Dian Widiyanti,SSi,MSi,Ph.D Bagian Mikrobiologi FK Universitas YARSI

PEMERIKSAAN SEROLOGI

Serologi Definisi : Ilmu yang mempelajari antibodi dan

reaksinya terhadap antigen

Pemeriksaan serologi : pemeriksaan berdasarkan adanya interaksi antigen dan antibodi

Dasar pemeriksaan serologi: Reaksi antigen-antibodi bersifat spesifik

Suatu antigen hanya bereaksi terhadap antibodi yang ditimbulkannya atau oleh antigen yang dekat hubungannya.

Bertujuan mendeteksi antibodi dengan antigen yang sudah diketahui atau sebaliknya

Penggunaan pemeriksaan serologi Diagnosis penyakit infeksi

Mikroorganisme sulit dikultur

Mikroorganisme terlalu berbahaya untuk dikultur

Teknik kultur yang sesuai belum ada

Mikroorganisme membutuhkan waktu lama untuk tumbuh

Diagnosis penyakit autoimun Deteksi anti-dsDNA antibodi pada SLE

Penentuan golongan darah ABO dan jenis Rh

Jenis-jenis pemeriksaan serologi

1. Agglutinasi

2. Flocculation

3. Presipitasi

4. Complement fixation

5. Immunoassay

Cross-linking Ag-Ab

Antibody-antigen equivalent

Fungsi pemeriksaan serologi

Kualitatif

- Mendeteksi adanya antibodi atau antigen dalam suatu sampel klinik

Kuantitatif

- Mengetahui titer antibodi atau antigen yang terdapat dalam sampel klinik

Titer : pengenceran terkecil antigen/antibodi yang masih menunjukkan hasil positif

Interpretasi tes serologi Kuantitatif serum fase akut dan serum fase

konvalesen Kenaikan titer antibodi (seroconversion) 4 x

infeksi baru

Agglutination Definisi : Interaksi antibodi dengan antigen

partikel membentuk gumpalan (clumping) yang dapat terlihat.

Jenis aglutinasi :

1. Direct agglutination

Ab direaksikan langung dengan antigen, atau sebaliknya

2. Indirect agglutination

Ag/Ab dilekatkan pada partikel, baru direaksikan dengan sampel Jenis partikel yang digunakan:

Bakteri/komponen bakteri koaglutinasi

Sel darah merah hemaglutinasi

Partikel latex latex aglutinasi

Agglutination

Steps in Agglutination

Sensitization

Agglutination is a two-step process that results in the formation of a stable lattice network. The first reaction involves antigen-antibody combination through single antigenic determinants on the particle surface and is often called sensitization.

Steps in Agglutination

Lattice formation The second stage

representing the sum of interactions between antibody and multiple antigenic determinants on a particle, is dependent on environmental conditions and the relative concentrations of antigen and antibody.

Direct agglutination Widal tes typhoid

Menggunakan antigen H (flagel) dan antigen O (somatic) S. typhi direaksikan terhadap sampel darah

Coagglutination

Antibodi dilekatkan pada bakteri atau komponen dari bakteri (i,.e Protein A S. aureus)

Latex agglutination

Hemagglutination

1/2

1/4

1/8

1/1

6

1/3

2

1/6

4

1/1

28

1/2

56

1/5

12

1/1

02

4

Pos.

Neg

.

Titer

64

8

512

Treponema pallidum hemagglutination (TPHA)

Kontrol positif

Serum negatif

Kontrol negatif

Serum pasien

Merupakan tes spesifik untuk diagnosis siphilis Antigen T. pallidum dilekatkan pada SDM

Hemagglutination inhibition

Virus memiliki hemagglutinin yang dapat menyebabkan hemaglutinasi SDM

Apabila diberikan antibodi yang spesifik terhadap virus tersebut, maka virus akan berikatan dengan antibodi dan menyebabkan hemaglutinasi dihambat (hemagglutination inhibition)

Flocculation

RPR atau VDRL non treponemal test syphilis Kardiolipin direaksikan dengan serum pasien dan

diamati terbentuknya flokulasi

Presipitasi Interaksi antibodi

dengan antigen terlarut (soluble) membentuk presipitasi yang terlihat.

Jenis :

Presipitasi tabung

Radial immunodifusion

Double immunodiffusion (Outerlochny method)

Presipitasi tabung

Radial immunodifusion

Double diffusion (Outerlochny method)

Elek-Ouchterlochny test

Immunoelectrophoresis

o Modifikasi double diffusion

o Dilakukan pada agar

o Prosedur : sample dimasukkan

ke dalam sumur/lubang

sampel. Arus listrik dialirkan,

dan antigen akan bermigrasi

menurut ukuran dan

muatannya. Antibodi

dimasukkan ke dalam agar. Bila

antibodi spesifik terhadap

antigen presipitasi

o Termasuk dalam kualitatif tes

Fiksasi komplemen

Dasar : ikatan antigen dan antibodi akan mengaktifkan komplemen

Terbentuknya komplek antigen-antibodi- komplemen indikator sisteim hemolitik atau amboseptor RBC dan hemolisin

Ag + Ab (positif ) C+Ag+Ab tidak hemolise

Ag + Ab (negatif) Ag+Ab C+amboseptor hemolise

Interpretasi hasil

Kontrol

Percobaan

Positif Negatif Remming

Immunoassay

Mengetahui terbentuknya ikatan antigen dan antibodi, dimana salah satunya dilabel

Jenis label :

Radioaktif radioimmunoassay (RIA)

Enzim Enzyme immunoassay (EIA) atau Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)

Fluorescence ImmunoAssay (FIA)

Immunoblotting

Immunochromatography

Radioimmunoassay

EIA atau ELISA

Ag (Ab) dilekatkan pada permukaan microtiter plate

Deteksi menggunakan Ab yang dilabel (i.e horseradish peroxidase (HRP), alkaline phosphatase (AP))

Jenis- jenis ELISA :

Direct ELISA

Indirect ELISA

Sandwich ELISA

Competitive ELISA

Direct ELISA

Umumnya digunakan untuk mendeteksi antigen dalam suatu sampel

Antibodi spesifik langsung dilabel dengan enzim, dan direaksikan dengan sampel yang mengandung antigen

Terbentuknya ikatan antigen-antibodi dideteksi dengan adanya perubahan warna, setelah ditambahkan katalisator enzim

Indirect ELISA

- Umumnya digunakan untuk mendeteksi adanya antibodi dalam suatu sampel

- Antigen dilekatkan terlebih dahulu, kemudian ditambahkan sampel yang diuji ada/tidaknya antibodi spesifik. Antibodi kedua yang dilabel dan spesifik terhadap antibodi manusia ditambahkan dan akan terikat dengan kompleks Ag-Ab, serta dideteksi perubahan warnanya, setelah ditambah katalisator

Sandwich ELISA

Competitive ELISA

Fluorescence immunoassay

Direct : salah satu komponen (Ag/Ab) langsung dilabel dengan zat fluorescence, dan direaksikan dengan sampel.

Indirect : antigen dan antibodi direaksikan terlebih dahulu, baru ditambahkan antibodi kedua (sekunder) yang dilabel dan spesifik terhadap antibodi manusia. Hal ini untuk meningkatkan sensitivitas

Contoh jenis label : FITC (Fluorescein isoyhiocyanate), rhodamine

Immunoblotting

Immunochromatography (lateral flow test)

Dengue diagnosis

Immunochromatography dengue NS-1 structural protein antigen Acute phase (1-5 days)

IgG and IgM antibody

Acute and early convalescence phase (3-14 days)