GE Healthcare Korea

Application note IN Cell Analyzer 2000

제목 : Mouse Brain fluorescence imaging Analysis

–based on Intensity & Area of Investigator

[Summary]

IN Cell Analyzer systems 을 사용하여 microslide 상에 고정시킨 mouse brain image 를 찍은 뒤,

Investigator software 의 stitching tool 을 이용하여 8 개 FOVs 에서 1 개의 fused image 를

만든 후, intensity 값을 이용하여 total granules 을 counting 하였습니다. 그후, area 에

근거하여 142um2 이상의 크기를 가진 large granules 를 선별한 뒤, 평균값을 알아 보았습니다.

Fig 1) Microslide상의 mouse brain 의 Imaging Processing 과정

분석

H

Stitching

[ Materials & Results]

IN Cell Analyzer 2000 Imaging system (2-D Deconvolution software)

IN Cell Investigator software 28-4089-71

IN Cell Analyzer Slide Imaging Module 28-9544-75

10x 0.45NA objective standard

• Microslide : Mouse brain section ( with FITC )

Mouse brain section slide 1. 4 개의 microslide 에서 12 sample 을 IN Cell Analyzer 에서 preview 로 먼저 scan 한 후

첫번째 microslide 내의 중간에 위치한 B1 brain sample (red box)을 선택하였습니다 (Fig2).

Figure 1

Fig 2) 첫번째 micro slide 내의 중간에 위치한 B1 brain sample 을 선택함. Figure 3

Fig3) target region인 8개의 FOVs 선택함. 3. 선택한 8개의 region을 stitching한 후 Investigator software에서 sample의 intensity를

활용하여 mouse brain morphology (green color) 를 만들었습니다.

Fig4) 선택된 8개의 FOVs를 하나의 이미지로 만든 후, Investigator software로 boundary 만듬.

2. B1 sample 에서 FITC filter set 을 이용하여 이미징을 얻고, 그 후 target 으로 생각되는 internal

region 에서 8 field of views (FOVs)만을 선택하였습니다.

4. FITC로 염색된 granules의 Intensity 값에 근거하여 mouse brain section내에 있는 granules를

선별하여 counting한 결과 393개 였습니다.

Fig5) all granules를 intensity에 근거하여 393개를 counting함.

The counting of granules with large area

The counting of granules with large area

Average intensity large granules

The counting of total granules

5. Mouse brain section내에서, 면적이 142um2 보다 큰 granules을 large granules로

counting 했을때, 그 숫자는 45 였고, 평균 area 값은 342um2였습니다.

Fig6) 142um2 보다 큰 사이즈의 granules를 선별한 후, counting했을 때 그 값은 45였고,

그 평균 area 값은 342um2 이었음.

The counting of granules with large area

Average intensity large granules The counting of total granules

[ Conclusions & Discussion ] 이번 실험으로 mouse brain 의 특정 부위를 FITC 만을 사용하여 염색한 경우에 high

intensity 를 보이는 경우, 그 intensity 값을 통해서 먼저 전체 granules 을 counting 할 수 있다는

것을 보여줍니다. 그 후, large area 의 특징을 가지고 있는 granules 의 단백질들을 area 를

이용하여 다시 선별한 후, 그 숫자와 평균 area 를 분석하였습니다. 이번 application 을 통해서

microslide 상에 올려져 있는 mouse brain 의 특정 단백질들을 IN Cell Analyzer Investigator

software 를 이용하여 순차적으로 intensity 값과 area 값을 활용하여 선별한 후, 정량할 수

있다는 것을 확인할 수 있었습니다.