Khảo sát thành phần hóa học và định lượng Flavonoid toàn phần trong vỏ thân cây Núc nác (Oroxylum indicum (L.) Vent.)

8/17/2019 Khảo sát thành phần hóa học và định lượng Flavonoid toàn phần trong vỏ thân cây Núc nác (Oroxylum indicum (L…

http://slidepdf.com/reader/full/khao-sat-thanh-phan-hoa-hoc-va-dinh-luong-flavonoid-toan-phan 1/108

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ

KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN --- ---

NGUYỄN HỮU PHONG

ĐOÀN THỊ LY KHA

KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ ĐỊNH

LƯỢNG FLAVONOID TOÀN PHẦN TRONG VỎTHÂN CÂY NÚC NÁC (OROXYLUM INDICUM (L.)

VENT.)

LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC

CHUYÊN NGÀNH CỬ NHÂN HÓA DƯỢC

Cần Thơ, tháng 12/2014

WW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON

WWW.BOIDUONGHOAHOCQUYNHON.BLOGSPOT.COMóng góp PDF bở i GV. Nguy ễ n Thanh Tú



TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ

KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN --- ---

NGUYỄN HỮU PHONG

ĐOÀN THỊ LY KHA

KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ ĐỊNH

LƯỢNG FLAVONOID TOÀN PHẦN TRONG VỎTHÂN CÂY NÚC NÁC (OROXYLUM INDICUM (L.)

VENT.)

LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC

CHUYÊN NGÀNH CỬ NHÂN HÓA DƯỢC

HƯỚNG DẪN KHOA HOC TS. TÔN NỮ LIÊN HƯƠNG

Cần Thơ, tháng 12/2014





NÚC NÁC (OROXYLUM INDI CUM (L.) VENT.)

NGUYỄN HỮU PHONG -PLi- LUẬN VĂN ĐẠI HỌC ĐOÀN THỊ LY KHA

LỜI CẢM ƠN

Chúng tôi xin chân thành bày tỏ lòng cảm ơn sâu sắc đến:

Ts. Tôn Nữ Liên Hương người cô hướng dẫn, một tấm gương nghiên cứukhoa học đã tận tình giảng dạy, hướng dẫn và quan tâm chúng tôi trong quátrình học tập ở trường.

Anh Nguyễn Đăng Khoa đã luôn động viên, giúp đỡ chúng tôi trong suốtquá trình làm luận văn.

Ts. Lê Thanh Phước, PGS. Ts. Bùi Thị Bửu Huê, Ts. Nguyễn TrọngTuân, CVHT. Phạm Bé Nhị, Bộ môn Hóa, Khoa Khoa Học Tự Nhiên, Trường

Đại Học Cần Thơ đã tạo điều kiện thuận lợi, giúp đỡ chúng tôi hoàn thành tốtluận văn này.

Các anh chị học viên cao học, các bạn sinh viên lớp Hóa Dược K37 vàcác bạn sinh viên ở phòng thí nghiệm Bộ môn Hóa, Khoa Khoa Học Tự Nhiên,

Trường Đại Học Cần Thơ về sự giúp đỡ, quan tâm, động viên của mọi ngườitrong suốt quá trình chúng tôi làm luận văn.

Và cuối cùng là lòng biết ơn sâu sắc nhất đến Cha Mẹ, cũng như tất cả

những người thân yêu trong gia đình đã luôn tạo mọi điều kiện tốt nhất về vậtchất lẫn tinh thần giúp chúng con hoàn thành quá trình học tập của mình.

Xin chân thành cảm ơn.






NGUYỄN HỮU PHONG -PLii- LUẬN VĂN ĐẠI HỌC ĐOÀN THỊ LY KHA

Trường Đại Học Cần Thơ Cộng Hòa Xã Hội Chủ Nghĩa Việt Nam Khoa Khoa Học Tự Nhiên Độc lập - Tự do - Hạnh phúc

Bộ Môn Hóa Học

NHẬN XÉT ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ HƯỚ NG DẪN1. Cán bộ hướng dẫn: Ts. Tôn Nữ Liên Hương

2. Đề tài: “Khảo sát thành phần hóa học và định lượng flavonoid toàn phần trongvỏ thân cây Núc nác (Oroxylum indicum (L.) Vent.)”

3. Sinh viên thực hiện: Nguyễn Hữu Phong MSSV: 2112068

Đoàn Thị Ly Kha MSSV: 2112031

Lớp: Hóa Dược – Khóa: 37

4. Nội dung nhận xét:

a) Nhận xét về hình thức của LVTN:

..............................................................................................................................

..............................................................................................................................

b) Nhận xét về nội dung của LVTN (đề nghị ghi chi tiết và đầy đủ):

Đánh giá nội dung thực hiện của đề tài:

..............................................................................................................................

..............................................................................................................................

Những vấn đề còn hạn chế:

..............................................................................................................................

..............................................................................................................................

c) Nhận xét đối với sinh viên tham gia thực hiện đề tài (ghi rõ từng nội dung chính do sinh viên nào chịu trách nhiệm thực hiện nếu có):

..............................................................................................................................

..............................................................................................................................

d) Kết luận, đề nghị và điểm: ............................................................................................................................................................................................................................................................

Cần Thơ, ngày… tháng… năm 2014 Cán bộ hướng dẫn

Ts. Tôn Nữ Liên Hương






NGUYỄN HỮU PHONG -PLiii- LUẬN VĂN ĐẠI HỌC ĐOÀN THỊ LY KHA

Trường Đại Học Cần Thơ Cộng Hòa Xã Hội Chủ Nghĩa Việt Nam Khoa Khoa Học Tự Nhiên Độc lập - Tự do - Hạnh phúc

Bộ Môn Hóa Học

NHẬN XÉT ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN1. Cán bộ phản biện: ……………………………………………………………

2. Đề tài: “Khảo sát thành phần hóa học và định lượng flavonoid toàn phần

trong vỏ thân cây Núc nác (Oroxylum indicum (L.) Vent.)”

3. Sinh viên thực hiện: Nguyễn Hữu Phong MSSV: 2112068

Đoàn Thị Ly Kha MSSV: 2112031

Lớp: Hóa Dược – Khóa: 37

4. Nội dung nhận xét: a) Nhận xét về hình thức của LVTN:

..............................................................................................................................

..............................................................................................................................

b) Nhận xét về nội dung của LVTN (đề nghị ghi chi tiết và đầy đủ):

Đánh giá nội dung thực hiện của đề tài:

..............................................................................................................................

..............................................................................................................................

Những vấn đề còn hạn chế:

..............................................................................................................................

..............................................................................................................................

c) Nhận xét đối với sinh viên tham gia thực hiện đề tài (ghi rõ từng nội dungchính do sinh viên nào chịu trách nhiệm thực hiện nếu có):

..............................................................................................................................

..............................................................................................................................

d) Kết luận, đề nghị và điểm:

..............................................................................................................................

..............................................................................................................................

Cần Thơ, ngày… tháng… năm 2014 Cán bộ phản biện






NGUYỄN HỮU PHONG -PLiv- LUẬN VĂN ĐẠI HỌC ĐOÀN THỊ LY KHA

TÓM TẮT NỘI DUNG LUẬN VĂN

Nội dung luận văn gồm các phần sau đây:

Chương 1: MỞ ĐẦU Trình bày lý do chọn đề tài, mục tiêu nghiên cứu, nội dung và phạm vi

nghiên cứu, các phương pháp tiếp cận đề tài.

Chương 2: TỔNG QUAN

Giới thiệu đại cương về cây Núc nác, tác dụng dược lý theo y học dân gian,

hoạt tính sinh-hóa theo các phương pháp nghiên cứu hiện đại.

Lược khảo các công trình nghiên cứu thành phần hóa học về cây Núc nác

trên thế giới. Qua đó, đánh giá sơ bộ tình hình nghiên cứu thành phần hóa học trên loài Oroxylum indicum (L.) Vent.

Chương 3: THỰC NGHIỆM

Sử dụng các phương pháp chiết ngâm dầm, chiết siêu âm (chiết rắn-lỏng,chiết lỏng-lỏng,…) để điều chế cao thô (cao MeOH, cao n-Hexane, cao

Dichloromethane, cao Ethyl acetate) và flavonoid toàn phần từ vỏ cây Núc nác.

Sử dụng các phương pháp sắc ký cột, sắc ký lớp mỏng, sắc ký lớp mỏng

điều chế, kết tinh trong dung môi thích hợp,... để khảo sát cao Dichloromethanevà phân lập được 4 hợp chất tinh khiết.

Sử dụng phương pháp quang phổ UV-Vis để định lượng flavonoid toàn

phần trong vỏ thân cây Núc nác.

Chương 4: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN

Phân lập và nhận danh cấu trúc của 4 hợp chất có tên lần lượt là:

- ORI.K1 là 5,7-dihydroxy-2-phenylchroman-4-one (Pinocembrin).

- ORI.P1 là 5,7-dihydroxy-6-methoxy-2-phenyl-4H-chromen-4-one

(Oroxylin A).

- ORI.P2 là 5,7-dihydroxy-2-phenyl-4H-chromen-4-one (Chrysin).

- ORI.P3 là 5,6,7-trihydroxy-2-phenyl-4H-chromen-4-one (Baicalein).

Cấu trúc của các chất trên được xác định bằng các phương pháp phổ hiệnđại như: UV-Vis, ESI-MS, 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT, HSQC, HMBC và kết

hợp so sánh với các tài liệu đã công bố.






NGUYỄN HỮU PHONG -PLv- LUẬN VĂN ĐẠI HỌC ĐOÀN THỊ LY KHA

Chương 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ

Khẳng định các kết quả nghiên cứu nêu trên.

Kiến nghị tiếp tục phân lập các chất từ các cao n-Hexane, cao Ethyl

acetate, cao nước và thử hoạt tính sinh học.






NGUYỄN HỮU PHONG -PLvi- LUẬN VĂN ĐẠI HỌC ĐOÀN THỊ LY KHA

LỜI CAM ĐOAN

Chúng tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu riêng của chúng tôi,

các số liệu có nguồn gốc rõ ràng, tuân thủ đúng nguyên tắc, k ết quả thu đượ ctrong quá trình nghiên cứu là trung thực và chưa từng được ai dùng cho bất cứ

luận văn cùng cấp nào khác.

Ngoài ra, các nội dung nghiên cứu của chúng tôi nằm trong phạm vi đề tài

“Khảo sát thành phần hóa học của vỏ thân cây Núc nác (Oroxylum indicum (L.)

Vent.)” của học viên Nguyễn Đăng Khoa, cao học Hóa Hữu Cơ K20, Khoa

Khoa học Tự nhiên, Trường Đại học Cần Thơ. Học viên có thể sử dụng kết quảcủa luận văn này để phục vụ cho luận văn tốt nghiệp thạc sĩ.

Cần Thơ , ngày…tháng…năm 2014






NGUYỄN HỮU PHONG -PLvii- LUẬN VĂN ĐẠI HỌC ĐOÀN THỊ LY KHA

MỤC LỤC

TrangLỜI CẢM ƠN .............................................................................................................. i

NHẬN XÉT ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ HƯỚ NG DẪ N .......................................... ii

NHẬ N XÉT ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ PHẢ N BIỆ N ............................................iiiTÓM TẮT NỘI DUNG LUẬN VĂN ........................................................................ iv

LỜI CAM ĐOAN ....................................................................................................... vi

MỤC LỤC ................................................................................................................. vii

DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT ....................................................... x

DANH MỤC CÁC BẢ NG ....................................................................................... xii

DANH MỤC CÁC HÌNH, SƠ ĐỒ ...........................................................................xiii

DANH MỤC CÁC PHỤ LỤC .................................................................................. xiv

NỘI DUNG LUẬN VĂN Chương 1: MỞ ĐẦU

1.1 LÝ DO CHỌN ĐỀ TÀI .............................................................................. 1

1.2 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨ U ....................................................................... 2

1.3 ĐỐI TƯỢ NG VÀ PHẠM VI NGHIÊN CỨ U .............................................. 2

1.4 Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰ C TIỄ N CỦA ĐỀ TÀI................................. 2


2.1 ĐẶC TÍNH THỰ C VẬT ............................................................................ 3

2.1.1 Giớ i thiệu cây Núc nác .................................................................. 3

2.1.2 Phân loại khoa học ......................................................................... 3

2.1.3 Mô tả thực vật ................................................................................ 3

2.2 CÁC NGHIÊN CỨ U VỀ MẶT DƯỢC TÍNH CỦA CÂY NÚC NÁC ........... 5

2.2.1

Theo kinh nghiệm dân gian .......................................................... 52.2.2 Các hoạt tính sinh học của Núc nác đã đượ c nghiên cứu .............. 5

2.2.3 Các nghiên cứu trong y học và thử nghiệm lâm sàng ................... 7

2.3 TỔ NG HỢP K ẾT QUẢ NGHIÊN CỨ U VỀ THÀNH PHẦ N HÓA HỌC CỦA

CÂY NÚC NÁC ........................................................................................................ 7

2.3.1 Các nghiên cứu trong nướ c ............................................................ 7

2.3.2 Các nghiên cứu ngoài nướ c ............................................................ 7

2.3.3 Tổng hợ p thành phần hóa học đã đượ c nghiên cứu trên loài Núc nác

(Oroxylum indicum (L.) Vent.) .................................................................. 8






NGUYỄN HỮU PHONG -PLviii- LUẬN VĂN ĐẠI HỌC ĐOÀN THỊ LY KHA

2.4 NHÓM HỢP CHẤT FLAVONOID ................................................................. 17

2.4.1 Flavonoid ...................................................................................... 17

2.4.2 Hoạt tính dượ c lý của flavonoid ................................................... 18

2.4.3 Quy trình sinh tổng hợ p flavonoid ............................................... 18

Chương 3: THỰ C NGHIỆM

3.1 NGUYÊN LIỆU, HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ ..................................... 20

3.1.1 Nguyên liệu ................................................................................. 20

3.1.2 Xử lý mẫu nguyên liệu ................................................................ 20

3.1.3 Hóa chất sử dụng ......................................................................... 20

3.1.4 Thiết bị chính ............................................................................... 20

3.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨ U ........................................................ 21

3.2.1 Phương pháp chiết xuất ............................................................... 21

3.2.2 Phương pháp phân lậ p các hợ p chất ............................................ 21

3.2.3 Phương pháp khảo sát và xác định cấu trúc các hợ p chất ........... 21

3.2.4 Phương pháp xác định độ ẩm dượ c liệu ....................................... 22

3.2.5 Phương pháp chiết flavonoid toàn phần có sự hỗ tr ợ của sóng siêu

âm ............................................................................................................ 22

3.2.6 Nguyên tắc định lượ ng flavonoid bằng phương pháp quang phổ UV-Vis .................................................................................................... 23

3.2.7 Phương pháp chọn bước sóng định lượ ng ................................... 23

3.2.8 Phương pháp xác định độ lặ p lại .................................................. 23

3.2.9 Phương pháp xây dựng đườ ng chuẩn .......................................... 23

3.2.10 Phương pháp xác định giớ i hạn định lượ ng ................................. 23

3.2.11 Xác định độ đúng của phương pháp ............................................ 24

3.2.12 Phương pháp định lượ ng flavonoid toàn phần ............................. 24

3.3 THỰ C NGHIỆM CHIẾT XUẤT, ĐIỀU CHẾ CAO THÔ TỪ VỎ THÂNCÂY NÚC NÁC ............................................................................................ 24

3.4 PHÂN LẬP, TINH CHẾ MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ VỎ THÂN CÂY

NÚC NÁC ..................................................................................................... 26

3.4.1 Khảo sát phân đoạn OD2 .............................................................. 28



3.5 ĐỊNH LƯỢ NG FLAVONOID TOÀN PHẦ N TRONG VỎ THÂN CÂY

NÚC NÁC THEO CHẤT ĐỐI CHIÊU BAICALEIN .................................. 29






NGUYỄN HỮU PHONG -PLix- LUẬN VĂN ĐẠI HỌC ĐOÀN THỊ LY KHA

3.5.1 Xác định độ ẩm của dượ c liệu ..................................................... 29

3.5.2 Chiết flavonoid toàn phần bằng phương pháp chiết tr ực tiế p có sự

hỗ tr ợ của sóng siêu âm ........................................................................... 29

