Procesado de muestras en el laboratorio de la clínica (I)

A lo largo de esta primera parte veremos como realizar un manejo correcto de las muestras de sangre, orina y líquidos orgánicos. Dejamos la citología para nuestro próximo número.

12.prevención de la salud

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Procesado de muestras en el laboratorio de la clínica (I)

La fi abilidad de un análisis y su interpretación dependen en gran medida

de la calidad de la muestra que se analiza o que se envía al laborato-

rio.

El manejo adecuado de las muestras desde que se obtienen hasta que

se procesan es muy importante para poder realizar un análisis correcto

y no tener resultados erróneos.

Repasaremos algunas normas de manejo de muestras que son bastan-

tes generales y que nos pueden servir tanto si los análisis se hacen en

la clínica como si se envían fuera, a laboratorios externos.

Análisis de sangre

Análisis hematológico: hemograma

El hemograma nos proporciona el recuento de glóbulos rojos, blancos

y plaquetas.

Para poder realizarlo la sangre tiene que conservar sus características

físicas y químicas, es decir no puede coagularse, debe permanecer lí-

quida.

La muestra que necesitamos es sangre entera recogida en tubos con

anticoagulante EDTA ya que es el anticoagulante que mejor conserva la

morfología de las células sanguíneas.

La primera regla para poder realizar correctamente el hemograma es

que la sangre que vamos a echar al tubo con anticoagulante EDTA no

puede tener ningún coágulo.

La segunda regla a tener en

cuenta es que es muy importan-

te ajustar la cantidad de sangre

que se echa al anticoagulante

que hay en el tubo (los tubos

vienen ya preparados con el an-

ticoagulante).

Normalmente los tubos vienen

con una línea que indica la can-

tidad de sangre que hay que

adicionar. Es fundamental res-

petar la recomendación ya que

un defecto o exceso de sangre

según la proporción de anticoa-

gulante del tubo va a producir

alteraciones hematológicas.

El EDTA es el anticoagulante de elección para hacer el hemograma y el frotis sanguíneo

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Si hay demasiada sangre y sobrepasa el nivel indicado en el tubo, la

muestra se coagulará. La muestra no será apta para realizar el análisis

hematológico.

Si hay poca sangre y no llega al nivel indicado se producirán falsos valo-

res del hematocrito y alteraciones de la morfología de las células.

El hemograma se puede realizar en muestras recogidas en tubos con

otros anticoagulantes como la heparina, pero este anticoagulante con-

serva peor la morfología celular y favorece que las plaquetas formen

grupos (agregación plaquetaria) lo cual altera su contaje.

¿Cómo conservar la muestra de sangre si no se puede hacer el

análisis inmediatamente?

Si no hacemos el hemograma en dos o tres horas la sangre debe ser

refrigerada a 4º C (debe estar en nevera). El recuento de glóbulos rojos,

la hemoglobina y el hematocrito no sufren modifi caciones si la sangre

se refrigera durante unas 24 horas.

Además de realizar los recuentos celulares, para completar un análisis

hematológico debemos realizar también un frotis sanguíneo. Hay que

extender una pequeña gota de sangre sobre una lámina de vidrio (por-

taobjetos) para formar una película delgada (frotis sanguíneo).

Lo dejamos secar al aire, y luego lo fi jamos introduciéndolo en un po-

cillo que contenga metanol y después se tiñe. El frotis se examina con

un microscopio, se cuentan los distintos tipos de glóbulos blancos y se

examinan las células. Al observar esta extensión de sangre se buscan

también posibles parásitos sanguíneos que pudieran aparecer.

Los frotis sanguíneos también deberían ser preparados inmediatamente

después de haber obtenido la muestra o como máximo transcurridas 2

horas tras la extracción de la sangre. Así se evitan los problemas deri-

vados de que la sangre esté mucho tiempo en el anticoagulante como

el deterioro de las células.

La cantidad de sangre que hay que adiccionar a cada tubo viene marcada en el propio tubo. Es muy importante respetar esa recomendación para que no haya resultados erróneos

prevención de la salud.15

Si el frotis, una vez hecho, no puede teñirse

inmediatamente, es importante por lo menos

fijarlo sumergiéndolo en metanol durante dos

minutos. Las células fijadas se conservan du-

rante mucho tiempo.

