Upload
others
View
12
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
i
PROPOSAL
PENELITIAN LABORATORIUM
DANA ITS TAHUN 2020
PEMISAHAN DAN PEMURNIAN SENYAWA SQUALENE PADA DAUN
NYAMPLUNG (CALOPHYLLUM INOPHYLLUM L.)
Tim Peneliti:
1. Hakun Wirawasista, ST, M.MT, PhD (0022097808 / Teknik Kimia / FTI)
2. Setiyo Gunawan, ST. Ph.D (0023037604 / Teknik Kimia / FTI)
DIREKTORAT PENELITIAN DAN PENGABDIAN KEPADA MASYARAKAT
INSTITUT TEKNOLOGI SEPULUH NOPEMBER
SURABAYA
2020
ii
DAFTAR ISI
HALAMAN SAMPUL
DAFTAR ISI .............................................................................................................ii
DAFTAR TABEL ....................................................................................................iv
DAFTAR GAMBAR .................................................................................................v
BAB I RINGKASAN.................................................................................................1
BAB II LATAR BELAKANG ...................................................................................2
II.1Latar Belakang ...................................................................................................2
II.2 Perumusan dan Batasan Masalah.......................................................................4
II.3 Tujuan Penelitian ...............................................................................................5
II.4 Urgensi ...............................................................................................................5
BAB III TINJAUAN PUSTAKA ...............................................................................7
III.1. Teori Penunjang.........................................................................................7
III.1.1. Kondisi Tanaman Nyamplung (Calophyllum inophyllum) di Indonesia ...... 7
III.1.2. Persebaran Nyamplung (Calophyllum inophyllum) di Indonesia.................7
III.1.3. Karakteristik Tanaman Nyamplung (Calophyllum inophyllum) .................9
III.1.4. Manfaat dan Kandungan dalam Tanaman Nyamplung (Calophyllum
inophyllum) .............................................................................................................10
III.1.5. Metode Ekstrak Daun Nyamplung ...........................................................18
III.1.6. Batchwise Solvent Extraction (BSE) .........................................................19
III.1.7. Metode Microwave-assisted Extraction (MAE) ..........................................20
III.1.8. Gelombang Mikro (Microwave) ................................................................22
III.1.9. Identifikasi dan Analisa Senyawa Bioaktif ...............................................23
III.1.10. Metode Kromatografi ...........................................................................24
BAB IV METODE ..................................................................................................34
IV.1. Garis besar Penelitian ..............................................................................34
IV.2. Bahan dan Peralatan ................................................................................34
IV.3. Variabel Penelitian ...................................................................................35
IV.4. Prosedur Penelitian ..................................................................................38
IV.5. Analisa .....................................................................................................43
BAB V JADWAL ....................................................................................................48
V.1. Jadwal Penelitihan .......................................................................................48
V.2. Anggaran Biaya ...........................................................................................48
iii
DAFTAR PUSTAKA ..............................................................................................51
LAMPIRAN 1 Biodata Tim Peneliti........................................................................55
iv
DAFTAR TABEL
Tabel III. 1 Manfaat dan Kegunaan Tanaman Nyamplung (Calophyllum inophyllum) .. 11
Tabel III. 2. Klasifikasi Senyawa Fenol Berdasarkan Jumlah Atom Karbon ................. 12
Tabel III. 3. Polaritas Solvent ................................................................................... 18
Tabel III. 4. Kondisi Operasi untuk Berbagai Macam Proses Ekstraksi ........................ 20
Tabel III. 5. Energi dengan Jenis Radiasi Berbeda...................................................... 23
Tabel III. 6. Jenis Adsorbent..................................................................................... 24
Tabel IV. 1 Variabel Penelitian Bacthwise solvent extraction ....................................... 36
Tabel IV.2. Variabel Penelitian Metode Microwave Assisted Extraction pada Proses
Ekstraksi................................................................................................................... 37
Tabel IV.3. Variabel Penelitian Microwave Assisted Extraction pada Proses Pemurnian. 38
v
DAFTAR GAMBAR
Gambar III. 1. Persebaran Tanaman Nyamplung (Calophyllum inophyllum ) di
Indonesia.................................................................................................................... 8
Gambar III. 2. Bagian-bagian Tanaman Nyamplung (Calophyllum inophyllum) ......... 10
Gambar III. 3.Gugus Fenol ...................................................................................... 13
Gambar III. 4. Struktur Senyawa (a) flavan, (b) flavanon, (c) flavon, (d) flavonol
(quarcetin), (e) dihidroflavonol, (f) flavan‐3‐ol, (g) flavan‐4‐ol, dan (h) flavan‐3,4‐diol . 13
Gambar III. 5. Bentuk Senyawa Xanthone ................................................................ 14
Gambar III. 6. Kemungkinan Posisi Oksigenasi Senyawa Xanthone ........................... 14
Gambar III. 7. Bentuk Seyawa Kumarin ................................................................... 15
Gambar III. 8. Betuk Senyawa Benzodipiranon......................................................... 15
Gambar III. 9. Gugus Isopren .................................................................................. 15
Gambar III. 10. Bentuk Senyawa Triterpenoid dan gugus fungsi friedelin (R= CH3),
canophyllalic acid (R= COOH) , dan canophyllol (R=CH2OH) .................................... 16
Gambar III. 11. Bentuk Senyawa (a) squalene (b) canophyllic acid ............................ 16
Gambar III. 12. Bentuk Senyawa (a) Steroid (b) Sitosterol (c) Kolesterol.................... 17
Gambar III. 13.a) Perbandingan Temperatur Microwave dengan Pemanasan
Konvensional. b) Kondisi thermal Pemanasan pada Microwave dan Pemanasan
Konvensional ........................................................................................................... 21
Gambar III. 14. Penggambaran Skema TLC.............................................................. 25
Gambar III. 15. Penentuan Retardation factor (Rf) .................................................... 25
Gambar IV. 1. Tahapan proses Penelitihan ................................................................ 34
Gambar IV. 2.Alat untuk Microwave Assisted Extraction (MAE) ................................. 35
Gambar IV.3. Skema Esktraksi Crude Non-Polar ...................................................... 39
Gambar IV.4. Sistem cross-current pada ekstraksi batchwise multistage ..................... 40
Gambar IV.5. Skema Proses Batchwise Solvent Extraction ........................................ 41
Gambar IV.6. Skema Proses Microwave Assisted Extraction ..................................... 42
Gambar IV.7. Skema Proses Kombinasi.................................................................... 43
Gambar IV.8. Skema Analisa Total Kandungan Fenolik Metode Folin-Ciocalteu ........ 44
Gambar IV.9 Skema Analisa Total Kandungan Flavonoid.......................................... 45
1
BAB I
RINGKASAN
Di era globasisasi ini penyakit kanker merupakan penyakit yang tidak
menular tetapi menjadi penghalang untuk meningkatkan harapan hidup di
dunia. Kanker yang terjadi pada organ pernapasan atau paru-paru menjadi
kanker pembunuh nomor satu di dunia dan Indonesia. Oleh karena itu para
penderita kanker di dunia, perlu penanganan khusus dan diberikan obat agar
memiliki angka harapan hidup yang tinggi. Kemoterapi pengobatan kanker
yang terkenal dengan membunuh atau menghentikan perkembangan sel yang
aktif. Hal ini berdampak yang terbunuh tidak hanya sel kanker, melainkan sel-
sel yang baik bagi tubuh juga, selain itu biaya untuk pengobatan kemoterapi
cukup tinggi. Hal ini menyebabkan beberapa peneliti mencari solusi lain. Salah
satunya dengan pengembangan dan isolasi senyawa boaktif yang terdapat dalam
tanaman. Tanaman nyamplung dikenal sebagai tanaman yang memiliki banyak
manfaat, salah satunya sebagai obat sebab memiliki banyak kandungan bioaktif.
Squalene merupakan senyawa bioaktif yang terdapat pada tanaman nyamplung
yang dapat menghambat pertumbuhan sel kanker. Diharapkan pada penelitihan
ini nantinya mampu menjadikan senyawa squalene sebagai obat herbal yang
dapat digunakan sebagai penghambat dan terapi penyembuhan. Penelitihan ini
memiliki target untuk mengisolasi dan memurnikan senyawa squalene hingga
>99% dengan metode pemurnian Microwave-assisted Extraction (MAE),
batchwise solven extraction (BSE) dan kombinasi MAE-BSE yang nantinya
akan dianalisa dengan TLC, GC serta GC-MS. Untuk mengetahui kandungan
senyawa bioaktif uji TPC, TFC, Antioxidant Activity diperlukan. Sedangkan
untuk tahapan selanjutnya diharapkan mampu mengimplementasikan bahwa
senyawa squalene dapat digunakan sebagai pengobatan kanker yang lebih aman
dengan melakukan analisa toksisitas.
Kata Kunci : Bioaktif, Pemurnian, Separasi, Squalene
2
BAB II
LATAR BELAKANG
II.1 Latar Belakang
Pada abad 21 ini kanker yang merupakan penyakit tidak menular menjadi
penghalang untuk meningkatkan harapan hidup di dunia. Menurut WHO kanker
menjadi penyebab utama kematian pertama atau kedua pada usia sebelum 70 tahun
di 91 negara, sedangkan menjadi peringkat ketiga di 22 negara dari 172 negara yang
telah disurvei. Berdasarkan data Globocan di Indonesia sendiri pada tahun 2018
jumlah penderita kanker menjadi bertambah 348.809 orang. Setiap tahunnya angka
tersebut terus bertambah. Salah satu pengobatan kanker yang paling terkenal adalah
kemoterapi. Kemoterapi merupakan pengobatan dengan membunuh atau
menghentikan perkembangan sel yang aktif. Sehingga hal ini memiliki dampak
tidak hanya bagi sel kanker, melainkan sel-sel yang baik bagi tubuh juga dibunuh,
selain itu biaya untuk pengobatan kemoterapi ini cukup tinggi. Hal ini
menyebabkan beberapa peneliti mencari solusi lain. Salah satunya adalah
pengobatan herbal.
Beberapa orang beralih ke obat herbal alami yang relatif lebih murah serta
telah dipercaya sejak jaman dahulu. Selain itu lebih mudah di dapat, pembuatannya
sederhana, serta tidak memiliki efek samping yang membahayakan karena
memakai bahan-bahan yang berasal dari alam. Pengembangan dan pencarian
sumber senyawa bioaktif (bioactive compounds) dilakukan seiring dengan makin
banyaknya penyakit-penyakit baru yang bermunculan, mulai dari penyakit infeksi,
kanker, dan beberapa penyakit berbahaya lainnya. Salah satu komponen bioaktif
yang kita ketahui adalah squalene.
Squalene adalah triterpene dengan rumus C30H50 yang disintesis pada
tumbuhan, hewan, bakteri, dan jamur sebagai prekursor untuk sintesis metabolit
sekunder seperti sterol, hormon, atau vitamin (Ghimire dkk, 2016). Konsentrasi
squalene terbesar di dunia yang hidup ismet di hati spesies ikan tertentu, terutama
3
hiu yang hidup di laut pada kedalam di bawah 400m. Squalene dianggap penting
dalam ekstrak berminyak untuk kelangsungan hidup hewan laut, di mana pasokan
oksigen miskin dan tekanan sangat tinggi (Andries dkk ̧ 2014). Squalane sebagai
langkah perantara dalam biosintesis kolesterol. Squalane memiliki banyak fungsi
diantanya sebagai antioksidannya yang terkenal (Gunes, 2013); memiliki efek
penghambatan pada kanker dan aktivitas anti tumor yang tinggi (Alvaro dan
Eduardo, 2018); anti penuaan pada kosmetik sebagai pelembab alami dan dalam
biosintesis kolesterol (Grande dkk, 2018). Penggunaan minyak hewan laut sebagai
sumber squalene telah dibatasi oleh peraturan perlindungan hewan dan keberadaan
polutan organik (POPs) sebagai pestisida organoklorin, hidrokarbon aromatik
polisiklik, dioksin, atau logam berat yang menyebabkan kanker (Grande dkk,
2018). Ekstraksi Squalane dari sumber tanaman memiliki daya minat yang tinggi.
Salah satu tanaman yang memiliki kandungan squalene adalah Nyamplung.
Tanaman nyamplung (Calophyllum inophyllum L.) adalah salah satu jenis
tanaman hutan bakau yang memiliki banyak manfaat. Selain akar tanaman tersebut
dapat mencegah abrasi, bagian tanaman yang lain juga tidak kalah penting. Hampir
setiap bagian dari tanaman ini dapat diolah menjadi produk bernilai tinggi. Namun,
masih sedikit masyarakat Indonesia yang mengetahui keunggulan tanaman tersebut.
Di India, seluruh bagian tanaman nyamplung digunakan sebagai obat untuk
menyembuhkan reumatik dan berbagai penyakit kulit. Batang nyamplung
digunakan untuk mengobati pendarahan internal dan sebagai bahan astringen untuk
produk perawatan kulit. Daun nyamplung dapat bermanfaat untuk mengobati iritasi
mata, vertigo, migrain, dan heat stroke (Ling dkk., 2009; Chavan dkk., 2013).
Menurut Giesen dkk. (2006), tanaman mangrove dapat ditemukan di daerah pesisir
Indonesia, dimana 60% total mangrove yang tumbuh di Asia Tenggara tumbuh di
wilayah Indonesia dengan sisanya tersebar di Malaysia (11,7%), Myanmar (8,8%),
Papua Nugini (8,7%), dan Thailand (5,0%)Salah satu jenis tanaman mangrove di
indonesia yang memiliki nilai ekonomis tinggi adalah tanaman nyamplung
(Calophyllum inophyllum). Indonesia merupakan negara dengan populasi hutan
bakau terbesar di dunia dengan tingkat keanekaragaman hayati yang sangat
bervariasi di dunia dengan area seluas 3,1 juta hektar atau 22% dari total populasi
4
hutan bakau dunia. Sisanya berada di Australia (7,1%), Brazil (7%), Meksiko
(5,4%), Nigeria (4,7%) dan di beberapa negara lainnya.
Sebagai tanaman obat, Prasad dkk. (2012), menemukan bahwa daun
nyamplung memiliki senyawa bioaktif yang bersifat antidislipidemik dan
antioksidan. Sedangkan, Novianti dkk. 2015, menyebutkan bahwa pada kulit batang
dan daun nyamplung mengandung komponen bioaktiaf yang bersifat analgesik,
antibakteri, antitoksik, dan antitumor. Selain itu, nyamplung berkhasiat dalam
menyembuhkan luka, meredakan iritasi mata, dan mencegah penyakit jantung
(Aparatmarta dkk, 2016).
Isolasi komponen senyawa bioaktif yang yang telah dilakukan Yohed dan
Maulinda (2017), terhadap daun nyamplung berdasarkan total kandungan fenol
(Total Phenolic Content, TPC), total kandungan flavonoid (Total Flavonoid
Content, TFC), dan aktivitas antioksidan melalui analisa DPPH (1,1-Diphenyl-2-
picrylhydrazyl). Oleh karena banyak manfaatnya dalam menyembuhkan penyakit,
dan dalam dunia kesehatan, maka penelitian mengenai tanaman nyamplung mulai
berkembang. Selain itu pada penelitian yang dilakukan sebelumnya oleh Ardhyni
dan Sholehah (2019), menggunakan ekstrak daun nyamplung dengan menggunakan
pelarut n-hexane didapati kandungan squalane sebesar 40,1%. Dari penelitihan
tersebut menunjukan bahwa nyamplung memiliki potensi untuk menjadi sumber
squalene. Tetapi untuk konsentrasi squalene dalam daun nyamplung masih
diperlukan proses pemisahan dan pemurnian yang sebelumnya belum dilakukan
pada daun nyamplung. Sehingga untuk penelitihan kali ini untuk proses pemurnian
dan pemisahan menggunakan metode Batchwise Solvent Extraction (BSE), dan
Microwave Assisted Extraction (MAE). Serta nantinya akan dilakukan pengujian
lebih lanjut mengenai pengaruh senyawa squalene terhadap pertumbuhan sel
kanker.
