Upload
luisepacheco
View
1.818
Download
2
Tags:
Embed Size (px)
Citation preview
Universidad de CaraboboFacultad de Odontología
Departamento de Ciencias MorfofuncionalesHistología General y Bucodentaria
TÉCNICAS HISTOLÓGICAS Y
MICROSCOPIO2013
PROFESOR: LUIS ENRIQUE PACHECO
www.histologiadidactica.blogspot.com
@profesorpacheco
Profesor Luis Pacheco
TEXTOS RECOMENDADOS
INDICADOR DE LOGRO UNIDAD I
DESCRIBE LAS CARACTERÍSTICAS MICROSCÓPICAS,
ULTRAESTRUCTURALES Y LAS TÉCNICAS PARA EL PROCESAMIENTO,
OBSERVACIÓN Y DIAGNÓSTICO HISTOLÓGICO DE LAS CÉLULAS Y
TEJIDOS BÁSICOS.
TÉCNICAS HISTOLÓGICAS
MÉTODOS 1-Examen inmediato o in vivo:
a) Observación de células en el organismo vivo.
b) Observación de células que se
mantienen vivas luego de ser obtenidas del organismo
2- Examen mediato o post-morten:
Requiere de la muerte celular y supone seguir una serie de pasos, la Técnica histológica
TÉCNICAS HISTOLÓGICAS SON LOS DIFERENTES PROCEDIMIENTOS,
QUE SE USAN PARA MANTENER, EN LO
POSIBLE, EL ASPECTO DE LAS
ESTRUCTURAS HISTOLÓGICAS DEL
ORGANISMO VIVO. TRANSFORMÁNDOLAS
EN DELGADOS CORTES COLOREADOS
QUE PUEDAN POSTERIORMENTE SER
OBSERVADOS AL MICROSCOPIO
PROCEDIMIENTOS:
FIJACIÓN DESHIDRATACIÓN ACLARAMIENTO INFILTRACIÓN E INCLUSIÓN SECCIÓN O CORTE COLORACIÓN MONTAJE
FIJACIÓN En este Procedimiento se introduce el tejido en sustancias
que retardan las alteraciones y conservan su configuración normal.
FORMALDEHIDO AL 10%.
DESHIDRATACIÓN
CONSISTE EN INTRODUCIR EL TEJIDO FIJADO EN FRASCOS DE
ALCOHOL ABSOLUTO A CONCENTRACIONES ASCENDENTES
Y TIEMPOS DETERMINADOS.
70% 80% 95% 100% 100% 100%
30´ 45´ 45´ 60´ 60´ 60´ 5Horas
ACLARAMIENTO O DIAFANIZACIÓN
ESTE PASO SUSTITUYE EL ALCOHOL POR EL XILOL (VUELVE
TRANSPARENTE AL TEJIDO), QUE ES UN LÍQUIDO MISCIBLE
CON LA PARAFINA
XILOL XILOL
45´ 45´
ES LA FORMACIÓN DEL BLOQUE DE PARAFINA Y TEJIDO QUE RECIBE EL NOMBRE DE TACO
INFILTRACIÓN E INCLUSIÓN
SECCIÓN O CORTE Consiste en cortar el tejido en secciones lo
suficientemente delgadas para permitir el paso de la luz, el corte se realiza con un micrótomo.
SECCIÓN O CORTE
Para eliminar PLIEGUES O ARRUGAS del tejido…
EL CORTE ES LLEVADO A UN RECIPIENTE QUE ES EL
BAÑO DE FLOTACIÓN (40º C)
MONTAJE Y TINCIÓN
Los cortes se colocan sobre un portaobjetos y luego se tiñen mediante coloraciones hidrosolubles
Para ADHERIR el corte a la lámina…
SE COLOCA EN UNA LAMINA PORTA OBJETO Y SE
LLEVA A LA ESTUFA DURANTE 15 a 20´ A 80ºC
MONTAJE Y TINCIÓNExtraer parafina Hidratar Colorear
2 tubos
15´
100% 100% 100% 70% 70%
70% 100% 100%
5´ 5´ 5´ 5´
5 Veces in/out
UNA VEZ COLOREADA LA LAMINA, SE USA MARTEX
(RESINA ACRILÍCA DILUIDA EN XILOL)
SE COLOCA UN CUBREOBJETO Y EL TEJIDO QUEDA LISTO PARA OBSERVARLO AL
MICROSCOPIO
MARTEX
COLORACION CON HEMATOXILINA Y EOSINA
La hematoxilina es un colorante básico que tiñe de color azuloso a los componentes ácidos de la célula.
La eosina es un colorante acido que tiñe de color rosado a los componentes básicos de la célula.
OTRAS TÉCNICAS DE TINCIÓN
Tricrómico de Masson Orceína Resorcina Colorante de Wright Tinciones Argenticas Hematoxilina Férrica Acido Periódico de Shiff Colorante Giemsa
COLORACIONES:
Tricrómico de Masson OrceínaResorcina
Hematoxilina férrica Hematoxilina eosina
COLORACIONES:
Sales de Plata
TricrómicoHematoxilina Eosina
COLORACIONES:
Ovario De Gata Hematoxilina -Eosina
Ganglio Raquídeo Plata
Hígado Carmín de Best
COLORACIONES:
Raíz de cebolla
Hematoxilina Ferrica
Riñón
Hematoxilina-Eosina
MICROSCOPIO
MICROSCOPIO
Un microscopio es un dispositivo encargado de hacer visibles objetos muy pequeños.
Es el instrumento mas importante en la histología , debido al tamaño de las estructuras analizadas.
Se clasifica según el tipo de fuente luminosa que utilice.
