STUDY ON THE INFLUENCE OF ECHINACEA EXTRACT UPON THE ... · Soluţia folosită a fost „Tinctură de Echinacea” de la Plantextrakt. Soluţia conţinea alcool 62%. Pentru studiu,

Annals of West University of Timişoara, ser. Biology, 2012, vol XV (1), pp.27-38

27

STUDY ON THE INFLUENCE OF ECHINACEA EXTRACT UPON THE DEVELOPMENT OF BLOOD CELLS AT

YOUNG CHICK EMBRYO

Aura Mirela ARDELEANU

West University of Timisoara, Faculty of Chemistry-Biology-Geography, Department of Biology and Chemistry, Pestalozzi 16, Romania

Corresponding author e-mail: [email protected] ABSTRACT Echinacea is used as an immune enhancer to increase the resistance to viral, bacterial

and fungal infections. The aim of the present study was to determine the influence that

Echinacea has on the development of the different types of blood cells of the chick

embryo. There were incubated 60 eggs which were treated with Echinacea diluted

solution in the 9th day of incubation. The control group was treated with Chick

Ringer. In the following 5 days since the treatment was applied, it was collected the

blood and then there were made the smears. At this age, no white blood cells were

found. The analysis of the red blood cells showed that Echinacea extract does not

significantly influence the development of the red blood cells.

KEY WORDS: Echinacea, blood cells, chick embryo

INTRODUCERE

Chiar înainte de colonizarea europeană, băştinaşii americani au folosit diferite preparate cu Echinacea pentru tratarea mai multor afecţiuni: dureri de dinţi, de gât, răni (Flannery, 1999; Foster, 1991). Europenii au învăţat despre speciile native de la autohtoni, iar apoi au adus planta în Europa. Primele atestări ale acestei plante au fost menţionate de către Clayton în Flora Virginica (1762) şi de Schöpf în Materia Medica

Americana (1787) (Flannery, 1999; Foster, 1991). Multiple proprietăţi antimicrobiene, anticancerigene, antioxidante sau imunostimulatoare au fost studiate (Woelkart et al, 2006; Rehman et al, 1999; Jurcic et al, 1989; Burger et al, 1997; Stimpel et al, 1984; Gorski et al, 2004; Hu & Kitts, 2000). În studiile pe animale, s-au raportat pentru Echinacea angustifolia activităţi antiinflamatoare și antihialuronidazice, probabil o funcție a unei fracțiuni polizaharidice, care poate stimula vindecarea rănilor (Tragni et al, 1985; Tubaro et al, 1987; Tunnerhoff & Schwabe, 1956). Pe de altă parte, alte studii au arătat că extractul de Echinacea nu a avut niciun efect clinic semnificativ în cazul infecţiei la şoareci, asupra duratei sau intensităţii simptomelor la aceştia (Turner et al, 2005).

Activarea macrofagelor umane a fost raportată într-un experiment în care 12 bărbaţi tineri au fost injectaţi zilnic cu 2mL Echinacin, timp de 4 zile, după ce sângele lor a fost colectat, fracţionat şi celulele sistemului imunitar au fost expuse la Candida

albicans . Viteza cu care Candida albicans a fost fagocitată de către macrofage a fost

ARDELEANU: Study on the influence of Echinacea extract upon the development of blood cells at young chick

embryo

28

considerată semnificativ crescută la bărbaţii trataţi cu Echinacin faţă de martori. Nu a fost observat nici un efect privind activitatea celulelor natural killer (Möse, 1983). În ceea ce priveşte siguranţa utilizării produselor cu Echinacea în perioada sarcinii, s-a efectuat un studiu în care au fost implicate 206 femei ce au folosit Echinacea în timpul sarcinii şi 206 martore, pentru a se observa efectele adverse (Gallo et al, 2000). Nu s-au semnalat diferenţe în ceea ce priveşte numărul de copii morţi la naştere, apariţia anomaliilor cromozomiale sau a malformaţiilor între cele două grupuri de femei. Autorii cu ajuns la concluzia că Echinacea folosită în sarcină, în perioada în care are loc organogeneza, nu e asociată cu un risc crescut pentru malformaţii majore.