II.2 Perumusan dan Batasan Masalah
Dari latar belakang yang telah dijelaskan, rumusan masalah dalam penelitian
ini adalah sebagai berikut:
5
1. Bagaimana cara mengisolasi dan memurnikan senyawa Squalane pada daun
nyamplung?
2. Bagaimana metode dan kondisi terbaik dalam mengisolasi senyawa Squalane
pada Tanaman Nyamplung serta perbandingan dari metode Batchwise
Solvent Extraction (BSE), dan Microwave Assisted Extraction) ?
3. Berapa yield dan kemurnian senyawa squalane yang berhasil dipisahkan pada
penggunaan metode Batchwise Solvent Extraction (BSE), dan Microwave
Assisted Extraction (MAE) ?
Dalam penelitian ini diberikan batasan masalah dengan ruang lingkup
sebagai berikut:
1. Bahan yang digunakan adalah daun nyamplung yang diperoleh dari Ekowisata
Mangrove Wonorejo, Surabaya Jawa Timur
2. Senyawa yang akan dipisahkan adalah Squalane.
II.3 Tujuan Penelitian
Adapun tujuan penelitian ini meliputi:
1. Mendapatkan metode pemurnian terbaik untuk senyawa squalene hingga
>99%
2. Menganalisa kandungan senyawa bioaktif dari tanaman nyamplung untuk
bisa dijadikan alternatif lain yang masih memiliki nilai pengembangan
kedepannya.
II.4 Urgensi
Data internasional dari Globocan 2018 yang baru saja dirilis menyatakan
kanker paru adalah kanker yang paling banyak ditemukan pada pria dan wanita di
seluruh dunia dibanding jenis kanker lainnya. Total, kanker paru berjumlah 11,6
persen dari semua kasus kanker di dunia. Disusul kanker payudara, usus besar,
prostat, dan perut. Oleh karena itu para penderita kanker di dunia, perlu dilakukan
penanganan khusus dan diberikan obat agar memiliki angka harapan hidup yang
tinggi. Jenis pengobatan yang menjadi alternatif saat ini adalah obat herbal. Tetapi
menurut WHO, Negara Asia dan Afrika 80% populasi tergantung dari obat
6
tradisional untuk kebutuhan kesehatan secara umum. Sehingga pelu adanya
alternatif lain untuk mencari sumber dari obat tradisional. Di Jepang banyak sekali
warga yang tinggal di pesisir laut untuk meminum hati minyak ikan hiu sebagai
obat tradisional. Sebab memiliki berbagai manfaat sebagai obat diabetes, pencegah
kanker serta dapat digunakan untuk memperhalus kulit. Dengan mengisolasi
senyawa squalene dari daun nyamplung ini diharapkan dapat digunakan untuk
mengobati penyakit. Sejalan dengan hal tersebut, Laboratorium Teknologi
Biokimia ITS mencantumkan penelitian dalam bidang Natural Products (Bahan-
Bahan Aktif) di dalamnya. Oleh sebab itu, judul ini memiliki relevansi atau
memiliki manfaat terhadap masyarakat dan juga didukung tersedianya bahan baku
yang melimpah di Indonesia, khususnya Jawa yaitu daun nyamplung yang sering
tidak dimanfaatkan. Dengan penelitian ini, dapat mengubah bahan baku yang tidak
bernilai menjadi bahan yang dapat dimanfaatkan dalam bidang kesehatan.
7
BAB III
TINJAUAN PUSTAKA
III.1. Teori Penunjang
III.1.1.Kondisi Tanaman Nyamplung (Calophyllum inophyllum) di Indonesia
Di Indonesia, tanaman nyamplung (Calophyllum inophyllum) tersebar di
berbagai daerah di tepian pantai, atau dataran rendah yang menjorok ke pantai.
Nyamplung merupakan salah satu jenis tanaman kehutanan yang mulai
dikembangkan penanamannya di Indonesia pada tahun 1950, sebagai pelindung
pantai dari abrasi, penahan angin dari laut ke darat, penahan gelombang pasang,
penahan tebing sungai dan pantai dari longsor, dan penjaga kualitas air payau.
Namun, tanaman dapat beradaptasi dengan baik pada ketinggian 100 - 350 mdpl.
Saat ini habitatnya tersebar dari hutan di pantai, tepi sungai, rawa-rawa hingga
hutan di pegunungan tanaman nyamplung banyak. Di daerah Jawa, tanaman ini
tumbuh liar, bercabang rendah dekat permukaan tanah, dan tumbuh berkelompok
(Balitbang Pertanian, 2015).
Namun FAO (2007) mengatakan bahwa, jumlah tanaman nyamplung turut
mengalami penurunan setiap tahunnya seiring dengan kondisi hutan bakau di
Indonesia yang semakin memprihatinkan, dimana 40% hutan bakau per tahun
mengalami kerusakan. Penyebab utama hilangnya hutan bakau di Indonesia
termasuk akibat konversi tambak udang yang dikenal sebagai “revolusi biru”
(Sumatra, Sulawesi dan Jawa Timur), penebangan dan konversi lahan untuk
pertanian atau tambak garam (Jawa dan Sulawesi) serta degradasi akibat tumpahan
minyak danpolusi (Kalimantan Timur). Selain fungsinya dalam menjaga stabilitas
pantai, tanaman nyamplung memiliki banyak manfaat yang besar baik sebagai
sumber energi nabati terbarukan maupun sebagai obat.
III.1.2.Persebaran Nyamplung (Calophyllum inophyllum) di Indonesia
Tanaman nyamplung mempunyai sebaran yang cukup luas di dunia yakni
meliputi Madagaskar, Afrika Timur, Asia Selatan dan Tenggara, Kepulauan
Pasifik, Hindia Barat, dan Amerika Selatan. Persebaran nyamplung di Indonesia
dapat dilihat pada Gambar III.1. yang meliputi daerah Sumatera Barat, Riau,
8
Jambi, Sumatera Selatan, Lampung, Jawa, Kalimantan Barat, Kalimantan Tengah,
Sulawesi, Maluku hingga Nusa Tenggara Timur dan Papua .Tanaman ini
mempunyai nama yang berbeda pada setiap daerah seperti eyobe (Enggano),
nyamplung (Jawa,Sunda, dan Makassar), samplong atau camplong (Madura),
punaga (Minangkabau dan Bali), kanaga (Dayak atau Panaga), mantau (Bima),
pantar (Alor), fitako (Ternate) dan masih banyak nama lain di berbagai daerah
(Balitbang Pertanian, 2015).
Menurut Leksono dkk. (2014) tanaman nyamplung di pulau Jawa pada
umumnya tumbuh di daerah pantai berpasir (0 m dpl.) juga pada tanah mineral
sampai ketinggian 150 m dpl. Nyamplung tumbuh paling dekat pada posisi 50 –
1000 m dari bibir pantai dengan kerapatan pohon sangat bervariasi. Peta sebaran
nyamplung di pulau Jawa pada umumnya berdekatan dengan pantai selatan dan
pantai barat pulau Jawa, yang mempunyai karakteristik fisik lahan dalam klasifikasi
sistem dataran laut dan pantai, sistem dataran, sistem bukit kapur, sistem pesisir
pantai yang bergelombang, tipe batuan sedimen pasir serta tipe batuan kapur yang
terbentuk dari endapan muara dan endapan vulkanik. Daerah penyebaran
nyamplung dapat dilihat pada Gambar III.I.
Gambar III. 1. Persebaran Tanaman Nyamplung (Calophyllum inophyllum ) di
Indonesia
9
III.1.3.Karakteristik Tanaman Nyamplung (Calophyllum inophyllum)
Nama ilmiah dari Calophyllum inophyllum diambil dari bahasa yunani Kalos,
yang berarti cantik dan Phullon yang berarti daun. Di Inggris, pohonnya dikenal
sebagai beautiful leaf (terjemahan dari bahasa yunani), Indian Laurel (karena
berasal dari India), Alexandrian Laurel, dan Beach Calophyllum (karena pohonnya
biasanya tumbuh di tepi pantai). Di Tahiti, pohon ini dinamakan ati dan buahnya
disebut tamanu. Di Samoa, pohon ini dikenal dengan nama fetau, damanu di Pulau
Fiji, dan te itai di Pulau Kirbati. Sedangkan di Indonesia, tanaman ini disebut
dengan Nyamplung, Penaga Laut di Malaysia, dan Puna di Pulau Lakshadweep.
Sedangkan di Hawaii tanaman ini dinamakan Kamani Tree dan dikenal dengan
sebutan Foraha Tree di Madagascar (Ling dkk., 2009).
Menurut Heyne (1987) tanaman nyamplung memiliki taksonomi sebagai
berikut:
Kingdom : Plantae (tumbuhan)
Subkingdom : Tracheobionta (berpembuluh)
Superdivisio : Spermatophyta (Menghasilkan Biji)
Divisio : Magnoliophyta (berbunga)
Kelas : Magnoliopsida (berkeping dua/dikotil)
Sub-Kelas : Dilleniidae
Ordo : Theales
Familia : Clusiaceae
Tanaman nyamplung mudah dibudidayakan, tumbuh baik pada ketinggian 0-
800 meter dpl seperti di hutan, pegunungan dan rawa-rawa, curah hujan antara
1000-5000mm per tahun, pH tanah 4-7,4, tumbuh pada tanah tandus, daerah pantai
yang kering dan berpasir atau digenangi air laut. Tinggi tanaman dapat mencapati
30 meter dengan diameter 0,8 meter, daun mengkilap, batang berwarna abu-abu
hingga putih, warna kayu bervariasi tergantung spesies. Tanaman nyamplung
berbuah sepanjang tahun terutama pada bulan Februari-Maret dan Agustus-
September di Indonesia dan di Hawaii pada bulan April- Juni dan Oktober-
Desember. Tanaman nyamplung memiliki daya tahan yang tinggi terhadap
lingkungan, ditemukan dalam jumlah populasi yang besar, dengan kisaran umur
10
yang lama (1-50 tahun), dan memiliki biji yang banyak (Friday dan Okano, 2006).
Untuk bagian-bagian dari tanman nyamplung ini dapat dilihat pada Gambar II.2.
Gambar III. 2. Bagian-bagian Tanaman Nyamplung (Calophyllum inophyllum)
III.1.4.Manfaat dan Kandungan dalam Tanaman Nyamplung (Calophyllum
inophyllum)
Tanaman nyamplung merupakan tanaman serba guna, mulai dari manfaat
pohonnya sebagai tanaman konservasi dan penghijauan sampai pada produk yang
dihasilkan yaitu kayu dan hasil hutan bukan kayu berupa biji yang dimanfaatkan
sebagai penghasil minyak nabati (Wibowo dan Hendra, 2011).
Menurut Ling dkk. (2009) tanaman nyamplung dapat berfungsi sebagai anti
bakteri, anti kanker, anti neoplastic, anti inflamasi, anti platelet, anti psikotik,
antiviral, photoprotective, molluscicidal, dan piscicidal. Pada Tabel III.1
merupakan manfaat tanaman nyamplung yang didapat dari berbagai sumber.
Manfaat tersebut didapatkan karena adanya metabolit sekunder yang
dihasilkan oleh tanaman nyamplung. Metabolit sekunder adalah senyawa organik
yang dihasilkan tumbuhan yang tidak memiliki fungsi langsung pada pertumbuhan,
perkembangan, maupun reproduksi tumbuhan, namun senyawa ini biasa digunakan
tanaman untuk mempertahankan diri dari kondisi lingkungan (Saifudin, 2014).
11
Tabel III. 1 Manfaat dan Kegunaan Tanaman Nyamplung (Calophyllum inophyllum)
Nama Bagian Tanaman Fungsinya dalam dunia medis
Dari Su dkk., 2008 Dari Ling dkk., 2009
Daun
Mengobati ruam kulit,
pembengkakan kaki,
merawat luka bakar, iritasi
pada mata, disentri,
migrain, dan vertigo
Mengobati penyakit
kulit, radang sendi,
linu panggul, dan
iritasi pada mata
Batang
Mengobati disentri,
kencing nanah, masalah
pencernaan, luka luar,
bisul, dan lain-lain.
Mengobati internal
haemorhage, sebagai
penyegar,
Buah/Biji
Mengobati nyeri lambung,
gatal-gatal, rematik, luka
bakar, kencing nanah,
arthritis, bisul, dan kurap.
Mengobati luka,
kusta, penyakit syaraf,
dan luka bakar.
Terdapat beberapa kelompok utama metabolit sekunder, yaitu senyawa
fenolik, terpenoid, steroid dan alkaloid.
a) Senyawa Fenolik
Senyawa fenolik adalah senyawa yang memiliki satu atau lebih gugus
hidroksil (OH) yang menempel di cincin aromatik. Dengan kata lain senyawa
fenolik adalah senyawa yang sekurang-kurangnya memiliki satu gugus fenol
(Gambar III.3), sedangkan senyawa yang memiliki gugus fenol lebih dari satu
disebut polifenol. Banyaknya variasi gugus yang mungkin tersubtitusi pada
kerangka utama fenol menyebabkan kelompok fenolik memiliki banyak sekali
anggota. Rincian klasifikasinya dapat dilihat pada Tabel.III.2.
12
Tabel III. 2. Klasifikasi Senyawa Fenol Berdasarkan Jumlah Atom Karbon
Struktur Kelas C6 Fenolik sederhana
C6-C1 Asam fenolat dan senyawa yang berhubungan lainnya
C6-C2 Asetofenon dan asam fenilasetat
C6-C3 Asam sinamat, sinamil aldehid, sinamil alkohol
C6-C3 Koumarin, isokoumarin, dan kromon
C15 Kalkon, auron, dihidrokalkon C15 Flavan
C15 Flavon C15 Flavanon
C15 Flavanonol
C15 Antosianidin C15 Antosianin
C30 Biflavonil C6-C1-C6,C6-C2-C6 Benzofenon, xanthone, stilben
C6,C10,C14 Kuinon C18 Betasianin
Lignan, neolignan Dimer atau oligomer Lignin Polimer
Tanin Oligoner atau polimer Phlobaphene Polimer
(Vermerris dan Nicholson 2006)
Flavonoid merupakan senyawa terbesar pada senyawa fenolik tumbuhan
yang memiliki struktur dasar yang dibangun oleh 15 atom C (C6‐C3‐C6).
Senyawa flavonoid dapat dibagi menjadi delapan jenis, yaitu flavan, flavanon,
flavon, flavonol, dihidroflavonol, flavan‐3‐ol, flavan‐4‐ol, dan flavan‐3,4‐diol
(Ramdani, 2005). Untuk macam-macam bentuk senyawa flavonoid dapat
dilihat pada Gambar III.4.
Pada penelitian yang telah dilakukan Ling dkk., (2009) menunjukan bahwa
tanaman Calophyllum inophyllum mengandung senyawa kumarin yang
mungkin dapat efektif dalam mengobati penyakit kanker dan menghambat
virus HIV. Menurut Lim (2012), dalam bukunya menurut Li dkk., (2007)
sedikitnya sembilan komponen telah di isolasi dari daun Calophyllum
inophyllum, diantaranya: 2hydroxy xanthone ; 4hydroxy xanthone;
1,5 dihydroxy xanthone; 1,7dihydroxyxanthone; 1, 3,5 – trihydroxy -2
methoxy xhantone; 6 -6 -deoxyjacaerubin; flavonoids, amentoflavone;
kaempferol -3-O-α-L-rhamnoside; dan quercetin-3-O-α-L-rhamnoside.