MICRO- (PEQUEÑO) / SCOPIO (OBSERVAR): INSTRUMENTO QUE PERMITE OBSERVAR OBJETOS QUE SON DEMASIADO PEQUEÑOS PARA SER VISTOS A SIMPLE VISTA.
MICROSCOPIO
Óptico• Óptico simple• Óptico compuesto
Electrónico• Electrónico de transmisión • Electrónico de barrido
Ultramicroscopio.Microscopio de contraste de fase. Microscopio de interferencia.Microscopio confocal.Microscopio de polarización.Microscopio de fuerza atómica.
MICROSCOPIO ÓPTICO Consiste en una
fuente luminosa, un condensador que enfoca los rayos de luz sobre la muestra, una platina en la cual se coloca la muestra, un objetivo y un ocular .
COMPONENTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO
Sistema óptico
Sistema de iluminación
Sistema mecánico
SISTEMA ÓPTICO Y DE ILUMINACIÓN
Ocular
Objetivos
Fuente de luzCondensador
Es cilindro hueco metálico, provisto de una lente o un sistema de lentes convergentes, cuya finalidad es aumentar la imagen real e invertida enviada por el objetivo.
OCULAR
OBJETIVO
Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de ésta 4X, 10X,40X,100X.
CONDENSADOR Y DIAFRAGMAEl condensador concentra el haz de luz sobre la preparación y el diafragma limita el haz de rayos que atraviesa el sistema de lentes eliminando los rayos mas desviados.
Base
ColumnaPlatina
Cabezal
Brazo
SISTEMA MECÁNICO
Sistema Mecánico
Revolver
Platina
Tornillo Macrométrico
Tornillo Micrométrico
Sistema Mecánico
Tornillo Macrométrico
Tornillo Micrométrico
MICROSCOPIO ELECTRÓNICO
MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE TRANSMISIÓN
Usa un Haz de electrones. para producir la imagen, esto permite obtener una mayor amplificación y resolución. La imagen puede plasmarse en una película y producir micrografías en blanco y negro.
PODER DE RESOLUCIÓN
Capacidad de un lente o sistema óptico del microscopio de separar claramente dos puntos que se encuentran muy próximos. la resolución esta limitada por la longitud de onda de la luz ,la apertura numérica del objetivo y el grosor del espécimen observado.
Microscopio Óptico Microscopio electrónico
Utiliza un haz de luz. Utiliza un haz de electrones.
Utiliza lentes de cristal. Utiliza lentes electromagnéticas.
La imagen se observa de forma directa. La imagen se registra en una placa fotográfica
Proporciona aumentos de hasta 1000 X Proporciona aumentos de hasta 200000 X
Posee un poder de resolución de aproximadamente 0.2 micras
Posee una resolución de aproximadamente 0.2 nanómetros
MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE BARRIDO
Proporciona una imagen tridimensional del espécimen.
El haz de electrones no atraviesa el objeto, por lo que no es necesario utilizar cortes ultra finos.
La imagen Obtenida es observada en una Pantalla de TV
Diferencia entre las imágenes observadas
M.O M.E.T M.E.B
DIFERENCIAS ENTRE M.O, M.E.T Y M.E.B
MICROSCOPIO ÓPTICO
•LAS LENTES ÓPTICAS ENFOCAN UN HAZ DE FOTONES
•BUENA AMPLIFICACIÓN Y RESOLUCIÓN
•PARA OBSERVAR LOS TEJIDOS SE USAN COLORANTES HIDROSOLUBLES
•REQUIERE DE CORTES DELGADOS
•LA IMAGEN QUE SE OBSERVA ES BIDIMENSIONAL
•LA IMAGEN SE PROYECTA EN EL OJO A TRAVÉS DE LOS LENTES Y SE VISUALIZA SEGÚN LOS COLORANTES UTILIZADOS
MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE TRANSMISIÓN
•LOS ELECTROMAGNETOS ENFOCAN UN RAYO DE ELECTRONES
•MAYOR AMPLIFICACIÓN Y RESOLUCIÓN QUE EL M.O
•PARA OBSERVAR LOS TEJIDOS SE USAN TÉCNICAS DE PRECIPITADOS DE METALES PESADOS
•REQUIERE DE CORTES EXTREMADAMENTE DELGADOS
•LA IMAGEN QUE SE OBSERVA ES BIDIMENSIONAL
•LA IMAGEN SE PROYECTA EN UNA PANTALLA Y POR MEDIO DE UNA VENTANA DE OBSERVACIÓN SE VE LA IMAGEN EN BLANCO Y NEGRO
MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE BARRIDO
•LOS ELECTROMAGNETOS ENFOCAN UN RAYO DE ELECTRONES
•MAYOR AMPLIFICACIÓN Y RESOLUCIÓN QUE EL M.O PERO MENOR QUE EL M.E.T
• SE DEPOSITA EN LA SUPERFICIE DEL ESPÉCIMEN A OBSERVAR UNA CAPA DELGADA DE UN METAL PESADO
•NO REQUIERE DE CORTES DELGADOS
•LA IMAGEN QUE SE OBSERVA ES TRIDIMENSIONAL
• LA IMAGEN SE REPRESENTA FOTOGRAFIÁNDOLA O DIGITALIZÁNDOLA EN UNA COMPUTADORA Y SE OBSERVA A TRAVÉS DE UNA PANTALLA DE TV.
Microscopio electrónico
Macroscópico Microscopio óptico
CONCLUSIÓN Conocer la estructura , organización y
funcionamiento de células, tejidos, órganos, nos permitirá comprender en un fúturo, el origen de los cuadros patológicos de nuestros pacientes, los que se iniciaran con alteraciones a nivel celular.