Se cunoaşte faptul că alchilamidele, acidul cicoric şi polizaharidele sunt potenţialele componente bioactive din extractul de Echinacea (Bauer et al, 1991). Pentru a investiga dacă aceste componente au efect imunostimulatoare, Bauer şi colaboratorii săi, în 2002, au efectuat un studiu in vivo, în care s-au folosit şobolani sănătoşi, din linia Sprague-Dawley. S-au format patru extracte, B, C, D şi E. Primul extract, B, conţinea: 40µg/kg/d acid cicoric; 1000µg/kg/d polizaharide şi 4µg/kg/d alchilamide. Extractele C, D şi E conţineau de 3, 20, respectiv 50 de ori cantitatea extractului B. Şobolanii au primit pe cale orală aceste trei componente din extractul de Echinacea. Substanţele s-au administrat de două ori pe zi, timp de patru zile. Activitatea fagocitară a macrofagelor a fost crescută la concentraţii tot mai mari ale componentelor extractului. S-a observat o tendinţă de creştere a TNF-α şi eliberare de oxid nitric de către macrofagele alveolare. De asemenea, s-au eliberat citokine (TNF-α şi IFN-γ) în macrofagele splinei şobolanilor, datorită componentelor din extractul de Echinacea, dar la concentraţii mai mari ale acestora. Aceste rezultate arată că preparatele de Echinacea care conţin concentraţii optime de acid cicoric, polizaharide şi alchilamide au efect în stimularea in vivo a imunităţii la şobolani.

Un alt studiu a fost efectuat de către Schwartz şi colaboratorii săi în 2002, pentru a determina dacă activitatea fagocitară şi producerea de citokine e stimulată de preparatele comerciale pe bază de Echinacea, administrate pe cale orală. 40 de bărbaţi voluntari sănătoşi (20-40 ani)au participat la studiu. Ei au primit suc proaspăt de Echinacea purpurea sau suc placebo. În final, s-a determinat activitatea fagocitară a leucocitelor polimorfonucleare şi monocite, măsurate prin flowcitometrie, producerea de factor de necroză tumorală α (TNF-α) şi Interleukină β (IL-1β). E. purpurea nu a sporit nici activitatea fagocitară a leucocitelor polimorfonucleare, nici pe cea a monocitelor faţă de placebo. E. purpurea nu a influenţat producerea de TNF-α şi IL-1β. Însă E. purpurea a determinat scăderea semnificativă a concentraţiei feritinei serice.

Un alt studiu, efectuat de Shen-An Hwang et al. în 2004, se bazează pe faptul că Echinacea e capabilă să stimuleze răspunsuri imune, inclusiv cele reglate de macrofage şi unele celule natural killer. Macrofagele răspund la preparatele purificate de polizaharide şi alchilamide. Totuşi, mecanismele pentru stimularea celulelor


29

responsabile pentru adaptarea imunităţii nu au fost încă elucidate pentru alte molecule prezente în preparatele de E. purpurea. Astfel, populaţii de splenocite aderente şi non-aderente provenite de la şoareci, au fost incubate in vitro alături de două tipuri de extracte din Echinacea: unul apos şi unul hidroalcoolic. Supernatanţii au fost colectaţi la 48h după incubaţie şi testaţi prin ELISA pentru prezenţă de citokine secretate şi mediatori proinflamatori. Toate populaţiile de splenocite au fost capabile să producă în cantităţi semnificative IL-6 (1014 pg/mL) după tratarea cu preparate din Echinacea de ambele tipuri. IL-6 a fost produs de populaţiile celulare non-aderente în cantitate foarte mare (4912 pg/mL) datorită extractului pe bază de apă de 1 mg/mL. Acelaşi extract a fost capabil să stimuleze populaţiile de splenocite non-aderente să producă TNF-α (2082 pg/ml), Il-10 (892 pg/mL) şi MIP-1α (6486 pg/mL). În cazul splenocitelor aderente însă, s-au găsit în concentraţii semnificative numai TNF-α şi MIP-1α, deşi s-a folosit o doză similară de extract. Nici o populaţie de splenocite nu a putut stimula producerea în concentraţii semnificative de IFN-γ sau IL-12 la administrarea nici uneia din cele două tipuri de extracte de Echinacea.