13
OH
Gambar III. 3.Gugus Fenol
O
O
O
(a) (b)
O
O
O
O
OH
O
OOH
(c) (d) (e)
O
OH
O
OH
O
OH
OH
(f) (g) (h)
Gambar III. 4. Struktur Senyawa (a) flavan, (b) flavanon, (c) flavon, (d) flavonol
(quarcetin), (e) dihidroflavonol, (f) flavan‐3‐ol, (g) flavan‐4‐ol, dan (h) flavan‐3,4‐diol
Menurut beberapa penelitian yang telah dilakukan, kandungan senyawa
bioaktif yang dapat diisolasi pada nyamplung cukup beragam untuk jenis
senyawa fenolik tetapi bukan flavonoid diantaranya xanthone (Yimdjo dkk.,
2004; Linuma dkk., 1994), kumarin (Su dkk., 2008), benzodipiranon (Khan
dkk., 1996), berikut penjelasan senyawa secara singkat:
1. Xanthone
Xanthone merupakan senyawa dengan kerangka dasarnya dua fenil
yang dihubungkan dengan jembatan karbonil dan oksigen. Xanthone
mempunyai kerangka dasar yang terdiri atas 13 atom karbon yang
membentuk susunan C6-C1-C6, bentuk strukturnya dapat dilihat pada
Gambar III.5. Biosintesis senyawa xanthone belum diketahui secara jelas
14
namun diduga masih berhubungan dekat dengan biosintesis senyawa
flavonoid dan stilbenoid. Hal ini bisa dilihat dari tipe oksigenasi dua jenis
cincin aromatik yaitu satu cincin aromatik(A) memperlihatkan ciri berasal
dari jalur sikimat dan satu cincin(B) lagi memperlihatkan ciri berasal dari
jalur asetat-malonat. Senyawa xanthone yang di isolasi dari tumbuhan
Calophyllum inophyllum ada yang terprenilasi dan ada juga yang tidak
terprenilasi. Kebanyakan senyawa xanthone yang diisolasi dari tumbuhan
ini menunjukkan adanya ciri khas, salah satunya adalah gugus hidroksi pada
C1. Kemungkinan posisi oksigenasi ditunjukkan pada Gambar III.6.
R
R
R
RO
R
R
R
R
O
Gambar III. 5. Bentuk Senyawa Xanthone
O
O
A C B
6
7
8
5 4
3
2
1
Gambar III. 6. Kemungkinan Posisi Oksigenasi Senyawa Xanthone
Senyawa xanthone yang telah diisolasi dari tumbuhan Calophyllum inophyllum
cukup banyak. Kebanyakan senyawa tersebut mengandung gugus tambahan
terutama gugus isoprenil.
2. Kumarin
Senyawa bahan alam yang juga banyak diisolasi dari tumbuhan
Calophyllum inophyllum adalah golongan kumarin (Gambar III.7). Biosintesis
senyawa kumarin berasal dari jalur sikimat, atau masih sejalur dengan golongan
fenil propanoid. Dari segi biogenetik, kerangka benzopiran-2-on dari kumarin
berasal dari asam-asam sinamat melalui orto-hidrolaksi. Asam orto-kumarat yang
dihasilkan setelah menjalani isomerisasi cis-trans mengalami kondensasi (Lenny,
2006). Ciri khas senyawa ini adalah adanya gugus lakton yang terbentuk dari asam
pada ujung gugus propan dengan hidroksi pada gugus fenil. Oksigenasi senyawa
kumarin pada cincin aromatiknya juga khas, yaitu berselang-seling. Strukur
15
senyawa turunan kumarin dilihat dari gugus yang terikat pada C4 dapat dibedakan
menjadi 4-metilkumarin, 4-fenilkumarin, dan 4-(n-propil) kumarin. Diantara
ketiganya senyawa kumarin dengan gugus fenil dan n-propil pada C4 merupakan
senyawa yang terbanyak ditemukan.
R
R
R
R
R
O O
Gambar III. 7. Bentuk Seyawa Kumarin
3. Benzodipiranon
Benzodipiranon merupakan senyawa turunan dari kromanon. Senyawa-senyawa ini
memiliki kerangka yang mirip dengan stilben dengan tambahan dua gugus prenil.
Untuk gugus benzodipiranon dapat dilihat pada Gambar III.8.
OO
OH O
R
R
R
H
Gambar III. 8. Betuk Senyawa Benzodipiranon
b) Senyawa Terpenoida
Terpenoid adalah senyawa yang tersusun dari kerangka isopren (C5) pada
Gambar III.9, yakni rantai beranggota lima karbon bercabang (branching)
metil pada karbon nomor 2 atau kelipatannya. Menurut Lenny (2006)
klasifikasi terpenoid ditentukan dari unit isopren atau unit C5 penyusun
senyawa tersebut. Penggabungan kepala dan ekor dari unit isopren dapat
membentuk monoterpenoid (10 unit karbon), sesquiterpenoid (15 unit karbon),
diterpenoid (20 unit karbon), triterpenoid (30 unit karbon), tetraterpenoid (40
unit karbon), dan politerpenoid.
CH3
CH2
CH2
Gambar III. 9. Gugus Isopren
16
Selain itu, penelitian oleh Ragasa, (2015) membuktikan bahwa ada beberapa
senyawa terpenoid yang berada pada tanaman nyamplung umumnya
merupakan triterpenoid Gambar III.10. meliputi friedelin, squalene,
canophyllic acid, canophyllalic acid, dan canophyllol. Berikut adalah beberapa
bentuk senyawa triterpenoid Gambar III.11.
O
OHOH
OH OH
R
OHOH
OH
H HH
Gambar III. 10. Bentuk Senyawa Triterpenoid dan gugus fungsi friedelin (R= CH3), canophyllalic acid (R= COOH) , dan canophyllol (R=CH2OH)
CH3CH3
CH3CH3
CH3
CH3CH3
CH3
CH3 CH3
COOH
CH3CH3
CH3CH3
OH
HH
H
H
(a) (b)
Gambar III. 11. Bentuk Senyawa (a) squalene (b) canophyllic acid
Triterpenoid merupakan golongan senyawa terpenoid yang terdiri dari 30
atom C atau 6 unit isopren. Triterpenoid dalam jaringan tumbuhan dapat
dijumpai dalam bentuk bebasnya, tetapi juga banyak dijumpai dalam bentuk
glikosidanya. Triterpenoid terbagi dalam struktur siklik dan asiklik.
Triterpenoid asiklik yang penting hanya squalene yang dianggap sebagai
senyawa antara dalam biosintesis steroid. Triterpenoid yang paling tersebar
luas adalah triterpenoid pentasiklik. Kerangka yang paling banyak dijumpai
pada senyawa golongan triterpenoid di alam adalah ursam, lupan, oleanan, dan
friedelin (Kristanti, 2008).
17
c) Senyawa Steroid
Steroid ditemukan pada Calophyllum inophyllum adalah sitosterol (Kumar
dkk., (1976); Goh dan Jantan, (1991) dan kolesterol (Ali dkk., 1999). Sterol
adalah steroid yang memiliki gugus hidroksi pada C3-nya. Sterol dijumpai
dalam bentuk bebas ataupun bergabung dengan glukosa membentuk glikosida
(sterolin) atau sebagai ester asam lemak. Sterol merupakan senyawa bahan
alam yang umumnya tersusun dari 27 atom karbon (Kristianti, 2008). Berikut
adalah gambar senyawa Steroid.
R3
R2
R1
(a)
CH3
CH3
CH3 CH3
CH3
OH
H H
H
H
CH3
OH
H H
H
H
CH3CH3
(b) (c)
Gambar III. 12. Bentuk Senyawa (a) Steroid (b) Sitosterol (c) Kolesterol
d) Senyawa Alkaloid
Alkaloid didefinisikan sebagai senyawa tanaman yang aktif secara
farmakologis, mengandung nitrogen berbentuk hetrosikli, serta dapat
memblokir saluran ion, menghambat enzim, atau mengganggu transmisi saraf,
menghasilkan halusinasi, kehilangan koordinasi, kejang-kejang, muntah, dan
mati (Tiwari dan Rana, 2015).
Menurut klasifikasi Hegnauer, yang didasarkan pada keduanya, jenis
nitrogen dan asal biokimia, tiga jenis utama alkaloid dibedakan menjadi tiga
yaitu alkaloid sejati yang berasal dari asam amino dan memiliki nitrogen dalam
cincin heterosiklik, protoalakloid yang berasal dari asam amino dan tidak
memiliki nitrogen dalam cincin heterosiklik dan alkaloid semu yang tidak
berasal dari asam amino tetapi memiliki cincin heterosiklik nitrogen (Mazen,
18
2010). Pada penelitian Susanto dkk., (2017) menyebutkan bahwa ada senyawa
alkaloid yang terkandung dalam tanaman nyamplung.
III.1.5. Metode Ekstrak Daun Nyamplung
Senyawa polar adalah suatu senyawa yang terbentuk akibat satu atom
mempunyai keelektronegatifan yang substansial lebih besar daripada yang lain.
Semakin elektronegatif suatu atom, semakin besar tarikannya terhadap ikatan
elektron. Hasilnya adalah suatu ikatan dengan distribusi rapat elektron yang tak
merata. Senyawa non-polar adalah suatu senyawa yang terbentuk akibar atom
dengan keelektronegatifan yang sama atau hampir sama membentuk ikatan
kovalen, dimana kedua atom menerapkan tarikan yang sama atau hampir sama
terhadap elektron ikatan. Umumnya, ikatan karbon-karbon dan ikatan karbon-
hidrogen adalah jenis ikatan nonpolar yang paling umum (Fessenden,1986).
Untuk mengidentifikasi kandungan senyawa polar dan non-polar dari daun
nyamplung, hal yang perlu dilakukan pertama kali adalah memisahkan antara
kandungan polar dan non-polarnya. Pemisahan ini berdasarkan solvent yang
digunakan. Pemilihan solvent tersebut berdasarkan polarity index. Polar atau non-
polar suatu senyawa dapat dilihat pada Tabel III.3.
Tabel III. 3. Polaritas Solvent
Relative
Polarity Formula Group Solvents
Non-polar R-H Alkanes Petroleum ethers, hexanes, ligroin
Ar-H Aromatics Toluene
R-O-R Ethers Diethyl ether
R-X Alkyl halides Trichloromethane,
chloroform
R-COOR Esters Ethyl acetate
R-CO-R Aldehydes, Ketones
Acetone, MEK
R-NH2 Amines Phyridine,
triethylamine
R-OH Alcohols MeOH, EtOH, IPA,
Butanol
R-COHN2 Amides Dimethylformamide
R-COOH Carboxylic Acid Ethanoic acid
Polar H-O-H Water
(Sadek , 2002)
19
Ekstraksi adalah proses pemisahan suatu atau beberapa zat dari suatu padatan
atau cairan dengan bantuan pelarut. Pelarut tidak atau hanya sebagian larut dengan
padatan atau cairan dengan kontak secara terus menerus agen aktif berpindah dari
campuran padatan/cairan (raffinate) menuju pelarut (extract). Setelah pencampuran
dua fase, proses pemisahan dilakukan dengan prinsip gravitasi atau dengan gaya
sentrifugal (Gamse,2004).
Menurut Yunitasari (2008), dalam penelitiannya menjelaskan tentang
pengaruh jenis solvent pada berbagai variasi jumlah tray dari 6-10 untuk
pengambilan minyak nyamplung dengan metode ekstraksi kolom. Dari hasil
percobaan, penulis menjelaskan bahwa semakin banyak jumlah tray maka semakin
cepat waktu yang dibutuhkan solvent untuk mengekstrak minyak. Pelarut yang
digunakan adalah antara n-Hexane dan Petroleum. Dari hasil percobaan, penulis
menjelaskan bahwa kondisi maksimum ekstraksi dicapai Petroleum pada tray
ketujuh, kemudian pada tray selanjutnya semakin menurun jumlah minyak yang
diperoleh. Sedangkan untuk n-Hexane, minyak yang diperoleh terus meningkat di
setiap kenaikan tray. Pada Tabel III.4. ditunjukan perbandingan beberapa kondisi
operasi ekstraksi.
III.1.6. Batchwise Solvent Extraction (BSE)
Metode ini dilakukan untuk menghilangkan pengotor sekaligus memurnikan dan
memisahkan antara fraksi polar dan nonpolar yang masih ada dalam crude ekstrak
dengan menggunakan prinsip perbedaan polarity. Crude ekstrak yang diperoleh dari
metode ekstraksi dicampurkan dengan pelarut polar dan non polar. Larut an
kemudian akan terpisah menjadi dua layer dimana dibagian atasnya merupakan
Non Polar Lipid Fraction (NPLF) yang kaya akan TG sedangkan layer bawah
disebut Polar Lipid Fraction yang kaya akan senyawa bioaktif. Aparamarta et al
(2016) menggunakan metode ini untuk memurnikan minyak nyamplung.
Kemurnian TG dengan metode batchwise solvent-solvent extraction berhasil
ditingkatkan mulai dari 70.8 menjadi 98.53 wt%. (2013)
20
Tabel III. 4. Kondisi Operasi untuk Berbagai Macam Proses Ekstraksi
Modified
Sokhlet
Extraction1
Ekstraksi
Soxhlet2 Maserasi3
Pressurized
Liquid
Extraction4
Pelarut
Umum yang
Digunakan
Heksana,
Ethyl acetate
Methanol, ethanol,
atau campuran etanol dan
air
Methanol, ethanol,
atau campuran etanol dan
air
CO2, Alkohol,
Dichloromethane-acetone
Temperatur
(oC) Dipanaskan
Tergantung pelarut
yang digunakan
Dapat
dipanaskan Dipanaskan
Modified
Sokhlet
Extraction1
Ekstraksi
Soxhlet2 Maserasi3
Pressurized
Liquid
Extraction4
Penggunaan
Tekanan
diatas 1 atm
Tidak bisa Tidak Bisa Tidak Bisa Bisa
(50-250 bar)
Waktu yang
Dibutuhkan 11-12 jam 3 – 18 jam 3-4 hari 5 menit
Volume
Pelarut
yang
Dibutuhkan
(ml)
350 150 – 200 Tergantung banyaknya
sampel
Mengurangi
penggunaan pelarut 30 mL/sampel
dibandingkan dengan ekstraksi
soxhlet
1) Fabian dkk., 2009; Gunawan dkk., 2008; Kasim dkk., 2009; Gunawan
dkk.,2013
2) Yunitasari dkk., 2008
3) Sasidharan dkk., 2011
4) Saleh dan Sanagi 2009
III.1.7. Metode Microwave-assisted Extraction (MAE)
Microwave-Assisted Extraction (MAE) atau ekstraksi dengan bantuan
gelombang mikro merupakan proses ekstraksi yang memanfaatkan energi yang
ditimbulkan oleh gelombang mikro dengan frekuensi 0.30-300 GHz dalam bentuk
radiasi nonionisasi elektromagnetik. Keuntungan MAE yakni aplikasinya yang luas
dalam mengekstrak berbagai senyawa termasuk senyawa yang labil terhadap panas.
21
Selain itu, laju ekstraksi yang lebih tinggi, konsumsi pelarut yang lebih rendah, dan
pengurangan waktu ekstraksi yang signifikan dibanding ekstraksi konvensional
(Liu, dkk, 2013). Dapat dilihat pada Gambar III.13 untuk perbandingan
pemanasan menggunakan microwave dan konvesional
Gambar III. 13.a) Perbandingan Temperatur Microwave dengan Pemanasan
Konvensional. b) Kondisi thermal Pemanasan pada Microwave dan Pemanasan Konvensional
MAE merupakan teknologi untuk mengekstrak material organik dengan
memperhatikan alternatif yang penting dalam teknik ekstraksi karena dapat
bermanfaat untuk mengurangi waktu ekstraksi dan penggunaan solvent,
selektivitas, pemanasan volumetrik, dan proses pemanasan yang terkontrol. Sebagai
tambahan, untuk mengurangi waktu ekstraksi, pengguaan pelarut dan konsumsi
energi, proses ini menunjukkan lebih banyak keuntungan seperti lebih efektif dalam
proses pemanasan, transfer energi yang lebih cepat, ukuran peralatan yang tidak
terlalu besar,serta laju pemanasan yang lebih cepat dan peningkatan yield (Liu, dkk,
2013).
