Pembuatan Apusan Darah

8/19/2019 Pembuatan Apusan Darah

1/14

Fakultas Kedokteran Universitas Islam Indonesia Yogyakarta @2013

pembuatan pengecatan

sedi n pus d r hPEMBUATAN DAN PENGECATAN SEDIAAN APUS DARAH TEPI

(PERIPHERAL B LOOD SMEAR = FILM)

TIK : Mahasiswa mampu melakukan pembuatan dan melakukan pengecatansediaan apusan darah tepi.

Sediaan Apus Darah berguna untuk :- Hitung Jenis Lekosit secara manual- Pemeriksaan Morfologi Darah Tepi- Pemeriksaan malaria- Cek jumlah trombosit

Alat-alat yang diperlukan dalam pembuatan dan pengecatan sediaan apus darah tepiadalah:1. Kaca obyek (slide/object glass) yang bersih, kering dan baru2. Kaca pemulas (spreader/penggeser)3. Pipet darah dan pengaduk

4. Rak pengecatan5. Rak pengeringan6. Timer/pencatat waktu

Reagensia yang diperlukan:1. Cat Romanowsky

- Wright- Leishman- May Grunwald- Giemsa

2. Buffer distilled water pH 7,2 (larutan penyangga) untuk melarutkan cat3. Methanol (90%) untuk fiksasi

Darah yang digunakan :1. Yang terbaik adalah bahan darah langsung/tanpa antikoagulan (kapiler, vena)2. Darah EDTA harus sesegera mungkin dibuat, karena akan mempengaruhi hasil.


2/14


CARA PEMBUATAN SEDIAAN APUS :

Alat yang diperlukan: 1. Kaca obyek yang bersih2. Kaca pemulas

Cara membuat kaca pemulas:a. Pilih sebuah kaca obyek dengan tepi

yang rata. b. Buatlah tanda diagonal pada dua sudut

tepi kaca obyek.c. Potonglah kedua sudut tersebut.

- Kaca obyek yang akan digunakan untukpembuatan apusan harus benar-benar bersih,kalau perlu dibersihkan dengan etermenggunakan kain halus.

- Pegang kaca obyek dengan ibu jari dantelunjuk tangan kiri. Letakkan setetes darah (2

atau 3 mm) sekitar 1 cm dari tepi kaca obyek.- Dengan tangan kanan, letakkan tepi dari kacapemulas di depan tetesan darah dengan sudut30 – 45 derajat.

- Geserlah kaca pemulas ke belakang sampaimenyentuh tetesan darah.


3/14


- Biarkan darah menyebar sepanjang tepi kacapemulas.

- Doronglah kaca pemulas ke ujung kaca obyekdengan gerakan halus sampai seluruh darahmenyebar menjadi apusan yang cukup tipis

- Darah dari pasien anemia seharusnya diapusdengan lebih cepat.

- Biarkan sediaan kering di udara, lalu tulislah identitas pasien (berupa nomor urut sediaan)pada bagian kepala dari sediaan dengan pensil kaca.

Ciri-ciri sediaan apus yang baik: - Panjang apusan 1/2 - 2/3 panjang kaca - Harus ada bagian yang cukup tipis untuk

diperiksa- Pinggir sediaan rata, tidak berlubang-

lubang dan bergaris-garis

A : memenuhi semua kriteria B : tidak memenuhi semua kriteria

Beberapa hasil pembuatan sediaan apus yang kurang baik

Hasil pembuatan sediaan apus yangideal


4/14


Sumber kesalahan pembuatan sediaan apus:

- Film yang terlalu tebal- Film yang terlalu tipis- Gambaran berpasir

- Garis-garis pada bagian ekor apusan


5/14


CARA PENGECATAN SEDIAAN APUS

Pengecatan Wright :