Diverşi compuşi vegetali au puternice acţiuni fiziologice, terapeutice şi toxicologice pe care le imprimă plantelor care le conţin (Faur & Ianovici 2004; Ianovici, 2010; Petran, 2010). Numeroase experimente cu Echinacea au fost efectuate cu extracte administrate pe şoareci, şobolani, sau chiar pe oameni. Având în vedere experienţa acumulată în instituţia noastră în domeniul embriologiei (Checiu et al, 2006a; Checiu et al, 2006b; Checiu et al, 2008), pentru a observa mai bine efectul pe care această plantă îl are, am considerat util să investigăm influenţa extractului de Echinacea asupra vertebratelor din clasele inferioare ale mamiferelor; în acest scop am investigat efectele acestui extract asupra embrionului de pasăre în dezvoltare. Obiectivul studiului este investigarea posibilelor efecte ale extractului de Echinacea asupra diferentierii celulelor sangvine, de la formele tinere ale acestora spre forme mature. Embrionii folosiţi au fost de vârste mici (10, 11, 12, 13 şi 14 zile de incubaţie).

MATERIALE ŞI METODE

Soluţia folosită a fost „Tinctură de Echinacea” de la Plantextrakt. Soluţia conţinea alcool 62%. Pentru studiu, am diluat soluţia astfel: 1mL soluţie concentrată la 1,5mL apă distilată.

S-a administrat Chick Ringer - 9g NaCl, 0,42g KCl, 0,24g CaCl2 la 1L apă distilată (New, 1966) pentru a simula umectarea la nivelul corion-alantoidei, umectare care are loc în cazul picurării soluţiei de Echinacea.

Pentru a obţine embrioni de găină, am incubat 60 de ouă la o temperatură de 38,5°C şi umiditate necesară. În ziua a 9-a, ouăle au fost ferestruite. Ferestruirea s-a realizat la nivelul camerei cu aer, care se află la polul rotunjit al oului. După ferestruire, ele au fost împărţite în două loturi: unul care a fost tratat cu soluţie diluată de Echinacea şi altul, embrionii-martor, cărora le-a fost picurat Chick Ringer. Soluţiile au fost administrate prin picurarea a 1mL de soluţie de Echinacea, respectiv Chick


embryo

30

Ringer la nivelul membranei corion-alantoidiene. Apoi, fereastra a fost închisă cu leucoplast, iar ouăle au fost reintroduse în incubator, până la recoltare de sânge. Ouăle au fost aşezate pe rând, pe un suport, la lupa binoculară OPTICA. După îndepărtarea leucoplastului, cu ajutorul unui ac de sticlă, a fost ruptă membrana vitelină. Sângele a fost extras cu o seringă de 1mL şi s-a picurat pe mai multe lame de sticlă. Cu ajutorul unei lame speciale, au fost realizate frotiuri de sânge. Frotiurile au fost efectuate in prima, a 2-a, a 3-a, a 4-a şi a 5-a zi de la administrarea soluţiilor (zilele 10, 11, 12, 13 şi 14 zile de incubaţie). Pentru colorarea frotiurilor, am folosit una dintre cele mai utilizate tehnici, şi anume May- Grünwald Giemsa. Examinarea frotiurilor s-a efectuat la un microscop OPTICA, cu obiectivul de imersie, pentru a vedea tipurile de celule sangvine apărute, numărul şi morfologia acestora. Am calculat media aritmetică cu abaterea standard a numărului de celule apărute în sângele embrionilor trataţi cu Echinacea şi în sângele embrionilor control. Apoi, am calculat parametrul t, după Steinbach, 1966, ceea ce presupune compararea mediei aritmetice a lotului experimental cu media aritmetică a lotului control. Diferenţele mediilor le-am considerat a fi semnificative dacă valoarea lui p din tabel a fost mai mică de 0,05. REZULTATE ŞI DISCUŢII

Celulele sangvine pe care le-am găsit în urma studiului microscopic, au fost celule ale liniei roşii, dintre care au apărut cu precădere trei tipuri. • Unele celule au formă relativ rotundă, citoplasmă mai deschisă la culoare, uneori fiind vizibil numai nucleul, care este roşiatic, mai mare şi uşor reticulat. Celuele acestea sunt cele mai numeroase = eritroblaşti. • Altele, de formă ovală, prezintă citoplasmă albăstruie, nucleu mai mic, mai condensat şi cu nuanţă spre albastru. Aceste celule sunt cele mai puţin numeroase = eritrocite. • Al treilea tip este reprezentat de celule de formă rotundă, bine delimitate, cu citoplasmă puternic albastră şi nucleu situat în centru, rotund, mai intens colorat. Acestea nu se găsesc în număr chiar atât de mare ca şi eritroblaştii = proeritroblaşti.


