T-2 i HT-2 toksini u ţitaricama i proizvodima na bazi ... · PDF fileTOKSIĈNI EFEKTI U LJUDI I ŢIVOTINJA Krvožilni sustav Smanjenje elastičnosti žila, unutarnja krvarenja Aflatoksini

izv. prof. dr. sc. Jelka PleadinLaboratorij za analitičku kemiju

Hrvatski veterinarski institut

T-2 i HT-2 toksini u ţitaricama i proizvodima na bazi ţitarica proizvedenim u Hrvatskoj

XI Konferencija o sigurnosti i kvaliteti hrane, 29. – 31.05. 2017., Opatija

M I K O T O K S I N I

grĉ. rijeĉ „myces“ tj. gljiva + lat. rijeĉ „toxicum“ tj. otrov

sekundarni toksični metaboliti plijesni

ne postoji jedinstvena sistematizacija

Penicillium, Aspergillus, Fusarium

vrste toksikotvornih plijesni vezane uz geografsko područje:

• Aspergillus spp. - tropsko i suptropsko područje

• Penicillium i Fusarium spp. - umjereno klimatsko područje


Pojavnost mikotoksina u svijetu



Kontaminacija

ţitarica na polju i

tijekom skladištenja

Kontaminacija

hrane ţivotinjskog

podrijetla

IZRAVAN I

NEIZRAVAN UNOS

U ORGANIZAM

POTROŠAĈA

INTOKSIKACIJA

U LJUDI


TOKSIĈNI UĈINCI MIKOTOKSINA DOKAZANI KOD

BROJNIH ŢIVOTINJSKIH VRSTA

1. genetski

2. fiziološki

3. okolišni

citotoksiĉno

hepatotoksiĉno

genotoksiĉno

teratogeno

karcinogeno

mutageno

imunosupresijsko

Mikotoksini

ĈIMBENICI

UTJECAJA


TOKSIĈNI EFEKTI U LJUDI I ŢIVOTINJA

Krvožilni sustavSmanjenje elastičnosti žila, unutarnja krvarenja

Aflatoksini

Probavni sustavProljev, povradanje, oštedenje jetre, anoreksija

Aflatoksini, T-2 toksin, DON

Dišni sustavPoteškode s disanjem, krvarenja iz pluda

Trihoteceni

Živčani sustavDrhtavica, nekoordinirani pokreti, depresija

Tremorgeni trihoteceni

KožaOsip, osjet vrudine, fotosenzitivnost

Trihoteceni

Mokradni sustav Oštedenje bubrega Okratoksin A, citrinin

Reproduktivni sustav

Sterilnost, promjene u reproduktivnim ciklusima

T-2 toksin, zearalenon

Imunosustav Promjene ili potpuno uništenjeAflatoksini, T-2 toksin, okratoksin A

TEKUĆINSKA KROMATOGRAFIJA (HPLC-FLD)

KOMBINACIJA SA MASENOM

SPEKTROMETRIJOM (LC-MS/MS)

ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT

ASSAY (ELISA)

TANKOSLOJNA KROMATOGRAFIJA (TLC)

A N A L I T I Ĉ K E M E T O D E

SCREENING METODE

POTVRDNE METODE


F U Z A R I J S K I M I K O T O K S I N I

Najznaĉajniji u ţitaricama i

proizvodima na bazi ţitarica:

• zearalenon - kukuruz, pšenica

• deoksinivalenol - pšenica,

kukuruz, jeĉam, zob i raţ

• fumonizini - kukuruz

• T-2/HT-2 toksin - zob, pšenica,

jeĉam Fusarium verticillioides

sintetiziraju ih plijesni iz roda Fusarium

optimalna temperatura rasta između 18°C i 30°C

aktivitet vode (aw) > 0,88 → rast plijesni;

> 0,91 → proizvodnja mikotoksina

konzumacija/ hranidba može rezultirati

ugrožavanjem zdravlja ljudi/ životinja (IARC, 1993)


