.917 41961.504 3.431 2.899 4.623
0.99 4548.807 1165.351 100029.860 3.658 3.066 5.000
a. A heterogeneity factor is
used.
b. Logarithm base = 10.
24
LANJUTAN LAMPIRAN III
ANALISA PROBIT
SEDUHAN TEH HITAM 4 GRAM/100 ML
Confidence Limits
Probability
95% Confidence Limits for
KOSENTRASI
95% Confidence Limits for
log(KOSENTRASI)b
Estimate
Lower
Bound
Upper
Bound Estimate
Lower
Bound
Upper
Bound
PROBITa 0.01 .195 .011 .847 -.710 -1.961 -.072
0.02 .353 .027 1.334 -.452 -1.575 .125
0.03 .515 .047 1.783 -.289 -1.332 .251
0.04 .683 .071 2.218 -.165 -1.148 .346
0.05 .860 .100 2.652 -.065 -1.000 .424
0.06 1.047 .134 3.089 .020 -.873 .490
0.07 1.243 .173 3.533 .095 -.763 .548
0.08 1.451 .217 3.986 .162 -.664 .600
0.09 1.669 .266 4.449 .222 -.574 .648
0.1 1.898 .322 4.925 .278 -.492 .692
0.15 3.238 .703 7.537 .510 -.153 .877
0.2 4.950 1.299 10.641 .695 .114 1.027
0.25 7.124 2.184 14.408 .853 .339 1.159
0.3 9.879 3.456 19.059 .995 .539 1.280
0.35 13.376 5.241 24.919 1.126 .719 1.397
0.4 17.831 7.702 32.469 1.251 .887 1.511
0.45 23.549 11.042 42.455 1.372 1.043 1.628
0.5 30.964 15.519 56.065 1.491 1.191 1.749
0.55 40.714 21.462 75.244 1.610 1.332 1.876
0.6 53.770 29.312 103.278 1.731 1.467 2.014
0.65 71.681 39.712 145.953 1.855 1.599 2.164
0.7 97.047 53.687 214.062 1.987 1.730 2.331
25
0.75 134.579 73.024 329.415 2.129 1.863 2.518
0.8 193.686 101.145 541.366 2.287 2.005 2.733
0.85 296.077 145.496 981.696 2.471 2.163 2.992
0.9 505.017 226.110 2110.692 2.703 2.354 3.324
0.91 574.536 251.014 2544.415 2.759 2.400 3.406
0.92 660.946 280.992 3119.337 2.820 2.449 3.494
0.93 771.032 317.867 3905.421 2.887 2.502 3.592
0.94 915.790 364.501 5023.786 2.962 2.562 3.701
0.95 1114.343 425.706 6701.284 3.047 2.629 3.826
0.96 1403.281 510.320 9410.909 3.147 2.708 3.974
0.97 1863.102 636.875 14305.823 3.270 2.804 4.156
0.98 2715.601 853.375 25009.343 3.434 2.931 4.398
0.99 4917.745 1348.976 60519.037 3.692 3.130 4.782
a. A heterogeneity factor is
used.
b. Logarithm base = 10.
