Pop Fosfatase Alcalina

FOSFATASE ALCALINA-PP

Nome do LaboratrioProcedimento Operacional Padro (POP)

FOSFATASE ALCALINAPgina 4 de 4

POP xxx

Reviso: 00

Nombre del LaboratorioProcedimiento Operativo Estndar (POE)

FOSFATASA ALCALINAPgina 4 de 4

POE xxx

Revisin: 00

FOSFATASE ALCALINAFINALIDADE

Mtodo para a determinao da Fosfatase Alcalina. Teste colorimtrico, somente para uso diagnstico in vitro.PRINCPIO DE AO

Metodologia: Roy Modificado.A Fosfatase Alcalina presente na amostra hidrolisa o substrato de timolftalena monofosfato, liberando timolftalena e fosfato inorgnico, em um tempo pr-determinado de 10 minutos. A atividade enzimtica proporcional quantidade de timolftalena formada, que medida colorimetricamente. Com a adio do Reagente de Cor, a reao enzimtica inativada e a timolftalena adquire cor azul. Como o substrato e o produto da reao apresentam cores diferentes, em meio alcalino, a colorao final constituda por uma mistura de cores.Timolftalena monofosfato + H2O ALP Timolftalena + H3PO4 Mg+REAGENTE UTILIZADO

FOSFATASE ALCALINA CATLOGO: K019 ANVISA: 10269360104QUIBASA QUMICA BSICA Ltda.

Rua Teles de Menezes, 92 - Santa Branca

CEP 31565-130 - Belo Horizonte - MG - Brasil

Tel.: (31) 3439.5454 - Fax (31) 3439.5455

e-mail: [email protected]: www.bioclin.com.br

CNPJ: 19.400.787/0001-07 - Indstria Brasileira

COMPONENTESNmero 1 - Substrato - conservar entre 15 e 30C. Aps o manuseio conservar entre 2 e 8C em frasco bem vedado para evitar evaporao. O reagente pode apresentar turvao ou precipitado, fato que no interfere na sua qualidade. Agitar antes de usar. Contm: Timolftalena monofosfato 40 mmol/L, solubilizante e estabilizador.

Nmero 2 - Tampo - conservar entre 15 e 30C. Aps o uso, fechar o frasco para evitar contaminao com CO2 do ar. Contm: Dietanolamina 0,3 mol/L pH 9,9, Citrato de sdio 10 mmol/L, surfactante e ativador.

Nmero 3 - Reagente de Cor - conservar entre 15 e 30C. Contm: Carbonato de sdio 150 mmol/L e Hidrxido de sdio 100 mmol/L.

Nmero 4 - Padro 40 UI - conservar entre 15 e 30C. Aps o manuseio conservar entre 2 e 8C em frasco bem vedado para evitar evaporao. Contm: Timolftalena 0,4 mmol/L (40 UI) e solubilizante.ESTABILIDADE

Os reagentes so estveis at a da data de validade impressa no rtulo quando conservados de acordo com a temperatura recomendada. Evitar a contaminao do produto durante o uso para no afetar a sua estabilidade.

CUIDADOS ESPECIAIS1 - Somente para uso diagnstico in vitro;

2 - Seguir com rigor a metodologia proposta para obteno de resultados exatos;

3 - A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes contaminantes;

4 - Colunas deionizadoras saturadas liberam gua alcalina, ons diversos e agentes oxidantes e redutores, que podem alterar de forma significativa os resultados;

5 - O nvel de gua no banho-maria deve ser superior ao nvel dos reagentes nos tubos de ensaio;

6 - O Reagente N 3 deve ser manuseado com cuidado, pois apresenta ao corrosiva;

7 - Recomendamos aplicar as normas locais, estaduais e federais de proteo ambiental para que o descarte dos reagentes e do material biolgico seja feito de acordo com a legislao vigente.