1. Letakkan preparat pada rak pengecatan dalam posisi mendatar, dengan lapisan darah di atas2. Teteskan 20 tetes Cat Wright pada tengah sediaan

dan biarkan 5 menit

3. Teteskan larutan penyangga pada sediaan samabanyak dan biarkan 20 menit

4. Cuci dengan air mengalir (sediaan apus dipegangdengan posisi miring dengan menggunakan

penjepit atau dengan sedikit memiringkan rak pengecatan)

5. Letakkan sediaan dengan posisi miring pada rak pengeringan, dan biarkan kering di udara

Cara pemeriksaan sediaan apus darah tepi : Periksalah sediaan apus di bawah mikroskop dengan pembesaran lemah (obyektif 10 x)

- Sel-sel lekosit sebaiknya merata penyebarannya- Taksirlah kesan jumlah lekosit (perbandingan lekosit per jumlah eritrosit ), Apakahsesuai dengan hitung lekosit ? Bila tidak sesuai dengan jumlah lekosit, makapenghitungan harus diulang.

Periksalah sediaan dari daerah kepala sampai ke ekor. Pada umumnya bagian ekor sel-selnya lebih besar, seperti monosit, netrofil

Sel yang lebih kecil seperti limfosit ada di bagian kepala badan. Pada pengamatan sepintas, catatlah bila dijumpai adanya kelainan.


6/14


Pilihlah sediaan di bagian yang eritrositnya tidak saling menumpuk (daerah ideal) danteteskan setetes minyak imersi kemudian amati dengan perbesaran kuat (obyektif 100x)

Gambaran mikroskopis sediaan apus pada beberapa tempat :

Ideal Ekor Kepala

Sumber kesalahan dalam pembuatan dan pengecatan sediaan apus :- Gelas obyek tidak bersih, kotor dan berlemak- Kaca penggeser tidak rata- Darah yang diteteskan terlalu sedikit atau terlalu banyak- Waktu pengecatan terlalu lama atau kurang lama- Pencucian terlalu lama

Berikut ini beberapa contoh pembuatan apusan dan pengecatan yang kurang baik :

Metanol tercampur air Satelitosis (karena pengaruh EDTA)

ideal

ekorkepala


7/14


Cat kotor

Pelaporan Hasil- Alat : Differential cell counter - Buatlah tabel seperti di bawah ini:

Jumlah sel Nilai Normal (%) Jumlah Sel setiap lapangan pandang

I II III IV V VI VII VIII IX dst Basofil 0 – 1 Eosinofil 1 – 4 Netrofil batang 2 – 6 Netrofil segmen 55 – 65 Limfosit 25 - 33 Monosit 3 – 6 Total 100

Asam:- Buffer terlalu asam - Suasana asam


8/14


Prosedur Penghitungan :

1. Pilihlah daerah dimana lekosit tersebar merata dan jelas (daerah ideal) yaitu pada bagianapusan yang tipis dengan lensa obyektif 10X.

2. Setelah menemukan daerah ideal, tetesi dengan minyak emersi dan periksa dengan lensa

obyektif 100X.3. Dengan menggunakan pengatur mikro pada mikroskop, mulailah menghitung dari pinggiransediaan ke arah bawah.

4. Setelah itu, geserlah kekanan kemudian keatas lagi dan seterusnya.


9/14


CHEKLIST DAN KRITERIA PENILAIANPEMBUATAN SEDIAAN APUS DAN PENGECATAN WRIGHT

NO ASPEK YANG DINILAI Feedback

1 Menyebutkan dan menunjukkan kelengkapan alat dan bahan (darahEDTA, pengaduk, kaca objek, kaca pemulas, pensil kaca/spidolpermanen, rak pengecatan/rak pengeringan, cat wright, larutanpenyangga, penjepit, label identitas, sarung tangan)

2 Mencuci tangan (simulasi) dan Memakai sarung tangan Melakukan simulasi mencuci tangan tanpa menggunakan air, namuntatacara mencuci tangan tetap dilakukan.