3.5.3 Chọn bướ c sóng hấ p thụ thích hợ p .............................................. 30

3.5.4 Độ lặ p lại của phương pháp ......................................................... 303.5.5 Xây dựng đườ ng chuẩn ............................................................... 31

3.5.6 Giớ i hạn phương pháp ................................................................. 31

3.5.7 Độ đúng của phương pháp........................................................... 32

3.5.8 K ết quả định lượ ng flavonoid toàn phần của vỏ thân cây Núc nác

...................................................................................................... 33


4.1 XÁC ĐỊ NH CẤU TRÚC VÀ NHẬ N DANH CÁC HỢP CHẤT ........ 344.1.1 Hợ p chất ORI.K1 ......................................................................... 34

4.1.2 Hợ p chất ORI.P1 ......................................................................... 40

4.1.3 Hợ p chất ORI.P2 ......................................................................... 45

4.1.4 Hợ p chất ORI.P3 ......................................................................... 48

4.1.5 K ết quả định lượ ng flavonoid toàn phần ...................................... 51


5.1 K ẾT LUẬ N ........................................................................................... 525.1.1 Phân lậ p các hợ p chất .................................................................. 52

5.1.2 Cấu trúc hóa học của các hợ p chất đã phân lậ p ........................... 53

5.1.3 Hàm lượ ng flavonoid toàn phần ................................................... 53

5.2 KIẾ N NGHỊ .......................................................................................... 53

TÀI LIỆU THAM KHẢO ........................................................................................ xvi

PHỤ LỤC ..................................................................................................... PL1






NGUYỄN HỮU PHONG -PLx- LUẬN VĂN ĐẠI HỌC ĐOÀN THỊ LY KHA

DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT

1D-NMR : One Dimension Nuclear Magnetic Resonance

2D-NMR : Two Dimensions Nuclear Magnetic Resonance

1H-NMR : Proton Nuclear Magnetic Resonance

13C-NMR : Carbon (13) Nuclear Magnetic Resonance

C:M : Chloroform:Methanol (CHCl3:MeOH)

C:M:W : Chloroform:Methanol:Nướ c (CHCl3:MeOH:H2O)

CDCl3 : CHCl3 đã thế hydro (H) bằng deuteri (D)

COSY : Correlation Spectroscopy

CTPT : Công thức phân tử

DEPT : Distortionless Enhancement by Polarization Transfer

DMSO : Dimethylsulfoxyde (Me2SO)

DPPH : 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl

EI : Electron Impact/Electron Ionization

ESI-MS : Electrospray Ionization Mass spectrometry

EtOAc : Ethyl acetate (CH3COOC2H5)

EtOH : Ethanol (C2H5OH)

E:M : Ethyl acetate:methanol (EtOAc:MeOH)

H:E : n-Hexane:Ethyl acetate

HMBC : Heteronuclear Multiple Bond Correelation

HSQC : Heteronuclear Single Quantum Coherence

Hz : Hertz (đơn vị đo tần số)IUPAC : International Union of Pure and Applied Chemistry

J : Hằng số ghép spin

M : Khối lượ ng phân tử

MHz : Mega Hertz (đơn vị đo tần số)

MeOH : Methanol (CH3OH)

mp : Melting point (điểm tan chảy)

MS : Mass Spectrum/Spectrometry (phổ khối lượ ng)






NGUYỄN HỮU PHONG -PLxi- LUẬN VĂN ĐẠI HỌC ĐOÀN THỊ LY KHA

NMR : Nuclear Magnetic Resonance

C : độ Cencius

Peak (pic) : Mũi tín hiệu

ppm : part per million (phần triệu)

R f : Retention factor

SKLM : Sắc ký lớ p mỏng

UV-Vis : Ultraviolet Visible Spectroscopy (phổ tử ngoại khả kiến)

δ : Chemical shift (độ dịch chuyển hay độ dờ i hóa học)

λ : Bướ c sóng

d : doublet (mũi đôi) dd : double of doublet (mũi đôi-đôi)

m : multiplet (mũi đa)

q : quarlet (mũi bốn)

s : singlet (mũi đơn)

t : triplet (mũi ba)






NGUYỄN HỮU PHONG -PLxii- LUẬN VĂN ĐẠI HỌC ĐOÀN THỊ LY KHA

DANH MỤC BẢNG Trang

Bảng 2.1 Các nghiên cứu hoạt tính sinh học trên các bộ phận của Núc nác..6

Bảng 2.2 Thành phần hóa học đã công bố của loài Oroxylum indicum (L.)

Vent. ............................................................................................... 8

Bảng 3.1 Kết quả sắc ký cột nhanh khô ....................................................... 27

Bảng 3.2 K ết quả đo độ ẩm bột vỏ thân cây Núc nác .................................. 29

Bảng 3.3 Kết quả độ lặp lại của phương pháp ............................................. 30

Bảng 3.4 Kết quả xây dựng đường chuẩn theo chất đối chiếu Baicalein .... 31

Bảng 3.5 Kết quả xác định độ lệch chuẩn của mẫu trắng ............................ 31

Bảng 3.6 Kết quả xác định nồng độ giới hạn LOL của chất đối chiếuBaicalein ....................................................................................... 32

Bảng 3.7 Kết quả xác định độ đúng của phương pháp ................................ 32

Bảng 3.8 K ết quả định lượng flavonoid toàn phần trong vỏ thân cây Núc nác

...................................................................................................... 33

Bảng 4.1 Dữ liệu phổ 1H-NMR, 13C- NMR và DEPT của ORI.K1 ............. 37

Bảng 4.2 Dữ liệu phổ 1H-NMR,13C- NMR, HSQC và HMBC của ORI.K1...38

Bảng 4.3 So sánh dữ liệu phổ của ORI.K1 và Pinocembrin ........................ 39

Bảng 4.4 Dữ liệu phổ 1H-NMR, 13C- NMR và DEPT của ORI.P1 .............. 42

Bảng 4.5 Dữ liệu phổ 1H-NMR,13C- NMR, HSQC và HMBC của ORI.P1...43

Bảng 4.6 So sánh dữ liệu phổ của ORI.P1 và Oroxylin A .......................... 44


Bảng 4.8 So sánh dữ liệu phổ của ORI.P2 và Chrysin ................................ 47


Bảng 4.10 So sánh dữ liệu phổ của ORI.P3 và ORI.P1 ................................. 50






NGUYỄN HỮU PHONG -PLxiii- LUẬN VĂN ĐẠI HỌC ĐOÀN THỊ LY KHA

DANH MỤC HÌNH VÀ SƠ ĐỒ Trang

HÌNH 2.1 Quả và lá Núc nác ......................................................................... 4HÌNH 2.2 Thân và hoa Núc nác ...................................................................... 4

HÌNH 2.3 Khung cơ bản của nhóm hợp chất flavonoid ............................... 18

HÌNH 3.1 Quét bướ c sóng phức flavonoid và AlCl3 .................................... 30

HÌNH 3.2 Đồ thị đườ ng chuẩn theo chất đối chiếu Baicalein ...................... 31

HÌNH 3.3 Đồ thị xác định nồng độ giới hạn LOL theo Baicalein ................ 33

HÌNH 4.1 Khung flavanone và số chỉ vị trí .................................................. 35

HÌNH 4.2 Cấu trúc của ORI.K1 (Pinocembrin)............................................ 39

HÌNH 4.3 Khung flavonone và số chỉ vị trí .................................................. 41

HÌNH 4.4 Cấu trúc của ORI.P1 (Oroxylin A) .............................................. 44

HÌNH 4.5 Cấu trúc của ORI.P2 (Chrysin) .................................................... 47

HÌNH 4.6 Cấu trúc của ORI.P3 (Baicalein).................................................. 50

HÌNH 5.1 Các hợp chất tinh khiết chiết tách từ vỏ thân cây Núc nác .......... 52

Sơ đồ 2.1 Quy trình sinh tổng hợ p flavonoid ............................................... 20

Sơ đồ 3.1 Tinh chế cao thô từ bột vỏ thân cây Núc nác ............................... 25

Sơ đồ 3.2 Tinh chế cao Dichloromethane .................................................... 28

Sơ đồ 3.3 Chiết flavonoid toàn phần dưới sự hỗ trợ của sóng siêu âm ........ 29






NGUYỄN HỮU PHONG -PLxiv- LUẬN VĂN ĐẠI HỌC ĐOÀN THỊ LY KHA

DANH MỤC CÁC PHỤ LỤC

PHỤ LỤC 1 Trang

Phụ lục 1.1 Phổ ESI-MS của ORI.K1 ....................................................... PL1

Phụ lục 1.2 Phổ 1H-NMR của ORI.K1 ..................................................... PL2

Phụ lục 1.3 Phổ 1H-NMR giãn r ộng của ORI.K1 ..................................... PL3

Phụ lục 1.4 Phổ 13C-NMR của ORI.K1 .................................................... PL4

Phụ lục 1.5 Phổ 13C-NMR giãn r ộng của ORI.K1 .................................... PL5

Phụ lục 1.6 Phổ DEPT của ORI.K1 .......................................................... PL6

Phụ lục 1.7 Phổ DEPT giãn r ộng của ORI.K1.......................................... PL7

Phụ lục 1.8 Phổ HMBC của ORI.K1 ........................................................ PL8

Phụ lục 1.9 Phổ HMBC giãn r ộng của ORI.K1 ........................................ PL9

Phụ lục 1.10 Phổ HMBC giãn r ộng của ORI.K1 ...................................... PL10

Phụ lục 1.11 Phổ HSQC của ORI.K1 ....................................................... PL11

Phụ lục 1.10 Phổ HSQC giãn r ộng của ORI.K1 ....................................... PL12

PHỤ LỤC 2

Phụ lục 2.1 Phổ 1

H-NMR của ORI.P1 .................................................... PL13Phụ lục 2.2 Phổ 1H-NMR giãn r ộng của ORI.P1.................................... PL14

Phụ lục 2.3 Phổ 13C-NMR của ORI.P1 ................................................... PL15

Phụ lục 2.4 Phổ 13C-NMR giãn r ộng của ORI.P1 .................................. PL16

Phụ lục 2.5 Phổ DEPT của ORI.P1 ........................................................ PL17

Phụ lục 2.6 Phổ DEPT giãn r ộng của ORI.P1 ........................................ PL18

Phụ lục 2.7 Phổ HMBC của ORI.P1 ....................................................... PL19

Phụ lục 2.8 Phổ HMBC giãn r ộng của ORI.P1 ...................................... PL20

Phụ lục 2.9 Phổ HMBC giãn r ộng của ORI.P1 ...................................... PL21

Phụ lục 2.10 Phổ HSQC của ORI.P1 ........................................................ PL22

Phụ lục 2.11 Phổ HSQC giãn r ộng của ORI.P1........................................ PL23

PHỤ LỤC 3

Phụ lục 3.1 Phổ ESI-MS của ORI.P2 ..................................................... PL24

Phụ lục 3.1 Phổ 1H-NMR của ORI.P2 .................................................... PL25






NGUYỄN HỮU PHONG -PLxv- LUẬN VĂN ĐẠI HỌC ĐOÀN THỊ LY KHA

Phụ lục 3.2 Phổ 1H-NMR giãn r ộng của ORI.P2.................................... PL26


Phụ lục 3.4 Phổ 13C-NMR giãn r ộng của ORI.P2 .................................. PL28

Phụ lục 3.5 Phổ DEPT của ORI.P2 ........................................................ PL29


PHỤ LỤC 4

Phụ lục 4.1 Phổ 1H-NMR của ORI.P3 .................................................... PL31

Phụ lục 4.2 Phổ 1H-NMR giãn r ộng của ORI.P3.................................... PL32


Phụ lục 4.4 Phổ 13C-NMR giãn r ộng của ORI.P3 .................................. PL34Phụ lục 4.5 Phổ DEPT của ORI.P3 ........................................................ PL35







NGUYỄN HỮU PHONG -PL1- LUẬN VĂN ĐẠI HỌC ĐOÀN THỊ LY KHA

Chương 1: MỞ ĐẦU

1.1 LÝ DO CHỌN ĐỀ TÀI

Y học cổ truyền và y học hiện đại ngày nay đã có sự kết hợp rất tốt trongviệc điều trị một số loại bệnh. Trong thế giới tự nhiên có nhiều loài thực vậtchứa các hoạt chất với công dụng chữa bệnh hữu hiệu, đã từng được y học hiệnđại xác thực và cũng có nhiều loài là ứng viên cần được nghiên cứu để bổ sungvào kho tàng dược liệu. Hơn nữa điều trị bằng thảo dược chứa các hoạt chất tựnhiên hiện nay đang là một hướng ứng dụng tích cực, được khuyến khích trong

y học Việt Nam cũng như thế giới vì khả năng chữa bệnh ít độc hại và chi phíkhông quá lớn.

Gần nửa thế kỷ nay, việc nghiên cứu các hợp chất thiên nhiên để làm thuốcđã có những bước phát triển mạnh mẽ nhờ những phương pháp mới, tiên tiếnhơ n r a đời. Các phương pháp sắc ký, sắc ký điện di, sắc ký lỏng cao áp…đã trởthành những công cụ đắt lực trong việc tách các hoạt chất từ sinh vật.

Các phương pháp phân tích hiện nay như quang phổ hồng ngoại (IR), khối phổ (MS), cộng hưởng từ hạt nhân (NMR), phổ hấp thụ quang (UV-Vis), nhiễuxạ tia X…đã giúp xác định được chính xác cấu trúc hóa học của các hợp chấtthiên nhiên một cách nhanh chóng. Nhờ vậy một số hợp chất mới từ sinh vật

ngày nay càng được phát hiện nên cung cấp cho y học nhiều loại thuốc mới cógiá trị trên cơ sở hiện đại hóa y học cổ truyền của ông cha.

Núc nác là một loài cây thân gỗ, cây có thể mọc hoang hoặc được trồngđể làm thuốc, có thể tìm thấy ở hầu khắp các tỉnh thành của nước ta. Từ xưa, nóđã được ông cha ta sử dụng như một vị thuốc để chữa trị các loại bệnh như vàngda, mẩn ngứa, ban sởi, viêm họng, ho, đau dạ dày. Ngày nay trên thế giới đã cómột số công trình nghiên cứu về thành phần hóa học của cây Núc nác, cho thấycác nhóm hợp chất hữu cơ chủ yếu của cây là các flavonoid, tannin, phenolic,

saponin và lượng vết alkaloid,... Ngoài ra các nghiên cứu về hoạt tính sinh họccủa hầu hết các bộ phận trên cây đã được công bố có các hoạt tính như khángviêm, kháng oxy hóa, kháng khuẩn, kháng giun, kháng các tác nhân gây đột

biến gen,...Vì những lý do trên, việc nghiên cứu, khảo sát thành phần hóa họccủa cây Núc nác ở Việt Nam là một vấn đề cần thiết, nên chúng tôi lựa chọn và

thực hiện đề tài tốt nghiệp “Khảo sát thành phần hóa học và định lượng

flavonoid toàn phần trong vỏ thân cây Núc nác Oroxylum indicum (L.)Vent.”.







1.2 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU

Phân lập được ít nhất 2 hợp chất tinh chế và xác định cấu trúc hợp chất.

Định lượng flavonoid toàn phần trong vỏ thân cây Núc nác.

1.3 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHẠM VI NGHIÊN CỨU

Đối tượng nghiên cứu: Vỏ thân cây Núc nác (Oroxylum indicum (L.)

Vent.) mọc ở huyện Thoại Sơn, tỉnh An Giang.

Phạm vi nghiên cứu: Cao Dichloromethane của vỏ thân cây Núc nác

(Oroxylum indicum (L.) Vent.).

1.4 Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN CỦA ĐỀ TÀI

Ý nghĩa thực tiễnTìm hiểu về công dụng của cây Núc nác trong y học cổ truyền Việt Nam.

Nghiên cứu nguồn nguyên liệu tự nhiên có tiềm năng ứng dụng làm thuốc.

Ý nghĩa khoa học

Cung cấp thêm thông tin về đặc điểm nhận dạng, khu vực phân bố, phương pháp tách chiết, thành phần hóa học của cây Núc nác.








2.1 ĐẶC TÍNH THỰC VẬT

2.1.1

Giới thiệu cây Núc nácHọ Bignoniaceae, còn gọi là họ chùm ớt, là một họ thực vật có hoa có

khoảng 116-120 chi, 650-750 loài. Các thành viên thuộc họ này thường là cácloài thân gỗ và cây bụi, rất hiếm các cây thân leo hay thân thảo. Chúng đượctìm thấy trên khắp thế giới, nhưng phân bố nhiều nhất ở vùng nhiệt đới và cận

nhiệt đới như Nam Mỹ, Tây Á, Nam Á, Đông Nam Á [1].