8 - Para obteno de informaes relacionadas biossegurana ou em caso de acidentes com o produto, consultar as FISPQ (Ficha de Informaes de Segurana de Produtos Qumicos) disponibilizadas no site www.bioclin.com.br ou atravs de solicitao pelo SAC(Servio de Assessoria ao Cliente) da Quibasa.EQUIPAMENTOS E INSUMOS OPERACIONAIS

Procedimento Manual

Equipamento: Espectrofotmetro termostatizado Banho-maria 37C Pipetas e tubos de ensaio Relgio ou cronmetroAMOSTRASoro ou plasma (heparina) obtido livre de hemlise. O analito estvel 07 dias entre 2 e 8C e 30 dias a 10C negativos.PREPARO DO REAGENTE DE TRABALHOOs reagentes so prontos para uso.TCNICAA Bioclin recomenda, para uso do kit, utilizar como soro controle os kits Biocontrol N e P Bioclin.Procedimento ManualMarcar 3 tubos de ensaio com as letras B (Branco), P (Padro), A (Amostra) e proceder como a seguir:BrancoPadroAmostra

Reagente N 150 L50 L50 L

Reagente N 2500 L500 L500 L

Reagente N 4-------50 L-------

Incubar a 37C por 2 minutos.

Amostra--------------50 L

Homogeneizar e incubar a 37C por exatamente 10 minutos.

Reagente N 32,0 mL2,0 mL2,0 mL

Homogeneizar bem e determinar a absorbncia da Amostra e do Padro em 578 nm (570 - 590), acertando o zero com o Branco. A cor estvel por 60 minutos.

CLCULOS

Fosfatase Alcalina (U/L) = Absorbncia da amostra x 40

Absorbncia do padro

Como a reao de cor segue a lei de Lambert Beer, pode-se usar o Fator de calibrao:

Fator de calibrao = Concentrao padro (40 U/L) Absorbncia do padro

U/L = Absorbncia da amostra x Fator de calibraoRESULTADOS

Unidade de Medida: U/LVALORES DE REFERNCIA

Os valores de referncia em U/L, para o presente mtodo, foram obtidos atravs da determinao da Fosfatase Alcalina em populaes sadias do sexo masculino e feminino.

Adultos: 12 a 43 U/L

Crianas at 12 anos: 56 a 156 U/L

Estes valores devem ser usados como orientao, sendo que cada laboratrio dever criar sua faixa de valores de referncia, de acordo com a populao atendida.LIMITAES DO PROCESSOA metodologia no pode ser adaptada em aparelhos de automao.INTERFERENTES

No utilizar amostras hemolisadas ou lipmicas, pois tais amostras podem elevar falsamente os resultados.SENSIBILIDADE

A sensibilidade foi calculada a partir de 20 determinaes de uma amostra isenta da presena de fosfatase. A mdia encontrada foi 0,419 U/L, com desvio padro de 0,004 U/L. A sensibilidade, que indica o limite de deteco do mtodo, corresponde a 3 vezes o desvio padro, sendo igual a 0,429 U/L.LINEARIDADE

A reao linear at 500 U/L. Para valores maiores, diluir o soro com Cloreto de sdio 0,85%, repetir a dosagem e multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluio.CONTROLE DA QUALIDADE

Materiais

Identificar os materiais de controle interno e externo da qualidade, citando fabricante e nmero de catlogo.

Referenciar POP para limpeza e secagem dos materiais utilizados.

Controle Interno

Descrever a calibrao peridica de pipetas, equipamentos utilizados, controle de temperatura ambiente e geladeiras para armazenamento dos kits.

Deve ser prtica rotineira do Laboratrio Clnico o uso de soro controle para checar a preciso e exatido das dosagens.

Citar POP para controle interno.

Controle Externo

Descrever os procedimentos utilizados nas avaliaes de qualidade feitas por programas de comparao entre laboratrios ou outros controles de qualidade.

Gerenciamento dos dados obtidos no Controle Interno e Externo

Definir como os dados de controle so arquivados e gerenciados.

Fazer referncia ao manual ou POP de garantia da qualidade.SIGNIFICADO CLNICO

A Fosfatase Alcalina est presente em altas concentraes nos ossos, fgado, intestino e placenta. Constitui um til indicador de doenas hepticas e de doenas sseas associadas com hiperatividade osteoblstica.

Condies em que a Fosfatase Alcalina est aumentada: nas doenas hepticas e do trato biliar, na metstase do fgado e metstase ssea, na acromegalia, no hipertireoidismo, no raquitismo, na mononucleose infecciosa, na doena de Paget (atividade osteoblstica) e no crescimento sseo fisiolgico.