Keunggulan dalam pemilihan microwave sebagai media pemanas karena
microwave bisa bekerja cepat dan efisien. Hal ini dikarenakan adanya gelombang
elektromagnetik yang bisa menembus bahan dan mengeksitasi molekul-molekul
bahan secara merata. Gelombang pada frekuesnsi 2500MHz (2,5 GHz) ini diserap
bahan. Saat diserap, atom-atom akan tereksitasi dan menghasilkan panas. Proses ini
tidak membutuhkan konduksi panas seperti oven biasa. Maka dari itu, prosesnya
22
bisa dilakukan sangat cepat. Disamping itu, gelombang mikro pada frekuensi ini
diserap oleh bahan gelas, keramik, dan sebagian jenis plastik. Pemanasan dengan
gelombang mikro lebih merata karena bukan mentransfer panas dari luar tetapi
membangkitkan panas dari dalam bahan tersebut. Pemanasannya juga dapat bersifat
selektif artinya tergantung dari dielektrik properties bahan. Hal ini akan menghemat
energi untuk pemanasan. Selain itu waktu reaksi pemanasan dengan gelombang
mikro jauh lebih cepat jika dibandingkan dengan waktu reaksi pemanasan
konvensional. Pemanasan dengan microwave memiliki panas yang hilang lebih
kecil dibandingkan dengan pemanasan konvensional. Hal ini menandakan bahwa
efisiensi energi pemansan menggunakan microwave lebih besar dibandingkan
pemanasan konvensional.
III.1.8. Gelombang Mikro (Microwave)
Gelombang mikro atau mikro gelombang (microwave) adalah gelombang
elektromagnetik dengan frekuensi super tinggi (Super High Frequency, SHF), yaitu
diatas 3GHz (3x109 Hz). Sebenarnya gelombang ini merupakan gelombang radio,
tetapi panjang gelombangnya lebih kecil dari gelombang radio biasa. Panjang
gelombangnya termasuk ultrashort (sangat pendek) sehingga disebut juga mikro.
Dari sinilah lahir istilah microwave. Gelombang mikro berada pada frekuensi 2.500
MHz (2,5 GHz) ini diserap oleh air, lemak, dan gula. Saat diserap, atom tereksitasi
dan menghasilkan panas. Proses ini tidak memerlukan konduksi panas seperti oven
biasa. Karena itulah prosesnya bisa dilakukan sangat cepat. Hebatnya lagi,
gelombang mikro pada frekuensi ini tidak diserap oleh bahan-bahan gelas, keramik,
dan sebagian jenis plastik. Bahan logam bahkan memantulkan gelombang ini.
Untuk Energi dengan jenis radiasi berbeda dapat dilihat pada Tabel III.5.
Pemanasan dielektrik terjadi melalui dua fenomena utama; polarisasi dipolar dan
konduksi ionik. Polarisasi dipole dihasilkan ketika dipol atau beban dalam molekul
cair berusaha untuk menyesuaikan diri dengan elektromagnetik lapangan yang
disebabkan oleh MW iradiasi. Hal ini menyebabkan gesekan dipole dan tabrakan
dan akhirnya menghasilkan pemanasan dielektrik. Dalam konduksi ionik, ion
molekul akan bergerak dibawah pengaruh medan elektromagnetik yang berubah
23
dan memberikan panas dari tingkat tabrakan cepat pada tingkat molekuler (Liu,
dkk, 2013).
Tabel III. 5. Energi dengan Jenis Radiasi Berbeda
Radiasi Frekuensi (Hz) Energi (eV)
Gamma 3.0 x 1020 1.24 x 106
X 3.0 x 1019 1.24 x 106
Ultraviolet 1.0 x 1015 4.1
Visible 6.0 x 1014 2.5
Infrared 3.0 x 1012 0.012
Microwave 2.45 x 109 0.0016
Radio frekuensi 1.0 x 106 4.0 x 10-9
(De Souza, 2015)
III.1.9. Identifikasi dan Analisa Senyawa Bioaktif
Pemisahan campuran menjadi komponen-komponennya adalah hal yang
penting dalam semua cabang kimia dan tidak kalah pentingnya dalam banyak
bidang lain di mana teknik-teknik kimia digunakan untuk memecahkan berbagai
macam masalah. Pemisahan untuk identifikasi dan karakterisasi umumnya dibagi
menjadi dua macam, yaitu metode kromatografi dan metode nonkromatografi.
Kromatografi adalah suatu metode pemisahan fisik, dimana komponen-komponen
yang dipisahkan didistribusikan di antara dua fasa, salah satu fasa tersebut adalah
suatu lapisan stasioner dengan permukaan yang luas, yang lainnya sebagai fluida
yang mengalir perlahan di sepanjang landasan stasioner (Day dan Underwood,
2002). Untuk metode kromatografi diantaranya adalah dengan TLC, GC-MS, dan
HPLC. Dalam penelitian ini metode yang digunakan adalah TLC dan GC-MS.
Sedangkan metode non-kromatografi mencakup immunoassay yang menggunakan
antibodi monoclonal (MAbs), phytochemical screening assay, Fourier-transform
infrared spectroscopy (FTIR), dan Spectrophotometry UV-Vis.
24
III.1.10. Metode Kromatografi
III.1.10.1. Thin Layer Chromatography (TLC)
Thin Layer Chromatography (TLC) merupakan metode yang digunakan untuk
menganalisa dan mengidentifikasi senyawa yang terdapat di dalam campuran. TLC
dapat digunakan untuk membantu menentukan jumlah komponen dalam suatu
campuran, mengidentifikasi senyawa dan kemurnian suatu senyawa. TLC memiliki
dua fase yaitu fase gerak dan fase diam. Fase diam biasanya terdiri dari adsorben
halus, contohnya silika (SiO2), atau alumina (Al2O3) yang digunakan dalam bentuk
lapisan tipis (sekitar 0,25 mm). Fase gerak terdiri dari pelarut organik yang mudah
menguap. Jenis adsorben yang biasa digunakan terdapat pada Tabel III.6.
Tabel III. 6. Jenis Adsorbent
Adsorbent
Paling Kuat
Paling Lemah
Silika Gel
Alumunium Oksida
Magnesium Karbonat
Kalsium Phospat
Selulosa
(Das, 1994)
TLC terdiri atas tiga langkah yaitu spotting, development, dan visualization.
Pada spotting, sampel akan ditotolkan pada plate TLC dalam jumlah yang kecil
dengan menggunakan micropipet. Pada development, senyawa-senyawa dalam
sampel akan terelusi dengan kecepatan yang tergantung pada sifat senyawa-
senyawa tersebut (kemampuan terikan pada fasa diam dan kemampuan larut dalam
fasa gerak). Senyawa non-polar akan lebih sedikit tertarik pada plate sehingga akan
menghabiskan waktu yang lebih banyak pada fase gerak. Senyawa ini akan
bergerak lebih cepat dan muncul lebih dekat dengan puncak dari plate. Sedangkan
senyawa polar akan lebih tertarik pada plate sehingga akan menghabiskan waktu
lebih sedikit pada fase gerak dan akan muncul lebih rendah pada plate. Pada
visualisasi, spot-spot dapat secara langsung diamati setelah proses development.
Namun karena pada umumnya suatu senyawa tidak berwarna, metode visualisasi
dibutuhkan. Misalnya pada silika gel dalam plate TLC yang akan menampilkan
25
dark spot di bawah sinar ultraviolet atau dengan menempatkan plate pada iodin
vapor.
Pada Gambar III.14. dapat dilihat bahwa semakin berjalannya waktu,
komponen yang terdapat pada larutan sampel akan terpisah. Pelarut terus bergerak
menuju atas dengan prinsip kapilaritas. Komponen berwarna hijau merupakan
senyawa yang kurang polar dibandingkan komponen berwarna merah karena lebih
dekat dengan puncak plate. Sedangkan komponen berwarna merah merupakan
senyawa yang lebih polar.
Gambar III. 14. Penggambaran Skema TLC
Analisis suatu senyawa dalam TLC biasanya dilakukan dengan
dibandingkan terhadap senyawa standarnya. Nilai Rf (Retardation factor)
digunakan untuk mengkuantitaskan perpindahan dari suatu material sepanajang
plate. Rf sebanding dengan jarak yang berpindah dari suatu substansi dibagi dengan
jarak yang berpindah dari suatu solvent. Biasanya nilainya diantara nol dan satu.
Umumnya efektif solvent memiliki nilai Rf antara 0,3-0,7. Secara ideal, nilai Rf
akan sama dari senyawa yang diberikan dengan menggunakan pelarut yang sama.
Secara praktis,perpindahan berdasarkan dari struktur dan ketebalan dari layer,
jumlah air tersisa, dan efek dari binding agents. Dapat dilihat pada Gambar III.15.
untuk penentuan Rf.
Gambar III. 15. Penentuan Retardation factor (Rf)
X Y
SOLVENT FRONT
CENTER SPOT
STARTING
POINT OF SPOT
26
Thin Layer Chromatography (TLC) ini adalah analisa kualitatif. Keuntungan
dengan menggunakan metode TLC adalah mudah, cepat, dan murah. Namun
terkadang juga ada masalah dengan metode ini, misalnya adalah sampel tidak
muncul yang kemungkinan dapat disebabkan karena sampel tidak cukup atau
dibutuhkan metode visualisasi yang berbeda.
Dari penelitian Iskandari (2010), TLC digunakan untuk menentukan tiap
langkah yang dilakukan pada proses kromatografi untuk isolasi senyawa bahan
seperti pemilihan sistem eluen dan monitoring jumlah komponen yang ada dalam
suatu fraksi. TLC juga digunakan untuk memonitoring kemurnian dari suatu
senyawa. Senyawa tunggal tersebut dimonitoring dengan uji TLC menggunakan
variasi eluen, jika spot dari beberapa elusi tetap satu, maka senyawa diduga murni.
Pada penelitian ini digunakan plat silika yang spesifik untuk senyawa aromatik
yaitu plat silika GF254. Reagen penyemprot yang digunakan adalah reagen umum
untuk mendeteksi adanya senyawa aromatik, yaitu Ce(SO4)2. Senyawa yang diduga
murni ini dielusidasi dengan spektrofometri IR, UV, H NMR, C NMR, C NMR
DEPT 90 dan NMR dua dimensi.
Praveena, dkk. (2013) menggunakan analisa TLC untuk mengetahui senyawa
yang ada pada ekstrak metanol-daun Calophyllum inophyllum pada pelarut yang
berbeda baik pada fase normal dan balik. TLC ini dilakukan dengan prosedur
standar untuk mendeteksi phytochemical, memonitoring progres dari kromatografi
kolom, dan mengetes homogenitas dari bahan yang terisolasi. Plat yang digunakan
untuk fase normal dan balik adalah plat silika gel 60 F254 (Mercks, Germany) yang
digunakan untuk fase diam. Pendeteksian phytochemical pada plate TLC setelah
observasi terlebih dahulu pada siang hari, kemudian dibawah sinar UV, dan dispray
dengan reagen vanilin-sulphuric acid (VS). VS reagen tersebut mengandung 5%
larutan methanol dari asam sulfat (larutan 1) dan 1% larutan methanol dari vanilin
(larutan 2). Pertama, plat disemprot dengan larutan 1 untuk membasahinya, diikuti
dengan larutan 2, dan kemudian dipanaskan 3-4 menit pada suhu 110oC dibawah
pengawasan. Steroid atau triterpenoid dan glycoside akan memberikan spot
berwarna biru, biru-violet, pink dan warna kuning dari flavonoid.
27
III.1.10.2. Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS)
GC-MS merupakan metode pemisahan senyawa organik yang menggunakan
dua metode analisis senyawa yaitu kromatografi gas (GC) untuk menganalisa
jumlah senyawa secara kuantitatif dan spektrometri massa (MS) untuk menganalisis
struktur molekul senyawa analit. Gas Chromatography (GC) menggunakan carrier
gas untuk membawa komponen sampel melewati packed column atau kolom
kapiler yang mengandung fase diam. Gas pembawa yang dipilih biasanya adalah
gas yang inert contohnya Helium yang bisa digunakan juga untuk deteksi MS. Fasa
diam yang digunakan bisa dalam bentuk solid atau immobilised polymeric liquid.
Prinsip pemisahan campuran dari GC berdasarkan perbedaan kecepatan
migrasi komponen-komponen penyusunnya. Ketika fase gerak membawa sampel
melewati fase diam, sebagian komponen sampel akan menempel ke fase diam dan
bergerak lebih lama dari komponen lain sehingga masing-masing komponen akan
keluar kolom dengan waktu yang berbeda (retention time). Pada GC, jika spektra
mengandung banyak senyawa, maka semakin banyak pula peak yang terbentuk.
Berdasarkan data waktu retensi yang sudah diketahui dari literatur, bisa diketahui
senyawa apa saja yang ada dalam sampel.
Mass spectrometer (MS) merupakan suatu instrumen yang didesain untuk
memisahkan ion-ion fase gas berdasarkan nilai mass to charge ratio (m/z). MS
memasukkan pemisahan dari charged species yang dihasilkan berdasarkan variasi
dari metode ionisasi, umumnya yang digunakan adalah Electron Impact (EI) dan
Chemical Ionisation (CI). Pemisahan dari fase ion dapat diperoleh dengan MS
menggunakan bidang elektrik atau magnetik yang akan membedakan ion. Pada
ionisasi EI dimana molekul analit diionisasi secara langsung melewati collision
dengan membombardir aliran elektron sehingga menghasilkan penghilangan
elektron untuk membentuk spesies kation radikal. Pada CI molekul analit diionisasi
melalui proses reaksi dengan mencharge reagen gas plasma menghasilkan baik
spesies anion atau kation berdasarkan kepolaran analit atau analiser.
Malarvizhi dan Ramakrishnan (2011) menggunakan analisa GC-MS untuk
mengetahui senyawa bioaktif dari daun Calophyllum inophyllum. Hasil dari
pembacaan GC-MS terdapat 17 senyawa teridentifikasi. Dari 17 senyawa yang
28
terisolasi, terdapat empat phytochemical yang terekam diatas 10% dari level peak
area, yaitu squalene (10,74%), 1-monolinoleoylglycerol trimethylsilyl ether
(11,80%), Androstan-1α-01-17- one, 2,3, isopropylidenedioxy - 4β – methyl-
(21,63%), 1-2- Benzene dicarboxylic acid, di isooctyl ester (28,11%). Dimana
cyclohexene muncul pertama kali dari kolom dengan retention time 10,83 menit.
III.2. Studi Hasil Penelitian Sebelumnya
Penelitian-penelitian tentang daun nyamplung (Calophyllum inophyllum) yang
telah dilakukan antara lain :
1. Pretto dkk. (2004)
Pretto dkk. Membuat suatu penelitian yang bertujuan untuk mencari fraksi
/ komponen yang bersifat sebagai antimikroba yang terdapat dalam Calophyllum
Brasiliensi. Prosedurnya adalah, bagian tanaman yang akan digunakan untuk
percobaan (akar, batang, daun, dan buah) dihilangkan kandungan airnya dan
dijadikan bentuk serbuk. Setelah itu kemudian bahan tersebut di maserasi dengan
menggunakan methanol selama 7 hari dan didiamkan pada suhu ruangan. Setelah
diambil larutan ekstraknya kemudian dievaporasi untuk menghilangkan sisa
campuran pelarut yang masih ada. Setelah itu kemudian crude exctract dilarutkan
dalam klorofom untuk memisahkan fraksi polar dan nonpolarnya. Fraksi polar dan
non-polar kemudian di uji kandungannya menggunakan TLC. Untuk menguji sifat
antimikroba ekstrak, digunakan beberapa mikroorganisme, diantaranya : Bacillus
Aureus, Enterobacter cloacae, Eschericia coli, Proteus mirabilis, Pseudomonas
Aeruginosa, Salmonella typhimurium, Staphylococcus aureus, Staphylococcus
saprophyticus, Staphylococcus agalactiae, Candida albicans, dan Candida
tropiccals. Dari hasil penelitian didapatkan bahwa dari ke empat bagian tanaman
tersebut, tanaman yang memiliki sifat antimikroba paling baik adalah pada bagian
daun.