Análisis bioquímicos

Recordemos que la sangre es un tejido líqui-

do, formado por dos partes, las células y el

líquido en el que sobrenadan, el plasma.

El plasma se obtiene tras centrifugar la sangre

introducida en un tubo con anticoagulante. Con-

tiene factores de la coagulación (fibrinógeno).

Si ponemos sangre en un tubo de ensayo sin

anticoagulante y dejamos pasar unos minutos

se forma un coágulo. Posteriormente, el coá-

gulo se contrae y se separa de un líquido am-

barino y transparente, el suero sanguíneo.

El suero se obtiene dejando que se produzca la

coagulación espontáneamente en un tubo, pre-

ferentemente de vidrio, en el que no se ha pues-

to anticoagulante y después centrifugando.

El plasma se obtiene tras centrifugar la sangre

que se ha introducido en un tubo con anti-

coagulante

La mayoría de las pruebas bioquímicas que

se hacen en el laboratorio de análisis clínicos

pueden realizarse en muestras de suero.

Muchas de estas determinaciones pueden

realizase también en muestras de plasma te-

niendo en cuenta que el anticoagulante que

usemos no interfiera en la prueba.

Como hemos dicho para obtener suero para

hacer las pruebas bioquímicas la muestra de

sangre debe introducirse en un tubo seco sin

anticoagulante. Las muestras así obtenidas se dejan a tem-

peratura ambiente en posición vertical hasta

que se coagulen y se inicie la retracción del

coágulo (30-40 minutos después de obtener

la muestra). Posteriormente se centrifugan los

tubos a 2500-3000 rpm (5-10 min) para

separar el suero del coágulo. Esta separación

conviene realizarla dentro de las 2 horas des-

pués de la toma de muestras para evitar el

intercambio de compuestos entre las células y

el suero y que la muestra se deteriore.

Para obtener el plasma, las muestras se han

de recoger en tubos que contengan heparina,

preferentemente de litio, ya que este anticoa-

gulante interfiere en muy pocas determinacio-

nes bioquímicas. Igual que para hacer el he-

mograma es muy importante adicionar al tubo

el volumen de sangre indicado en el mismo.

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El plasma se obtiene centrifugando la muestra a 2500-3000 rpm

(5-10 min). Al igual que el suero, conviene separar el plasma de las célu-

las dentro de las 2 horas después de la toma de muestras.

Conservación suero/plasma

Si las determinaciones no se realizan inmediatamente después de ha-

ber obtenido el suero o plasma:

• conservar el suero/plasma a 4º C: la mayoría de los compuestos se

conservan bien a esta temperatura al menos durante 3 días.

• congelar el suero/plasma a -20º C: hay muy pocos compuestos que

no son estables a esta temperatura durante largo tiempo

Análisis de orina

Las muestras de orina se han de recoger en recipientes limpios, secos y

estériles. Es preciso conocer y apuntar la técnica de obtención (micción

espontánea, sondaje uretral, cistocentesis) ya que los valores de refe-

rencia del sedimento difieren en los distintos tipos de técnicas.

También es importante realizar el análisis cuanto antes, pues muchos

componentes se alteran desde que la orina sale al exterior, especialmen-

te bajo temperaturas de almacenamiento elevadas, pH alcalino y en las

orinas muy diluidas.

Las muestras de orina se conserva correctamente:

• 30 minutos a temperatura ambiente

• 12 horas a 4º C

Líquidos orgánicos

Cuando tenemos un líquido orgánico (pleural, peritoneal, pericárdico,

sinovial, cefalorraquídeo) las muestras se han de recoger en distintos

tubos dependiendo de las pruebas que queramos hacer:

Tubo con anticoagulante EDTA:

• recuento de células nucleadas y estudio citológico

Tubo sin anticoagulante o con anticoagulante heparina de litio:

• parámetros bioquímicos

Tubo estéril sin anticoagulante:

• cultivo microbiológico.