Valores diminudos da Fosfatase Alcalina podem ser observados no hipotireoidismo, retardo de crescimento nas crianas, hipofosfatasia (erro metablico inato), desnutrio grave.REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

1 - COLEMAN, C. M.; STROJE, R. C.: Clin. Chem. Acta 13: 401, 1966.

2 - ROY, A. V.: Clin. Chem. 16:431, 1970.

3 - ZAK, B.: Clin Chim. Acta 3: 328, 1958.

4 - BRITTENHAM, G.: Clin Chim. Acta. 91: 203, 1979.

5 - TONKS, D. B.: Chim. Acta 2: 393, 1983.

6 - CARL, A. B. and EDWARD, R. A.: Tietz Textbook of Clinical Chem 2nd ed., 1994, 1942-1943.NomeAssinaturaData

Elaborado por:__/__/__

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Quibasa/Bioclin POP Fosfatase Alcalina Reviso: Janeiro/12FOSFATASA ALCALINAFINALIDAD

Mtodo para la determinacion de Fosfatasa Alcalina. Test colorimtrico, solamente para uso diagnstico in vitro.PRINCIPIO DE ACCIN

Metodologa: Roy Modificado.

La Fosfatasa Alcalina presente en la muestra hidroliza el substrato de timolftalena monofosfato, liberando timolftalena y fosfato inorgnico, en un tiempo predeterminado de 10 minutos. La actividade enzimtica es proporcional la cantidad de timolftalena formada, que es medida colorimtricamente. Con la adicin del Reactivo de Color, la reaccin enzimtica es inactivada y la timolftalena adquire color azul. Como el substrato y el producto de la reaccin presentan colores diferentes, en meio alcalino, la coloracin final es constituda por una mezcla de colores.

Timolftalena monofosfato + H2O ALP Timolftalena + H3PO4 Mg+REACTIVO UTILIZADO

FOSFATASA ALCALINA CATLOGO: K019 ANVISA: 10269360104QUIBASA QUMICA BSICA Ltda.



Tel.: +55 (31) 3439.5454 Fax: +55 (31) 3439.5455



COMPONENTES

Nmero 1 - Sustrato - Almacenar a temperaturas entre 15 y 30C. Despus del manipuleo conservar a temperaturas entre 2 y 8 C en frasco bien cerrado para evitar evaporacin. El reactivo puede presentar turbiedas o precipitado, hechos que no interfieren en la calidad. Agitar antes de usar. Contiene: Timolftalena monofosfato 40 mmol/L, solubilizante y estabilizador.

Nmero 2 - Tampn - Almacenar a temperaturas entre 15 y 30C. Despus del uso, tapar el frasco para evitar contaminacin con CO2 del aire. Contiene: Dietanolamina 0,3 mol/L pH 9,9, Citrato de sdio 10 mmol/L, surfactante y activador.

Nmero 3 - Reactivo de Color - Almacenar a temperaturas entre 15 y 30C. Contiene: Carbonato de sdio 150 mmol/L y Hidrxido de sodio 100 mmol/L.

Nmero 4 - Patrn 40 UI - Almacenar a temperaturas entre 15 y 30C. Despus del manipuleo Almacenar a temperaturas entre 2 y 8 C en frasco bien cerrado para evitar evaporacin. Contiene: Timolftalena 0,4 mmol/L (40 UI) y solubilizante.ESTABILIDADE

Los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad impresa en la etiqueta cuando se almacena en la temperatura recomendada. Evitar la contaminacin del producto durante su uso para no afectar a su estabilidad.CUIDADOS ESPECIALES

1 - Solamente para uso diagnstico in vitro;

2 - Seguir con rigor la metodologa propuesta para obtencin de resultados exactos;

3 - El agua utilizada en la limpieza del material debe ser reciente y exenta de agentes contaminantes;

4 - Columnas deionizadoras saturadas liberan gua alcalina, iones diversos y agentes oxidantes y reductores, que pueden alterar de forma significativa los resultados;

5 - El nivel de agua en el bao maria debe ser superior al nivel de los reactivos en los tubos de ensayo;

6 - El Reactivo N 3 debe ser manipulado con cuidado, pus presenta accin corrosiva;

7 - Se recomienda la aplicacin de las leyes locales, estatales y federales de proteccin ambiental para que el desecho de reactivos y materiales biolgicos se haga de acuerdo a la legislacin vigente.