2. Frederic Laure dkk. (2008)
Melakukan penelitian tentang Screening of anti-HIV-1 inophyllums by
HPLC-DAD of Calophyllum Inophyllum Leaf Exctract from French Polynesia
Islands.Penelitian ini menggunakan HPLC untuk menganalisa senyawa bioaktif di
29
ekstrak daun Calophyllum inophyllum. Hasilnya, di tiap-tiap daerah kandungan
bioaktifnya tidak seragam.
3. Prasad dkk. (2012)
Melakukan penelitian tentang Antislipidemic dan aktifitas antioksidan dari
senyawa yang diisolasi dari daun Calophyllum inophyllum. Daun Calophyllum
inophyllum ditumbuk hingga berbentuk serbuk. Serbuk daun di ekstrak dengan
95% ethanol dan dibiarkan pada suhu kamar selama 24 jam. Hasil ekstraksi lalu
dipekatkan menggunakan rotary evaporator pada suhu 400 C. Ekstrak ethanol di
fraksinasi dengan toluene dan air. Bagian yang larut di dalam Toluene dipisahkan
menggunakan corong pemisah dan dipekatkan sedangkan bagian aqeous
dilarutkan kembali dengan athyl asetat. Bagian yang larut di ethyl asetat
dipisahkan dan dipekatkan menggunakan rotary evaporator. Bagian aqeous
kemudian di fraksinasi dengan n-butanol. Tiap bagian yang larut di masing-masing
pelarut dilakukan analisa kromatografi menggunakan silica gel sehingga akan
didapatkan senyawa bioaktif yang bisa diisolasi. Komponen yang diisolasi adalah
calophyllic acid dan isocalophyllic acid, canophyllic acid, amentoflavone, dan
shikimic acid. Calophyllic acid dan isocalophyllic acid,calophyllic acid, serta
amentoflavone dapat menurunkan kadar lemak serta baik sebagai antioksidan.
4. Indrakumar dkk. (2012)
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui komponen phytochemical yang
terkandung dalam daun Calophyllum inophyllum. Daun Calophyllum inophyllum
segar dikeringkan terlebih dahulu selama 15 hari lalu diblender hingga halus.
Serbuk daun tersebut kemudian dilarutkan dalam 3 pelarut yang berbeda yaitu
Petroleum Eter, Methanol, dan Chloroform kemudian di ekstraksi menggunakan
soklet. Ekstrak yang dihasilkan kemudian di uji kandungan senyawanya
menggunakan Mayer’s test untuk uji alkaloids, Benedict’s test untuk uji
karbohidrat, Modified Borntrager’s test untuk uji glikosid, Froth test untuk uji
saponin, Xanthoproteic untuk uji protein, Alkaline reagent test untuk uji
flavonoids, deteksi steroid, anthraquinone oleh Harbone, dan deteksi diterpenes,
phenol dan kumarin oleh Mace.
30
5. Praveena dkk. (2013)
Penelitian ini bertujuan untuk menganalisa komponen fitokimia dalam daun
Calophyllum inophyllum. Serbuk daun Calophyllum inophyllum dimaserasi
menggunakan methanol selama 7 hari dalam labu alas datar. Ekstrak yang
dihasilkan kemudian disaring lalu dikentalkan dan dimasukkan dalam desikator.
Ekstrak yang terbentuk kemudian di uji menggunakan TLC (Thin Layer
Chromatography). Hasil analisa menyebutkan bahwa ekstrak daun tersebut
mengandung flavonoidal, glycosides, dan steroidal glycosides.
6. Susanto dkk. (2017)
Penelitian ini bertujuan menyelidiki adanya komposisi proksimat,
kandungan mineral, dan fitokimia senyawa yang terdapat pada daun Calophyllum
inophyllum. Serta isolasi dan identifikasi pyrene juga dilakukan. Daun
Calophyllum inophyllum diekstraksi dengan metanol dengan metode perkolasi.
Komposisi proksimat yang terdapat di daun Calophyllum inophyllum dianalisis
dengan metode standar. Kandungan mineral dalam tanaman ini dianalisis
menggunakan spektrofotometer serapan atom. Skrining dan analisis fitokimia
tanaman dilakukan dengan metode spektrofotometri. Metode pencucian dengan
karbon disulfida digunakan untuk mengisolasi senyawa dihydropyrene dari
ekstrak daun Calophyllum inophyllum. Hasil penelitian mengatakan bahwa daun
Calophyllum inophyllum dapat digunakan sebagai sumber serat yang baik. Serta
daun Calophyllum inophyllum berpotensi sebagai obat herbal karena kandungan
fitokimia.
7. Susanto dkk. (2018)
Mengetahui pengaruh tingkat polaritas pelarut pada pemisahan senyawa
xanthone dan coumarin yang terkandung dalam ekstrak daun Calophyllum
inophyllum. Ekstrak daun kasar diperoleh dengan metode perkolasi. Menggunakan
metode Liquid Liquid Extraction (LLE) yang berguna untuk memisahkan senyawa
xanthone dan coumarin. Dilakukan dengan menggunakan metanol sebagai
pelarut polar dan n-heksan sebagai pelarut non-polar dengan rasio pelarut 1.
Konsentrasi metanol dalam air yang digunakan adalah 20%, 50%, 80%, dan 100%.
Setiap fraksi yang diperoleh diuji secara kualitatif menggunakan Thin Layer
31
Chromatography (TLC) dan secara kuantitatif menggunakan Gas
Chromatography (GC) untuk menganalisis xanthone dan coumarin. Hasil
pemisahan terbaik diperoleh dengan menggunakan 50% metanol. Dalam hasil ini,
coumarin dan xanthone dipisahkan dalam fraksi metanol (81,18% recovery) dan
fraksi n-heksan (81,91% recovery).
8. Govindappa, 2018
Ekstaksi secara microwave dengan pelarut air menggunakan Daun
Calophyllum tomentosum yang tumbuh didaerah india membuktikan adanya
bioactive compounds yang memiliki kemampuan antibakteri, antioksidan,
antidiabetik, anti-inflamantori, serta anti-tirosin. Penelitian ini dilakukan dengan
pengujian ekstrak terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa, Eschericia coli,
Staphylococcus aureus, dan Klebsiella aerogenes.
II.5. Peta Jalan Penelitian
Laboratorium biokimia, jurusan teknik kimia FTI-ITS mempunyai topik
penelitian dibidang bioenergi, bahan-bahan aktif alamiah, teknologi pangan, dan
teknologi pengolahan biogas seperti pada table dibawah ini.
32
Topik Capaian 2011 2012 2013 2014 2015 2016 2017-2020
Bioenergi
(Biodiesel,
Bioetanol,
Biogas dan
Biohidrogen)
-Diversifikasi feedstock untuk produksi biodisel dari dedak
padi, buah xylocarpus dan nyamplung.
-Modifikasi proses produksi dan peralatan:
separasi, reaktor, and purifikasi.
-Feedstock menjadi biodiesel yang ekonomis:
bahan bakar dan ada produk sampingan.
Pengembangan
& Aplikasi
Teknologi
Biobased Energy
Produksi enzim untuk konversi lignocellulose menjadi gula Konversi Lignocelulose -> Gula -> bioetanol
-Diversifikasi feedstock untuk produksi bioetanol dari limbah
tapioka/onggok dan sorgum
- Pemilihan pelarut yang optimal pada proses ekstraksi broth
untuk pemisahan etanol dari glukosa yang belum terfermentasi
dan mengurangi beban proses destilasi
-Pemodelan produksi bioetanol dengan sistem proses terpadu
fermentasi-ekstraktif untuk mendapatkan kondisi yang optimal
-Modifikasi proses produksi dan sistem proses
fermentasi-ekstraktif dengan
-Feedstock menjadi bioetanol yang ekonomis
dengan keunggulan produktivitas dan mampu
saving energi.
- Rekayasa produksi bioetanol sistem proses
kontinyu fermentasi-ekstraktif dan destilasi
dilengkapi dengan adsorpsi
-Pengembangan produksi bietanol secara kontinyu
menggunakan teknik immobilisasi sel dan penggunakan
mikroorganisme yang handal/termutasi
- Rekayasa peningkatan produktivitas bioetanol dengan sistem
proses fermentasi-ekstraktif
Produksi enzim
selulase dan
xylanase
- Optimasi
aktifitas dan
stabilitas enzim
selulase dan
xilanase
- Optimasi proses
pretreatment alkali
- Optimasi degradasi
enzimatik
hemiselulosa dan
selulosa
- Optimasi proses pretreatment yang lain:
pretreatment asam, organic solvent, subcritical
dan supercritical extraction, serta pretreatment
biologis
- Optimasi proses fermentasi xilosa menjadi
etanol atau hidrogen
- Optimasi proses fermentasi glukosa menjadi
etanol atau hydrogen
33
- Kinetika degradasi
enzimatik selulosa dan
hemiselulosa
- Kinetika fermentasi etanol dan biohidrogen
Produksi dan Pemurnian biogas Pemurnian dan transportasi biogas
Natural
products
(Bahan-
bahan aktif)
-Karakterisasi dan identifikasi komposisi dedak padi
-Karakterisasi dan identifikasi komposisi buah xylocarpus
-Karakterisasi dan identifikasi komposisi buah nyamplung
-Modifikasi proses produksi dan peralatan:
separasi, reaktor, and purifikasi.
Pengembangan
& Aplikasi
Teknologi herbal
Teknologi
Pangan
-Karakterisasi dan identifikasi komposisi singkong
- Karakterisasi dan identifikasi mikroorganisme seperti yeast,
rhizopus oryzae, dan lactobacilus
- Kajian mutu produk dari fermentasi singkong dengan yeast,
rhizopus oryzae, dan lactobacilus
-Modifikasi proses produksi dan peralatan:
separasi, reaktor, and purifikasi.
Pengembangan
& Aplikasi
Teknologi
singkong
termodifikasi
Teknologi
Pengolahan
Limbah
Biologis
-Karakterisasi dan identifikasi fouling pada sistem proses
pengolahan limbah industri berkadar bahan organik dan
ammonia dengan teknik SMBR dan MBR
-Kajian fouling pada kombinasi proses lumpur aktif-
membran-adsorpsi untuk mengolah limbah B3
-Rekayasa pengolahan limbah industri berkadar
bahan organik dan ammonia dengan teknik
SMBR dan MBR
-Rekayasa pengolahan limbah industri berkadar
bahan organik, ammonia dan B3 dengan teknik
SMBR dan MBR yang dikombinasikan dengan
adsorpsi karbon aktif
Pengembangan
& Aplikasi
Teknologi
pengolahan
limbah biologis &
membran yang
handal
Riset Fundamental
Riset Terapan
Riset Industri
34
BAB IV
METODE
IV.1. Garis besar Penelitian
Tujuan dari penelitian ini adalah melakukan pemisahan senyawa squalene dari
daun nyamplung, mengetahui kondisi dan metode terbaik yang digunakan untuk
memisahkan senyawa squalene, dan mengetahui yield squalane yang dapat diisolasi dan
persen kemurniannya dengan metode Batchwise Solvent Extraction (BSE), dan
Microwave Assisted Extraction (MAE). Tahapan proses penelitihan terdiri secara
umum terdapat 3 tahap dapat dilihat di Gambar III.1 yaitu proses ekstraksi, proses
pemurnian, dan analisa. Untuk proses pertama yaitu ekstraksi daun nyamplung
menggunakan pelarut n-heksana metode maserasi. Proses yang kedua yaitu proses
pemurian terdapat 3 metode yaitu metode Batchwise Solvent Extraction (BSE),
Microwave Assisted Extraction (MAE), dan kombinasi kedua metode. Proses yang
terakhir adalah analisa yang terdiri dari analisa kualitatif TLC (Thin Layer
Chromatography), analisa kuantitatif menggunakan Gas Chromatography (GC), dan
nalisa kuantitatif menggunakan Gas Chromatography (GC-MS).
Gambar IV. 1. Tahapan proses Penelitihan
IV.2. Bahan dan Peralatan
IV.2.1. Bahan yang digunakan
1. Daun nyamplung (wilayah Ekowisata Edukasi Mangrove Wonorejo Surabaya, Jawa
Timur)
2. N-heksana (Merck, Germany)
3. Metanol (Merck, Germany)
4. TLC Silica gel 60 F254 (Merck, Germany)
5. Squalene ≥98%, liquid (Sigma Aldrich)
Proses
Analisa
Proses
Ekstraksi
Proses
Pemurnian
Daun
Nyamplung
35
1. Alat yang digunakan
2. Beaker Glass
3. Erlemeyer
4. Kertas saring
5. Kondensor
6. Labu distilasi
7. Magnetic Stirer
8. Batang Segitiga
9. Petri dish
10. Pipet Tetes
11. Tabung Reaksi
12. Termometer
13. UV-Vis
14. Peralatan MAE
Keterangan :
1. Microwave Oven
2. Reactor
3. Bahan Baku
4. Power Setting
5. Time Setting
6. Condensor
Gambar IV. 2.Alat untuk Microwave Assisted Extraction (MAE)
IV.3. Variabel Penelitian
Penelitian ini menggunakan variabel kontrol daun nyamplung (Calophyllum inophyllum).
Terdapat 2 proses yang divariabel yang ditetapkan yaitu proses ektraksi yang menggunakan
metode solid-liquid extraction (SLE) dan microwave assisted extraction (MAE) dan proses
36
pemurnian dengan menggunakan tiga metode batchwise solvent extraction (BSE), proses
microwave assisted extraction (MAE) dan proses kombinasi BSE-MAE. Hasil dari setiap
variabel yang ada nantinya akan dilakukan analisa berupa analisa Total Phenolic Compound
(TPC), Total Flavonoid Compound (TFC), Antioxidant Activity (AA), Thin Layer
Chromatography (TLC), dan Gas Chromatography (GC).
Pada proses ekstraksi untuk SLE telah ditetapkan dengan pemilihan pelarut heksana
dengan perbandingan Solid: Liquid adalah 1:3 (kg/L) dengan perendaman selama tiga hari dan
dilakukan pengulangan berdasarkan penelitihan sebelumnya yang dilakukan Danissa, dkk
(2019). Sedangkan untuk metode MAE Sedangkan pada proses pemurnian pemilihan pelarut
methanol dan heksana. Adapun dalam pemilihan pelarut berdasarkan hasil penelitian
sebelumnya. Menurut Aparamarta, dkk (2016) pelarut yang paling baik digunakan adalah
petroleum ether (PE) dan methanol dengan perbandingan massa petroleum ether : methanol
adalah 75 : 25 atau 3 : 1. Tetapi untuk saat ini dimodifikasi untuk menggunakan pelarut n-heksana.
Untuk Variabel bebas dapat dilihat pada Tabel IV.1 untuk proses batchwise solvent extraction
Tabel IV. 1 Variabel Penelitian Bacthwise solvent extraction
No Variabel
Perbandingan
Massa Crude :
Solvent
Perbandingan
Massa Heksana :
ME
Jumlah
stage
1
Crude
Nyamplung
(0,5 gr)
1 : 5 3 : 1 8
Pada proses ekstraksi metode microwave assisted extraction (MAE) menggunakan
Response Surface Methodology (RSM) dengan Box Behnken pada Design of Experiment (DOE)
menggunakan software minitab 18.1. Dalam hal ini continous factors yang digunakan adalah 15
dengan parameter-parameter yang digunakan sebagai berikut.