T-2 i HT-2 toksini

• produktivnost u širokom temperaturnom rasponu

(0-32 °C), max pri <15 °C

• HT-2 toksin - glavni metabolit T-2 toksina

• kontaminacija ţitarica i krmiva (zob, jeĉam, pšenica, raţ,

kukuruz), proizvoda na bazi ţitarica i krmnih smjesa


• trihoteceni tipa A

• T-2 toksin prvi put

izoliran iz plijesni

Fusarium tricinctum

• najveći producent

Fusarium langsethiae,

Fusarium poae i

Fusarium

sporotrichioides

najtoksiĉniji predstavnici trihotecenskih

mikotoksina tipa A i općenito fuzarijskih mikotoksina

citotoksiĉno i imunosupresivno djelovanje

mogu uzrokovati akutnu intoksikaciju te kroniĉne

bolesti u ljudi i ţivotinja

istraţivanja upućuju na moguće sinergistiĉke uĉinke

T-2 i HT-2 toksina s drugih mikotoksinima


nehlapljivi i termostabilni te ih je teško suzbiti u

proizvodnji hrane

topljivi u razliĉitim organskim otapalima; nisu topljivi

u vodi i petroleteru

inaktiviraju se pri 200 - 210 °C tijekom 30 - 40 minuta

Toksiĉni uĉinci

Svojstva

Pojavnost T-2 i HT-2 u ţitaricama i proizvodima od

ţitarica ovisna o brojnim ĉimbenicima:

klimatski uvjeti - godina i podruĉje uzgoja ţitarica

(godišnje variranje ovisno o temperaturama i

padalinama)

vrsta i sorta ţitarica - općenito veća kontaminacija

ţitarica malog zrna (najveća zobi)

vrijeme (datum) ţetve - proljetne i jesenske kulture

(koncentracije veće u proljetnoj ţetvi)

uvjeti uzgoja - uporaba fungicida (organski i

konvencionalni uzgoj)

uvjeti prerade - pranje, prosijavanje, sortiranje, ljuštenje, mljevenje, kuhanje, peĉenje, ekstruzija...


ZAKONODAVSTVO O

T-2 i HT-2 TOKSINIMA


Najveće dopuštene

koliĉine (NDK)

mikotoksina u hrani

Uredba Komisije

1881/2006

Orijentacijske vrijednosti

mikotoksina u hrani za

ţivotinje

Preporuka Komisije

2006/576/EZ

INDIKATIVNE RAZINE T-2 i HT-2 toksina u ţitaricama i proizvodima na bazi ţitarica namijenjenih za

uporabu kao hrana i hrana za ţivotinje pri kojima je potrebno poduzimanje mjera

Preporuka Komisije 2013/165/EU

Preporuka Komisije 2013/165/EU


Podaci o koliĉinama T-2 i HT-2 u razliĉitim

vrstama hrane nedostatni su za definiranje

NDK

Europska komisija preporuĉila drţavama

ĉlanicama prikupljanje pouzdanih podataka

o variranju godišnjih razina s ciljem

uspostave NDK za razliĉite vrste hrane i

hrane za ţivotinje

PROVEDBA ISTRAŢIVANJA U HRVATSKOJ


NEPROCESIRANE

ŢITARICE

(n = 201)

PROIZVODI OD

ŢITARICA

(n = 58)

kukuruz; pšenica;

zob; jeĉam;

kukuruz. pahuljice;

tjestenina;

pšeniĉno brašno;

zobene pahuljice;

jeĉmena kaša

KRMIVA

(n = 191)

KRMNE SMJESE

(n = 91)


kukuruz; pšenica;

zob; jeĉam; soja;

krmne smjese za

svinje, telad i perad

ISTRAŢIVANJE POJAVNOSTI T-2/HT-2 TOKSINA (suma T-2 i HT-2)

ELISA metoda za odreĊivanje

T-2/HT-2

kemijski analizator ChemWell

Awareness Technologies 2910

mikrotitracijska ploĉa sa jaţicama

obloţenim antitijelima

standardne otopine analita u vodi

razliĉitih koncentracija

konjugat (peroxidase conjugated)

antitijelo koncentrat

substrat (urea peroksid)

kromogen (tetrametil benzidin)

stop reagens (1M sulfatna kiselina)

pufer za razrjeĊivanje

Komercijalni kitovi sadrţe materijal

za 96 odreĊivanja -

R-Biopharm, Darmstadt, Njemaĉka:

