Ade SetiawanA.1210190Tugas mata kuliah budidaya pakan alami

Teknik Isolasi mikroalga 1. Mikro manipulasi peralatan : mikroskop terbalik atau mikroskop stereo dengan pembesaran hingga 200 x, walaupun 40-100 x pun cukup dalam kebanyakan kasus. Fase kontras atau optik lapangan gelap adalah keuntungan. tabung kapiler atau tabung hematokrit dengan diameter 1 mm - 100 mm. Bunsen dengan api yang kecil. Tabung silikon sesuai dengan ujung tabung kapiler. Panjang sekitar 300-400 mm, Hot plate untuk mengeringkan slide Kaca hingga bersih Tempat Agar (1,5% Bacto-Agar, misalnya Difco Cat. No. 0140-01) disusun dalam cawan petri piring (sekali pakai, 90 mm diameter.) Kultur jaringan. Pipet tetes (steril),karet atau silikon dot. Media steril, biasanya pada konsentrasi hara encer; misalnya F20, F50 Kultur jaringan steril cawan multi-well atau cawan petri steril (misalnya diameter 33 atau 55 mm)metode: Dengan api baik dari kompor panas Bunsen dan menarik keluar (memegang di kedua ujungnya) tabung kapiler untuk membentuk dua micropipettes. Sempit end harus sekitar dua kali diameter sel yang akan micromanipulated. Dipanaskan suling air ke titik mendidih di atas hot plate. Ini digunakan untuk mensterilkan mikropipet antara setiap transfer. tetes Tempat media steril ke 1,5% agar piring dengan pipet pasteur steril. Atau menempatkan tiga tetes pada slide kaca. Dengan silikon tabung melekat mikropipet menyedot dan meniup dengan mulut sedikit air suling panas. Ini mensterilkan mikropipet tersebut. Cari sel alga menjadi terisolasi dalam setetes sampel pengayaan. Ketika mengamati sel, menyedot ke dalam mikropipet tersebut. Pindahkan sel untuk setetes media steril di piring agar-agar atau slide kaca. Sterilkan mikropipet tersebut. Ulangi proses ini untuk "mencuci" sel. Semakin sering sel dicuci kurang mungkin adalah kontaminasi bakteri. Namun, risiko kerusakan sel meningkat dengan jumlah waktu sel ditangani. Jumlah optimum dari mencuci akan tergantung pada jenis ganggang. Pindahkan sel untuk mencairkan menengah dalam piring kultur jaringan, piring atau budaya petri tabung. Tempat budaya kapal di bawah cahaya rendah pada suhu konstan yang sesuai. Lihat mikroskopis untuk pertumbuhan atau menunggu sampai pertumbuhan makroskopik dapat dideteksi (3-4 minggu setelah transfer). Sebuah klonal budaya uni-alga harus hasil dari metode ini.

Untuk sel non-motil besar atau ketika waktu adalah pada premi metode alternatif adalah untuk mengisolasi ke cawan petri bukan pada slide. Sel Beberapa dari populasi dengan cepat ditransfer ke pelat bilas pertama dan kemudian dari sana semakin sedikit ke dalam piring berikutnya. Karena relatif kurang perawatan diambil untuk menghindari perpindahan sel non-target masing-masing bertindak cawan petri sebagai budaya pengayaan dengan mudah-mudahan budaya relatif bersih di piring akhir (atau bahkan mungkin klonal). "Bersih" piring kemudian dapat digunakan sebagai bekal untuk membuat isolasi klonal ketika waktu memungkinkan.

2. Serial pengenceran peralatan:

tabung Budaya, (steril) sekrup-capped atau steristoppered (lihat Catatan di bawah). rak Test-tabung, jaring terbuka. Media - biasanya encer mis f10, F20. dispenser otomatis (steril) atau 10 ml pipet kaca steril. pipet kaca 1 ml atau pasteur (steril), karet atau silikon dot. Bunsen burner atau nyala api kecil.

metode: Menggunakan teknik aseptik, mengeluarkan 9 ml media ke masing-masing sepuluh tabung reaksi dengan dispenser otomatis steril atau steril 10 ml pipet. Label tabung 10-1 untuk 10-10 menunjukkan faktor pengenceran. aseptik tambahkan 1 ml sampel pengayaan ke tabung pertama (01/10) dan campuran lembut. Ambil 1 ml pengenceran ini dan menambah tabung berikutnya (10-2), campur dengan lembut. Ulangi prosedur ini untuk tabung yang tersisa (1O-3 sampai 10-10). Inkubasi tabung-tabung uji dalam kondisi suhu dan cahaya dikendalikan: (a) Suhu dan penyinaran - sebagai dekat dengan lingkungan alam mungkin. (b) Cahaya intensitas - sedikit lebih rendah dari lingkungan alam. Periksa budaya mikroskopik setelah 2-4 minggu dengan menarik sampel secara aseptik kecil dari masing-masing tabung pengenceran. Budaya unialgal dapat tumbuh di salah satu tabung pengenceran yang lebih tinggi misalnya 10-6 untuk 10-10. Jika tabung berisi dua atau tiga spesies yang berbeda maka mikromanipulasi dapat digunakan untuk memperoleh budaya unialgal.

Prosedur berikut diperlukan untuk menghilangkan bahan beracun dari tabung budaya dan topi sekrup. Isi setengah tabung kultur dengan air suling. colokan dengan steristoppers atau penyerap kapas. Autoklaf. Ambil sekrup-topi dari tabung budaya dan tempat sisi terbuka di sebuah cawan petri kaca. Tuang air suling sekitar wadah, ganti atas cawan petri dan autoclave. Dalam kondisi aseptik menghapus sumbat Steri atau colokan kapas dan mencurahkan air suling. Tabung api dan mengganti steristopper atau sekrupwadah.

3. Streak plating

Ini adalah metode yang cocok untuk spesies kecil (