Núc nác có tên khoa học là Oroxylum indicum (L.) Vent. thuộc chi

Oroxylum, họ Bignoniaceae. Loài này được L. Vent miêu tả lần đầu tiên vào

năm 1877. Các bộ phận khác nhau của cây có các tên riêng như vỏ thân câyđược gọi là nam hoàng bá, hạt được gọi là mộc hồ điệp,... Nó được tìm thấy ởmột số quốc gia châu Á như Ấn Độ, Trung Quốc, Myanmar, Philippin, Thái

Lan, Đài Loan, Campuchia, Nepal, Indonesia, Malaysia, Nhật Bản. Ở Việt Nam

Núc nác có thể được tìm thấy ở hầu khắp các tỉnh thành từ bắc vào nam.

Tên nước ngoài: Tatelo, Karamkanda, saune tatal (Nepali); Ka-pa,

Sonapatha (Ấn Độ) [1].

2.1.2

Phân loại khoa học Giới: Plantae.

Ngành: Angiosperms.

Lớp: Eudicots.

Phân lớp: Asterids.

Bộ: Lamiales.

Họ: Bignoniaceae. Chi: Oroxylum.

Loài: O. indicum (L.) Vent.

2.1.3

Mô tả thực vật

Thân: là loài thân gỗ có kích cỡ trung bình cao khoảng 8-12 m. Thân nhẵn,

ít phân cành, vỏ cây màu xám tro, mặt trong màu vàng.

Lá: xẻ 2-3 lần lông chim.



http://en.wikipedia.org/wiki/Angiosperms


http://en.wikipedia.org/wiki/Eudicots


http://en.wikipedia.org/wiki/Asterids


http://vi.wikipedia.org/wiki/B%E1%BB%99_(sinh_h%E1%BB%8Dc)


http://vi.wikipedia.org/wiki/B%E1%BB%99_Hoa_m%C3%B4i

http://vi.wikipedia.org/wiki/H%E1%BB%8D_(sinh_h%E1%BB%8Dc)


http://vi.wikipedia.org/wiki/H%E1%BB%8D_Ch%C3%B9m_%E1%BB%9Bt

http://vi.wikipedia.org/wiki/Chi_(sinh_h%E1%BB%8Dc)

http://vi.wikipedia.org/w/index.php?title=Oroxylum&action=edit&redlink=1


http://vi.wikipedia.org/wiki/Lo%C3%A0i

http://vi.wikipedia.org/wiki/Lo%C3%A0i


http://vi.wikipedia.org/wiki/Chi_(sinh_h%E1%BB%8Dc)

http://vi.wikipedia.org/wiki/H%E1%BB%8D_Ch%C3%B9m_%E1%BB%9Bt


http://vi.wikipedia.org/wiki/B%E1%BB%99_Hoa_m%C3%B4i









Hoa: màu nâu đỏ sẫm mọc thành chùm dài ở ngọn thân. Đài hoa hình ống,

cứng, dày, có 5 khía nông. Tràng hình chuông, phình rộng, có 5 thùy họp thànhhai môi, 5 nhị, có chỉ nhị có lông ở gốc. Đĩa mật có 5 thùy rõ, cao 4-5 mm,

đườ ng kính 12-14 mm.

Quả: dài, dẹp, dạng lưỡi kiếm nhọn hai đầu, mở vách, van song song với

vách, dài 40-120 cm, rộng 5-10 cm.

Hạt: Hạt dài 4-9 cm, rộng 3-4 cm, kể cả cánh mỏng bao quanh.

Hoa nở về đêm, thụ phấn nhờ dơi, côn trùng. Mùa hoa tháng 2-4 (trướckhi ra lá), mùa quả tháng 10-11; có khi vẫn thấy hoa quả quanh năm. Các quảchín vẫn ở trên cây khá lâu vào mùa khô khi cây rụng hết lá.

HÌNH 2.1 Quả và lá Núc nác

HÌNH 2.2 Thân và hoa Núc nác







2.2 CÁC NGHIÊN CỨU VỀ MẶT DƯỢC TÍNH CỦA CÂY NÚC NÁC2.2.1

Theo kinh nghiệm dân gian

Núc nác một loại dược liệu quan trọng trong y học cổ truyền của một số

nước Nam Á, Đông Nam Á, Trung Quốc. Nó là loại dược liệu thông dụng trong phương pháp Ayurveda của Ấn Độ. Ở Ấn Độ các bộ phận rễ, lá và vỏ thân cây

có thể được sử dụng riêng lẻ hoặc phối hợp với các vị thuốc khác để điều trị bệnh. Theo phương pháp Ayurveda dược liệu này dùng để điều trị một số loại bệnh rối loạn hoặc dùng như một loại thuốc bổ. Y học cổ truyền Trung Quốc sửdụng nó để điều trị các bệnh rối loạn đường tiêu hóa như tiêu chảy, kiết lỵ và

bệnh viêm khớp. Ở vùng phía Bắc và Tây Bắc Thái Lan, quả và hoa của câyđược sử dụng như một loại thực phẩm hằng ngày [1]. Trong Y học cổ truyềnnước ta hai bộ phận chính được sử dụng làm thuốc của Núc nác là vỏ thân cây

(tên dược liệu là nam hoàng bá) và hạt khô (tên dược liệu là mộc hồ điệp).

Nam hoàng bá :

+ Thu hái: vỏ Núc nác có thể thu hoạch gần như quanh năm, tốt nhất vào

mùa xuân, hạ. Thường đẽo vỏ trên cây còn sống, ít nơi hạ cây. Vỏ Núc nác màu

xám tro, mặt trong khi còn tươi có màu vàng nhạt, không mùi, vị đắng, hơi hắc.

+ Công dụng: thanh nhiệt lợi thấp, tiêu thũng giải độc. Chữa trị viêm gan

do nhiễm trùng, vàng da, viêm bàng quang, yết hầu sưng đau, ung nhọt lở loét.

Mộc hồ điệp :

+ Thu hái: thu hoạch hạt vào thời điểm cuối thu sang đông, hái lấy quảchín, phơi khô, mổ lấy hạt rồi tiếp tục phơi khô, sau đó bảo quản sử dụng dần.

Thường dùng những hạt khô, màu trắng, còn nguyên là tốt nhất.

+ Công dụng: mộc hồ điệp có công dụng nhuận phế, thanh phế nhiệt, lợiyết hầu, hòa vị, sinh cơ. Chữa trị ho do phong nhiệt, ho gà (bách nhật khái), ho

do lao, cổ họng sưng đau, khan tiếng, viêm phế quản cấp và mạn tính, viêm

amidan, đau vùng gan, dạ dày, vết thương không liền miệng, dị ứng ngoài da.

2.2.2

Các hoạt tính sinh học của Núc nác đã được nghiên cứu

Có nhiều thử nghiệm hoạt tính sinh học trên các bộ phận khác nhau của

cây đã được báo cáo (các thử nghiệm được trình bày cụ thể trong bảng 2.1).[2]

Hoạt tính kháng oxy hóa được thể hiện trên tất cả các bộ phận của cây. Các hoạt

tính kháng khuẩn được thử nghiệm thấy trên phần rễ và vỏ thân cây. Các nghiêncứu về hoạt tính kháng giun, kháng khối u, điều chỉnh hệ miễn dịch đã đượcthực hiện trên vỏ rễ. Hoạt tính kháng viêm được thực hiện trên lá và vỏ thân,trong k hi các hoạt tính kháng tác nhân gây độc gan và kháng các tác nhân gây

đột biến gen đã được nghiên cứu trên lá và quả. Hoạt tính ức chế enzym α-







glucosidase được thực hiện trên lõi thân cây [10]. Những nghiên cứu trên cho

thấy một tiềm năng to lớn về việc tách chiết các hợp chất có hoạt tính sinh họctrong cây có thể ứng dụng vào việc điều trị các loại bệnh sau này.

Bảng 2.1 Các nghiên cứu hoạt tính sinh học trên các bộ phận của Núc nác [2, 10]

STT Hoạt tính nghiêm cứu Bộ phận thưc vật Cao chiết

1 Kháng oxy hóa(antioxidantion)

Vỏ thân Ethyl acetate

Chlorofrom

Methanol

Ethanol

Thân Methanol

Lá Methanol

Rễ Methanol

Hạt Ethanol

Nước

2 Kháng khuẩn (antimicrobial) Vỏ rễ Ethyl acetate

Methanol

Vỏ thân Ethyl acetate

Methanol

3 Kháng giun (anthelminthic) Vỏ rễ -4 Kháng tác nhân gây đột biến

(antiulcer)Vỏ thân Ethanol

Petroleum ether

n-Butanol

5 Kháng viêm

(anti-inflammtory)

Lá Nước

Vỏ thân Nước

Ethanol

6 Kháng tác nhân gây độc gan

(antihepatotoxic)

Lá Ethanol

7 Kháng ung thư (Anticancer) Quả

Vỏ thân

Methanol

Ethanol

Nước

8 Bảo vệ dạ dày(Gastroprotecttive)

Vỏ rễ n-Buthanol

9 Kháng đột biến(antimutagencity)

Quả Methanol

10 Ức chế α-glucosidase

(α-glucosidase inhibitory)

Lõi thân Methanol







2.2.3 Nghiên cứu trong y học và thử nghiệm lâm sàng

Theo mục 19, khoảng B, quyết định số 154-BYT/QG về việc “Bổ sungdanh mục thuốc, hóa chất dược dụng, hóa chất sát côn trùng, diệt côn trùng

dược liệu thống nhất trong toàn ng ành y tế hai năm 1974-1975” ngày 9/4/1974,

viên uống Núc nác (Nunaxin) 0,25 g được bào chế từ flavonoid toàn phần trong

vỏ thân cây Núc nác, chính thức được lưu hành trong hai năm 1974-1975 dướidạng thuốc thành phẩm để nghiên cứu, với các công dụng điều trị mày đay vàmẩn ngứa.

2.3 TỔNG HỢP KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VỀ THÀNH PHẦN HÓAHỌC CỦA CÂY NÚC NÁC2.3.1 Các nghiên cứu trong nước

Năm 2012 nhóm tác giả Nguyễn Thị Thanh Mai, Nguyễn Trung Nhân, Nguyễn Xuân Hải, Huỳnh Ngọc Nghiêm Thủy và Byung Sun Min đã có côngtrình nghiên cứu về thành phần hóa học của lõi thân cây Núc nác. Kết quả chothấy đã phân lập và nhận danh được 12 hợp chất là oroxylin A, oroxyloside,

hispidulin, apigenin, ficusal, balanophonin, salicylic acid, p-hydroxybenzoic

acid, protocatechuic acid, isovanillin, β-hydroxypropiovanillon và 2-(1-

hydroxymethylethyl)-4H,9H-naphtho[2,3-b] furan-4,9-dione [10].

Năm 2013 nhóm tác giả Nguyễn Thị Thu Hương, Nguyễn Tiến Công,

Nguyễn Vũ Mai Trang, Nguyễn Thị Minh Trang đã công bố 4 hợp chất tìmđược trong lá cây Núc nác bao gồm chrysin, hispidulin, baicalein, oroxylin A

[9].

2.3.2

Các nghiên cứu ngoài nước

Qua các tài liệu đã công bố từ năm 1992 cho tới nay (về thành phần hóahọc của loài Oroxylum indicum (L.) Vent.), các nhà hóa học trên thế giới đã tách

được hơn 41 hợp chất từ loài Oroxylum indicum (L.) Vent. Có thể tạm chia

thành 3 nhóm chính: flavonoid, glycoside và nhóm các hợp chất khác. Vỏthân cây và lá có chứa nhiều các flavonoid như chrysin, oroxylin A, baicalien,

oroxyloside methyl ester, chrysin-7-O-methyl glucoside. Trong hạt của câyđược báo cáo có chứa ellagic acid. Phần vỏ rễ được báo cáo có chứa chrysin,

baicalein, biochanin A và acid ellagic. Oroxylin A, chrysin, triterpene

carboxylic acid và ursolic acid được tìm thấy trong phần vỏ quả [2, 10].







2.3.3 Tổng hợp thành phần hóa học đã được nghiên cứu trên loài Núcnác (Oroxylum indicum (L.) Vent.)

Các hợp chất đã được chiết tách từ loài Oroxylum indicum (L.) Vent. được

trình bày ở Bảng 2.2.

Bảng 2.2 Thành phần hóa học đã công bố của loài Oroxylum indicum (L.) Vent [1, 2,10]

TT

Công thức, tên gọi CTPT(M amu)

Nhiệtđộ

nóngchảy(oC)

Flavonoid

1

Baicalein

C15H10O5

(M = 270,24

amu)

263,7

2

Chrysin

C15H10O4

(M = 254,24

amu)

286

3

Teocochrysin

C16H12O4

(M = 268 amu)-







4

Scutellarein

C15H10O6

(M = 297 amu)

300

5

Oroxylin A

C16H12O5

(M = 284 amu)197

6

Apigenin

C15H10O5

(M = 270 amu)-

7

Luteolin

C18H16O6

(M = 328 amu)-

8

Galangin

C15H10O5

(M = 270 amu)-









14

6 - Hydroxyluteolin

C15H10O7

(M = 302 amu)284

15

8,8-bisBaicalein

C30H18O10

(M = 538 amu) 238

Terpenoid

16

Ursolic acid

C30H48O3

(M = 456 amu)292

17

-Sitosterol

C29H50O

(M = 414 amu)142







18

Lupeol

C30H50O(M = 426 amu)

218

19

2 -Hydroxylupeol

C30H50O2

(M = 440 amu)-

20

Betulinic acid

C30H48O3

(M = 456 amu)281

21

Friedeli

C30H50O

(M = 426 amu)246







Glycoside

22

Oroxyloside methy ester

C23H27O10

(M = 463 amu)201

23

Baicalein-7-O-diglucoside

C21H20O15

(M = 416 amu)-

24

Chrysin-7-O-diglucoside

C21H20O14

(M = 512 amu)-

25

Chrysin-6-C--D-glucopyranosyl-8-O--D-

glucopyranoside

C28H30O14

(M = 615 amu)-







26

Baicalein-7-O-D-glucuronopyranosyl-(1-3) [-

D-glucopyranosyl-(1-6)] --Dglucopyranoside

C32H37O21

(M = 769 amu)-

27

Baicalein-7-O-glucoside

C21H20O10

(M = 432 amu)-

28

Scutellarein-7-O-glucoside

C21H20O11

(M = 448 amu)-

29

Chrysin-7-O-glucuronide

C21H18O11

(M = 446 amu)-







30

Chrysin-6-C--D-glucopyranosyl-8-C- -L-

arabinopyranoside

C26H28O12

(M = 580 amu)-

31

Chrysin-6--D-glucopyranosyl-8-O--D-

glucoronopyranoside

C28H30O16

(M = 622 amu)-

Alkaloid

32

Adenisine

C10H13 N5O4

(M = 267 amu)







33

Echinulin

C29H39 N3O2

(M = 461

amu)

-

Các hợp chất khác

34

2-Methyl-6-phynyl-4H-pyran-4-one

C12H10O2

(M = 186 amu)81,8

35

Methylsulfonylmethane

C2H6O2S

(M = 94 amu)109

36

Ellagic acid

C14H6O8

(M = 302 amu)>=350







37

Balanophonin

C20H22O6

(M = 358 amu)

38

Salicylic acid

C7H6O3

(M = 138 amu)-

39

Protocatechuic acid

C7H6O4

(M = 155 amu)-

40

Isovanillin

C8H8O3

(M = 153 amu)-

41

Mellin

C10H9O3

(M = 177 amu)-

2.4

NHÓM HỢP CHẤT FLAVONOID

Qua các tài liệu trên, nhận thấy nhóm hợp chất flavonoid là nhóm hợp chất

chính trong vỏ thân cây cũng như các bộ phận khác của Núc nác.

2.4.1 Flavonoid

Flavonoid (hoặc bioflavonoid) (bắt nguồn từ “flavus” tiếng Latin nghĩa

là màu vàng, màu của flavonoid trong tự nhiên) là 1 loại chất chuyển hóa trunggian của thực vật. Tuy nhiên một số flavonoid có màu xanh, tím đỏ và cũng có

một số khác lại không có màu.