KVANTITATIVNA

METODA



ŽitariceIndikat.razine

(µg/kg)

Pozitivno (%)

Mean(µg/kg)

SD (µg/kg)

Min (µg/kg)

Max (µg/kg)

Kukuruz(n = 68)

200 52,3 63,1 36,7 19,1 142,0

Pšenica(n = 61)

100 31,7 34,3 11,2 20,5 56,2

Zob(n = 49)

1000 68,8 102,2 73,6 11,6 304,1

Ječam(n = 23)

200 30,4 51,7 18,6 32,2 82,5

REZULTATI - ŢITARICE


ProizvodiIndik. razine

(µg/kg)Pozitivno

(%)Mean

(µg/kg)SD

(µg/kg)Min

(µg/kg)Max

(µg/kg)

Kukuruznepahuljice(n = 16)

75 25,0 23,6 9,23 15,1 36,4

Tjestenina(n = 11)

25 ND ND ND ND ND

Pšeničnobrašno(n = 9)

50 ND ND ND ND ND

Zobenepahuljice(n = 14)

200 42,9 52,1 20,1 34,5 89,4

Ječmenakaša(n = 8)

50 ND ND ND ND ND

REZULTATI – PROIZVODI OD ŢITARICA


Z A K LJ U Ĉ C I:

utvrĊene koliĉine T-2/HT-2 toksina upućuju na

visoku varijabilnost u pojavnosti ovih mikotoksina

u ovisnosti o klimatskim uvjetima

općenito najveća razina kontaminacije odreĊena

je u zobi i proizvodima na bazi zobi

potrebno je istraţiti odnos zajedniĉke pojavnosti

T-2 i njegovog najtoksiĉnijeg metabolita HT-2

kako bi se sprijeĉila kontaminacija ţitarica s T-

2/HT-2 potrebno je osim adekvatnih agrotehniĉkih

mjera provoditi i pravilno skladištenje te

suzbijanje rasta plijesni


s obzirom na moguće štetno djelovanje i sinergistiĉke uĉinke u ljudi i ţivotinja nuţna je provedba sustavnog nadzora odnosno kontinuirana samokontrola SPH i provedba programa drţavnih monitoringa

potrebno je praćenje znaĉajnih ĉimbenika utjecaja, primarno vremenskih uvjeta, na produkciju ovih mikotoksina odnosno na njihove godišnjih razine u ţitaricama

potrebna je provedba istraţivanja o uĉinkovitosti metoda redukcije primjenom razliĉitih postupaka prerade hrane, npr. kuhanja, peĉenja, zraĉenja...

nuţno je ĉim prije definirati NDK za hranu i hranu za ţivotinje


Z A K LJ U Ĉ C I:

Projekt u suradnji s Hrvatskom

agencijom za hranu

T-2 i HT-2 toksini u ţitaricama

uzgojenim u Republici Hrvatskoj


Primjena validirane LC-MS/MS tehnike

T-2 i HT-2 toksin

pojedinaĉne

koncentracije

suma

omjer

HPLC - 1260 Infinity, MS/MS - 6410 QQQ Agilent

Technologies, Santa Clara SAD


Provedba projekta:

uzorkovanje 100 uzoraka – kukuruz, jeĉam, zob,

pšenica, raţ i soja; rod 2017. godine

evidencija podataka o uzorcima (hibrid, sorta)

meterološki podaci o temperaturama i padalinama

(DHMZ)

evidencija o uvjetima pohrane uzoraka na OPG-ima

(temperatura i vlaţnost) te ostalih ĉimbenika

Cilj projekta:

ispitivanje pojavnosti T-2 i HT-2 i njihovih omjera u

skladu s preporukom Europske Komisije

izrada znanstvenog mišljenja i procjena rizika za

potrošaĉe

podaci za definiranje NDK u hrani i hrani za ţivotinje


Hvala na pažnji!

[email protected]


Documents

T-2 i HT-2 toksini u ţitaricama i proizvodima na bazi ... · PDF fileTOKSIĈNI EFEKTI U LJUDI I ŢIVOTINJA Krvožilni sustav Smanjenje elastičnosti žila, unutarnja krvarenja Aflatoksini