-Variabel Daun Nyamplung: Pelarutan = 1:10 – 1: 30 (gram:mL)
- Daya = 150 – 600 (Watt)
- Waktu = 5 – 15 (menit)
Untuk hasil run order dapat dilihat pada Tabel III.2.
37
Tabel IV.2. Variabel Penelitian Metode Microwave Assisted Extraction pada Proses Ekstraksi
Run
Order Perbandingan
Daun:Pelarut (gr/mL) Daya (Watt)
Waktu Ekstraksi
(menit)
1 1:10 150 10
2 1:30 150 10
3 1:10 600 10
4 1:30 600 10
5 1:10 375 5
6 1:30 375 5
7 1:10 375 15
8 1:30 375 15
9 1:20 150 5
10 1:20 600 5
11 1:20 150 15
12 1:20 600 15
13 1:20 375 10
14 1:20 375 10
15 1:20 375 10
Pada proses pemurnian metode microwave assisted extraction (MAE) menggunakan
Response Surface Methodology (RSM) dengan Box Behnken pada Design of Experiment (DOE)
menggunakan software minitab 18.1. Dalam hal ini continous factors yang digunakan adalah 15
dengan parameter-parameter yang digunakan sebagai berikut.
-Variabel Daun Nyamplung: Pelarutan = 1:10 – 1: 30 (gram:mL)
- Daya = 150 – 600 (Watt)
- Waktu = 5 – 15 (menit)
Untuk hasil run order dapat dilihat pada Tabel IV.3.
38
Tabel IV.3. Variabel Penelitian Microwave Assisted Extraction pada Proses Pemurnian
Run
Order Perbandingan
Daun:Pelarut (gr/mL) Daya (Watt)
Waktu Ekstraksi
(menit)
1 1:100 150 10
2 1:300 150 10
3 1:100 600 10
4 1:300 600 10
5 1:100 375 5
6 1:300 375 5
7 1:100 375 15
8 1:300 375 15
9 1:200 150 5
10 1:200 600 5
11 1:200 150 15
12 1:200 600 15
13 1:200 375 10
14 1:200 375 10
15 1:200 375 10
IV.4. Prosedur Penelitian
III.4.1. Ekstraksi Crude Non-polar Daun Nyamplung
Ekstraksi senyawa bioaktif daun nyamplung menggunakan pelarut N-heksana dengan
ekstraksi solid-liquid
a. Solid berupa bubuk daun nyamplung.
b. Pelarut yang digunakan yakni n-Heksana
c. Perbandingan solid:pelarut n-Heksana adalah 1:3 (kg/L). Sebanyak 3 kg dalam 9L
n-heksana direndam selama 3 hari dan disaring
39
d. filtrat hasil ekstraksi di distilasi untuk menghilangkan pelarut n-heksan sehingga
didapat crude non-polar yang kemudian di simpan pada suhu 4oC
Skema ekstrasi non-polar terlihat pada Gambar IV.3.
Gambar IV.3. Skema Esktraksi Crude Non-Polar
III.4.2. Proses Pemurnian Crude
a. Metode Batchwise Solvent Extraction (BSE)
Proses Pemurnian Non Polar Fraction (NPF) dan Polar Fraction (PF) dengan
batchwise solvent extraction (BSE) (Aparamarta dkk, 2016)
a. Massa crude n-heksana 0,5 gram.
b. Ekstraksi menggunakan corong pemisah.
c. Pelarut yang digunakan = n-hexane : methanol-air dengan rasio 75:25 (g/g).
d. Rasio massa total pelarut : crude minyak nyamplung = 5:1.
e. Ekstraksi hingga delapan stage.
Pada penelitian ini, dilakukan proses ekstraksi multistage batchwise solvent yang
N-heksana Distilasi
Serbuk daun nyamplung kering dimaserasi dengan pelarut
N-heksan
Saring Residu di oven 50oC
selama 8 jam
NPLF dalam
N-heksana Residu Solid
Crude n-heksana
Metode BSE Metode MAE Metode Kombinasi
MAE dan BSE
Analisa TLC, GC, GC-MS
40
bertujuan untuk lebih memurnikan squalene yang termasuk bagian dari senyawa non-polar.
Proses ekstraksi batchwise menggunakan sistem cross-current seperti pada Gambar IV.4.
Sistem ini dikatakan cross-current karena menggunakan pelarut polar baru untuk setiap proses
ekstraksinya hingga n-stage dan produk yang diharapkan bersifat non-polar akan terikut dalam
n-heksana. Jumlah campuran metanol yang ditambahkan selalu sama, yaitu sesuai
perbandingan yang digunakan. Gambar IV.5 merupakan skema proses batchwise.
Gambar IV.4. Sistem cross-current pada ekstraksi batchwise multistage
metanol metanol metanol
Crude
n-heksan
Fraksi 1 2 n
non-polar
Fraksi
polar
Fraksi
polar
Fraksi
polar
41
Gambar IV.5. Skema Proses Batchwise Solvent Extraction
b. Metode microwave assisted extraction (MAE)
Proses Pemurnian Non Polar Fraction (NPF) dan Polar Fraction (PF) dengan proses
microwave assisted extraction (MAE)
a. Massa daun nyamplung 1 gram
b. Pelarut n-heksana 100 mL, 200 mL, 300 mL
c. Variabel daya microwave 150, 375, dan 600 Watt
d. Waktu ekstraksi 5,10,15 menit
Setelah itu campuran dimasukkan ke corong pemisah dan diambil fraksi non polar.
Setelah itu dilakukan distilasi untuk senyawa non polar. Hasil yang didapat dilakukan analisa.
Untuk gambar alat metode ini dapat dilihat pada Gambar IV.6.
8 stages
42
Gambar IV.6. Skema Proses Microwave Assisted Extraction
c. Metode Kombinasi
Metode ini merupakan metode kombinasi antara MAE dan BSE. Prosesnya awalnya
sama dengan metode BSE mula-mula crude n-heksana 0,5 gram dilarutkan dengan pelarut n-
heksana 50mL, setelah itu diaduk dengan kecepatan 300rpm selama 15 menit pada suhu ruang.
Kemudian dilakukan ekstraksi MAE, crude diletakkan ke dalam microwave dengan variabel
daya (150, 375, dan 600 Watt). Campuran diaduk dengan variable waktu (5,10,15 menit).
Setelah itu campuran dimasukkan ke corong pemisah dan diambil fraksi non polar. Setelah itu
dilakukan distilasi untuk senyawa non polar. Setelah itu dilakukan pencuncian dengan metanol
hingga 8 stages. Hasil yang didapat dilakukan analisa. Untuk skema proses dapat dilihat pada
Gambar III.7.
43
Gambar IV.7. Skema Proses Kombinasi
IV.5. Analisa
IV.5.1. Analisa Total Phenolic Content (TPC)
Total kandungan fenolik pada tiap ekstrak dianalisa menggunakan metode Folin-
Ciocalteu oleh Bahorun (1996) dengan sedikit modifikasi. Membuat konsentrasi ekstrak
menjadi 1000mg/L dengan melarutkan 4 mg ekstrak dengan metanol 4 mL. Hasil pengenceran
ekstrak diambil 0,6 ml dan dicampur dengan 1,5 mL reagen Follin-Ciocalteu 10% (v/v) diaduk
8 stages
44
selama 5 menit. Kemudian tambahkan 4,5 mL natrium karbonat 6% (b/v) diaduk dan
didiamkan selama 2 jam pada suhu ruang dalam keadaan gelap. Setelah itu hasil reaksi dianalisa
dengan spektrofotometer pada panjang gelombang 760 nm.
Proses pembuatan larutan standar asam galat digunakan untuk kurva kalibrasi. Mula-
mula 20 mg asam galat diencerkan dengan akuades hingga 40 mL untuk membuat larutan induk
asam galat. Dibuat larutan standar asam galat dengan konsentrasi 0; 5; 10; 30; dan 60 mg/L
dengan mengambil masing-masing larutan induk asam galat sebanyak 0; 1; 2; 6; dan 12 ml dan
dimasukkan ke dalam labu takar ukuran 100 mL untuk dilakukan pengenceran. Diambil
masing-masing 1 mL larutan asam galat seperti langkah-langkah sebelumnya. Hasil dari analisa
masing-masing sampel ini dinyatakan dalam satuan mg Gallic Acid Equivalent (GAE) per gram
ekstrak daun nyamplung. Berikut ini disajikan skema analisa total kandungan fenolik pada
Gambar IV.8.
Gambar IV.8. Skema Analisa Total Kandungan Fenolik Metode Folin-Ciocalteu
IV.5.2. Analisa Total Flavonoid Content (TFC)
Total flavonoid pada tiap ekstrak dianalisa menggunakan metode AlCl3 oleh Bahorun
(1996) dengan sedikit modifikasi. Membuat konsentrasi ekstrak menjadi 1000mg/L dengan
melarutkan 4 mg ekstrak dengan metanol sebanyak 4 mL. Hasil pengenceran ekstrak diambil
0,75 mL dan dicampur dengan 0,375 mL akuades dan 0,225 mL NaNO3 % (b/v). Kemudian
Melakukan analisa dengan spektrofotometer pada panjang
gelombang 760 nm.
Melakukan pengenceran pada tiap ekstrak dengan metanol
Mereaksikan hasil pengenceran ekstrak dengan reagen FC
Mereaksikan campuran reagen dan ekstrak dengan natrium
karbonat
Mendiamkan hasil reaksi pada suhu ruang dalam keadaan gelap
45
dimasukkan ke dalam inkubator shaker dengan kecepatan 100rpm. Kemudian tambahkan 0,45
mL AlCl3 10%(b/v) diamkan selama 5 menit. Setelah itu tambahkan 15 mL NaOH 4% (b/v)
dan 0,825 mL akuades. Setelah itu hasil reaksi dianalisa dengan spektrofotometer pada panjang
gelombang 319 nm
Prosedur pembuatan larutan standar quercetin digunakan sebagai kurva kalibrasi. Mula-
mula 50 mg quercetin diencerkan dengan 100 mL akuades untuk membuat larutan induk
quercetin. Dibuat larutan standar quarcetin dengan konsentrasi 0; 25; 50; 125; dan 250 mg/L
dengan mengambil masing-masing larutan induk quercetin sebanyak 0; 5; 10; 25; dan 50 mL
dan dan diencerkan hingga 100 mL dengan akuades menggunakan labu takar. Diambil masing-
masing 1 mL larutan standar quercetin dan direaksikan dengan metode kalorimetrik alumunium
klorida seperti langkah-langkah sebelumnya. Hasil dari analisa metode ini dinyatakan dalam
satuan mg Quercetin Equivalent (QE) per gram ekstrak daun nyamplung. Skema analisa total
kandungan flavonoid pada Gambar IV.9.
Gambar IV.9 Skema Analisa Total Kandungan Flavonoid
IV.5.3. Analisa Antioxidant Activity (AA)
Analisa antioksidan pada tiap ekstrak dianalisa menggunakan metode Asorbic Acid oleh
Klein dan Perry (1982) dengan sedikit modifikasi. Mengambil 100 mg diekstrak dengan 10ml
Melakukan analisa dengan spektrofotometer pada panjang
gelombang 319 nm
Melakukan pengenceran pada tiap ekstrak dengan metanol
Mereaksikan hasil pengenceran ekstrak dengan Natrium Nitrat
dan AlCl3
Mendiamkan campuran reaksi selama 5 menit kemudian
dilanjutkan penambahan dengan natrium hidroksida dan akuades
Mendiamkan hasil reaksi pada suhu ruang dalam keadaan gelap
46
dari 1% Asam metafosforik selama 45 menit pada suhu kamar. Kemudian menyaring dengan
kertas saring Whatmann No.4. Hasil filtrat diambil 1 mL dan dicampur dengan 2,6-
dichlorophenolidophenol ditunggu selama 30 menit. Setelah itu hasil reaksi dianalisa dengan
spektrofotometer pada panjang gelombang 515nm
Prosedur pembuatan larutan standar quercetin digunakan sebagai kurva kalibrasi. Mula-
mula 50 mg quercetin diencerkan dengan 100 mL akuades untuk membuat larutan induk
quercetin. Dibuat larutan standar quarcetin dengan konsentrasi 0; 25; 50; 125; dan 250 mg/L
dengan mengambil masing-masing larutan induk quercetin sebanyak 0; 5; 10; 25; dan 50 mL
dan dan diencerkan hingga 100 mL dengan akuades menggunakan labu takar. Diambil masing-
masing 1 mL larutan standar quercetin dan direaksikan dengan metode kalorimetrik alumunium
klorida seperti langkah-langkah sebelumnya. Hasil dari analisa metode ini dinyatakan dalam
satuan mg Asorbic Acid (AA) per gram ekstrak daun nyamplung.
IV.5.4. Analisa Thin Layer Chromatography (TLC)
Tiap fraksi yang didapatkan kemudian diuji kandungan komponennya menggunakan
TLC (Thin Layer Chromatography). TLC digunakan untuk menguji secara kualitatif. Sebelum
dilakukan uji TLC, mula-mula kertas TLC yang telah ditetesi oleh sampel direndam dalam
mobile phase dengan kadar hexane:etil asetat:asam asetat sebesar 80:20:1 (v/v/v). Perendaman
dalam mobile phase dilakukan dalam botol tertutup rapat. Pada saat perendaman, tinggi mobile
phase tidak diperbolehkan melebihi area yang telah ditentukan pada kertas TLC. Setelah
perendaman, kertas TLC kemudian dikeringkan pada suhu ruangan lalu dilakukan pewarnaan
menggunakan iodin. Pelat TLC yang telah direndam dalam mobile phase tersebut dimasukkan
dalam botol yang berisi iodin hingga terbentuk spot-spot pada kertas TLC. Fungsi dari iodin
adalah untuk memberi warna pada sampel yang telah diteteskan pada pelat TLC tersebut. Pada
pembacaan pelat TLC, selain menggunakan iodin, dapat juga menggunakan lampu UV, dengan
cara setelah setelah pelat TLC direndam dalam mobile phase, pelat TLC disinari dengan
menggunakan alat UV (UVITEC Cambridge) dengan menggunakan lampu UV gelombang 254
dan 365 nm.
IV.5.5. Analisa Gas Chromatography (GC)
Kandungan xanthone, coumarin dan friedelin dalam tiap fraksi dianalisa dengan GC.
Kurva kalibrasi standar eksternal diperoleh dengan 0,2-20 mg standar murni. Analisa
47
kromatografi dilakukan pada pelat TLC dan Shimadzu GC-2010 (Kyoto, Japan) Gas
Chromatography yang dilengkapi dengan Flame Ionization Detector. Separasi dilakukan
dengan DB-5HT (5%-phenyl)- methylpolysiloxane non-polar column (15m x 0,32mm i.d.;
Agilent Tech. Palo Alto, California). Temperatur injektor dan detector diset pada suhu 370ºC.
Temperatur kolom dimulai pada 80ºC. Sebanyak 20 mg sampel dilarutkan dalam 1mL etil
asetat, dan 1 μL sampel diambil dan diinjeksikan ke dalam GC.
IV.5.6. Analisa Gas Chromatography- Mass Spectrometry (GC-MS)
Analisis GC-MS digunakan oleh Agilent 6890 sistem GC dengan Agilent 6971 detektor
selektif massa inert (Agilent Tech. Palo Alto, California, USA). Pemisahan terjadi kolom
kapiler, HP5 5% fenilmetilsiloksana non-polar kolom (30 000 mm × 0,32 mm id, dengan
ketebalan lapisan fase diam 0,25 mm. Suhu oven diatur pada 800C dan dipertahankan selama
5 menit. Kemudian, oven suhu dinaikkan 150C / mnt ke suhu 3000C dan naik selama 2 mnt.