26
LANJUTAN LAMPIRAN III
ANALISA PROBIT
SEDUHAN TEH HITAM 6 GRAM/100 ML
Confidence Limits
Probability
95% Confidence Limits for
KOSENTRASI
95% Confidence Limits for
log(KOSENTRASI)b
Estimate
Lower
Bound
Upper
Bound Estimate
Lower
Bound
Upper
Bound
PROBITa 0.01 .104 .011 .389 -.985 -1.957 -.410
0.02 .194 .026 .643 -.713 -1.589 -.192
0.03 .288 .044 .885 -.540 -1.356 -.053
0.04 .389 .066 1.127 -.410 -1.181 .052
0.05 .496 .091 1.371 -.305 -1.039 .137
0.06 .610 .121 1.622 -.215 -.918 .210
0.07 .731 .154 1.880 -.136 -.812 .274
0.08 .860 .192 2.145 -.065 -.717 .331
0.09 .997 .234 2.420 -.001 -.632 .384
0.1 1.143 .280 2.705 .058 -.553 .432
0.15 2.007 .593 4.300 .303 -.227 .633
0.2 3.141 1.071 6.246 .497 .030 .796
0.25 4.611 1.770 8.644 .664 .248 .937
0.3 6.511 2.764 11.633 .814 .442 1.066
0.35 8.963 4.153 15.410 .952 .618 1.188
0.4 12.138 6.071 20.261 1.084 .783 1.307
0.45 16.277 8.692 26.623 1.212 .939 1.425
0.5 21.727 12.253 35.179 1.337 1.088 1.546
0.55 29.001 17.072 47.031 1.462 1.232 1.672
0.6 38.890 23.592 64.029 1.590 1.373 1.806
0.65 52.669 32.472 89.403 1.722 1.512 1.951
0.7 72.503 44.759 129.109 1.860 1.651 2.111
27
0.75 102.365 62.292 195.011 2.010 1.794 2.290
0.8 150.298 88.628 313.475 2.177 1.948 2.496
0.85 235.169 131.677 553.419 2.371 2.120 2.743
0.9 413.061 213.334 1149.312 2.616 2.329 3.060
0.91 473.261 239.255 1373.752 2.675 2.379 3.138
0.92 548.644 270.820 1668.595 2.739 2.433 3.222
0.93 645.462 310.140 2067.762 2.810 2.492 3.316
0.94 773.922 360.568 2629.428 2.889 2.557 3.420
0.95 951.918 427.802 3461.398 2.979 2.631 3.539
0.96 1214.012 522.465 4785.720 3.084 2.718 3.680
0.97 1637.095 667.196 7135.845 3.214 2.824 3.853
0.98 2436.059 921.908 12156.695 3.387 2.965 4.085
0.99 4557.731 1530.157 28234.318 3.659 3.185 4.451
a. A heterogeneity factor is
used.
b. Logarithm base = 10.
28
LANJUTAN LAMPIRAN III
ANALISA PROBIT
SEDUHAN TEH HITAM 8 GRAM/100 ML
Confidence Limits
Probability
95% Confidence Limits for
KOSENTRASI
95% Confidence Limits for
log(KOSENTRASI)a
Estimate
Lower
Bound
Upper
Bound Estimate
Lower
Bound
Upper
Bound
PROBIT 0.01 .039 .008 .118 -1.409 -2.109 -.928
0.02 .074 .017 .203 -1.130 -1.767 -.692
0.03 .111 .028 .287 -.954 -1.549 -.542
0.04 .151 .041 .372 -.821 -1.386 -.429
0.05 .194 .056 .460 -.713 -1.253 -.337
0.06 .240 .072 .551 -.620 -1.141 -.259
0.07 .289 .091 .646 -.540 -1.042 -.190
0.08 .341 .111 .744 -.468 -.953 -.128
0.09 .396 .134 .847 -.402 -.873 -.072
0.1 .456 .159 .955 -.341 -.799 -.020
0.15 .811 .321 1.567 -.091 -.494 .195
0.2 1.282 .559 2.329 .108 -.253 .367
0.25 1.900 .898 3.281 .279 -.047 .516
0.3 2.704 1.370 4.477 .432 .137 .651
0.35 3.750 2.021 5.989 .574 .305 .777
0.4 5.116 2.911 7.923 .709 .464 .899
0.45 6.908 4.128 10.430 .839 .616 1.018
0.5 9.283 5.790 13.742 .968 .763 1.138
0.55 12.475 8.070 18.221 1.096 .907 1.261
0.6 16.845 11.221 24.457 1.226 1.050 1.388
0.65 22.976 15.631 33.465 1.361 1.194 1.525
0.7 31.868 21.923 47.084 1.503 1.341 1.673
29
0.75 45.359 31.191 68.913 1.657 1.494 1.838
0.8 67.202 45.568 106.762 1.827 1.659 2.028
0.85 106.263 69.859 180.446 2.026 1.844 2.256
0.9 189.132 117.697 354.872 2.277 2.071 2.550
0.91 217.390 133.239 418.665 2.337 2.125 2.622
0.92 252.894 152.354 501.370 2.403 2.183 2.700
0.93 298.660 176.423 611.730 2.475 2.247 2.787
0.94 359.630 207.661 764.542 2.556 2.317 2.883
0.95 444.500 249.874 986.810 2.648 2.398 2.994
0.96 570.134 310.236 1333.195 2.756 2.492 3.125
0.97 774.247 404.267 1932.298 2.889 2.607 3.286
0.98 1162.921 573.791 3170.231 3.066 2.759 3.501
0.99 2208.030 993.446 6939.021 3.344 2.997 3.841
a. Logarithm base = 10.