Về mặt hóa học, flavonoid là những hợp chất có cấu trúc chung chứa môt

khung cơ bản có 15C, gồm 2 vòng phenyl (A và B) và một vòng pyran (C), có

thể viết tắt là C6-C3-C6:

HÌNH 2.3 K hung cơ bản của nhóm hợp chất flavonoid

2.4.2 Hoạt tính dược lý của flavonoid

Các chất flavonoid là những chất oxy hóa chậm, có thể ngăn chặn quá trìnhoxy hóa của các gốc tự do là nguyên nhân làm cho tế bào hoạt động khác thường.Các gốc tự do sinh ra trong quá trình trao đổi chất thường là các gốc tự do nhưOH•, ROO• là các yếu tố gây biến dị, huỷ hoại tế bào, gây ung thư, tăng nhanhsự lão hoá). Các flavonoid còn có khả năng tạo phức với các ion kim loại nêncó tác dụng như những chất xúc tác ngăn cản các phản ứng oxy hoá mà các kim

loại tạo ra.

Hyaluronidase là enzym làm tăng tính thấm của mao mạch, khi thừa

enzym này sẽ xảy ra hiện tượng xuất huyết dưới da. Flavonoid ức chế sự hoạtđộng của Hyaluronidase, vì thế các flavonoid có thể cải thiện tình trạng trên.

Những nhà nghiên cứu cũng đã chỉ ra những thực phẩm giàu flavonoid có

tác động tốt đối với những người có nguy cơ cao về tim mạch. Flavonoid làm bền thành mạch, được dùng trong các trường hợp rối loạn chức năng tĩnh mạch,

giảm hay suy yếu tĩnh mạch, rối loạn tuần hoàn võng mạc.

Flavonoid còn có tác dụng chống độc, làm giảm thương tổn gan, bảo vệ

chức năng gan. 2.4.3 Quy trình sinh tổng hợp flavonoid

Hầu hết các flavonoid đều chứa một dị vòng thơm được hình thành từ sựtác kích thân hạch theo kiểu phản ứng Michael của nhóm – OH phenol của vòng

A vào ketone bất bão hòa tạo ra flavanone. Flavanone có thể cho ra nhiều cácdẫn xuất dựa trên khung cơ bản đó, ví dụ: f lavone, flavonol, anthocyanidin và

catechin [1].







Sơ đồ 2.1 Quy trình sinh tổng hợp f lavonoid

flavone synthase IIO2, 2-oxo-glutarate

flavone synthase IIO2, NADPH

R’ = H, R’’ = H : galagin R’ = H, R’’ = OH : kaempferol R’ = OH, R’’ = OH : quercetin

R’ = H, R’’ = H: chrysin R’ = OH, R’’ = OH: luteolin R’ = H, R’’ = OH: apigenin

O2, 2-oxo-glutarate

Flavone-3-hydroxylase

flavonol synthaseO2, 2-oxo-glutarate

R = H, R’= H: cinnamol CoA R = H, R’= OH: p-hydroxycinnamoyl CoAR = OH, R’= OH: 3,4-hydroxycinnamoyl CoA

3X

chalcone isomerase

Chalcone







Chương 3: THỰC NGHIỆM

3.1 NGUYÊN LIỆU, HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ

3.1.1

Nguyên liệu Mẫu thực vật được dùng trong đề tài là vỏ thân cây Núc nác (trong đông

y gọi là Nam hoàng bá) được thu hoạch ở vùng núi Bà Thê thuộc xã Vọng Thê,huyện Thoại Sơn, tỉnh An Giang.

Thời gian thu mẫu: tháng 01/2014.

3.1.2

Xử lý mẫu nguyên liệu Mẫu nguyên liệu sau khi thu hoạch được rửa sạch, loại bỏ phần tạp, phơi

khô trong bóng râm, sau đó sấy lại ở 60C. Vỏ thân cây Núc nác sau khi sấy

được xay thành bột mịn. Đây là nguyên liệu dùng trong đề tài. 3.1.3 Hóa chất sử dụng

Dung môi hữu cơ : Methanol (MeOH), Chloroform (CHCl3), Ethanol

(EtOH), Dicloromethane (CH2Cl2), n-Hexane (Hex), Ethyl acetate (EtOAc),

Acetone. Các dung môi này đều là hóa chất công nghiệp của hãng Chemsol.

Hóa chất khác: dung dịch AlCl3 (5%) trong Ethanol, muối Na2SO4.

Silica gel 60 của hãng Merck .

3.1.4 Thiết bị chính

Máy cô quay chân không Heidolph.Bản silica gel 60 F254 Merck tráng sẵn.

Đèn UV.

Cân phân tích GR-200 và cân kỹ thuật GM 612.

Tủ sấy Ecocell.

Máy đo điểm chảy Electrothermal 9100 (U.K).

Bếp điện dùng để nướng bản mỏng Blacker®.

Bể cách thủy.

Các loại cột sắc ký.

Các thiết bị dùng để ly trích: Becher 100 mL, 250 mL, 500 mL, 1000 mL.

Bình lóng 500 mL, 1000 mL.

Ống đong 10 mL, 100 mL, 1000 mL.

Bình cô quay loại 50 mL, 250 mL, 500 mL, 1000 mL.

Phễu, đũa thủy tinh, giấy lọc.

Các thiết bị để ghi phổ:

Máy quang phổ UV-Vis_6800. Phổ MS ghi trên máy 1100 series LC/MS Tra p Agilent.







Phổ 1H-NMR, 13C- NMR kết hợp với phổ DEPT- NMR 135 và 90, phổ

HSQC, HMBC ghi trên máy cộng hưởng từ hạt nhân Bruker Avance ở tần số500 MHz cho 1H-NMR và 125 MHz cho phổ 13C-NMR.

3.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

3.2.1

Phương pháp chiết xuấtChiết là phương pháp dùng một dung môi (đơ n hay hỗn hợ p) để tách lấy

một chất hay một nhóm các chất từ hỗn hợ p cần nghiên cứu.

Các phương pháp chiết rắn-lỏng, lỏng-lỏng hoặc kết hợp cả hai thườngđược sử dụng.

Trong các phương pháp trên có thể ứng dụng kết hợp đun nóng (chiếtnhiệt độ cao, chiết tuần hoàn (sử dụng hệ thống soxhlet), chiết có sự trợ giúp

của vi sóng, sóng siêu âm, tùy nhu cầu cần lấy những hợp chất mà có thể dùng

phương pháp thích hợp.Phương pháp chiết rắn-lỏng sử dụng trong đề tài này là phương pháp

chiết ngâm dầm (maceration). Kỹ thuật này không đòi hỏi thiết bị phức tạp, có

thể dễ dàng thao tác với một lượng lớn mẫu cây. Ngâm nguyên liệu trong một bình chứa thủy tinh hoặc bằng thép. Ngoài ra để chiết flavonoid toàn phần vớihiệu suất chiết cao, đề tài còn sử dụng phương pháp chiết trực tiếp có sự trợgiúp của sóng siêu âm.

Phương pháp chiết lỏng-lỏng dùng điều chế các loại cao, sử dụng bình

lóng để lắc chiết. 3.2.2 Phương pháp phân lập các hợp chất Các phương pháp chung được áp dụng để phân lập những hợp chất sạch

chủ yếu là các phương pháp sắc ký bao gồm sắc ký cột nhanh khô, sắc ký cột

hở, sắc ký chớ p nhoáng với sự kết hợ p sắc ký lớp mỏng để theo dõi quá trình

sắc ký. Ngoài ra, đề tài còn sử dụng phương pháp sắc ký lớp mỏng điều chế và phương pháp kết tinh trong dung môi thích hợp.

3.2.3 Phương pháp khảo sát và xác định cấu trúc của các hợp chất Các chất tinh khiết phân lập ra sẽ được xác định những hằng số lý hoá đặc

trưng như: màu sắc, R f , nhiệt độ nóng chảy, tan tốt trong những dung môi nào…

Sau đó để xác định cấu trúc các hợp chất sẽ sử dụng các phương pháp

phổ hiện đại như: phổ khối lượng (Mass Spectroscopy), phổ cộng hưởng từ hạtnhân một chiều (Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy, 1D-NMR), phổcộng hưởng từ hạt nhân hai chiều (Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy,

2D-NMR) tùy theo từng hợp chất.









3.2.6 Nguyên tắc định lượng flavonoid bằng phương pháp quang phổUV-vis

Rút chính xác 1 mL dung dịch mẫu cho vào ống nghiệm. Sau đó thêm 1

mL AlCl3/EtOH (5%) vào ống nghiệm chứa dung dịch mẫu, dung dịch lúc này

có màu xanh lục đậm, thêm 2 mL MeOH để pha loãng phức màu. Ủ ở nhiệt độ phòng trong 30 phút sau đó tiến hành đo độ hấp thụ của phức màu.

Chú ý: bịt kín ống nghiệm trong quá trình ủ, vì MeOH dễ bay hơi trongquá trình ủ nên có thể làm sai lệch nồng độ.

3.2.7 Phương pháp chọn bước sóng định lượng Để xác định bước sóng thích hợp cho phương pháp, tiến hành quét bước

sóng (200-1000 nm) cho 6 mẫu dung dịch bao gồm 5 mẫu dung dịch của chất

đối chiếu đã được tạo phức với AlCl3/EtOH (5%) với nồng độ tăng dần và 1

mẫu dung dịch chất đối chiếu không tạo phức AlCl3/EtOH (5%) có nồng độ 500mg/L. Mẫu trắng để so sánh là dung dịch MeOH. Bước sóng thích hợp là bướcsóng mà ở đó dung dịch chất đối chiếu không hấp thụ ánh sáng, ngược lại dung

dịch phức hấp thụ tốt và có khoảng tuyến tính thích hợp giữa các nồng độ dungdịch.

3.2.8 Phương pháp xác định độ lặp lại Để xác định độ lặp lại của phương pháp tiến hành với 6 thí nghiệm, mỗi

thí nghiệm thực hiện theo quy trình chiết flavonoid toàn phần như trên để có

dung dịch flavonoid toàn phần. Tạo phức với AlCl3/EtOH (5%) và tiến hành đomật độ quang. Tính độ lệch chuẩn tương đối của các phép đo để đánh giá độ lặplại của phương pháp.

3.2.9 Phương pháp xây dựng đường chuẩn Tiến hành pha một dãy dung dịch đối chiếu đối chiếu với nồng độ chính

xác và có khoảng tuyến tính thích hợp. Tạo phức màu với dung dịch AlCl3/EtOH

(5%) tiến hành đo độ hấp thụ quang. Sử dụng phần mềm Excel để vẽ đồ thị

đường chuẩn và tính toán các thông số liên quan.

3.2.10 Phương pháp xác định giới hạn định lượng Xác định LOD Để tiến hành xác định LOQ tiến hành chuẩn bị các dung dịch mẫu trắng

bằng cách lấy vào 8 ống nghiệm: cho vào các ống nghiệm 3 mL MeOH + 1 mL

AlCl3/EtOH (5%), ủ khoảng 30 phút ở nhiệt độ phòng thì đem đi đo độ hấp thụ

quang của dãy dung dịch trên (với dung dịch so sánh là MeOH). Tính độ lệchchuẩn của 8 thí nghiệm, sau đó tính giới hạn định lượ ng bằng công thức sau:[7]

Công thức tính giớ i hạn định lượ ng:

LOQ = 10.







Trong đó:

SD : độ lệch chuẩn của các kết quả thí nghiệm trên. a: hệ số của phương trình đường chuẩn (y = ax + b).

Xác định LOL

Xác định bằng cách nới rộng nồng độ ở điểm trên của đường chuẩn chođến khi tương quan giữa nồng độ và độ hấp thụ quang không còn tuyến tínhnữa. Giới hạn LOL được xác định bằng giá trị nồng độ cao nhất của chất đốichiếu vẵn còn tuyến tính so với phương trình đường chuẩn.

3.2.11 Xác định độ đúng của phương pháp Để xác định độ đúng, thực hiện với một dung dịch mẫu đối chiếu có nồng

độ chính xác. Sau đó tiến hành tạo phức và đo độ hấp thụ quang lặp lại 6 lần.

Từ kết quả 6 lần lặp lại xác định hiệu suất thu hồi của phương pháp. Nếu hiệu

suất thu hồi nằm trong khoảng 100%5% thì phương pháp không mắc lỗi hệthống.

3.2.12 Phương pháp định lượng flavonoid toàn phần Hàm lượng flavonoid toàn phần được tính bằng cánh chiết dung dịch

flavonoid toàn phần theo quy trình chiết có sự hỗ trợ của siêu âm. Sau đó điềuchỉnh để nồng độ dung dịch vào khoảng tuyến tính, tạo phức với AlCl3/EtOH

(5%) và đo độ hấp thụ quang. Kết quả tính theo hàm lượng chất đối chiếu trong

1 gam khối lượng mẫu dược liệu khô tuyệt đối.

3.3

THỰC NGHIỆM CHIẾT XUẤT, ĐIỀU CHẾ CAO THÔ TỪ VỎTHÂN CÂY NÚC NÁC

Vỏ thân cây Núc nác phơi khô, xay nhuyễn thành bột (9,2 kg) được tậntrích với MeOH bằng phương pháp ngâm dầm, lọc bỏ bã, phần dịch chiết được

cô quay và thu hồi dung môi dưới á p suất kém. Thực hiện nhiều lần thu đượccao MeOH dạng sệt có khối lượng 1,6 kg. Cao MeOH hòa tan trong một lượng

nước vừa đủ, sau đó được chiết lần lượt với các dung môi theo thứ tự độ phâncực tăng dần: n-Hexane, Dichloromethane, Ethyl acetate.

Lọc lấy phần dịch tan sau khi chiết với n-Hexane đem cô quay thu hồidung môi dưới áp suất kém thu được cao n-Hexane có khối lượng 33,54 gam.

Phần không tan trong n-Hexane tiếp tục được chiết với Dichloromethane.

Lọc lấy phần dịch tan sau khi chiết đem cô quay thu hồi dung môi dưới áp suấtkém thu được cao Dichloromethane có khối lượng 110,85 gam.

Phần không tan trong Dichloromethane tiếp tục được chiết với Ethyl

acetate. Lọc lấy phần dịch tan sau khi chiết đem cô quay thu hồi dung môi dướiáp suất kém thu được cao Ethyl acetate có khối lượng 153,35 gam.

Phần dịch nước còn lại được đun cách thủy làm bay hơi nước thu được cao

nước có khối lượ ng 217,43 gam.









3.4 PHÂN LẬP, TINH CHẾ MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ VỎ THÂN CÂYNÚC NÁC

Phân đoạn cao Dichloromethane được tiền hấp phụ với 100 gam silica gel,

sấy khô và nghiền mịn, sau đó tiến hành sắc ký cột nhanh khô trên caoDichloromethane với các thông số cột như sau:

- Đường kính cột sắc ký: d = 25 cm.

- Chiều dài cột sắc ký: l = 5 cm.

- Khối lượng silica gel nhồi cột: 400 gam.

- Khối lượ ng cao Dichloromethane: 100 gam.

- Dung môi ổn định cột: n-Hexane.

Hệ dung môi giải ly n-Hexane:Ethyl acetate (H:E) với các tỉ lệ thay đổitheo hướng tăng dần độ phân cực từ H:E (100:0) đến H:E (0:100), sau đó chạytiếp hệ Ethyl acetate:MeOH (E:M) với độ phân cực tăng dần và cuối cùng là

MeOH 100%.

Dung dịch giải ly được chứa trong các lọ có dung tích 250 mL và đượctheo dõi bằng SKLM (TLC), hiện vết bằng đèn UV và bằng cách nhúng vào

thuốc thử Vaniline trong MeOH và hơ nóng trên bếp điện. Các lọ cho kết quảSKLM giống nhau (về màu vết và R f ) được gom thành một phân đoạn.

Kết quả sắc ký cột trên cao Dichloromethane thu được 12 phân đoạn

chính (OD1-OD12). Trong đó các phân đoạn OD2, OD7, OD8 cho vết chính rõ,

đẹp nên đượ c chọn để khảo sát tiế p. Kết quả sắc ký cột được trình bày chi tiết ởBảng 3.1.