Gas pembawa yang digunakan adalah helium ultrapure (99,999%) .Suhu untuk injektor,
antarmuka, dan sumber ion masing-masing adalah 310, 280 dan 230 _C. Volume injeksi adalah
1 mL, menggunakan model dengan inlet split 1:10, dengan laju aliran gas di kolom pada 1,3
mL / menit.
IV.6. Susunan Organisasi Tim Peneliti / Pelaksana dan Pembagian Tugas
NO Nama / NIDN Instansi
Asal
Bidang
Ilmu
Alokasi
Waktu
(Jam/minggu)
Uraian Tugas
1 Hakun Wirawasita
Aparamarta /
0022097808
ITS T Kimia 21 Mengkoordinasi, melakukan
kroscek data dan penulisan
serta melakukan analisa GC,
GC-MS beserta validasinya
2 Setiyo Gunawan /
0023037604
ITS T Kimia 21 Mengkoordinasi experiment
dan analisa GC serta
melakukan analisa TPC,
TFC, Antioxidant Activity
pada masing-masing bahan
baku.
48
BAB V
JADWAL
V.1. Jadwal Penelitihan
Berikut adalah rencana jadwal penelitihan yang disajikan pada table berikut:
No. KEGIATAN Bulan ke-
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
1. Studi Pustaka
2. Persiapan Bahan dan Alat
3. Ekstraksi Crude n-heksana
4. Proses Pemurnian
Squalene dengan Metode
Batchwise
5. Proses Pemurnian
Squalene dengan Metode
Microwave
6. Proses Pemurnian
Squalene dengan Metode
Kombinasi
7. Analisa TLC
8. Analisa GC
9 Analisa GC-MS
10 Pengolahan Data
11 Pembuatan Laporan
12. Penulisan jurnal
13. Seminar dan Publikasi
Jurnal
V.2. Anggaran Biaya
NO
Jenis Pengeluaran Biaya yang diusulkan (Rp)
1 Bahan Habis pakai 21.315.000
2 Analisa 7.250.000
3 Publikasi dan Penggandaan Laporan 21.435.000
TOTAL 50.000.000
49
Berikut adalah rincian dari anggaran biaya
1. Bahan Habis Pakai
Material Item Satuan
Harga
satuan (Rp)
Total
(Rp)
Daun Nyamplung 10 Kg 10,000 100,000
Hexane 50 L 75,000 3,750,000
Methanol 30 L 25,000 750,000
Kertas TLC 1 pak 3,475,000 3,475,000
Aluminium foil 3 buah 22,000 66,000
Plastic wrap 3 buah 20,000 60,000
Standar Squalene 100mL 1 pak 4,500,000 4,500,000
Labu distilasi 1 L 1 buah 250,000 250,000
Masker, 1 box 1 box 25,000 25,000
Botol sampel 10 ml 100 biji 1,000 100,000
Botol sampel 200 ml 100 biji 2,000 200,000
Kondensor reflux 2 buah 250,000 500,000
2,6 dichloindophenol 1 buah 3,200,000 3,200,000
standar asorbic acid 100gram
1 buah 160,000 160,000
Stirring bar 3 buah 100,000 300,000
Kertas Whatman No 4 filter
1 buah 295,000 295,000
Cawan 100mL 10 buah 25,000 250,000
Tissue 10 rol 1 pak 39,000 39,000
Methaphosporic Acid 100gram
1 pak 1,470,000 1,470,000
Etil Asetat 1 liter 100,000 100,000
Asam Asetat 5 liter 220,000 1,100,000
NaHCO3 100gram 1 pak 50,000 50,000
Labu Tiga Leher 1000mL 1 buah 575,000 575,000
SUB TOTAL 21,315,000
2. Analisa
Material Item Satuan
Harga
satuan (Rp)
Total (Rp)
Analisa GC-MS 4 sampel 500,000 2,000,000
Analisa GC 50 sampel 75,000 3,750,000
Operator TPC 50 sampel 10,000 500,000
Operator TFC 50 sampel 10,000 500,000
50
Operator Antioxidant Activity
50 sampel 10,000 500,000
SUB TOTAL 7,250,000
3. Publikasi dan Penggandaan Laporan
Material Item Satuan Harga satuan
(Rp)
Total (Rp)
Publikasi Internasional 1 Publikasi 15,000,000 15,000,000
Biaya Perjalanan Seminar 3 orang 2,000,000 6,000,000
Tinta (Hitam, Biru, Merah,
Kuning) 4 Botol 50,000 200,000
Kertas HVS A4 80gram 5 Rim 47,000 235,000
SUB TOTAL 21,435,000
TOTAL ANGGARAN YANG DIPERLUKAN (Rp) 50,000,000
51
DAFTAR PUSTAKA
(1) Ghimire GP, Thuan NH, Koirala N, Sohng JK. 2015. Advances in biochemistry and
microbial production of squalene and its derivatives. J Microbiol Biotechnol.;26(3):441-
451. doi:10.4014/jmb.1510.10039
(2) A. Andries ,̧ I. Popa, N. Elena B˘abeanu, S. Nit¸̆ a, and O. Popa, 2014. “Squalene- natural resources and applications,” Farmacia, vol. 62, no. 5, pp. 840–862,
(3) GUNES F. Medical use of squalene as a natural antioxidant. 2013 J Marmara Univ Inst Heal Sci.;3(4):1. doi:10.5455/musbed.20131213100404
(4) Ronco Alvaro, De Stéfani Eduardo. 2013.Squalene: a multi-task link in the crossroads
of cancer and aging. Funct Foods Heal Dis.;3(12):462. doi:10.31989/ffhd.v3i12.30 (5) Lozano-Grande MA, Gorinstein S, Espitia-Rangel E, Dávila-Ortiz G, Martínez-Ayala
AL. 2018. Plant Sources, Extraction Methods, and Uses of Squalene. Int J Agron.;2018.
doi:10.1155/2018/1829160
(6) Ling K.H., Kian C.T., dan Hoon T.C.. 2009.A Guide toMedicinal Plant. Singapore
World Scientific: 32-33.
(7) Chavan SB, Kumbhar RR, Deshmukh RB. 2013. Callophyllum Inophyllum Linn
("honne") Oil, A source for Biodiesel Production. Res J Chem Sci.;3(11):24-
31. www.isca.me.
(8) Giesen, W., Wulffraar, S., Zieren, M., dan Scholten, L., 2006. Mangrove Guidebook for Southeast Asia. Thailand: RAP REPUBLICATION.
(9) Prasad Janki., Shrivastava Atul., Khanna A.K., Bhatia G., Awasthi S.K., Narender, T.
2012. Antidyslipidemic and antioxidant activity of the constituents isolated from the leaves of Calophyllum inophyllum. Phytomedicine Vol 19, 1245-1249.
(10) Mutiara Novianti, Qurrotul Aini, Irma Fadhila Putri, Triana Kusumaningsih. 2015.
ANTIBACTERIAL ACTIVITY TEST OF EXTRACT NYAMPLUNG (Calophyllum
inophyllum Linn.) LEAVES. ALCHEMY jurnal penelitian kimia, vol. 11 (2015), no. 2,
hal. 200-210
(11) Aparamarta, H.W, Saputra T, Clarantika A, Ju Y.H, dan Gunawan S., 2016. Separation
and Purification of Triacylglycerols from Nyamplubg (Calophyllum inophyllum) Oil by Batchwise Solvent Extraction. I&EC Research, hal 3113-3119.
(12) Yohed I, dan Maulinda A., 2017. Pengaruh Jenis Pelarut Terhadap Total Phenolic
Content, Total Flavonoid Content dan Antoksidan Ekstrak Daun Nyamplung. Surabaya: Departemen Teknik Kimia FTI-ITS.
(13) Danissa H Ardhyni, dan Putri S Sholehah, 2019. Efektivitas Fraksinasi Senyawa Bioaktif Terhadap Aktivitas Antibakteri Daun Nyamplung (Calophyllum inophyllum). Surabaya: Departemen Teknik Kimia FTI-ITS.
(14) Balitbang Pertanian. 2015 .Nyamplung Calophyllum inophyllum L. Bahan Bakar
Nabati. Badan Penelitian dan Pengembangan Pertanian. Jakarta Selatan
(15) FAO. 2007.Mangroves of Oceania 1980-2005. Ctry. Reports, 155 pages.
(16) Leksono, B.; Windyarini, E.; Hasnah, T. M. 2014.Budidaya Nyamplung (Calophyllum
Inophyllum L.) Untuk Bioenergi Dan Prospek Pemanfaatan Lainnya. Direct 1–46.
(17) Ling K.H., Kian C.T., dan Hoon T.C.. 2009.A Guide toMedicinal Plant. Singapore
52
World Scientific:,32-33.
(18) Heyne K.,1987. Tumbuhan Berguna Indonesia Jilid 3. Jakarta Departemen Kehutanan
(19) Friday, J.B. dan Okano, D. 2006. Calophyllum inophyllum (Kamani),College of
Tropical Agriculture and Human Resources. Hawai’i: University of Hawai’i.
(20) Wibowo, S., dan Hendra, D. 2011. Manfaat Tanaman Nyamplung dan Prospek
Pengembangannya. Sumatera : Balai Penelitian Kehutanan.
(21) Saifudin A.. 2014 Senyawa Alam Metabolit Sekunder. Yogyakarta: Deepublish. ,
(22) Su, X.-H.; Zhang, M.-L.; Li, L.-G.; Huo, C.-H.; Gu, Y.-C.; Shi, Q.-W. 2008, Chemical
Constituents of the Plants of the Genus Calophyllum. Chem. Biodivers. 5 (12), 2579–
2608. https://doi.org/10.1002/cbdv.200890215.
(23) Lim, T. K. 2012 Calophyllum Inophyllum. In Edible Medicinal And Non-Medicinal
Plants; Springer Netherlands: Dordrecht,; Vol. 2, pp 7–20. https://doi.org/10.1007/978-
94-007-1764-0_2.
(24)) Li Y.Z., Li Z.L., Hua H.M., Li Z.G., dan Liu M.S., 2007. Studies on flavonoids from
stems and leaves of Calophyllum inophyllum . J Chin Materia Medica.. 32, 692–694
(25) Vermerris W., dan Nicholson R. 2006. Phenolic Compound Biochemistry. Netherlands:
Springer.
(26) Ramdani. 2016. Senyawa Kimia Alam Terpenoid. Tarbawi:Jurnal ilmu pendidikan.
(27) Yimdjo M.C., Azebaze A.G., Nkengfack A.E., Meyer A.M., Bodo B., dan Fomum Z.T.
2004.Antimicrobial and Cytotoxic Agents from Calophyllum inophyllum.
Phytochemistry. Vol 65, 2789-2795
(28) Linuma M., Tosa H., Tanaka T., dan Yonemori S., 1994. Two Xanthones from Root
Bark of Calophyllum inophyllum. Phytochemistry .. 35, 527-532.
(29) Khan N.U., N Parveen., M.P Singh., R Singh., dan B Achari. 1996.Two Isomeric
Benzodipyranone Derivatives from Calophyllum inophyllum. Phytochemistry., 42,
1181-1183.
(30) Lenny, S.; Ssi, M. 2006. Karya Ilmiah Senyawa Terpenoida Dan Steroida.
(31) Ragasa, C. Y.; Jr, V. E.; Reyes, M. M. D. L.; Emelina, H.; Brkljača, R.; Urban, S.
2015. Triterpenes from Calophyllum Inophyllum Linn . No. August.
(32) Kristanti A.N. 2008.Buku Ajar Fitokimia Laboratorium Kimia Organik Jurusan Kimia-
FMIPA. UNAIR ,Surabaya,Airlangga Universuty Press.
(33) Kumar, V.; Ramachandran, S.; Sultanbawa, M. U. S. Xanthones and Triterpenoids
from Timber of Calophyllum Inophyllum. Phytochemistry 1976, 15 (12), 2016–2017.
(34) Goh, S.H., dan I, Jantan. 1991A Xanthone from Calophyllum inophyllum.
Phytochemistry.. 30, 366-367.
(35) Ali, M.S., S. Mahmud., S, Parveen., V.U. Ahmad, dan G.H. Rizani. 1999. Epimers from
Leaves of Calophyllum inophyllum. Phytochemistry. 50, 1385-1389.
(36) Kaur H Tiwari, P., Kumar, B., Kaur, M., dan Kaur G. 2011. Phytochemical Screening
And Extraction: A Review. International Pharmaceutica Sciencia. 1, 1, 98-106.
(37) Mazen A. El-Sakka Dr. 2010.PHYTOCHEMISTRY (3) ALKALOIDS. Third Edition Al
Azhar University. Faculty of Pharmacy. Department of. Pharmacognosy.
53
(38) Susanto, D. F.; Aparamarta, H. W.; Widjaja, A.; Gunawan, S. 2017. Identification of
Phytochemical Compounds in Calophyllum Inophyllum Leaves. Asian Pac. J. Trop.
Biomed. 7 (9), 773–781. https://doi.org/10.1016/j.apjtb.2017.08.001.
(31) Fessenden J. R. 1986. Kimia Organik Edisi Ketiga Jilid 1. Jakarta: Erlangga.
(32) Sadek, P. 2002.. The HLPC Solvent Guide. United States of America: Wiley of
Interscience.
(33) Gamse, T. 2004.Extraction: Liquid-Liquid, Solid-Liquid, High Pressure. Inffeledgasse:
Graz University of Technology.
(34) Fabian C., Gunawan S., Kasim N.S., Chiang C.L., dan Ju Y. H., 2009. Separation of
Nonpolar Lipid from Soybean Oil Deodorizer Distillate by Stirred Batch-Wise Silica
Gel Adsorption-Desorption. Separation Science and Technology. 44:7. 1621-1637
(35) Gunawan, S., Fabian, C., Ju, Y. H., 2008.. Isolation and Purification of Fatty Acid
Steryl Esters from Soybean Oil Deodorizer Distillate. Ind-Eng-Chem Rex. 47, 7013-
7018.
(36) Kasim, N. S., Gunawan, S., dan Ju, Y. H.,. 2009. Isolation and Identification of
Steroidal Hydrocarbons in Soybean Oil Deodorizer Distillate. Elsivier. Food
Chemistry. 117, 15-19.
(37) Gunawan, S., Jeng, B. R., Ju, Y. H., 2013.. Regeneration of Silica Gel for Separation
of Squalene and Steryl Esters from Soybean Oil Deodorizer Distillate. International
Review of Chemical Engineering. Vol. 5, N.2
(38) Sasidharan, S., Chen, Y., Saravanan, D., Sundram, K. M., dan Latha, L. Y. 2011.
Extraction, Isolation, and Characterization of Bioactive Compounds from Plants
Extract. Afr J Tradit Complement Altern Med. 8(1), 1-10
(39) Saleh, N. M., Sanagi, M. M., 2009. Comparison of Pressurized Liquid Extraction with
Soxhlet Extraction in the Determination of Polycyclic Aromatic Hydrocarbons in Soil.
The Malaysian Journal of Analytical Sciences. Vol 13 No 1, 141-145.
(40) Liu W., Yin P., Liu X., Chen W., Chen H., Liu C., Qu R., Xu Q., 2013. Microwave
Assisted Esterification of Free Fatty Acid Over a Heterogeneous Catalyst for Biodiesel
Production. Energy Conversion and Management. Volume 76, pp. 1009– 10014.
(41) Day, R.A. dan Underwood, A.L. 2002.Analisis Kimia Kuantitatif Edisi Keenam.
Jakarta: Erlangga.
(42) Das, Dipak Kumar. 1994. Naturally occurring flavonoids: Structure, chemistry, and
high-performance liquid chromatography methods for separation and characterization.
Methods in Enzymology. 234, 410-420
(43) Iskandari, A. 2010.Isolasi dan Elusidasi Struktur Quercetrin dari Daun Nyamplung.
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sebelas Maret Surakarta.
(44) Praveena, Rani, Swaroopa, Veeresham. 2013.Phytochemical Investigation of
Calophyllum Inophyllum Linn. Natural Products Chemistry & Research. 1, 4.