31

Fig.1Tipurile de celule apărute în sângele embrionilor trataţi cu Echinacea, observate la microscopul OPTICA,

cu obiectivul de imersie. A = Proeritroblaşti; B = Eritrocite; C = Eritroblaşti

Fig.2.Tipurile de celule apărute în sângele embrionilor trataţi cu Echinacea observate la microscopul OPTICA,

cu obiectivul de imersie. Legendă: A = Proeritroblaşti; B = Eritrocite; C = Eritroblaşti (original)

Fig. 3Tipurile de celule apărute în sângele embrionilor control observate la microscopul OPTICA, cu obiectivul

de imersie. Legendă: A = Proeritroblaşti; C = Eritroblaşti (original)


embryo

32

Fig. 4 Tipurile de celule apărute în sângele embrionilor control observate la microscopul OPTICA, cu obiectivul

de imersie. Legendă: C = Eritroblaşti (original)

Fig.5. Valorile medii ale eritroblaştilor, proeritroblaştilor şi eritrocitelor la o zi de la administrarea soluţiei de

Echinacea şi a Chick Ringer.

Din analiza datelor prezentate, rezultă că eritroblaştii la ambele loturi prezintă cele mai mari valori, urmate de proeritroblaşti şi eritrocite.

Diferenţele existente între numărul mediu cu abaterea standard la lotul tratat şi control în cazul eritobalştilor şi a proeritroblaştilor nu este statistic semnificativă la fel ca şi în cazul eritrocitelor în zilele 2, 3, 4 şi 5 de la tratament. În ziua 1, există o diferenţă statistic semnificativă privind eritrocitele (p<0,02), observându-se o creştere a acestora la lotul tratat.

Eritroblaşti Proeritroblaşti Eritrocite

Embrioni trataţi 189.833 23.5 1.66

Embrioni control 196 15 0

020406080

100120140160180200

Ziua 1


33

Fig.6. Valorile medii ale eritroblaştilor, proeritroblaştilor şi eritrocitelor la 2 zile de la administrarea soluţiei de


Observăm că în cadrul lotului tratat cu Echinacea, numărul mediu al eritroblaştilor este semnificativ crescut (p<0,01) faţă de control. În ceea ce priveşte valorile proeritroblaştilor şi a eritrocitelor, nu se observă diferenţe semnificative între cele două loturi.



De asemenea, observăm valori aproximativ egale în cazul eritroblaştilor şi a eritrocitelor, dar în cazul proeritroblaştilor, se poate vedea o diferenţă, deşi nesemnificativă, între cele două loturi ; în sângele embrionilor trataţi cu Echinacea s-au găsit mai multe celule de acest tip.



Embrioni control 176.8 30 0

0

180

360

540

Ziua 2



Embrioni control 201.888 4.777 0.222

0

55

110

165

220

Ziua 3


embryo

34



Nu există diferenţe semnificative privind numărul mediu de eritroblaşti, proeritroblaşti şi eritrocite; valorile acestora în cazul lotului experimental fiind aproximativ egal cu cel al lotului control.

Fig.9. Valorile medii ale eritroblaştilor, proeritroblaştilor şi eritrocitelor 5 zile de la administrarea soluţiei de Echinacea şi a Chick Ringer.

În ceea ce priveşte valoriile medii ale acestor trei tipuri de celule din linia roşie, nu se observă diferenţe semnificative, valorile întâlnite în cazul embrionilor trataţi fiind aproximativ egal cu cele ale lotului control.


Embrioni trataţi 190 21.7 0.9


0

50

100

150

200

Ziua 4


Embrioni trataţi 191.214 18 0.785


0

50

100

150

200

Ziua 5


35

Fig.10. Valoriile medii ale eritroblaştilor în prima, a 2-a, a 3-a, a 4-a şi a 5-a zi de la administrarea soluţiilor.

În afară de ziua a 2-a, când valoriile din cazul embrionilor trataţi sunt mai mari decât cele ale embrionilor control (p<0,01), nu există nici o altă diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic la această categorie de celule între cele două tipuri de embrioni.

Fig.11. Valoriile medii ale proeritroblaştilor în zilele 1, 2, 3, 4 şi 5 de la administrare.