Bảng 3.1 Kết quả sắc ký cột nhanh khô

Hệ dung môigiải ly

Số lọ Các phân

đoạn Khối lượ ng

(gam)Màu phân đoạn

H:E ( 9:1) 1-18 OD1 0,15 Tinh thể nâu đỏ

H:E (8:2) 19-72 OD2 2.94 Tinh thể vàng tươi

H:E (7:3) 73-84 OD3 1,58 Tinh thể màu đỏ

H:E (6:4) 85-91 OD4 2,38 Tinh thể xanh lục nhạt

92-101 OD5 5,54 Tinh thể xanh lục

H:E (5:5) 102-112 OD6 9,58 Tinh thể vàng xanh

113-150 OD7 23,96 Tinh thể vàng nâu

H:E (3:7) 151-189 OD8 13,58 Tinh thể xanh lục

199-202 OD9 7,55 Nhựa màu nâu nhạt

H:E (2:8) 203-226 OD10 3,64 Nhựa màu nâu

E 100% 227-241

OD11 1,45

Nhựa màu nâu

E:M (9:1) 241-271 Nhựa màu nâu

MeOH 100% 271-275 OD12 7,44 Nhựa màu đen

Tổng cộng 79,79

Hiệu suất thu hồi cột 77,79%







Sơ đồ 3.2 Tinh chế cao Dichloromethane

3.4.1 Khảo sát phân đoạn OD2Phân đoạn OD2 (2,94 gam) được tiếp tục sắc ký cột với hệ dung môi giải

ly CHCl3 đến CHCl3:MeOH (8:2) thu được 4 phân đoạn OD2.1-OD2.4. Tiếptheo, phân đoạn OD2.2 tiếp tục được tinh chế bằng phương pháp sắc ký lớpmỏng điều chế thu được tinh thể màu vàng nhạt ORI.K1 (5,3 mg). ORI.K1 giảily sắc ký lớp mỏng với hệ dung môi CHCl3:MeOH (95:5) có giá trị R f = 0,86.

Hấp thụ bước sóng UV 254 nm. Bản mỏng được nhúng thuốc hiện hình vết làVaniline/H2SO4 (5%) và hơ nóng trên bếp điện cho một vết tròn màu đỏ cam.

3.4.2 K hảo sát phân đoạn OD8Phân đoạn OD8 (13,58 gam) tiếp tục được tinh chế bằng sắc ký cột nhanh

khô với hệ dung môi giải ly Hex:EtOAc (9:1) đến EtOAc 100% thu được 8 phân

đoạn từ OD8.1 – OD8.8. Phân đoạn OD8.3 (1,35 gam) được tinh chế bằng sắcký cột thườ ng với dung môi giải ly CHCl3 thu được 2 chất ORI.P1 (33,23 mg)

và ORI.P2 (23,92 mg) là hai tinh thể màu vàng. ORI.P1 và ORI.P2 được giảily sắc ký lớp mỏng với hệ dung môi Chlorof or m 100% có trị số R f lần lượt 0,3

và 0,1. Hấp thụ bước sóng UV 254 nm. Bản mỏng được nhúng thuốc hiện hìnhvết là Vaniline/H2SO4 (5%) và hơ nóng trên bếp điện cho vết mờ màu vàng nhạt,nhúng vào thuốc hiện hình FeCl3/MeOH cho vết màu nâu.

3.4.3

Khảo sát phân đoạn OD7Phân đoạn OD7 (23,96 g) được sắc ký cột với hệ dung môi giải ly CHCl3

100% đến CHCl3:MeOH (8:2) cho ra 9 phân đoạn OD7.1-OD7.9. Phân đoạnOD2.6 để bay hơi dung môi tự nhiên có hiện tượng kết tinh. Lọc, rửa tinh thểvới CHCl3 thu được ORI.P3 (27,99 mg). ORI.P3 giải ly sắc ký lớp mỏng với

hệ dung môi CHCl3:MeOH (9:1) có R f = 0,67. Hấp thụ bước sóng UV 254 nm.Bản mỏng được nhúng thuốc hiện hình vết là Vaniline/H2SO4 (5%) và hơ nóng

ORI.P1ORI.P2

ORI.P3

OD1 OD2 OD3 OD4 OD5 OD6 OD7 OD8 OD9

Cao chiết Dichloromethane

Sắc ký cột nhanh khô (QCC) với hệdung môi Hex-EtOAc, EtOAc, MeOH.

OD12 OD11 OD10

ORI.K1







trên bếp điện cho vết mờ màu vàng, nhúng vào thuốc hiện hình FeCl 3/MeOH

cho vết màu đen.

3.5 ĐỊNH LƯỢNG FLAVONOID TOÀN PHẦN TRONG VỎ THÂNCÂY NÚC NÁC THEO CHẤT ĐỐI CHIẾU BAICALEIN

3.5.1

Xác định độ ẩm của dược liệu Tiến hành xác định 3 mẫu song song thu được kết quả ở Bảng 3.2

Bảng 3.2 K ết quả đo độ ẩm bột vỏ thân cây Núc nác

m (g) m1 (g) m2 (g) Xi%

Mẫu 1 65,8997 75,8886 75,2278 6,6153

Mẫu 2 67,8768 78,87467 78,1433 6,6495

Mẫu 3 83,9768 94,9754 94,2432 6,6572

=̅X+X2+X3

3 =

6,653+6,6495+6,6572

3 = 6,6406%

Độ ẩm của dược liệu là 6,6406%.

3.5.2

Chiết flavonoid toàn phần dưới sự hỗ trợ của sóng siêu âm Quy trình chiết flavonoid toàn phần được tóm tắt ở sơ đồ 3.3.

Sơ đồ 3.3 Chiết flavonoid toàn phần dưới sự hỗ trợ của sóng siêu âm.

- Cô quay loại bỏ dung môi

Bột nguyên liệu (20 gam)

- Chiết dược liệu với 150 mL dungmôi MeOH:H2O (1:1) với sự hỗtrợ của sóng siêu âm trong 30

phút.- Lọc, cô quay dung môi.

- Thêm 100 mL HCl (10%).- Thủy phân dung dịch ở nhiệt độ

85ᴑC trong 3 giờ. - Chiết với Ethyl acetate (30 mL × 3)

Dịch chiết nước

Dịch chiết Ea Dịch chiết nước (bỏ)

Flavonoid toàn phần (1,2685 gam)(hiệu suất chiết thô 6,343%)







3.5.3 Chọn bước sóng hấp thụ thích hợp Tiến hành pha 6 mẫu dung dịch bao gồm 5 mẫu dung dịch của chất đối

chiếu Baicalein đã được tạo phức với AlCl3/EtOH (5%) với nồng độ: 200, 250,

300, 350, 400 mg/L và 1 mẫu dung dịch chất đối chiếu Baicalein không tạo phức

AlCl3/EtOH (5%) có nồng độ 500 ppm. Tiến hành quét bước sóng hấp thụ từ200-1000 nm. Mẫu trắng để so sánh là dung dịch MeOH. Thu được kết quả nhưHÌNH 3.1.

HÌNH 3.1 Quét bước sóng phức flavonoid và AlCl3

Qua kết quả trên cho thấy ở bước sóng 600 nm dung dịch Baicalein không

tạo phức với AlCl3 không hấp thụ ánh sáng. Các dung dịch phức của Baicalein

và AlCl3 có hấp thụ ánh sáng và các khoảng tuyến tính thích hợp để tiến hànhđịnh lượng.

3.5.4 Độ lặp lại của phương pháp Kết quả xác định độ lặp lại được trình bày ở Bảng 3.3.

Bảng 3.3 Kết quả độ lặ p lại của phương pháp

Mẫu Khối lượng bột (gam) ABS (600 nm) Kết quả thống kê

1 20,003 0,3203

SD = 0,0144

RSD = 4,39%

2 20,002 0,3522

3 20,002 0,3298

4 20,003 0,3213

5 20,005 0,3252

6 20,002 0,3094

Kết quả ở Bảng 3.3 cho thấy phương pháp có độ lặp lại có thể chấp nhậnđược thông qua RSD = 4,39% (< 5%).







3.5.5 Xây dựng đường chuẩn Tiến hành pha một dãy dung dịch đối chiếu Baicalein với nồng độ chính

xác: 100, 200, 300, 400, 500 mg/L. Tạo phức màu với dung dịch AlCl3/EtOH

(5%) và tiến hành đo độ hấp thụ quang ở bước sóng 600 nm. Kết quả được trình

bày ở Bảng 3.4.

Bảng 3.4 Kết quả xây dựng đường chuẩn theo chất đối chiếu Baicalein

Nồng độ Baicalein (mg/L)

100 200 300 400 500

ABS (600 nm) 0,1102 0,1497 0,2163 0,2421 0,2921

HÌNH 3.2 Đồ thị đường chuẩn theo chất đối chiếu Baicalein

Từ kết quả ở Bảng 3.4 và Hình 3.2 cho thấy có sự tương quan tuyến tínhgiữa nồng độ và độ hấp thụ quang. Với nồng độ của chất đối chiếu Baicalein từ

100-500 mg/L phương trình đường chuẩn thu được y = 0,0005x + 0,0652 vớihệ số tương quan R 2 = 0,9867.

3.5.6

Giới hạn phương pháp a) Giới hạn định lượng LOQ

Kết quả xác định giới hạn định lượng LOQ được trình bày ở Bảng 3.5.

Bảng 3.5 Kết quả xác định độ lệch chuẩn của mẫu trắng

STT 1 2 3 4 5 6 7 8

ABS 0,0747 0,0670 0,0699 0,0677 0,0659 0,0693 0,0678 0,0667

K ết quả thống kê SD = 0,0028 RSD =4,06%

y = 0,0005x + 0,0652R² = 0,9867

0

0.05

0.1

0.15

0.2

0.25

0.3

0.35

0 100 200 300 400 500 600

A B S ( 6 0 0 n m )

Nồng độ dung dịch Baicalein tạo phức với Al3+ (mg/L)







Giớ i hạn định lượ ng LOQ của phương pháp khi dùng chất Baicalein làm

chất đối chiếu:

LOQ = 10.

= 10.

,28

,5 = 55,7 (mg/L)

b)

Giới hạn LOL:Kết quả xác định giới hạn định lượng LOQ được trình bày ở Bảng 3.6.

Bảng 3.6 Kết quả xác định nồng độ giới hạn LOL của chất đối chiếu Baicalein

Nồng độ Baicalein (mg/L)

600 700 800 900

ABS (600 nm) 0,3095 0,3186 0,3298 0,3371

HÌNH 3.3 Đồ thị xác định nồng độ giới hạn LOL theo Baicalein

Kết quả Bảng 3.5 và HÌNH 3.3 cho thấy nồng độ giới hạn LOL là 600mg/L, tại nồng độ này trở đi thì đồ thị của độ hấp thụ quang theo nồng độ không

còn tuyến tính. Như vậy khoảng tuyến tính của phương pháp xác định theo chấtđối chiếu Baicalein là khoảng từ 55,7-600 mg/L.

3.5.7 Độ đúng của phương pháp

Pha một dung dịch đối chiếu Baicalein có nồng độ chính xác 150 mg/L.

Sau đó tiến hành tạo phức và đo độ hấp thụ quang lặp lại 6 lần. Kết quả được

trình bày ở Bảng 3.7.Bảng 3.7 Kết quả xác định độ đúng của phươ ng pháp

Mẫu 1 2 3 4 5 6

ABS (600 nm) 0,1411 0,1404 0,1405 0,1465 0,1408 0,1417

Hàm lượng thuhồi (mg/L)

151.8 150,4 150,6 150,9 151,1 152,9

Phần trăm thu hồi

(%) 101,2 100,3 100,4 100,6 100,7 101,9Kết quả thống kê SD = 0,9282 RSD = 0,61%

0

0.05

0.1

0.15

0.2

0.25

0.3

0.35

0.4

0 100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000

A B S ( 6 0 0 n m )

Nồng độ dung dịch phức Baicalein và Al3+ (mg/L)







Tỉ lệ thu hồi nằm trong giới hạn cho phép nên phương pháp có độ đúng

đạt yêu cầu → Phương pháp không mắc sai số hệ thống.

3.5.8 Kết quả định lượng flavonoid toàn phần của vỏ thân cây Núc nác

Lấy chính xác 5 mL dung dịch flavonoid toàn phần cho vào bình định mức10 mL, thêm dung dịch MeOH:nước (1:1) đến vạch (điều chỉnh nồng độ dungdịch flavonoid toàn phần vào khoảng tuyến tính). Dung dịch này được tạo phứcvới AlCl3/EtOH (5%) và đo độ hấp thụ quang ở bước sóng 600 nm.

Từ quy trình trên, suy ra công thức tính hàm lượng flavonoid toàn phần

của vỏ thân cây Núc nác như sau:

X (mg/g) =−

(%−ℎ)× 0,1

Trong đó:

X: là hàm lượng flavonoid toàn phần. A: là độ hấp thụ quang đo ở bước sóng 600 nm. a,b: là hệ số của phương trình đường chuẩn theo Baicalein (y = ax + b). h: là phần trăm độ ẩm của dượ c liệu.

K ết quả xác định đượ c lặ p lại 3 lần và trình bày ở Bảng 3.8 đượ c biểu diễn

X = ± SD (mg Baicalein/gam).

Bảng 3.8 K ết quả định lượng flavonoid toàn phần trong vỏ thân cây Núc nác.

Mẫu ABS (600 nm)Hàm lượng f lavonoid toàn phần

(mg Baicalein/gam)

1 0,1955 27,9135

2 0,1929 27,3565

3 0,1931 27.3993

Giá tr ị : = 27,5564 (mg Baicalein/gam).

Giá trị độ lệch chuẩn SD = 0,3099.

Vậy hàm lượng flavonoid toàn phần trong vỏ thân cây Núc nác là X =27,5564±0,3099 (mg Baicalein/gam) (2,76%).








4.1

XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC VÀ ĐỊNH DANH HỢP CHẤT 4.1.1 Hợp chất ORI.K1

4.1.1.1

Các đặc tính của ORI.K1- Tinh thể dạng mảng, màu vàng nhạt.- Tan tốt trong hệ dung môi CHCl3:MeOH (9:1).

- Nhiệt độ nóng chảy (mp): 193-195 C, k ết tinh trong dung môi CHCl3.

- SKLM giải ly bằng CHCl3:MeOH (95:5) cho vết tròn, với màu đỏ cam

trong thuốc thử Vaniline khi hơ nóng, hấp thụ UV bướ c sóng 254 nm, giá trị R f = 0,86.

4.1.1.2 Nhận danh cấu trúc ORI.K1

Phổ khối lượng ESI-MS (negative) (Phụ lục 1.1) cho mũi ion phân tử giả m/z

= 255 amu ứng với [M-H] – và các mảnh khác phù hợp với công thức phân tử

C15H12O4 (M = 256 amu, độ bất bão hòa là 10).

Phổ 1H-NMR (DMSO_ d 6 , δH ppm, 500 MHz) (Phụ lục 1.2-1.3) cho thấy:

Một tín hiệu proton nhóm hydroxyl (– OH) có độ dịch chuyển hóa học δH

12,20 ppm (1H, s).

Bốn tín hiệu của vòng benzen có độ dịch chuyển hóa học trong khoảng δH

5,67 – 7,49 ppm:

+ Một tín hiệu tại δH 7,48 ppm (2H, d, 3 J = 7,5 Hz) chứng tỏ 2 proton nàyghép cặp với các proton ở vị trí ortho với chúng.

+ Một tín hiệu tại δH 7,37 ppm (3H, m) 3 proton này có thể nằm kề nhauvà cùng nằm trên 1 vòng thơm.

+ Hai tín hiệu mũi đôi δH 5,72 ppm (1H, d , 4 J = 1,5 Hz) và δH 5,68 ppm

(1H, d , 4 J = 2 Hz) chứng tỏ 2 proton nằm ở vị trí meta với nhau trên cùng mộtvòng thơm.

Một tín hiệu proton mũi đôi đôi δH 5,48 ppm (1H, dd, 3 J ea = 3 Hz, 3 J aa =12,5 Hz) chứng tỏ proton này có ghép cặp với 1 proton ở vị trí trục-xích đạo và1 proton ở vị trí trục-trục với với nó.

Một tín hiệu proton mũi đôi đôi δH 3,11 ppm (1H, dd , 2 J gem = 17 Hz, 3 J aa

= 12,5 Hz) chứng tỏ proton này có ghép cặp với 1 proton ở vị trí gem và một proton ở vị trí trục-trục với nó.