8 - Para obtener ms informacin relacionada con la seguridad biolgica o en caso de accidentes con el producto, consultar la FISPQ (Ficha de Informaciones de la Seguridad de Productos Qumicos), disponibles en la pgina www.bioclin.com.br o mediante el Servicio de Atencin al Cliente (SAC) de Quibasa.EQUIPAMIENTOS E INSUMOS OPERACIONALESProcedimiento Manual

Equipamiento: Espectrofotmetro termostatizado Pipetas y tubos de ensayo Reloj o cronmetro Bao maria a 37CMUESTRASSuero o plasma (heparina) obtenido libre de hemlisis. El analito es estable 7 das a temperaturas entre 2 y 8 C y, 30 das a -10 C.PREPARO DEL REACTIVO DE TRABAJO

Los reactivos estan prontos para uso.

TCNICALa Bioclin recomienda, para uso del kit, utilizar como suero control los kits Biocontrol N y P Bioclin.Procedimiento Manual

Marcar 3 tubos de ensayo con as letras B (Blanco), P (Patrn), M (Muestra) y proceder como sigue:BlancoPatrnMuestra

Reactivo N 150 L50 L50 L

Reactivo N 2500 L500 L500 L

Reactivo N 4-------50 L-------

Incubar a 37C por 2 minutos.

Amostra--------------50 L

Homogenizar e incubar a 37C por exactamente 10 minutos.

Reactivo N 32,0 mL2,0 mL2,0 mL

Homogenizar bien y determinar la absorbancia de la Muestra y del Patrn en 578 nm (570 - 590), ajustando el cero con el Blanco. El color es estable por 60 minutos.

CLCULOS

Fosfatasa Alcalina(U/L)= Absorbancia de la muestra x 40

Absorbancia del patrn

Como la reaccin de color sigue la ley de Lambert Beer, puede usar el Factor de calibracin:

Factor de calibracin = Concentracin patrn (40 U/L) Absorbancia del patrn

U/L = Absorbancia de la muestra x Factor de calibracin

RESULTADOS

Unidad de Medida: U/LVALORES DE REFERENCIA

Los valores de referencia en U/L, para el presente mtodo, fueron obtenidos por determinacin de la Fosfatasa Alcalina en poblaciones sanas del sexo masculino y femenino.

Adultos: 12 a 43 U/L

Nios hasta 12 aos: 56 a 156 U/L

Estes valores deben ser usados como orientacin. Pus, que cada laboratorio deber crear su rango de valores de referencia de acuerdo con la poblacin atendida.LIMITACIONES DEL PROCESOSEsta metodologa no puede ser adaptada en aparatos automticos.INTERFERENTES

No utilizar muestras hemolizadas o lipmicas, porque pueden dar resultados falsos.SENSIBILIDADLa sensibilidad fue calculada a partir de 20 determinaciones de uma muestra exenta de la presencia del fosfatasa. El promedio encontrado fue 0,419 U/L, con desvo patrn de 0,004 U/L. La sensibilidade, que indica el lmite de deteccin del mtodo, corresponde el promedio mas 3 veces el desvo patrn siendo 0,429 U/L.LINEARIDADLa reaccin es lineal hasta 500 U/L. Para valores mayores, diluir el suero con Cloruro de sodio 0,85%, repetir la dosificacin y multiplicar el resultado obtenido por el factor de dilucin.

CONTROL DE CALIDADMateriales

Identificar el control del material interno y control externo de calidad, citando el fabricante y el nmero de catlogo.

Refirindose POE para la limpieza y secado de los materiales utilizados.

Control Interno

Describa la calibracin peridica de las pipetas, el equipo utilizado, control de temperatura y refrigeradores para el almacenamiento de equipos.

Debera ser una prctica habitual del laboratorio clnico utilizando suero de control para comprobar la precisin y la exactitud de las mediciones.

Cita POE para el control interno.

Control Externo

Describir los procedimientos utilizados en las evaluaciones de calidad realizadas por programas de comparacin entre laboratorios u otros controles de calidad.

La gestin de los datos obtenidos en el Control interno y externo

Establecer como los datos de control se almacenan y gestionan.

