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J.Maisonnave Area de Inmunología - F.Veterinaria 1
TECNICAS INMUNODIAGNOSTICAS
�se basan en Interacción Ag-Ac.
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PRUEBAS INMUNIDAGNOSTICAS
AGLUTINACIÓN: Ag.particulado-Ac.1) Rosa bengala-brucella (Ag.particulado)
2) LATEX (Lo hacemos particulado)QH
3) Hemaglutinación/Inhibición hemaglutinación (eritrocito(=1)/unido a eritrocito(=2)
PRECIPITACION(Ag.soluble)1) AGID 2) Inmunodifusión Radial 3) Inmunoelectroforesis
INMUNOMARCADOS1) Fluoresceina (IFD/IFI)
2) Enzimas (ELISA/DOT/WESTERN)/INMUNHISTOQUIMICA
3) Radio actividad (RIA)
SERONEUTRALIZACIONIn vitro(cc)/In vivo(SN)
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PRUEBAS INMUNO-DIAGNÓSTICAS
� UNIÓN PRIMARIA
� UNIÓN SECUNDARIA
ACs-MARCADOS
FERRITINA, ORO COLOIDAL
ENZIMATICASFLUORESCENCIA
PRECIPITACIÓN AGLUTINACIÓN NEUTRALIZACIÓN
FIJACIÓN de COMPLEMENTO
(luego de unión Ag-Ac hay):
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PRUEBAS INMUNIDAGNOSTICAS
1. AGID (IDGA)
2. Inmunodifusión Radial (Ac o Ag disuelto en Agar)
3. Inmunoelectroforesis
PRECIPITACION (Ag.soluble)
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Tanto para las técnicas de PRECIPITACION como de AGLUTINACION Ags y Acs deben estar en cantidades equilibradas
Exceso AgsExceso Acs
Prozona
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Precipitación (principio)
Los anticuerpos son bivalentes (unen dos epitopos a la vez), los antígenos complejos son multivalentes (poseen muchos epitopos).
Cuando se forman grandes complejos estos se hacen insolubles y precipitan.
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IDGA (AGID)
� Los Ag y Ac colocados en una placa de gel de agar
� difunden radialmente
� en la zona de equilibrio se produce una banda de precipitación.
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PRECIPITACION(Ag.soluble)
Inmuno Difusión en Gel Agar (AGID)
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IDGA
Zona de equilibrio (banda de
precipitación)
AcAg
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IDGA
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Inmunodifusión radial
1 mg.
2 mg.5 mg.
10 mg.
50 mg.
muestra
El área de este anillo tendrá relación directa con la [Ag] o [Ac].
1. Se incorpora al agar Ac 2. Una vez solidificado se perforan hoyos
3. se coloca Ag 4. Se colocan estandares de conc. Ag conocida
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PRECIPITACION(Ag.soluble)
INMONOELECTROFORESIS
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AGLUTINACIÓN
Reacción producida por la unión de los Accon un Ag particulado o insoluble
�Aglutinación (Ag.particulado) Rosa bengala-brucella
� HemaglutinaciónAg parte del eritrocito (grupos sanguineos)
algunos virus tiene epitopes hemoaglutinantes� Inhibición hemaglutinación =
Acs. inhiben los epitopes hemoaglutinantes o del eritrocitoy hematies no aglutinan
� LATEX (Lo hacemos particulado) QH
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Tanto para las técnicas de PRECIPITACION como de AGLUTINACION Ags y Acs deben estar en cantidades equilibradas
Exceso AgsExceso Acs
Prozona
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Aglutinación pasiva (Brucella)
Brucella
+ colorante
Suero problema Aglutinación
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Rosa bengala-brucella (Ag.particulado)
AgSuero
Control Neg
Control Pos
Ag
Mezclar
Brucella + colorante rosado
Muestra con Ac anti-brucella Muestra SIN
Ac anti-brucella
Aglutinación pasiva
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HEMO-AGLUTINACIÓNEritrocito es el Ag.particulado
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Hemoaglutinación
El Ag soluble se puede unir químicamente a eritrocitos y (haciendo un Ag. Soluble particulado)
Suero problema
Eritrocitos con Ag pegado Hemoaglutinación
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Hemoaglutinación viralAlgunos virus son capaces de aglutinar eritrocitos de mamíferos o aves, y esto puede utilizarse para caracterizar un virus desconocido, o medir [Ac] en suero.
Ejemplos : Orthomyxovirus
Paramyxovirus
Parvovirus
Coronavirus
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Hemoaglutinación y su Inhibición
Eritrocitos
Inhibición deHemoaglutinación (IHA)
Suero problema
Virus Hemoaglutinante
Hemoaglutinación (HA)
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Hemoaglutinación
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LATEX = Esferas de poliestirenoel Ag de QH (que es soluble) lo hacemos particulado,
Uniendo el Ag a las esferas de Latex
Ag
SueroMezclar
Control Neg
Control Pos
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PRUEBAS INMUNO-MARCADAS
� FLUORESCEINA InmunoFluorescencia
ELISA
RIA
� Enzimas
� Isotopos radioactivos
DOT
WESTERN-BLOT
IHQ = InmunoHistoQuimica
(Inmunoenzimaticas)
(Acs marcados)
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PRUEBAS INMUNO-MARCADAS
�Fluoresceina
InmunoFluorescencia Directa (IFD)
Ag + Acs (específico)-FICT
IFI = Ag + Acs (específico) + anti-Ig-FICT
Conjugado fluorescente
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INMUNOENZIMATICAInmunoFluorescencia Directa (IFD)
Fluoresceina
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Inmunofluorescencia
Negativo Positivo
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Inmunofluorescencia
Ventajas
� Permite identificar Agespecíficos de patógenos en tejidos, cultivos de células y secreciones (IFD o IFI).
� Permite identificar Acespecíficos en suero (IFI).
Desventajas
� Se debe utilizar microscopio UV.
� Personal capacitado.
� Infraestructura necesaria.
� Fundamentalmente cualitativa