Một tín hiệu proton mũi đôi đôi δH 2,68 ppm (1H, dd , 3 J ae = 3 Hz, 3 J ae =

17 Hz) chứng tỏ proton này có ghép cặp với 1 proton ở vị trí trục-xích đạo (hoặcxích đạo-xích đạo) và một proton ở vị trí gem với nó.







Phổ 13C-NMR (DMSO_ d 6 , δC ppm, 125 MHz) (Phụ lục 1.4-1.5) kết hợp với

phổ DEPT (Phụ lục 1.6-1.7) cho thấy trong ORI.K 1 có 11 tín hiệu tương ứngvới 13 carbon (có 4 carbon vòng benzen đối xứng) và 1 tín hiệu carbon tứ cấprất yếu. Tuy nhiên phổ MS cho thấy ORI.K1 có 15 carbon, do đó có thể giải

thích rằng tín hiệu yếu của phổ 13C- NMR là 1 tín hiệu carbon tứ cấp và 1 tínhiệu carbon không hiển thị. Các tín hiệu 13C- NMR và DEPT của ORI.K1 cho

thấy:

Một tín hiệu carbon carbonyl liên hợp (>C=O) có độ dịch chuyển hóa họcδC 193,8 ppm.

Hai tín hiệu carbon tứ cấp của vòng thơm gắn trực tiếp với o xygen

(≥C – O – ) δC 163,6 ppm; 162,4 ppm.

Bảy tín hiệu carbon methine vòng thơm (–CH=) (có hai cặp carbon tươngđương) ở các δC 128,5 ppm (2C); 128,3 ppm; 126,5 ppm (2C); 96,8 ppm; 96,1

ppm.

Hai tín hiệu carbon tứ cấp của vòng thơm (=C<) tại δC 139,1 ppm và 1 tín

hiệu rất yếu ở δC khoảng 100,0 ppm

Môt tín hiệu carbon methine kề oxygen (– OCH –) tại δC 78,0 ppm.

Một tín hiệu carbon methylene ( – CH2 –) tại δC 42,0 ppm.

Từ dữ liệu phổ ESI-MS, 1H-NMR, 13C-NMR và DEPT có thể dự đoán ORI.K1là một hợp chất thuộc nhóm flavanone, cấu trúc có 3 vòng: 1 vòng thơm 4 nhóm

thế, 1 vòng thơm mang 1 nhóm thế và 1 dị vòng thơm.

HÌNH 4.1 Khung flavanone và số chỉ vị trí

Vòng A: (vòng mang 4 nhóm thế)

Phổ 1H- NMR có 1 mũi tín hiệu proton hydroxyl kềm nối ở H 12,20 ppm,

đó là proton -OH gắn vào carbon C5 khung flavanone.

Phổ HSQC cho thấy proton H 5,72 ppm (1H, d , 4 J = 1,5 Hz) tương tác với

carbon methine δC 96,1 ppm, proton H 5,68 ppm (1H, d , 4 J = 2 Hz) tương tác

với carbon methine δC 96,8 ppm và hai proton đó ghép cặp meta với nhau, do

đó 2 proton này nằm ở vị trí H6 và H8. Mặt khác, do chịu ảnh hưởng của nhóm-OH tại C5 nên H6 cộng hưởng ở vùng từ trường mạnh hơn so với H8. Vì thế,







tín hiệu proton ở δH 5,72 ppm là tín hiệu H8 và δH 5,68 ppm là tín hiệu H6 và 2

carbon δC 96,1 ppm; 96,8 ppm lần lượt là C8 và C6.

Phổ HMBC cho thấy 2 proton H6 và H8 đều cho tương tác với carbon bậc

4 vòng thơm tín hiệu thấp không kề oxygen ở C 100,0 ppm, vậy nên carbon C 100,0 ppm là carbon C10. Proton H6 còn tương tác với 1 carbon bậc 4 vòng thơm

kề oxygen ở C 163,6 ppm suy ra carbon này là carbon C7. Proton H8 tương tác

với carbon tứ cấp kề oxygen ở C 162,4 ppm nên carbon này là C9.

Vòng C: (dị vòng chứa Oxygen)

Phổ 13C- NMR và DEPT cho thấy một mũi carbon ở C 193,8 ppm là tín

hiệu carbon carbonyl liên hợp của khung flavanone tương ứng với C4.

Hai proton ở H 3,11 ppm (1H, dd ,

2

J gem = 17 Hz,

3

J aa = 12,5 Hz) và H 2,68 ppm (1H, dd , 3 J ae = 3 Hz, 2 J gem = 17 Hz) ghép cặp với nhau với 2 J gem = 17

Hz và trong phổ HSQC cho thấy chúng tương tác với carbon methylene ở C

42,0 ppm vì thế 2 proton và carbon này liên kết trực tiếp với nhau. Mặt khác,

trong phổ HMBC cho thấy 2 proton này tương tác với carbon carbonyl C 4, do

đó 2 proton H 3,11 ppm và 2,68 ppm là 2 proton H3 ở vị trí trục và xích đạo. và

carbon ở C 42,0 ppm là carbon C3. Ngoài ra, proton H 3,11 ppm có tương tác

với carbon methine kề oxygen C 78,0 ppm, giúp xác thực carbon C2 tương ứng

với tín hiệu C 78,0 ppm. Trong phổ HSQC cho thấy proton H 5,48 ppm (1H,dd, 3 J ae = 3 Hz, 3 J aa = 12,5 Hz) gắn trực tiếp vào carbon C2 nên proton ở H 5,48

ppm là H2.

Phân tích độ chẻ mũi của proton H2 và 2 proton H3 cho thấy chúng có ghép

cặp lẫn nhau. Proton H2 có ghép cặp với proton H3 ở H 3,11 ppm có hằng số 3 J

= 12,5 Hz (đây là hằng số 3 J aa của 2 proton ở vị trí trục-trục) nên 2 proton này

đều phải nằm ở vị trí trục. Vì vậy proton H 3,11 ppm (H3a) là proton trục và

proton H 2,68 ppm (H3e) nằm ở vị trí xích đạo.

Vòng B: (vòng mang 1 nhóm thế) Phổ HSQC cho thấy 2 proton ở H 7,48 ppm (2H, d, 3 J = 7,5 Hz) tương

tác với 2 carbon tương đương ở C 126,5 ppm. Phổ HMBC cho thấy proton nàytương tác với carbon C2, ngoài ra nó còn tương tác với 2 carbon methine tươngđương ở 128,5 ppm, 1 carbon methine ở 128,3 ppm và tương tác với chínhcarbon C 126,5 ppm. Suy ra 2 proton này là 2 proton H2 H6, carbon ở C 126,5

ppm là 2 carbon tương đương C2 C6. Vậy tín hiệu ở 128,5 ppm là 2 carbon

tương đương C3 C5 và 128,3 ppm là carbon C4’

Trong phổ HSQC 3 proton δH 7,32 ppm (3H, m) tương tác trên 2 tín hiệucarbon ở C C3 C5 và C4, do đó 3 proton này là H3 H4 H5. Phổ HMBC cho thấy







3 proton H3 H4 H5 có tương tác với carbon C2 C6 và 1 carbon tứ cấp vòng thơm

ở 139,1 ppm nên carbon này là carbon C1.

Qua các dữ liệu trên nhận thấy tín hiệu carbon bị thiếu là 1 tín hiệu carbon

tứ cấp gắn trực tiếp với oxygen ở vị trí C5, có thể do cường độ thấp nên bị chelẫn.

Bảng 4.1 Dữ liệu phổ 1H-NMR, 13C- NMR và DEPT của ORI.K1

Vị tríC/H

1H-NMRδH ppm

(số H, tín hiệu, J Hz)

13C-NMRδC ppm

K ết luận

5-OH 12,20 (1H, s) - – OH

2 5,48 (1H, dd, 3 J= 3 Hz, 3 J = 12,5 Hz) 78,0 =HC – O –

3a 3,11 (1H, dd , 2 J = 17 Hz, 3 J = 12,5 Hz)42,0 – CH2 –

3e 2,68 (1H, dd , 3 J = 3 Hz, 3 J= 17 Hz)

4 - 193,8 >CO

5 - Mất ≥C – O –

6 5,72 (1H, d , 4 J = 1,5 Hz) 96,8 =CH –

7 - 163,6 ≥C – O –

8 5,68 (1H, d , 4 J = 2 Hz) 96,1 =CH –

9 - 162,4 ≥C – O –

10 - 100,0 =C<

1 - 139,1 =C<

2 7,48 (1H, d, 3 J = 7,5 Hz) 126,5 – CH=

6 7,48 (1H, d,

3

J = 7,5 Hz) 126,5 – CH=3 7,37 (1H, m) 128,5 – CH=

5 7,37 (1H, m) 128,5 – CH=

4 7,37 (1H, m) 128,3 – CH=

Phổ HSQC (Phụ lục 1.8-1.10) cho thấy có đủ các tương quan giữa các

proton và carbon nối trực tiếp với nhau (1 J CH): H2→C2; H3a, H3e→C3; H6→H6

H8→C8; H2→C2; H6→C6; H3→C3; H5→C5, H4→C4. Nhờ đó có thể xác định

vị trí các proton đi cùng theo từng nhóm =CH, >CH, CH2.







Phổ HMBC (Phụ lục 1.11-1.12) cho thấy các mối tương quan giữa proton

và các carbon lân cận qua 2 hoặc 3 nối hóa trị ( 2 J CH hoặc 3 J CH), các tương quantiêu biểu như sau:

Ở vòng A: H6→C7 (2 J CH) và H6→C8, C10 (3 J CH); H8→C9, C7 (2 J CH) và

H8→C6, C10 (3 J CH).

Ở vòng B: H2 H6→ C3, C5 (2 J CH) và H2 H6→ C4, C2 (3 J CH); H3 H4

H5→C2 C6 (2 J CH) và H3 H4 H5→C1, (3 J CH).

Ở vòng C: H2→C2 C6 (3 J CH); H3a→C4, C2 và H3e→C4 (2 J CH).

Bảng 4.2 Dữ liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR, HSQC và HMBC của ORI.K1

Vị tríC/H

1H-NMR

δH ppm(số H, tín hiệu, J Hz)

13C-

NMRδC ppm HSQC HMBC

5-OH 12,20 (1H, s) - - -

2 5,48 (1H, dd, J= 3; 12,5 Hz) 78,0 C2 C2, C6

3a 3,11 (1H, dd , J = 17; 12,5 Hz)42,0 C3

C4, C2

3e 2,68 (1H, dd , J= 3; 17 Hz) C4

4 - 193,8 - -

5 - Mất - -

6 5,72 (1H, d , J = 1,5 Hz) 96,8 C6 C7, C8, C10

7 - 163,6 - -

8 5,68 (1H, d , J = 2 Hz) 96,1 C8 C6, C7, C9, C10

9 - 162,4 - -

10 - 100,0 - -

1 - 139,1 - -

2 7,48 (1H, d, J = 7,5 Hz) 126,5 C2 C3, C5, C4, C2

6 7,48 (1H, d, J = 7,5 Hz) 126,5 C6 C3, C5, C4, C2

3 7,37 (1H, m) 128,5 C3 C2, C6, C1’

5 7,37 (1H, m) 128,5 C5 C2, C6, C1’

4 7,37 (1H, m) 128,3 C4 C2, C6, C1’







Các dữ liệu phổ đã phân tích trên đây được so sánh với dữ liệu phổ của

Pinocembrin trong tài liệu tham khảo[13] ở Bảng 4.3.

Bảng 4.3 So sánh dữ liệu phổ của ORI.K1 và Pinocembrin[13].

ORI.K1 Pinocembrin

Vị tríC/H

1H-NMRδH ppm

(tín hiệu, J Hz)

13C-NMR

δC ppm

1H-NMRδH ppm

(tín hiệu, J Hz)

13C-NMR

δC ppm

5-OH 12,20 ( s) - 12,00 ( s) -

2 5,48 ( dd, J= 3; 12,5 Hz) 78,0 5,43 (dd , J= 3; 13 Hz) 79,2

3a 3,11 (dd , J = 17; 12,5 Hz)42,0

3,10 (dd , J= 17; 13 Hz)43,3

3e 2,68 (dd , J = 3; 17 Hz) 2,83 (dd , J = 3; 17 Hz)

4 - 193,8 - 195,8

5 - Mất - 164,3

6 5,72 (d , J = 1,5 Hz) 96,8 6,00 (d , J = 1,5Hz) 96,7

7 - 163,6 164,6

8 5,68 (d , J = 2 Hz) 96,1 6,01 (d , 4 J = 2Hz) 95,5

9 - 162,4 - 163,5

10 - 100,0 - 103,2

1 - 139,1 - 138,2

2 7,48 (d, J = 7,5 Hz) 126,5

7,40-7,47 (5H, m)

126,1

6 7,48 (d, J = 7,5 Hz) 126,5 126,1

3 7,37 (m) 128,5 128,9

5 7,37 (m) 128,5 128,9

4 7,37 (m) 128,3 128,9

Từ các dữ liệu phổ 1H-NMR, 13C- NMR kết hợp với DEPT, HSQC, HMBCvà so sánh với tài liệu đã công bố[13] giúp nhận danh được ORI.K1 là

Pinocembrin (IUPAC: 5,7-dihydroxyl-2-phenylchroman-4-one)

HÌNH 4.2 Cấu trúc của ORI.K1 (Pinocembrin)







4.1.2 Hợp chất ORI.P1 4.1.2.1

Các đặc tính của ORI.P1- Tinh thể dạng mảng, màu vàng sáng.

- Tan tốt trong dung môi CHCl3:MeOH (9:1).

-

Nhiệt độ nóng chảy (mp): 198-200C, k ết tinh trong dung môi CHCl3.- SKLM giải ly bằng CHCl3 cho vết tròn, với màu vàng nhạt mờ trong

thuốc thử Vaniline khi hơ nóng và màu nâu nhạt trong thuốc thử Fe3+, hấp thụ

UV bước sóng 254 nm. Có giá trị R f = 0,3.

4.1.2.2 Nhận danh cấu trúc ORI.P1

Phổ 1H-NMR (DMSO d 6 , δH ppm, 500 MHz) (Phụ lục 2.1-2.2) cho thấy:

Một tín hiệu proton nhóm hydroxyl kềm nối (– OH) có độ dịch chuyển hóa

học δH 12,92 ppm (1H, s).Một tín hiệu proton methoxy (– OCH3) tại δH 3,76 ppm (3H, s).

Bốn tín hiệu của vòng benzen có độ dịch chuyển hóa học trong khoảng δH

6,63 – 8,07 ppm cường độ tích phân tương ứng 7 proton, cho thấy trong cấu trúc

có 2 vòng benzen:

+ Một tín hiệu tại δH 8,06 ppm (2H, dd , 4 J = 2 và 3 J = 7 Hz) của 2 proton

có ghép cặp với các proton ở vị trí ortho và meta với chúng.

+ Một tín hiệu tại δH 7,58 ppm (3H, m) 3 proton này có thể nằm kề nhauvà cùng nằm trên một vòng thơm.

+ Hai tín hiệu mũi đơn δH 6,95 ppm (1H, s) và δH 6,63 ppm (1H, s) chứng

tỏ 2 proton này không có proton kề cận chúng.

Phổ 13C-NMR (DMSO_ d 6 , δC ppm, 125 MHz) (Phụ lục 2.3-2.4) kết hợp vớiphổ DEPT (Phụ lục 2.5-2.6) cho thấy trong ORI.P1 có 16 carbon (có 4 carbon

vòng benzen đối xứng). Trong đó có:

Một tín hiệu carbon carbonyl liên hợp (>C=O) có độ dịch chuyển hóa họcδC 180,2 ppm.

Một tín hiệu carbon methoxy ( – OCH3) tại δC 59,9 ppm.

Năm tín hiệu carbon tứ cấp của vòng thơm gắn trực tiếp với oxygen(≥C – O – ) ở δC 163,2 ppm; 157,6 ppm; 152,7 ppm; 152,5 ppm; 131,5 ppm.

Bảy tín hiệu carbon methine vòng thơm (– CH=) (có hai cặp carbon tươngđương) ở δC 131,9 ppm; 129,1 ppm (2C); 126,3 ppm (2C); 104,6 ppm; 94,4

ppm.

Hai tín hiệu carbon tứ cấp vòng thơm (=C<) tại δC 130,7 ppm; 104,3 ppm.