Consulte el manual de Definido por el aseguramiento de la calidad.SIGNIFICADO DIAGNSTICOLa Fosfatasa Alcalina esta presente en altas concentraciones en los luesos, hgado, intestino y placenta. Constituye indicador de enfermedades hepticas y de enfermedades seas asociadas con hiperactividad osteoblstica.

Condiciones en que la Fosfatasa Alcalina esta aumentada: en las enfermedades hepticas y del tracto biliar, metstasis del hgado y metstasis sea, acromeglia, hipertiroidismo, raquitismo, mononucleosis infecciosa, enfermedad de Paget (actividad osteoblstica) y crecimento seo fisiolgico.

Valores disminudos de la Fosfatasa Alcalina pueden ser observados en el hipotiroidismo, retardo de crecimento y hipofosfatsia (error metablico innato), desnutricin grave.REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

1 - COLEMAN, C. M.; STROJE, R. C.: Clin. Chem. Acta 13: 401, 1966.

2 - ROY, A. V.: Clin. Chem. 16:431, 1970.




6 - CARL, A. B. and EDWARD, R. A.: Tietz Textbook of Clinical Chem 2nd ed., 1994, 1942-1943.

NombreFirmaFecha

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Quibasa/Bioclin POE Fosfatasa Alcalina Revisin: Enero/12PHOSPHATASE ALKALINEFUNCTION

Method for determination of Alkaline Phosphatase. Colorimetric test, only for in vitro diagnostic use.PRINCIPLE OF ACTION

Methodology: Modified Roy.The alkaline phosphatase present in the sample hydrolyzessubstrate thymolphthalein monophosphate, releasing thymolphthalein and inorganic phosphate in a predetermined time of 10 minutes. The enzyme activity is proportional to the amount thymolphthalein formed, which is measuredcolorimetrically. With the addition of color reagent, theenzymatic reaction is inactivated and acquires color thymolphthalein blue. As the substrate and the reaction product present different colors, in an alkaline environment, the final color is established by a mixture of colors.Thymolphthalein monophosphate + H2O ALP Thymolphthalein + H3PO4 Mg+REAGENT USEDPHOSPHATASE ALKALINE CATLOGO: K019 ANVISA: 10269360104QUIBASA QUMICA BSICA Ltda.



Tel.: +55 (31) 3439.5454 Fax: +55 (31) 3439.5455



COMPONENTS

Number 1 - Substrate store in temperatures between 15 and 30C. After it is used store in temperatures between 2 and 8C in well sealed flasks to avoid evaporation. Reagent can present turbidity or precipitation, fact that does not interfere in its quality. Agitate before using it. Contains: Thymolphthalein Monophosphate 40 mmol/L, solubilizer and stabilizer.

Number 2 Buffer - store in temperatures between 15 and 30C. After its use seal the flask to avoid contamination with CO2 from the air. Diethanolamine 0.3 mol/L pH 9.9, sodium citrate 10 mmol/L surfactant and activator.

Number 3 Color Reagent - store in temperatures between 15 and 30C. Contains: Sodium Carbonate 150 mmol/L and Sodium hydroxide 100 mmol/L.

Number 4 Standard 40 Ul - store in temperatures between 15 and 30C. After it is used store in temperatures between 2 and 8C in well sealed flasks to avoid evaporation. Contains: Thymolphthalein 0,4 mmol/L (40Ul) and solubilizer.STABILITYThe reagents are stable until the expiration date printed on the label when stored under the recommended temperature. Avoid contamination of the product during use to not affect its stability.SPECIAL CARE1 For in vitro diagnostic only;

2 Strictly follow the methodology proposed to obtainexact results;

3 Water used in material cleaning must to be recent and free of contaminants;

4 Saturated deionizer columns release alkaline water, many ions, oxidizing agents and reducers that may alter the results significantly;

5 Water level at water bath must be superior to the level of the reagents in the test tubes;

6 Reagent No3 must be handled carefully, for it presents corrosive action;

7 We recommend applying the local, state and federal regulations for environmental protection, so the disposal of reagents and biological material can be made in accordance with the current legislation.