Nu se observă nici o diferenţă semnificativă între lotul tratat şi lotul control în ceea ce priveşte acest tip de celule.

Ziua1 Ziua 2 Ziua 3 Ziua 4 Ziua 5

Embrioni trataţi 189.833 532.666 195.7 190 191.214

Embrioni control 196 176.8 201.888 185.333 188.5

0

180

360

540

Eritroblaşti


Embrioni trataţi 23.5 22.117 9.7 21.7 18

Embrioni control 15 30 4.777 21.8 17.75

0

10

20

30

Proeritroblaşti


embryo

36

Fig.12. Valoriile medii ale eritrocitelor în zilele 1, 2, 3, 4 şi 5 de la administrare.

În prima zi de la picurarea soluţiei de Echinacea şi a Chick Ringer, există o diferenţă statistic semnificativă (p<0,02) la această categorie de celule între embrionii trataţi şi control. Cu toate aceastea, în următoarele patru zile studiate, nu apar diferenţe între cele două loturi de embrioni.

CONCLUZII

Din analiza datelor studiate, în doar două cazuri există diferenţe statistic semnificative şi anume o creştere la categoria eritroblaşti, în cazul embrionilor trataţi cu Echinacea, la două zile după administrarea tratamentului şi o creştere a eritrocitelor aceloraşi embrioni, la o zi de la administrarea soluţiei. Privind valoriile medii ale eritroblaştilor din celelalte zile, se observă că la embrionii trataţi, aceste valori sunt aproximativ egale cu cele ale embrionilor control. La categoria proeritroblaşti, deşi se observă în zilele 1, 2 şi 3 de la tratament o diferenţă intre valoriile acestora la lotul tratat şi lotul control, această diferenţă nu e semnificativă statistic. În zilele 4 şi 5, valoriile medii ale proeritroblaştilor sunt aproximativ egale. În ceea ce privesc eritocitele, în afara diferenţei mai sus menţionate, există o uniformizare privind numărul acestora în următoarele zile, la cele două loturi de embrioni. Prin urmare, studiul efectuat arată că Echinacea nu are o influenţă semnificativă privind dezvoltarea tipurilor de celule sangvine din linia roşie. Literatura consultată nu oferă informaţii privind efectele la păsări. Deci, consider că mai trebuiesc efectuate investigaţii pe embrioni de găină de vârste mai mari pentru a monitoriza mai exact influenţa acestei plante asupra dezvoltării celulelor sangvine.


Embrioni trataţi 1.66 0.352 0.3 0.9 0.785

Embrioni control 0 0 0.222 1.8 0.75

0

0.6

1.2

1.8

Eritrocite


37

BIBLIOGRAFIE • Bauer R., Goel V., Chang C., Shama V. J., Barton R., Gahler R., Basu K. T.2002. Echinacea

stimulates macrophage function in the lung and spleen of normal rats. Journal of Nutritional

Biochemistry, 13, 487-492 • Bauer R., Wagner H. 1991. Echinacea species as potential immunostimulatory drugs. In Economic

and Medicinal Plant Research, Ed Wagner, Academic Press, London,U.K., pp.253-321 • Burger R. A., Torres A. R., Warren R. P., Caldwell V. D., Hughes, B. G. 1997. Echinacea-induced

cytokine production by human macrophages. Int J Immunopharmacol. 19(7):371-379 • Checiu I. Checiu M., Tuduce I., Iluţ I., Huţanu D. 2008. Teratogenic effects of copper upon early

postimplantational mouse embryos – in vitro experimental investigation, Annals of West University

of Timişoara, ser. Biology, 11,51-56 • Checiu M., Lupea A., Huţanu D., Checiu I. 2006b. The effect of ethanol in vitro on preimplantation

mouse embryos, Annals of West University of Timişoara, ser. Biology, 9, 31-42 • Checiu M., Tuduce I., Fruja T., Huţanu D., Checiu I. 2006a. In vitro effect of progesterone upon

preimplantation mouse embryos, Annals of West University of Timişoara, ser. Biology, 9, 43-54 • Faur A., Ianovici N. 2004. Practicum de fiziologie vegetală, Ed. Mirton, Timişoara • Flannery M.A. 1999. From Rudbeckia to Echinacea: The emergence of the purple cone flower in

modern therapeutics. Pharmacy in History, 41, 52-59 • Foster S. 1991. Echinacea: Nature’s Immune Enhancer. Healing Arts Press: Rochester, Vermont • Gallo M., Sarkar M, Au W., Pietrzark K., Comas B., Smith M., Jaeger T.V., Einarson A., Koren G.