Từ dữ liệu phổ 1H-NMR , 13C-NMR và DEPT cho thấy ORI.P3 là

flavonone, cấu trúc có 3 vòng: 1 vòng thơm mang 5 nhóm thế,1 vòng thơmmang 1 nhóm thế và 1 dị vòng thơm.

HÌNH 4.3 Khung flavonone và số chỉ vị trí

Vòng A: (vòng thơm 5 nhóm thế)

Phổ 1H- NMR cho thấy 1 tín hiệu proton hydroxyl kềm nối (proton -OH

gắn vào C5 khung flavone) ở H 12,92 ppm. Kết hợp phổ HMBC, cho thấy proton ở H 12,92 ppm tương tác với 2 carbon bậc 4 vòng thơm kề oxygen ở C

157,7 ppm, 131,5 ppm và 1 carbon bậc 4 vòng thơm không kề oxygen ở C

104,3 ppm nên 3 carbon này lần lượt là C5, C6 và C10.

Phổ HSQC cho thấy proton ở 6,63 ppm (1H, s) gắn trực tiếp vào carbonmethine ở δC 94,4 ppm. Đồng thời, phổ HMBC cho thấy proton này tương tác

với carbon C10, C6 và 2 carbon vòng thơm gắn với oxygen ở C 152,7 ppm, 163,2

ppm. Nên proton này là proton H8, carbon 94,4 ppm là carbon C8 và 2 carbon

vòng thơm kề oxygen lần lượt là C9 (C 152,7 ppm) và C7 (C 163,2 ppm).Trong phổ HMBC tín hiệu ở H 3,76 ppm của nhóm methoxy có tương tác

với carbon C6, nên nhóm methoxy sẽ nằm ở carbon C6.

Vòng C: ( dị vòng chứa Oxygen)

Phổ HSQC cho thấy proton ở 6,95 ppm (1H, s) gắn trực tiếp vào carbonmethine ở δC 104,6 ppm. Mặt khác trong phổ HMBC cho thấy proton này cótương tác với carbon C10 và 3 carbon khác bao gồm 1 carbon carbonyl δC 182,2

ppm, 1 carbon tứ cấp vòng thơm kề oxygen ở C 163,2 ppm và 1 carbon tứ cấp

vòng thơm không kề oxygen ở C 130,7 ppm. Từ các dữ kiện trên có thể kếtluận proton ở 6,95 ppm là proton H3. Car bon carbonyl ở C 182,2 ppm là carbon

C4, carbon ở C 163,2 ppm là carbon C2 và carbon ở C 130,7 ppm là carbon C1’

của vòng B.

Xét vòng B (vòng thơm mang 1 nhóm thế)

Phổ HSQC cho thấy 2 proton ở H 8,06 ppm (2H, dd , 4 J = 2 và 3 J = 7 Hz)

tương tác vớ i 2 carbon tương đương ở C 126,4 ppm. Phổ HMBC cho thấy

proton này tương tác với carbon C2, C1, ngoài ra nó còn tương tác với 1 carbon

methine ở C 131,9 ppm và có tương tác với chính carbon C 126,4 ppm. Suy ra







2 proton này là proton H2 H6, carbon ở C 126,3 ppm là carbon tương đương

C2 C6.

Trong phổ HSQC 3 proton δH 7,58 ppm (3H, m) tương tác trên 2 tín hiệu

carbon ở C 131,9 ppm và 130,7 ppm. Phổ HMBC cho thấy chúng có tương tác

với carbon C2, C6, C1. Suy ra nhóm 3 proton này là H3 H4 H5 và carbon ở C

131,9 ppm là C4’ và carbon ở C 130,7 ppm là carbon tương đương C3 C5.

Bảng 4.4: Dữ liệu phổ 1H-NMR, 13C- NMR và DEPT của ORI.P1

Vị tríC/H

1H-NMRδH ppm


13C-NMRδC ppm

K ết luận

5-OH 12,92 (1H, s) - – OH

2 - 163,2 ≥C – O –

3 6,95 (1H, s) 104,6 =CH –

4 - 182,2 >CO

5 - 152,5 ≥C – O –

6 - 131,5 ≥C – O –

7 - 157,6 ≥C – O –

8 6,63 (1H, s) 94,4 =CH – 9 - 152,7 ≥C – O –

10 - 104,3 =C<

1 - 130,7 =C<

2 8,06 (1H, dd , 4 J = 2 Hz và 3 J = 7 Hz) 126,3 – CH=

6 8,06 (1H, dd , 4 J = 2 Hz và 3 J = 7 Hz) 126,3 – CH=

3 7,58 (1H, m) 129,1 – CH=

5 7,58 (1H, m) 129,1 – CH=

4 7,58 (1H, m) 131,9 – CH=

-OCH3 3,76 (3H, s) 59,9 – OCH3

Phổ HSQC (Phụ lục 2.10-2.11) cho thấy có đủ các tương quan giữa các

proton và carbon nối trực tiếp với nhau (1 J CH): H3→C3; H8→C8; H2→C2;

H6→C6; H3→C3; H4→C4; H5→C5. Nhờ đó có thể xác định vị trí các protonđi cùng theo từng nhóm =CH– .







Phổ HMBC (Phụ lục 2.7-2.9) cho thấy các mối tương quan giữa proton

và các carbon lân cận qua 2 hoặc 3 nối hóa trị ( 2 J CH hoặc 3 J CH), các tương quantiêu biểu như sau:

Ở vòng A: –OH→C5 (2 J CH) và – OH→C6, C10 (3 J CH); H8→C9, C7 (2 J CH)

, H8→C6, C10 (3 J CH) và H8 →C4 (4 J CH), – OCH3 →C6 (3 J CH).

Ở vòng B: H2 H6→C1 (2 J CH) và H2 H6→C4, C2 (3 J CH); H3 H4 H5→C2,

C6 (2 J CH) và H3 H4 H5→C1(3 J CH).

Ở vòng C: H3→C2, C4 (2 J CH); H3→C1, C10 (3 J CH).

Bảng 4.5 Dữ liệu phổ 1H-NMR, 13C- NMR, HSQC và HMBC của ORI.P1

Vị tríC/H

1H-NMR


13C-NMR

δC ppm

HSQC HMQC

5-OH 12,92 (1H, s) - - C5, C6, C10

2 - 163,2 - -

3 6,95 (1H, s) 104,6 C3 C4, C2, C1’, C10

4 - 182,2 - -

5 - 152,5 - -6 - 131,5 - -

7 - 157,6 - -

8 6,63 (1H, s) 94,4 C8 C4, C6, C7, C9, C10

9 - 152,7 - -

10 - 104,3 - -

1 - 130,7 - -

2 8,06 (1H, dd , J = 2; 7 Hz) 126,3 C2 C1, C4, C2

6 8,06 (1H, dd , J = 2; 7 Hz) 126,3 C6 C1, C4, C2

3 7,58 (1H, m) 129,1 C3 C2, C6, C1’

5 7,58 (1H, m) 129,1 C5 C2, C6, C1’

4 7,58 (1H, m) 131,9 C4 C2, C6, C1’

-OCH3 3,76 (3H, s) 59,9 -OCH3 C6







Các dữ liệu phổ đã phân tích trên đây được so sánh với dữ liệu phổ củaOroxylin A trong tài liệu tham khảo[12] ở Bảng 4.6.

Bảng 4.6 So sánh dữ liệu phổ của ORI.P1 và Oroxylin A[12]

ORI.P1 Oroxylin A

Vị tríC/H

1H-NMR


13C-NMR

δC ppm

1H-NMRδH ppm


13C-NMR

δC ppm

5-OH 12,92 (1H, s) - 13,11 (1H, s) -

2 - 163,2 - 164,9

3 6,95 (1H, s) 104,6 6,79 (1H, s) 105,8

4 - 182,2 - 183,8

5 - 152,5 - 154,1

6 - 131,5 - 132,4

7 - 157,6 - 158,0

8 6,63 (1H, s) 94,4 6,67 (1H, s) 95,0

9 - 152,7 - 154,2

10 - 104,3 - 106,1

1 - 130,7 - 132,4

2, 6 8,06 (2H, dd, J = 2; 7 Hz) 126,3 8,07 (2H, dd ) 127,4

3, 5 7,58 (3H, m)

129,17,61-7,58 (3H, m)

130,1

4 131,9 132,8

-OCH3 3,76 (3H, s) 59,9 3,89 (3H, s) 60,8

Từ các dữ liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR kết hợp với DEPT, HSQC,HMBC và so sánh với tài liệu đã công bố [12] giúp nhận danh được ORI.P1 là

Oroxylin A (UIPAC: 5,7-dihydroxy-6-methoxy-2-phenyl-4H-chromen-4-one).

HÌNH 4.4 Cấu trúc của ORI.P1 (Oroxylin A)







4.1.3 Hợp chất ORI.P24.1.3.1

Các đặc tính của ORI.P2- Là tinh thể màu vàng nhạt, hình kim.

- Tan tốt trong hệ dung môi CHCl3 và MeOH.

-

Nhiệt độ nóng chảy (mp): 285-286oC, kết tinh trong dung môi CHCl3.- SKLM giải ly bằng CHCl3 cho vết tròn, với màu vàng nhạt mờ trong

thuốc thử Vaniline khi hơ nóng và màu nâu nhạt trong thuốc thử Fe3+ , hấp thụ

UV bước sóng 254 nm. Có giá trị R f = 0,1.


Phổ khối lượng ESI-MS (negative) (Phụ lục 3.1) cho mũi ion phân tử giả m/z

= 253 amu ứng với [M-H] – và các mảnh khác phù hợp với công thức phân tử

C15H10O4 (M = 254 amu, độ bất bão hòa của phân tử là 11).

Phổ 1H-NMR (DMSO_ d 6 , 500 MHz, δH ppm, J Hz) (Phụ lục 3.1-3.2) cho thấy:

Một tín hiệu proton hydroxyl k ềm nối ( – OH) tại H 12,73 ppm (1H, s).

Năm tín hiệu đặc trưng của các proton trên vòng thơm ( – CH=) trong

khoảng δH 5,83-8,00 ppm, trong đó có:

+ Một tín hiệu ở H 7,99 ppm (2H, dd , 4 J = 2 Hz và 3 J = 8 Hz) chứng tỏ 2

proton này ghép cặp spin với các proton ở vị trí ortho và meta trên cùng một

nhân thơm.

+ Một tín hiệu proton ở H 7,54 ppm (3H, m) chứng tỏ 3 proton có thể nằm

kề nhau và nằm cùng 1 nhân thơm.

+ Ba tín hiệu tại H 6,71 ppm (1H, s), H 6,09 ppm (1H, s) và H 5,83 ppm

(1H, s) chứng tỏ có 3 proton này không kề với proton kế cận.

Phổ 13C-NMR (DMSO_ d 6 , C ppm, 125 MHz) (Phụ lục 3.4-3.5) k ết hợp với

phổ DEPT (Phụ lục 3.6-3.7) cho thấy ORI.P2 có 11 mũi tương đương với 14carbon (trong đó có 3 cặp carbon tương đương). Tuy nhiên phổ ESI-MS cho

thấy ORI.P2 có 15 carbon nên có thể giải thích rằng 1 tín hiệu carbon khônghiển thị trên phổ 13C-NMR của ORI.P2. Các tín hiệu phổ 13C-NMR và DEPT

cho thấy:

Một carbon carbonyl (>C=O) ở C 179,9 ppm.

Ba carbon tứ cấp của vòng thơm liên kết trực tiếp với oxygen (≥C – O – )

ở các C 161,3 ppm; 161,2 ppm; 158,0 ppm.

Tám carbon methine của vòng thơm (– CH=) ở C 131,3 ppm; 129,0 ppm

(2C); 126,0 ppm (2C); 104,6 ppm; 101,0 ppm; 95,3 ppm.







Hai carbon bậc 4 của vòng thơm (>C=) ở C 100,8 ppm và 131,3 ppm.

Tín hiệu carbon còn thiếu là 1 carbon tứ cấp vòng thơm kề oxygen(≥CO – ).

Từ dữ liệu phổ ESI-MS, 1H-NMR, 13C-NMR và DEPT cho thấy ORI.P3là 1 hợp chất flavonone có 3 vòng: 1 vòng thơm mang 4 nhóm thế và 1 vòngmang 1 nhóm thế và 1 dị vòng thơm.

Bảng 4.7 Dữ liệu phổ 1H-NMR, 13C- NMR và DEPT của ORI.P2

Vị tríC/H

1H-NMR


13C-NMR

δC ppmK ết luận

5-OH 12,73 (1H, s) - – OH

2 - 161,3 ≥C – O –

3 6,71 (1H, s) 101,0 =CH –

4 - 179,9 >C – O

5 - 161,2 ≥C – O –

6 5,83 (1H, s) 104,6 =CH –

7 - Mất ≥C – O –

8 6,09 (1H, s) 95,3 =CH –

9 - 158,0 ≥C – O –

10 - 100,8 =C<

1 - 131,3 =C<

2 7,99 (2H, dd , 4 J = 2 Hz và 3 J = 8 Hz) 129,0 =CH –

6 7,99 (2H, dd , 4 J = 2 Hz và 3 J = 8 Hz) 129,0 =CH –

3 7,54 (3H, m) 126,0 =CH –

5 7,54 (3H, m) 126,0 =CH –

4 7,54 (3H, m) 131,3 =CH –







Các dữ liệu phổ đã phân tích trên đây rất phù hợp với cấu trúc của Chrysin

(đã từng được công bố là tìm thấy trong cây Núc nác). Do đó các dữ liệu phổtrên được so sánh với dữ liệu phổ của Chrysin trong tài liệu tham khảo[12] và ghi

ở Bảng 4.8

Bảng 4.8 So sánh dữ liệu phổ của ORI.P2 và Chrysin[12].

ORI.P2 Chrysin[12]

Vị tríC/H

1H-NMR


13C-NMR

δC ppm

1H-NMR


13C-NMR

δC ppm

5-OH 12,73 (1H, s) - 12,88 (1H, s) -

2 - 161,3 - 164,7

3 6,71 (1H, s) 101,0 6,76 (1H, s) 106,3

4 - 179,9 - 183,1

5 - 161,2 - 163,1

6 5,83(1H, s) 104,6 6,28 (1H, s) 100,0

7 - Mất - 165,9

8 6,09 (1H, s) 95,3 6,57 (1H, s) 95,1

9 - 158,0 - 159,1

10 - 100,8 - 105,7

1 - 131,3 - 132,5

2,6’ 7,99 (2H, dd , J = 2; 8 Hz) 129,0 8,05 (2H, dd, J = 8,1; 1,8 Hz) 127,4

3,5’ 7,54 (3H, m)

126,07,58-7,60 (3H, m)

130,1

4 131,3 132,8

Từ các dữ liệu phổ ESI-MS, 1H-NMR, 13C- NMR kết hợp với DEPT, và sosánh với dữ liệu phổ của Chrysin của tài liệu đã được công bố[12] giúp nhận danhđược ORI.P2 là Chrysin (UIPAC: 5,7-dihydroxy-2-phenyl-4H-chromen-4-

one).

HÌNH 4.5 Cấu trúc của ORI.P2 (Chrysin)







4.1.4 Hợp chất ORI.P34.1.4.1

Các đặc tính của ORI.P3 - Tinh thể hình kim, màu nâu đỏ.

- Tan tốt trong dung môi CHCl3:MeOH (9:1).

-

Nhiệt độ nóng chảy (mp): 263C, k ết tinh trong dung môi CHCl3.- SKLM giải ly bằng CHCl3:MeOH (9:1) cho vết tròn, với màu vàng nhạt

mờ trong thuốc thử Vaniline khi hơ nóng và màu đen trong thuốc thử Fe3+, hấpthụ ánh sáng UV bước sóng 254 nm. Có giá trị R f = 0,67.


Phổ 1H-NMR (DMSO_ d 6 , δH ppm, 500 MHz) (Phụ lục 4.1-4.2) cho thấy:

Một tín hiệu proton nhóm hydroxyl (– OH) có độ dịch chuyển hóa học δH

12,64 ppm (1H, s)Bốn tín hiệu của vòng benzen có độ dịch chuyển hóa học trong khoảng δH

6,63 – 8,06 ppm. Cho thấy trong cấu trúc có 2 vòng benzen:

+ Một tín hiệu tại δH 8,05 ppm (2H, d , 3 J = 7,5 Hz,) chứng tỏ 2 proton nàyghép cặp với các proton ở vị trí ortho với chúng.

