Facultad de ingeniería química

PRACTICA N0 6

COLIFORMES,ECHERICHIA COLI Y SALMONELLA

I. OBJETIVOS- Establecer la importancia que tiene la presencia de microorganismos

del género Salmonella, Eschericha coli y Coliformes en los alimentos.- Manejar la metodología necesaria para su detección e identificación

en alimentos.

II. FUNDAMENTO TEORICO La preparación adecuada de un medio de cultivo nos permite disponer de los nutrientes y condiciones necesarias para favorecer el crecimiento de los microorganismos en el laboratorio.

SalmonellaSon bacilos gran negativos,aéreo –anaerobios facultativos pertenecientes a la familia Enterabacteraceae, su tamaño oscila de a,3-1 µm, normalmente son móviles aun que existen alguinas excepciones. Las salmonellas se multiplican bien en medios ordinarios.Las colonias son al cabo de 18-24 horas de 2 a 3 mm de diámetro, la temperatura optima de crecimiento se encuentra entre 35-37ºC; presentan una cierta sensibilidad al calor.

Salmonella es un género de bacterias que pertenece a la familia Enterobacteriaceae, formado por bacilos gramnegativos, anaerobios facultativos, con flagelos perítricos y que no desarrollan cápsula ,ni esporas. Son bacterias móviles que producen ácido sulfhídrico (H2S). Emplean glucosa por poseer una enzima especializada, pero no lactosa, y no producen ureasa. No tienen metabolismo fermentativos.

Es un agente productor de zoonosis de distribución universal. Se transmite por contacto directo o contaminación cruzada durante la manipulación, en el procesado de alimentos o en el hogar, también por vía sexual.

Algunas salmonellas son comunes en la piel de tortugas y de muchos reptiles, lo cual puede ser importante cuando se manipulan a la vez este tipo de mascotas y alimentos.

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Echerichia coli

E. coli» redirige aquí. Para el protozoario con la misma abreviatura, véase Entamoeba coli

.

La Escherichia coli (pronunciado /eske'rikia 'koli/), también conocida por la abreviación de su nombre, E. coli, es quizás el organismo procariota más estudiado por el ser humano. Se trata de una enterobacteria que se encuentra generalmente en los intestinos animales, y por ende en las aguas negras, pero se lo puede encontrar en todos lados, dado que es un organismo ubicuo. Fue descrita por primera vez en 1885 por Theodore von Escherich, bacteriólogo alemán, quien la denominó Bacterium coli. Posteriormente la taxonomía le adjudicó el nombre de Escherichia coli, en honor a su descubridor.

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Esta y otras bacterias son necesarias para el funcionamiento correcto del proceso digestivo, además de producir las vitaminas B y K. Es un bacilo que reacciona negativamente a la tinción de Gram (gramnegativo), es anaerobio facultativo, móvil por flagelos peritricos (que rodean su cuerpo), no forma esporas, es capaz de fermentar la glucosa y la lactosa y su prueba de IMVIC es ++--.

Es una bacteria utilizada frecuentemente en experimentos de genética y biología molecular

Coliformes

La denominación genérica coliformes designa a un grupo de especies bacterianas que tienen ciertas características bioquímicas en común e importancia relevante como indicadores de contaminación del agua y los alimentos.

Coliforme significa con forma de coli, refiriéndose a la bacteria principal del grupo, la Escherichia coli, descubierta por el bacteriólogo alemán Theodor von Escherich en 1860. Von Escherich la bautizó como bacterium coli ("bacteria del intestino", del griego κολον, kolon, "intestino"). Con posterioridad, la microbiología sistemática nombraría el género Escherichia en honor a su descubridor.

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III. EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS

Equipos:- Contador de colonias - Balanza analítica - Estufa

Materiales:- Pipetas de 5 ml- Placa petri- Tubo de ensayo - Probeta

Reactivos e insumos:- AGAR XLD- Agar mac conkey- Lejía

Muestra:- Queso suizo

IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

ANEXO 01

Cantidad de muestra necesaria y condiciones de conservación y tiempo de transporte

TIPO DE ENSAYO: MICROBIOLOGICO.TIPO DE MUESTRA: EMBUTIDOSTIPO DE ENVASE: BOLSA DE PLASTICO PRIMER USO.CANTIDAD DE MUESTRA: 200g.CONSERVACION: (00C a 40C).TIEMPO MAXIMO DE TRANSPORTE: DENTROS DE LAS 24 HORAS.

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ANEXO 02

Formato de etiqueta

IDENTIFICACION :QUESO T. SUIZO DE PLASTICO

LUGAR DE MUESTREO: Metro –ALFONSO UGARTEFECHA : 24/09/12

HORA:10:00am

TEMPERATURA: 40C.

LOTE: ---

MUESTREADO POR: Elena Mamani Tipula

PREPARACION DE LA MUESTRA

Fecha de inicio de la siembra: lunes 24 de setiembre, 10.40am T=370CPrimero se preparo la solución salina al 0.8% de sal de mesa.

1. Luego se separa 10 g de muestra en una bolsa de primer uso de cierre hermético (ZIPLOC).

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2. Seguidamente se agrego 90ml de la solución salina, para luego obtener diluciones de las muestras hasta 10-3.

3. Inmediatamente se calienta por separado los siguientes agares : El Agar XLD para Salmonella, el Agar Mac- Conkey tanto para Esterichia Coli como para Coliformes .

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4. Luego usamos 15ml de cada Agar, los cuales échanos a sus respectivas placas petri, esperamos a que se enfrié y por ultimo colocamos 1ml de muestra de concentración 10-3 en cada unos de ellos, haciéndolo de tal manera que toda esta se esparza.

FOTOS DE CADA MUESTRA CON LOS AGARES

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5. Por último Incubar a 37ºC durante 2 días y realizar lectura.

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FOTOS DE LOS AGARES HACIENDO EL CONTEO O LA IMAGEN DEL RESULTADO

Echericha coli

coliformes

Salmonella

V. RESULTADOS Y ANALISIS DE ACUERDO A LA NORMA

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I.8 Quesos no maduros (queso freso,mantecoso,ricotta,cabaña ,crema, petit suisse,mozarella, ucayalino,otros.)

En nuestro análisis

Agente microbiano

Limite por gramom M Resultado Concentració

n1. Coliformes 5*103 103 POSITIVO 64*103

2. Escherichia Coli

3 10 POSITIVO 32*103

3. Salmonella. Ausencia/25g

--- POSITIVO 70*103

1. ColiformesSegún la norma sobre esta en el límite, pero de todas formas encontramos la presencia de coliformes y nos puede hacer daño. Porque con el resultado sobre pasa el límite máximo M, es riegoso para el consumo humano.

2. Escherichia coli Como la muestra de queso fue de 10 g menor que 25 g según la norma si debió encontrarse la presencia de eschericha coli, lo que se quiere que mi muestra analizada es mayor a M significa que mi producto no es apto para el consumo humano, es riegoso

3. Salmonella Como nuestra muestra fue de 10 g, menor que 25g según la norma no debió encontrarse salmonella, lo cual quiere decir que nuestro queso está contaminado y lo pudo haber hecho por nuestras condiciones de trabajo o por el mismo ambiente del laboratorio.

VI. RECOMENDACIONES

Colocarse los guantes y la mascarilla durante la experiencia. Tratar de esparcir correctamente todo el Agar en la muestra al inicio. Una vez obtenida el cultivo tenerlo lo más hermético posible. Hacer la lectura cuando el cultivo este frio, pero que no pase mucho

tiempo.

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