30
LANJUTAN LAMPIRAN III
ANALISA PROBIT
SEDUHAN TEH HITAM 10 GRAM/100 ML
Confidence Limits
Probability
95% Confidence Limits for
KOSENTRASI
95% Confidence Limits for
log(KOSENTRASI)a
Estimate
Lower
Bound
Upper
Bound Estimate
Lower
Bound
Upper
Bound
PROBIT 0.01 .017 .003 .058 -1.780 -2.586 -1.238
0.02 .032 .006 .101 -1.493 -2.228 -.997
0.03 .049 .010 .143 -1.310 -2.001 -.843
0.04 .067 .015 .187 -1.173 -1.830 -.728
0.05 .087 .020 .232 -1.062 -1.692 -.634
0.06 .108 .027 .279 -.967 -1.574 -.554
0.07 .131 .034 .328 -.884 -1.471 -.483
0.08 .155 .042 .380 -.809 -1.378 -.420
0.09 .181 .051 .434 -.741 -1.294 -.363
0.1 .209 .061 .490 -.679 -1.217 -.310
0.15 .380 .127 .812 -.421 -.898 -.090
0.2 .609 .226 1.217 -.215 -.645 .085
0.25 .914 .372 1.726 -.039 -.429 .237
0.3 1.315 .580 2.367 .119 -.237 .374
0.35 1.844 .873 3.181 .266 -.059 .503
0.4 2.539 1.282 4.223 .405 .108 .626
0.45 3.462 1.854 5.574 .539 .268 .746
0.5 4.696 2.653 7.356 .672 .424 .867
0.55 6.370 3.778 9.762 .804 .577 .990
0.6 8.684 5.372 13.101 .939 .730 1.117
0.65 11.963 7.664 17.913 1.078 .884 1.253
0.7 16.765 11.022 25.183 1.224 1.042 1.401
31
0.75 24.131 16.092 36.875 1.383 1.207 1.567
0.8 36.201 24.124 57.323 1.559 1.382 1.758
0.85 58.080 37.939 97.723 1.764 1.579 1.990
0.9 105.282 65.583 195.516 2.022 1.817 2.291
0.91 121.549 74.643 231.815 2.085 1.873 2.365
0.92 142.080 85.826 279.199 2.153 1.934 2.446
0.93 168.680 99.960 342.910 2.227 2.000 2.535
0.94 204.316 118.382 431.883 2.310 2.073 2.635
0.95 254.237 143.390 562.566 2.405 2.157 2.750
0.96 328.681 179.341 768.575 2.517 2.254 2.886
0.97 450.707 235.699 1129.929 2.654 2.372 3.053
0.98 685.758 338.123 1890.498 2.836 2.529 3.277
0.99 1328.807 594.699 4272.325 3.123 2.774 3.631
a. Logarithm base = 10.