2000. Pregnancy outcome following gestational exposure to Echinacea. Arch Intern Med, 160, 3141-3143

• Gorski J. C., Huang S. M., Pinto A., Hamman M. A., Hilligoss J. K., Zaheer N. A., Desai M., Miller M., Hall S. D. 2004.The effect of echinacea (Echinacea purpurea root) on cytochrome P450 activity in vivo. Clin Pharmacol Ther. 75(1):89-100.

• Hu C., Kitts D. D. 2000. Studies on the antioxidant activity of Echinacea root extract. J Agric Food

Chem, 48(5):1466-1472. • Hwang Shen-An, Dasgupta A., Actor K. J. 2004. Cytokine production by non-adherent mouse

splenocyte cultures to Echinacea extracts • Ianovici N. 2010. Citohistologie şi morfoanatomia organelor vegetative, Ed. Mirton, Timişoara • Jurcic K, Melchart D, Holzmann M. 1989. Two proband studies for the stimulation of granulocyte

phagocytosis through echinacea extract containing preparations. Z Phytoterapie.10:67-70. • Möse J.R. 1983. The effect of Echinacin on phagocytic activity and natural killer cells. Med Welt 12-

30-1983;34(51-52):1463-1467 • New Denis Alan Trevor. 1966. The Culture of Vertebrate Embryos. Logos Press Limited, London,

Great Britan • Petran M. 2010. Evaluarea efectului antimicotic al unor extracte de plante cu compusi antioxidanti,

Teză de doctorat. http://www.usamvcluj.ro/files/teze/pintea.pdf • Rehman J., Dillow J. M., Carter S. M., Chou J., Le B., Maisel, A. S. 1999. Increased production of

antigen-specific immunoglobulins G and M following in vivo treatment with the medicinal plants Echinacea angustifolia and Hydrastis canadensis. Immunol Lett. 68(2-3):391-395.

• Scwartz E., Metzler J., Diedrich J.P., Freudeinstein J., Bode C., Bode J.C. 2002. Oral administration of freshly expressed juice of Echinacea purpurea herbs fail to stimulate the non-specific immune response in healthy young men: results of a double-blind placebo-controlled crossover study, J

Immunother, Band 25, Heft 5, 413-420 • Steinbach M. 1961. Prelucrare statistică în medicină şi biologie, Editura Academiei Republicii

Populare Romi ̂ne, Bucureşti


embryo

38

• Stimpel M., Proksch A., Wagner H., Lohmann-Matthes M. L. 1984. Macrophage activation and induction of macrophage cytotoxicity by purified polysaccharide fractions from the plant Echinacea purpurea. Infect Immun.46(3):845-849.

• Tragni E., Tubaro A., Melis S., Galli C. L. 1985. Evidence from two classic irritation tests for an anti-inflammatory action of a natural extract, Echinacina B. Food Chem Toxicol. 23(2):317-319

• Tubaro A., Tragni E., Del Negro P., Galli C. L., Della Loggia R. 1987. Anti-inflammatory activity of a polysaccharidic fraction of Echinacea angustifolia. J Pharm Pharmacol. 39(7):567-569

• Tunnerhoff F.K., Schwabe H.K.1956. Studies in human beings and animals on the influence of echinacea extracts on the formation of connective tissue following the implantation of fibrin. Arzneim

Forsch. 6:330-334. • Turner R.B., Bauer R., Woelkart K., Hulsey T.C., Gangemi J. D. 2005. An Evaluation of Echinacea

angustifolia in Experimental Rhinovirus Infections. The New England Journal of Medicine 353 (4): 341–348.

• Woelkart K., Marth E., Suter A., Schoop R., Raggam R. B., Koidl C., Kleinhappl B., Bauer R. 2006. Bioavailability and pharmacokinetics of Echinacea purpurea preparations and their interaction with the immune system. Int J Clin Pharmacol Ther. 44(9):401-408

Documents

STUDY ON THE INFLUENCE OF ECHINACEA EXTRACT UPON THE ... · Soluţia folosită a fost „Tinctură de Echinacea” de la Plantextrakt. Soluţia conţinea alcool 62%. Pentru studiu,