(45) Malarvizhi, P dan N,Ramakrishnan. 2011. GC-MS Analysis of Biologically Active
Compoundsin Leaves of Calophyllum inophyllum L. International Journal of
ChemTech Research. 3 (2): 806-809.
54
55
LAMPIRAN 1 Biodata Tim Peneliti
Biodata Tim Peneliti
4. Ketua
a. Nama Lengkap : Hakun Wira, ST, M.MT, PhD
c. NIP/NIDN : 197809222008121001/0022097808
d. Fungsional/Pangkat/Gol. : Asisten Ahli/ III-b
e. Bidang Keahlian : Teknologi Biokimia
f. Departemen/Fakultas : Teknik Kimia/ Fakultas Teknologi Industri dan Rekayasa
Sistem
g. Alamat : Kampus ITS Keputih, Sukolilo, Surabaya 60111
h. No. Telp : 031-3763729/ 087855887372
i. Pengalaman Penelitian dalam 5 tahun terakhir
No Tahun Judul Penelitian Pendanaan
Sumber Jumlah (Juta Rp)
1 2019 Pengaruh komposisi Fatty
Acid terhadap pembuatan
biodiesel dengan metode
Batchwise solvent
extraction, Microwave dan
kombinasi
Dana Lokal
ITS
Rp 50 Juta
2 2017 Pembuatan Biodiesel dengan
metode batchwise solvent-
solvent extraction
Dana Lokal
ITS
Rp 50 Juta
3 2016 Pemanfaatan Biji dan Daun
Nyamplung untuk bahan
makanan, obat-obatan dan
biodiesel tahap 2
PUPT-DIKTI Rp. 150 Juta
4 2016 Pembuatan Tepung MOCAF
(Modified Cassava Flour)
tahap 1
PUPT-Dikti Rp 105 Juta
56
5 2015 Pemanfaatan Biji dan Daun
Nyamplung untuk bahan
makanan, obat-obatan dan
biodiesel tahap 1
PUPT-DIKTI Rp. 180 Juta
6 2009 Engineering properties of
bio-ethanol and isooctane
mixtures as the effort to
improve the quality of
biofuel
IMHERE Rp 50 Juta
j. Publikasi Artikel Ilmiah dalam Jurnal dalam 5 tahun terakhir
No Judul Artikel Ilmiah Nama Jurnal Volume/Nomor/Tahun
1 COMPARATIVE STUDY OF
BATCHWISE SOLVENT
EXTRACTION AND THE
MICROWAVE ASSISTED
EXTRACTION METHOD
FOR THE PURIFICATION
OF TRIGLYCERIDE FOR
BIODIESEL FEEDSTOCK
FROM CRUDE
CALOPHYLLUM
INOPHYLLUM OIL (CCIO)
International
Journal of
Technology
(IJTECH)
10(3): 46-55, 2019
2 Separation of Xanthone and
Vitamin E from Calophyllum
inophyllum Leaf.
MJFAS 14, 4, 2018
3 Separation and Identification
of Fatty Acid in
Triacylglycerol Isolated from
Calophyllum Inophyllum Oil.
ARPN JEAS. 13, 2. 2018
4 Separation and Purification of
Triacylglycerols from
Nyamplung (Calophyllum
Industrial and
Engineering
Chemistry
55 (11), pp 3113–3119
(2016)
57
inophyllum) Oil by Batchwise
Solvent Extraction
Research (ACS
Journal)
5 Effect of fermenting cassava
with Lactobacillus plantarum,
Saccharomyces cereviseae, and
Rhizopus oryzae on the
chemical composition of their
flour
International Food
Research Journal
22 (3), pp 1280 – 1287
(2015)
6 The utilization of Xylocarpus
moluccensis seed oil as
biodiesel
feedstock in Indonesia
Industrial Crops
and ProductsC
52, 286-291 (2013)
k. Pemakalah Seminar Ilmiah (Oral Presentation) dalam 5 tahun terakhir
No Nama Pertemuan Ilmiah/Seminar Judul Artikel Ilmiah Waktu
dan Tempat
1 ISICHEM 2018 The Effect of Power
and Extraction Time
in Purification of
Triglycerides from
Crude Calophyllum
inophyllum Oil for
Biodiesel Feedstock
By Microwave
Extraction Method
Padang, 3-6
Oktober 2018
2 CINIA 2017 The Election of
Edible and Non
Edible Crop for
Biodiesel Feedstock
in Indonesia with
AHP-BCR and GC
Analysis
Bumi Hotel,
Surabaya,
Desember 2017
58
3 International Seminar of
Chemical Engineering
(ISFACHE)
Fragmentation of
Triglyceride in Non
Polar Fraction
from Nyamplung Oil
(C. Inophyllum)
Tahun 2016,
Surabaya,
Indonesia
4 International Seminar Young
Chemical Engineering
Separation and
Purification of
Xanthone from Polar
Fraction Nyamplung
(Calophyllum
inophyllum) Leaf
Tahun 2016,
Taipei, Taiwan
5 International Seminar Young
Chemical Engineering
Effect of
Fermentation Time
and Cell Number on
The Psycochemical
Characteristic of
Modified Cassava
Flour.
Tahun 2016,
Taipei, Taiwan
6 International Seminar of
Chemical Engineering
(ISFACHE)
Identification of
Triglyceride in Non
Polar Fraction
Isolated
from Nyamplung Oil
(Calophyllum
Inophyllum)
Tahun 2014,
Bali, Indonesia
7 “, The 6th National Conference
on Hydrogen Energy and Fuel
Cell
Modified graphene
oxide by amine
groups : Synthesis,
Characterization,
It’S Application for
Capturing CO2
Tahun 2011,
Yilan, Taiwan
59
8 Seminar Nasional Teknik Kimia
Indonesia – SNTKI, , 2009
Integrated
Distillation for
Separating Mixtures
of Ethanol azeotrope
System – Water
Tahun 2009,
Bandung
l. Karya Buku dalam 5 tahun terakhir
No Judul Buku Tahun Jumlah Halaman Penerbit
1 Inspirasi BMI
Taiwan, Tips Aman
Bekerja di Taiwan
dan Pulang jadi
pengusaha”
2015 97 -
2 Handbook on
Cassava: Production,
Potential Uses and
Recent Advances
2017 200 Nova Science
Publisher
3 UTILIZATION OF
CALOPHYLLUM
INOPHYLLUM
SEED OIL
2018 200 Nova Science
Publisher
4 Benefits and Uses of
Calophyllum
inophyllum
2019 200 Intech
m. Perolehan HKI dalam 5-10 tahun terakhir
No Judul/ Tema HKI Tahun Jenis Nomor P/ID
1 Ekstraksi pelarut organic
sebagai metode
pemisahan untuk bahan
2015 Paten P00201507494
60
baku pembuatan
biodiesel dan obat
Semua data yang saya isikan dan tercantum dalam biodata ini adalah benar dan dapat
dipertanggungjawabkan secara hukum. Apabila dikemudian hari ternyata dijumpai
ketidaksesuaian dengan kenyataan , saya sanggup menerima sanksi.
Demikian biodata ini saya buat dengan sebenarnya untuk memenuhi salah satu persyaratan
dalam pengajuan penelitian laboratorium.
Surabaya, 5 Maret 2020
(Hakun Wirawasista, ST, M.MT PhD)
61
2. Anggota
a. Nama Lengkap : Setiyo Gunawan, ST, PhD
b. NIP/NIDN : 197603232002121001/ 0023037604
c. Fungsional/Pangkat/Gol. : Asisten Ahli/ III-b
d. Bidang Keahlian : Teknologi Biokimia
e. Departemen/Fakultas : Teknik Kimia/ Fakultas Teknologi Industri dan Rekayasa
Sistem
f. Alamat : Kampus ITS Keputih, Sukolilo, Surabaya 60111
g. No. Telp : 031-3763729/ 087855887372
h. Pengalaman Penelitian dalam 5 tahun terakhir
No Tahun Judul Penelitian Pendanaan
Sumber Jumlah
(Juta Rp)
1 2010 Pengaruh Penambahan Metanol dan
Katalis Asam Terhadap Yield
Biodiesel dari Dedak Padi dengan
Proses in-situ Esterifikasi
Researh Grand
I-MHere
30
2 2011 Pemanfaatan dan Karakterisasi
Minyak Biji Buah Mangrove
Xylocarpus Moluccensis Sebagai
Bahan Baku Pembuatan Biodiesel
Unggulan ITS
Tahun 2011
40
3 2012 Teknik Proses Fermentasi
Terimobilisasi menggunakan
Z.Mobilis Termutasi dan Ekstraksi
Kontinyu yang Terintegrasi Sebagai
Upaya Meningkatkan Produktivitas
Etanol
Penelitian
Strategis
Nasional
Tahun 2012
40
4 2013 Pembuatan Biodiesel dari Minyak
Murni Nyamplung (Calophyllum
Inophyllum) (Tahun ke 1)
Unggulan ITS
Tahun 2013
90
62
5 2014 Pembuatan Biodiesel dari Minyak
Murni Nyamplung (Calophyllum
Inophyllum) (Tahun ke 2)
Unggulan ITS
Tahun 2014
80
i. Publikasi Artikel Ilmiah dalam Jurnal dalam 5 tahun terakhir
No Judul Artikel Ilmiah Nama Jurnal Volume/Nomor/
Tahun
1 Isolation and identification of steroidal
hydrocarbon in soybean oil deodorizer
distillate.
Food Chemistry 117, 15-19
(2009)
2 Analysis of trans-cis fatty acids in fatty
acid steryl esters isolated from Soybean
oil deodorizer distillate.
Food Chemistry 121, 752-757
(2010)
3 Rice Bran, a Potensial Source of the
Biodiesel Production in Indonesia.
Industrial Crops
and Products
33:624-628
(2011)
4 Irresolvable Complex mixture of
Hydrocarbons in Soybean Oil
Deodorizer Distillate with High Purity
and Recovery
Journal of
Separation
Science,
35: 327-333
(2012)
5 Proximate composition of Xylocarpus
moluccensis seeds and their oils
Industrial Crops
and Products
41:107-112
(2013)
6 The utilization of Xylocarpus
moluccensis seed oil as biodiesel
feedstock in Indonesia
Industrial Crops
and Products,
52:286-291
(2014)
j. Pemakalah Seminar Ilmiah (Oral Presentation) dalam 5 tahun terakhir
No Nama Pertemuan
Ilmiah/Seminar
Judul Artikel Ilmiah Waktu dan
Tempat
1 The 1st International
Seminar on Fundamental
Biodiesel Production
from Rice Bran by
2010, November 3-4, Bali,
Institut Teknologi Sepuluh
63
& Application of
Chemical Engineering,
in-situ Esterification:
The Effect of
Methanol
Concentration and
Reaction Time
Nopember Surabaya,
Indonesia
2 Bali International
Seminar on Science and
Technology
The analysis and
characterization of
xylocarpus
moluccensis
mangrove fruit seeds
2011, July 22-23, Bali
Indonesia. ISBN 978-979-
98623-1-0,
3 The 5th International
Conference on Industrial
Bioprocesses IFIB
Biodiesel production
from Xylocarpus
moluccensis seed oils
2012, October 7-10, Taipei,
Taiwan, National Taiwan
University of Science and
Technology
4 5th Nanoscience and
Nanotechnology
Symposium (NNS2013)
Optimization of
Operating
Conditions for
Separation Non Polar
Lipids Fraction from
Soybean Oil
Deodorizer Distillate
by regenerated Silica
Gel
2013, Institut Teknologi
Sepuluh Nopember
Surabaya, Indonesia
5 Seminar Rekayasa
Kimia dan Proses
Pemisahan
Trigliserida dari
Minyak Mentah
Nyamplung
2014, UNDIP, Semarang
k. Karya Buku dalam 5 tahun terakhir
No Judul Buku Tahun Jumlah Halaman Penerbit
64
1 Soybean deodorizer
distillate: An
Integrated isolation
and analysis method
of bioactive
compounds. In
Soybeans Cultivation,
uses and nutrition
2010 23 Buku Chapter
International,
Soybeans
Cultivation, uses
and nutrition,
Editor Jason E
Maxwell, Nova
Publisher, New
York, 309-332.
l. Perolehan HKI dalam 5-10 tahun terakhir
No Judul/ Tema HKI Tahun Jenis Nomor P/ID
1 Metode Fermentasi -
Ekstraksi Terpadu
untuk Menghasilkan
Etanol
2012 Paten P.00201201228
m. Pengalaman Merumuskan Kebijakan Publik/Rekayasa Sosial lainnya dalam 5 tahun
terakhir
No Judul/ Tema/ Jenis
Rekayasa Sosial Lainnya
yang Telah Diterapkan
Tahun Tempat
Penerapan
Respon
Masyarakat
-
n. Penghargaan dalam 10 Tahun Terakhir (dari pemerintah, asosiasi atau institusi
No Nama Pertemuan Ilmiah/Seminar Judul Artikel Ilmiah Waktu
dan Tempat
1 Dosen Berprestasi II tingkat FTI - 2012, Surabaya
2 Dosen Berprestasi I tingkat FTI - 2013, Surabaya
3 Dosen Berprestasi II tingkat
Institut
- 2013, Surabaya
65
Semua data yang saya isikan dan tercantum dalam biodata ini adalah benar dan dapat
dipertanggungjawabkan secara hukum. Apabila dikemudian hari ternyata dijumpai
ketidaksesuaian dengan kenyataan , saya sanggup menerima sanksi.
Demikian biodata ini saya buat dengan sebenarnya untuk memenuhi salah satu persyaratan
dalam pengajuan penelitian laboratorium.
Surabaya, 5 Maret 2030
(Setiyo Gunawan, ST, PhD)
DATA USULAN DAN PENGESAHAN
PROPOSAL DANA LOKAL ITS 2020
1. Judul Penelitian
PEMISAHAN DAN PEMURNIAN SENYAWA SQUALENE PADA DAUN NYAMPLUNG (CALOPHYLLUM INOPHYLLUM L.)
Skema : PENELITIAN LABORATORIUM
Bidang Penelitian : Agri-pangan dan Bioteknologi
Topik Penelitian : Teknologi ketahanan dan kemandirian pangan dan obat
2. Identitas Pengusul
Ketua Tim
Nama : Hakun Wirawasista Aparamarta S.T, M.MT, Ph.D
NIP : 197809222008121001
No Telp/HP : .
Laboratorium : Laboratorium Teknologi Biokimia
Departemen/Unit : Departemen Teknik Kimia
Fakultas : Fakultas Teknologi Industri dan Rekayasa Sistem
Anggota Tim
No Nama Lengkap Asal Laboratorium Departemen/UnitPerguruan
Tinggi/Instansi
1Hakun Wirawasista
Aparamarta S.T, M.MT, Ph.D
Laboratorium Teknologi Biokimia
Departemen Teknik Kimia
ITS
2Setiyo Gunawan
S.T., Ph.DLaboratorium
Teknologi BiokimiaDepartemen Teknik
KimiaITS
3. Jumlah Mahasiswa terlibat : 1
4. Sumber dan jumlah dana penelitian yang diusulkan
a. Dana Lokal ITS 2020 : 50.000.000,-
b. Sumber Lain : 0,-
Jumlah : 50.000.000,-
Tanggal Persetujuan
Nama Pimpinan Pemberi
Persetujuan
Jabatan Pemberi Persetujuan
Nama Unit Pemberi
PersetujuanQR-Code
09 Maret 2020
Dr.rer.nat., Ir. Maya Shovitri
M.Si
Kepala Pusat Penelitian/Kajian/Unggulan
Iptek
Kepala Pusat Penelitihan
Agri-pangan dan
Bioteknologi
09 Maret 2020
Agus Muhamad Hatta , ST, MSi,
Ph.DDirektur
Direktorat Riset dan Pengabdian
Kepada Masyarakat