3 Homogenisasi darah EDTAHomogenisasi dengan cara mengaduk darah menggunakan pengadukatau mengggoyang-goyangkan tabung berisi darah

4 Meneteskan 1 tetes (2 atau 3 mm) darah pada gelas objek + 1 cm daritepi

5 Meletakkan kaca pemulas di depan tetesan darah 6 Menggeser kaca pemulas ke belakang sampai menyentuh tetesan

darah 7 Menunggu darah menyebar rata sepanjang kaca pemulas8 Mendorong kaca pemulas ke depan dengan stabil, tidak terlalu

cepat/lambat membentuk sudut ± 30 0 – 45 0 sampai darah habis9 Menilai hasil sediaan (tunjukkan ke evaluator)

a. Panjang apusan 1/2 - 2/3 panjang kaca b. Harus ada bagian yang cukup tipis untuk diperiksac. Pinggir sediaan rata, tidak berlubang-lubang dan bergaris-garis Ketiga kriteria terpenuhi

10 Mengeringkan sediaan di udara (simulasi waktu) 11 Memberi identitas (nomor urut sediaan, nama, nomor RM, tanggal

pembuatan sediaan).Memberi identitas menggunakan pensil kaca pada bagian kepalasediaan sebelum dilakukan pengecatan (atau dengan spidol permanendi samping bagian kepala sediaan yang tidak ada darahnya)

12 Meletakkan sediaan di atas rak pengecatan 13 Menggenangi sediaan dengan cat wright ± 20 tetes pada tengah

sediaan selama 5 menit (simulasi waktu) 14 Menggenangi sediaan dengan larutan penyangga sama banyak

selama 20 menit (simulasi waktu)

14 Mencuci dengan air mengalirSediaan apus dipegang dengan posisi miring dengan menggunakan

penjepit 15 Mengeringkan sediaan di udara, posisi miring (simulasi waktu)


10/14


SEDIAAN DARAH UNTUK MALARIA

Alat dan Bahan: Kaca obyek yang bersih dan kering Lancet steril

70% ethanol dan air Kasa steril Sarung tangan bedah Pensil kaca Box penyimpan Catatan pelaporan

A. Pembuatan Sediaan Apus Malaria

Pegang tangan pasien. Desinfeksi jari ketiga dengan kapas

alkohol 70%.

Tusuk jari ketiga dengan lancet secaracepat. Pada bayi bisa pada ibu jarikaki.

Ibu jari tangan tidak dianjurkan, baikpada anak maupun dewasa .

Hapus darah pertama dengan kasakering.

Tetesan berikutnya (2-3 tetes darah)disentuhkan pada kaca objek, pada 1cm dari tepi kaca. Tetesan ini akandigunakan untuk membuat sediaantebal.

Kemudian, teteskan lagi 1 tetes darahdengan jarak 1 cm dari tetesan

sebelumnya. Tetesan ini digunakanuntuk membuat sediaan darah tipis.

Usap ujung jari dengan kasa kering.

Keterangan: u ntuk la t ihan d ig unakan darah vena dengan ant ikoagu lan EDTA


11/14


Pembuatan sediaan darah tipis (seperti pada materi sebelumnya)

Pembuatan sediaan darah tebal : Dengan menggunakan ujung

kaca objek, lakukan gerakan

memutar pada tepi tetesan 3-6putaran sehingga diperolehsediaan darah tebal dengandiameter + 1-1,5 cm.

Keringkan.

Pemberian label dilakukan padasediaan darah tipis.

Contoh Hasil Sediaan Apus Darah Tipis dan Tebal:

B. Pengecatan Sediaan

Bahan dan alat yang diperlukan: Sediaan apus darah tipis dan tebal yang sudah kering Larutan Buffer Methanol murni Larutan Giemsa: 1 bagian Larutan Giemsa induk dalam 30-50 larutan pengencer pH 7,2.


12/14


Air mengalir

Cara Pengecatan Sediaan Tipis: Setelah sediaan kering, fiksasi sediaan dengan methanol absolut. Keringkan. Genangi dengan larutan Giemsa 30-60 menit. Cuci dengan air mengalir, keringkan. Periksa di bawah mikroskop dengan perbesaran kuat.

