Upload
daniela-diaconescu
View
192
Download
10
Embed Size (px)
Citation preview
MICROSCOPIE ELECTRONICA
1
puterea cea mai mare de rezoluţie puterea cea mai mare de rezoluţie a unui microscop optica unui microscop optic = = 0,2μ0,2μ
2
Principiul M.E. 1924 De Br1924 De Broglioglie e - - comportarea comportarea
dualistă undadualistă unda - corpuscul a - corpuscul a particulelor încărcate electric . particulelor încărcate electric .
D = λ / N x sinαD = λ / N x sinα
Λ =h /M * vΛ =h /M * v
3
4
Microscopul electronic de transmisie
5
tunul electronic este tunul electronic este sursa electronilor de sursa electronilor de inalta energie, lentile inalta energie, lentile electromagnetice, electromagnetice,
camera in care se camera in care se introduce preparatulintroduce preparatul
lentila proiectorlentila proiector ecranul fluorescent pe ecranul fluorescent pe
care se formeaza care se formeaza imaginea.imaginea.
Principiul MET
Electronii care strElectronii care străbat preparatul sunt ăbat preparatul sunt deviaţi în funcţie de grosimea şi densitatea deviaţi în funcţie de grosimea şi densitatea preparatuluipreparatuluistructurile mai dense vor produce un structurile mai dense vor produce un
grad mai mare de dispersie a electronilor grad mai mare de dispersie a electronilor – zone electronodense, mai întunecate – zone electronodense, mai întunecate
structurile mai subţiri vor permite o structurile mai subţiri vor permite o treceretrecere mai uşoară a electronilor – zone mai uşoară a electronilor – zone electronoclareelectronoclare
6
Interactiunea electroni- preparat
7
Caracteristicile M.E.
Puterea de mPuterea de măărirerire Puterea de rezolutiePuterea de rezolutie
Puterea maxima de marire utila Puterea maxima de marire utila este de aproximativ 1 milion de ori.este de aproximativ 1 milion de ori.
8
Caracteristicile M.E.
Puterea de rezoluţiePuterea de rezoluţie Teoretic, puterea maxima de rezolutie Teoretic, puterea maxima de rezolutie
==1- 2 Å.1- 2 Å.1 1 ÅÅ= 10= 10-10-10 m m Practic , puterea de rezolutie este de Practic , puterea de rezolutie este de
1/ 10 din grosimea sectiunii 1/ 10 din grosimea sectiunii examinate examinate ~~ 60 Å. 60 Å.
9
Caracteristicile M.E.
Numai pentru preparatul microscopic Numai pentru preparatul microscopic permanent!permanent!
Imaginea finala este MONOCROMA Imaginea finala este MONOCROMA
zone electronodense si zone electronodense si electronoclareelectronoclare
10
11
ETAPE
RecoltareRecoltare FixareFixare DeshidratareDeshidratare ClarificareClarificare ImpregnareImpregnare
IncluzieIncluzie SectionareSectionare Diferentierea Diferentierea
structurilor prin structurilor prin contrastarecontrastare
Montare pe Montare pe grilagrila
12
Criterii pentru aprecierea unei imagini corecte
Absenţa spaţiilor astructurateAbsenţa spaţiilor astructurate Continuitatea membranelorContinuitatea membranelor Aspectul particular al unor organiteAspectul particular al unor organite Aspectul general este acelaşi de fiecare Aspectul general este acelaşi de fiecare
dată, indiferent de fixatorul sau metoda dată, indiferent de fixatorul sau metoda folosităfolosită
13
MICROSCOAPE ELECTRONICE MicroscopulMicroscopul electronic cu baleiaj electronic cu baleiaj sau sau
scanning.scanning. imagini tridimensionale ale suprafetelor imagini tridimensionale ale suprafetelor
celulelor, tesuturilor sau chiar a organelorcelulelor, tesuturilor sau chiar a organelor acelaşi principiu al interacţiunii cu un acelaşi principiu al interacţiunii cu un
fascicul de electronifascicul de electroni importanţi pentru obţinerea imaginii sunt importanţi pentru obţinerea imaginii sunt
electronii “reflectaţi” pe suprafaţa electronii “reflectaţi” pe suprafaţa preparatuluipreparatului
14
MICROSCOPIE DE BALEIAJ
15
Ingheţare - fracturare
Permite vizualizarea suprafeţelor Permite vizualizarea suprafeţelor rezultate prin clivajul anumitor structuri rezultate prin clivajul anumitor structuri (ex: clivajul membranei celulare)(ex: clivajul membranei celulare) se realizează un mulaj metalic sau de se realizează un mulaj metalic sau de
carboncarbon
16
Ingheţare - fracturare
17