8 - To obtain information related to biosafety or in case of accidents with the product, consult the MSDS (Material Safety Data Sheet) available in the website www.bioclin.com.br or upon request to Bioclins Customer Services.EQUIPMENTS AND OPERATIONAL INPUTS

Manual Procedure

Equipment: Thermostated spectrophotometer Pipettes, test tubes watch or stopwatch Bath at 37CSAMPLESerum or plasma (heparin) obtained free of hemolysis, The analyte is stable for 07 days if kept between 2 and 8C and 30 days if kept at -10oC.PREPARATION OF WORKING REAGENTThe reagents are ready to use.

TECHNIQUEBioclin recommends, as control serum, Biocontrol N and P Bioclin Kits.Manual Procedure Mark three test tubes: B (Blank), A (Sample), P (Standard), and proceed as follows:BlankStandardSample

Reagent N 150 L50 L50 L

Reagent N 2500 L500 L500 L

Reagent N 4-------50 L-------

Incubate at 37C for 2 minutes

Sample--------------50 L

Homogenize and Incubate at 37C for exactly 10 minutes.

Reagent N 32,0 mL2,0 mL2,0 mL

Homogenize well and determine the absorbance of sample and Standard at 578 nm (570-590), correcting the zero with the blank. The color is stable for 60 minutes.

CALCULATIONPhosphatase Alkaline = Sample Absorbance x 40

(U/L) Standard Absorbance

As the reaction follows the Beer-Lambert Law, the calibration factor can be used.

Calibration = Standard Concentration (40 U/L) Factor Standard Absorbance

U/L = Sample Absorbance x Calibration FactorRESULTSUnit of measure: U/LREFERENCE VALUESThe reference values in U/L, for this method, were obtained through the determination of Alkaline Phosphatase in healthy populations of male and female.

Adults: 12 to 43 U/L.

Children up to 12 years of age: 56 to 156 U/L.

These values should be used as guidance, andeach laboratory should establish its range of reference values, according to the population served. PROCEDURE LIMITATIONS

This methodology can not be adapted for use in automation equipment.INTERFERINGDo not use hemolyzed or lipemic samples, because such samples can falsely elevate the results.SENSITIVITYThe sensitivity indicates the detection limit of the method. It was calculated from twenty (20) determinations of phosphatase, a sample absent of analytical. An average value of 0,419 U/L, with standard deviation of 0,004 U/L. The sensitivity corresponds to the sum of the average found with three times the standard deviations: 0,429 U/L.LINEARITYThe reaction is linear up to 500 U/L. For samples with higher values dilute the serum using Sodium Chloride 0,85%, repeat the dosage and multiply the result by the dilution factor.

QUALITY CONTROLMaterials

Identify material internal control and external quality assurance, citing manufacturer and catalog number.

Referring SOP for cleaning and drying of materials used.

Internal Control

Describe the periodic calibration of pipettes, equipment used, temperature control and refrigerators for storage of kits.

It should be a routine practice of the Clinical Laboratory using control serum to check the precision and accuracy of measurements.

Quote SOP for internal control.

External Control

Describe the procedures used in quality assessments made by inter-laboratory comparison programs or other quality controls.Management of the data obtained in the Internal and External Control

Set as the control data are stored and managed.

Refer to the manual or POP for quality assurance.DIAGNOSTIC SIGNIFICANCEThe alkaline phosphatase is present in high concentrations inbones, liver, intestine and placenta. Constitutes a useful indicator of liver and bone diseases associated osteoblastic hyperactivity. Conditions in which alkaline phosphatase is increased:

in liver diseases and biliary tract in metastasis liver and bone metastasis, in acromegaly, in hyperthyroidism in rickets in infectious mononucleosis, Pagets disease (osteoblastic activity) and physiological bone growth. Decreased values of alkaline phosphatase can be observed in hypothyroidism, growth retardation in children, hypophosphatasia (inborn metabolic error), serious malnutrition.BIBLIOGRAPHIC REFERENCES1 - COLEMAN, C. M.; STROJE, R. C.: Clin. Chem. Acta 13: 401, 1966.

2 - ROY, A. V.: Clin. Chem. 16:431, 1970.




6 - CARL, A. B. and EDWARD, R. A.: Tietz Textbook of Clinical Chem 2nd ed., 1994, 1942-1943.Name SignatureDate

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Quibasa/Bioclin

SOP Phosphatase Alkaline Review: January/12

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Pop Fosfatase Alcalina