Cara Pengecatan Sediaan Tebal: Setelah sediaan kering, genangi dengan larutan buffer selama 5 menit (sampai

terhemolisis). Keringkan. Genangi dengan larutan Giemsa selama 30-60 menit. Cuci dengan air mengalir, keringkan. Periksa di bawah mikroskop dengan perbesaran kuat.


13/14


PEMBUATAN SEDIAAN DARAH MALARIA DENGAN PENGECATAN GIEMSA(SEDIAAN DARAH TEBAL DAN TIPIS)


1 Menyebutkan dan menyiapkan kelengkapan alat dan bahan (darahEDTA, pengaduk, kaca obyek, kaca pemulas, pensil kaca/spidolpermanen, rak pengecatan/rak pengering, cat Giemsa, larutan metanolabsolut, larutan penyangga/Buffer, penjepit, label identitas, sarungtangan)

2 Memakai sarung tangan3 Homogenisasi darah EDTA 4 Meneteskan 2-3 tetes darah pada gelas objek + 1 cm dari tepi 5 Meneteskan 1 tetes darah pada gelas objek + 1 cm dari tetesan pertama Membuat sediaan tipis 6 Meletakkan kaca pemulas di depan tetesan darah 7 Menggeser kaca pemulas ke belakang sampai menyentuh tetesan

darah 8 Menunggu darah menyebar rata sepanjang kaca pemulas9 Mendorong kaca pemulas ke depan dengan stabil, tidak terlalu

cepat/lambat membentuk sudut ± 30 0 – 45 0 sampai darah habis.10 Menilai hasil sediaan (tunjukkan ke evaluator)

a. Panjang apusan 1/2 - 2/3 panjang kaca b. Harus ada bagian yang cukup tipis untuk diperiksac. Pinggir sediaan rata, tidak berlubang-lubang dan bergaris-garis

Ketiga kriteria terpenuhi Membuat sediaan darah tebal 11 Meletakkan salah satu ujung kaca objek lain pada tetesan darah

12 Membuat gerakan memutar (3-6 kali putaran) pada tepi tetesan darahsampai diperoleh sediaan tebal diameter + 1-1,5 cm

13 Mengeringkan sediaan di udara (simulasi waktu) 14 Memberi identitas (nomor urut sediaan)

Pada bagian kepala sediaan tipis sebelum dilakukan pengecatandengan pensil kaca (atau dengan spidol permanen di bagian sediaanyang tidak ada darahnya)

Mengecat sediaan darah malaria tebal dan tipis 15 Meletakkan sediaan di atas rak pengecatan 16 a. Menggenangi sediaan darah tipis dengan larutan methanol absolut

selama 5 menit/sampai sediaan kering (simulasi waktu)

b. Menggenangi sediaan tebal dengan larutan penyangga padatengah sediaan selama 5 menit/sampai seluruh darah terhemolisis(simulasi waktu)

Dilakukan dengan hati hati, metahnol tidak boleh mengenai sediaandarah tebal, begitu juga larutan biffer tidak boleh mengenai sediaandarah tipis.

17 Membuang larutan penyangga ke sisi tepiDilakukan dengan hati hati tanpa mengenai sediaan darah tipis

18 Mengeringkan sediaan (simulasi waktu)


14/14



19 Menggenangi seluruh sediaan tebal dan tipis dengan larutan Giemsaselama 30-60 menit (simulasi waktu)

20 Mencuci dengan air mengalirSediaan apus dipegang dengan posisi miring menggunakan penjepit,tanpa membuang larutan Giemsa terlebih dahulu

21 Mengeringkan sediaan di udara, posisi miring (simulasi waktu) 22 Memberi identitas (Nama, nomor RM, tanggal pembuatan sediaan)

setelah pengecatan dengan label identitas, pada bagian kepala sediaan

Documents

Pembuatan Apusan Darah