+ Một tín hiệu ở δH 7,58 ppm (3H, m) 3 proton này có thể nằm kề nhau vàcùng nằm trên vòng thơm.

+ Hai tín hiệu mũi đơn ở δH 6,91 ppm (1H, s) và δH 6,63ppm (1H, s) chứngtỏ 2 proton này không có proton kề cận.

Phổ 13C-NMR (DMSO_ d 6 , δC ppm, 125 MHz) (Phụ lục 4.3-4.4) kết hợp vớiphổ DEPT (Phụ lục 4.5-4.6) cho thấy trong ORI.P3 có 15 carbon (trong đó có

4 carbon đối xứng trên vòng benzen). Các tìn hiệu bao gồm:

Một tín hiệu carbon carbonyl liên hợp (>C=O) có độ dịch chuyển hóa họcδC 182,1 ppm

Năm tín hiệu carbon tứ cấp của vòng thơm gắn trực tiếp với oxygen

(≥C – O –) ở δC 162,9 ppm; 153,6 ppm; 149,8 ppm; 147,0 ppm; 131,0 ppm.

Bảy tín hiệu carbon methine vòng thơm (– CH=) (có hai cặp carbon tươngđương) ở δC 131,8 ppm; 129,1 ppm (2C); 126,3 ppm (2C); 104,5 ppm; 94,0

ppm.

Hai tín hiệu carbon tứ cấp của vòng thơm (=C<) ở δC 129,3 ppm; 104,3

ppm.

Từ dữ liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR và DEPT cho thấy ORI.P3 là

flavonone, cấu trúc có 3 vòng: 1 vòng mang 5 nhóm thế 1 vòng mang 1 nhómthế và 1 dị vòng thơm.







Bảng 4.9 Dữ liệu phổ 1H-NMR, 13C- NMR và DEPT của ORI.P3

Vị tríC/H

1H-NMR

δH ppm


13C-NMR

δC ppmK ết luận

5-OH 12,64 (1H, s) - – OH

2 - 162,9 ≥C – O –

3 6,91 (1H, s) 104,5 =CH –

4 - 182,1 >CO

5 - 147,0 ≥C – O –

6 - 131,0 =CH –

7 - 153,6 ≥C – O –

8 6,63 (1H, d ) 94,0 – CH=

9 - 149,8 ≥C – O –

10 - 104,3 =C<

1 - 129,3 =C<

2 8,05 (2H, d , 4 J = 7,5 Hz) 126,3 – CH=

6 8,05 (2H, d , 4 J = 7,5 Hz) 126,3 – CH=

3 7,58 (3H, m) 129,1 – CH=

5 7,58 (3H, m) 129,1 – CH=

4 7,58 (3H, m) 131,8 – CH=

Từ dữ liệu phổ trên có thể thấy ORI.P1 và ORI.P3 là 2 hợp chất đồng đẳng

của nhau, chúng chỉ khác nhau nhóm thế ở vị trí C7 (nhóm – OCH3 đối vớiORI.P1 và nhóm –OH đối với ORI.P3). Các dữ liệu phổ đã phân tích trên của

ORI.P3 được so sánh với dữ liệu phổ của ORI.P1 được ghi ở Bảng 4.10.







Bảng 4.10 So sánh dữ liệu phổ của ORI.P3 và ORI.P1

ORI.P3 ORI.P1

Vị tríC/H

1H-NMR


13C-

NMRδC ppm

1H-NMR


13C-

NMRδC ppm

5-OH 12,64 (1H, s) - 12,92 (1H, s) -

2 - 162,9 - 163,2

3 6,91 (1H, s) 104,5 6,95 (1H, s) 104,6

4 - 182,1 - 182,2

5 - 147,0 - 152,5

6 - 131,0 - 131,5

7 - 153,6 - 157,6

8 6,63 (1H, d ) 94,0 6,63 (1H, s) 94,4

9 - 149,8 - 152,7

10 - 104,3 - 104,31 - 129,3 - 130,7

2, 6 8,05 (2H, d , J = 7,5 Hz) 126,3 8,06 (2H, dd, J = 2; 7 Hz) 126,3

3, 5 7,58 (3H, m)

129,17,58 (3H, m)

129,1

4 131,8 131,9

-OCH3 - - 3,76 (3H, s) 59,9

Từ các dữ liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR kết hợp với DEPT, và so sánh vớidữ liệu phổ của ORI.P1 giúp nhận danh được ORI.P3 là Baicalein (UIPAC:

5,6,7-trihydroxy-2-phenyl-4H-chromen-4-one).

HÌNH 4.6 Cấu trúc của ORI.P3 (Baicalein)







4.1.5 K ết quả định lượ ng flavonoid toàn phần

Luận văn này chọn Baicalein là chất đối chiếu vì trong quá trình tinh chếhợp chất này nhận thấy có hàm lượng rất lớ n, Baicalein được tìm thấy ở hầu hết các phân đoạn chiết lỏng-lỏng và chạy cột nhanh phân cắt cao Dichloromethane.

Luận văn đã xây dựng và thẩm định quy trình định lượ ng flavonoid toàn

phần trong vỏ thân cây Núc nác tính theo Baicalein bằng quang phổ UV_Vis,

góp phần vào nguồn tài liệu tham khảo về cách thức định lượng flavonoid trongcác mẫu dược liệu.

Hàm lượng flavonoid toàn phần định lượng đượ c là 27,5564±0,3099 (mg

Baicalein/1gam bột Núc nác khô).








5.1 KẾT LUẬN

Quá trình nghiên cứu đề tài khảo sát thành phần hóa học và định lượng

flavonoid toàn phần của vỏ thân cây Núc nác Oroxylum indicum (L.) Vent., thu

hoạch tại huyện Thoại Sơn, tỉnh An Giang đã thu được một số kết quả sau.

5.1.1 Phân lặp các hợp chất

Vỏ thân cây Núc nác sấy khô, xay nhuyễn thành bột (9,2 kg) được tận trích

với MeOH bằng phương pháp ngâm dầm, lọc bỏ bã, phần dịch chiết đượ c cô

quay và thu hồi dung môi dưới áp suất kém. Thực hiện chiết kiệt nhiều lần thu

đượ c cao MeOH dạng sệt có khối lượng 1,6 kg. Cao MeOH hòa tan trong một

lượ ng nước vừa đủ, sau đó được chiết lần lượt với 3 dung môi theo thứ tự độ phân cực tăng dần thu được 4 cao phân đoạn tương ứng: n-Hexane (33,54 gam),

Dichloromethane (110,85 gam), Ethyl acetate (153,35 gam), cao nước (217,43

gam).

Tiến hành sắc ký cột trên cao Dichloromethane, thu được các hợp chất kýhiệu là ORI.K1, ORI.P1, ORI.P2, ORI.P3.

HÌNH 5.1 Các hợp chất tinh khiết chiết tách từ vỏ thân cây Núc nác

Sử dụng các phương pháp quang phổ hiện đại NMR, MS và các đặc trưngvật lý kết hợp so sánh với tài liệu tham khảo, đã xác định được cấu trúc hóa họccủa các hợp chất hữu cơ phân lập được từ vỏ thân cây Núc nác như sau:

- ORI.K1 là 5,7-dihydroxy-2-phenylchroman-4-one (Pinocembrin).

- ORI.P1 là 5,7-dihydroxy-6-methoxy-2-phenyl-4H-chromen-4-one

(Oroxylin A).

- ORI.P2 là 5,7-dihydroxy-2-phenyl-4H-chromen-4-one (Chrysin).

- ORI.P3 là 5,6,7-trihydroxy-2-phenyl-4H-chromen-4-one (Baicalein).







5.1.2 Cấu trúc hóa học của các chất đã phân lập

Pinocembrin Oroxylin A

Chrysin Baicalein5.1.3 Định lượng flavonoid toàn phần

Hàm lượng flavonoid toàn phần định lượng đượ c là 27,5564±0,3099 (mg

Baicalein/1 gam bột Núc nác khô).

5.2 KIẾN NGHỊ

Vì điều kiện thời gian và vật chất không cho phép nên trong phạm vinghiên cứu của luận văn chỉ khảo sát cao Dichloromethane. Trong thời gian sắp

tới, nếu có điều kiện nghiên cứu sẽ tiến hành khảo sát trên các phân đoạn caocòn lại, đặc biệt là cao Ethyl acetate, đồng thời nghiên cứu sẽ tiến hành thửnghiệm hoạt tính kháng oxy hóa, kháng khuẩn, cũng như hoạt tính kháng viêm

của các loại cao cũng như trên các hợp chất sạch.






NGUYỄN HỮU PHONG -PLxvi- LUẬN VĂN ĐẠI HỌC ĐOÀN THỊ LY KHA

TÀI LIỆU THAM KHẢO

[1] Saowanee Maungjunburee (2010). “Chemical constutient from the Stem

Bark of Oroxylum indicum (L.) Benth. ex Kurz ”. Prince of Songkla University.

[2] D C Deka, Vimal Kumar, Chandan Prasad, Kamal Kumar, B J Gogoi,Lokendra Singh, R B Srivastav (2013). “Oroxylum indicum – a medicinal plant

of North East India: An overview of its nutritional, remedial, and prophylactic

properties”. Journal of Applied Pharmaceutical Science. Vol 3. pp (S104-

S112).

[3] A. V. Raghu, Satheesh George, Renju Krishna V and Sindhu K. K

(2013).“ Bioactive properties of phenolics present in Oroxylum indicum – A

review”. Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry. pp 23-27.

[4] Lawania Rahul Dev, Mishra Anurag, Gupta Rajiv (2010). “Oroxylum

indicum: A Review”. PHCOG J. vol 2. Issue 9.

[5] Anupam Bisht, K. Zaman, Mamta Singh, Richa Gupta and Vinod Singh

(2011).“ Pharmacognostical studies on Oroxylum indicum (Linn.)Vent. sterm

bark ”. Indian Journal of Natural Products and Resources. Vol. 2(4). pp 472-

478.

[6] Talari Sammatha, Rudroju Shyamsundarachary , Penchala Srinivar and

Anna Rama Swany (2012).“Quantification of total phenolic and total flaconoidcontents in extracts of Oroxylum indicum (L.) Kurz ”. Asian Journal of

Pharmaceutical and Clinical Research. Vol 5. Suppl 4.

[7] Nguyễn Quốc Tuấn (2012). “ Xây dựng phương pháp định tính, định

lượng flavonoid trong lá và nụ vối”. Luận văn tốt nghiệp Cao học ngành Hóa

phân tích. Trường Đại học Khoa học Tự Nhiên Thành phố Hồ Chí Minh.

[8] Nguyễn Hữu Lạc Thủy, Phạm Thị Thanh Thúy, Phan Thanh Dũng, VõThị Bạch Huệ (2011). “ Định lương flavonoid toàn phần trong lá Trinh nữ hoàng

cung Crinum Latifolium (L.) (Amaryllidaeae) bằng phương pháp quang phổUV-Vis”. Y học T.P Hồ Chí Minh. Tập 15.

[9] Nguyễn Thị Thu Hương, Nguyễn Tiến Công, Nguyễn Vũ Mai Trang,

Nguyễn Thị Minh (2012). “Các hợp chất flavonoid từ lá Núc nác Oroxylumindicum”. Tạp chí Khoa Học ĐHSP TP. Hồ Chí Minh. Số 43.

[10] Nguyễn Thị Thanh Mai, Nguyễn Trung Nhân, Nguyễn Xuân Hải, Huỳnh Ngọc Nghiêm Thủy và Byung Sun Min (2013). “Screening of α-Glucosidase

Inhibitory Activity of Vietnamese Medicinal Plants: Isolation of Active






NGUYỄN HỮU PHONG -PLxvii- LUẬN VĂN ĐẠI HỌC ĐOÀN THỊ LY KHA

Principles from Oroxylum indicum”. Natural Product Sciences. Số 18. pp 47-

51.

[11] Sujuan Wu, Ailing Sun, Renmin Liu (2005). “Separation and

purification of baicalin and wogonoside from the Chinese medicinal plant

Scutellaria baicalensis Georgi high-speed counter-current chromatography”.

Science Direct. số 1066. pp 243 – 247.

[12] Soumia Mouffok, Hamada Haba, Catherine Lavaud, Christophe Long,

Mohammed Benkhaled (2012). “Chemical constituents of Centaureaomphalo

tricha Coss. & Durieu ex Batt. & Trab”. Supporting Information. pp 292-295.

[13] Tanasak Sae-Leaw, “ Effect of Drying on Phenolic Compounds and

Antioxidant Capacity of Fingerroot (Boesenbergia pandurata (Roxb.) Schltr.)” ,

the Graduate Studies - The University of Kansas.



https://research.rdi.ku.ac.th/forest/Search.aspx?keyword=Tanasak%20SAE-LEAW

http://www.lib.ku.ac.th/KUthesis/2552/TanasakSAE/TanasakSAEAll.pdf


http://graduate.ku.edu/

http://graduate.ku.edu/



https://research.rdi.ku.ac.th/forest/Search.aspx?keyword=Tanasak%20SAE-LEAW





PHỤ LỤC 1

Phụ lục 1.1 Phổ MS-ESI của ORI.K1

[ M ] = 2 5 6 a m u

[M-H]-







Phụ lục 1.2 Phổ 1H- NMR của ORI.K1

H2H6 H8

5-HO

H2 H6 H3 H4 H5

H3a

H3e









Phụ lục 1.4 Phổ 13C- NMR của ORI.K1

C4

C9 C7

C1

C3 C5 C2 C6

C10C6C8

C2

C3







Phụ lục 1.5 Phổ 13C- NMR giãn rộng của ORI.K1

C4

C9

C7

C1

C3 C5 C2 C6

C10C6

C8

C2

C3

C4







Phụ lục 1.6 Phổ DEPT của ORI.K1







Phụ lục 1.7 Phổ DEPT giãn rộng của ORI.K1







Phụ lục 1.8 Phổ HMBC của ORI.K1

H3a→C2







Phụ lục 1.9 Phổ HMBC giãn rộng của ORI.K1

H8→C6

H6→C8

H2 H6→C2

H8→C10 H6→C10

H3 H4 H5→C1’







Phụ lục 1.10 Phổ HMBC giãn rộng của ORI.K1

H6→C7

H8→C9

H3a→C4H3e→C4







Phụ lục 1.11 Phổ HSQC của ORI.K1

H3a H3e→C3

H2→C2

H6→C6

H8→C8

H3 H4 H5 →C3 C4 C5

H2 H6→C2 C6







Phu lục 1.12 Phổ HSQC giãn rộng của ORI.K1







PHỤ LỤC 2 Phụ lục 2.1: Phổ 1H- NMR của ORI.P1

5-HO

H2 H6

H3 H4 H5

H8H3

H3CO







Phụ lục 2.2: Phổ 1H- NMR giãn rộng của ORI.P1

H2 H6

H3 H4 H5

H8

H3







Phụ lục 2.3: Phổ 13C- NMR của ORI.P1

C3 C10

C4

C7

C4

C2

C5 C9

C3 C5 C2 C6

C8

H3CO







Phụ lục 2.4: Phổ 13C- NMR giãn rộng của ORI.P1

C3C10

C4 C6 C1

C4

C2

C7

C9 C5

C3 C5

C2 C6

C8

H3CO







Phụ lục 2.5: Phổ DEPT của ORI.P1







Phụ lục 2.6: Phổ DEPT giãn rộng của ORI.P1









Phụ lục 2.8: Phổ HMBC giãn rộng của ORI.P1

H3→C10

H8→C10

H3→C1

H8→C6







Phụ lục 2.9: Phổ HMBC giãn rộng của ORI.P1

H3→C4

H8→C4

H3→C2

H2 H6→C2

H8→C9

H8→C7







Phụ lục 2.10: Phổ HSQC của ORI.P1

-OCH3→-OCH3

H3→C3

H8→C8

H2 H6→C2 C6







Phụ lục 2.11: Phổ HSQC của ORI.P1

H3 H5 →C3 C5

H4→C4











Phụ lục 3.3 Phổ 1H- NMR của ORI.P2

H2 H6

H3 H4 H5

H8

H3

H6







Phụ lục 3.4 Phổ 13C- NMR của ORI.P2

C3 C10

C1 C4

C6

C4

C2C5 C9

C3 C5 C2 C6

C8







Phụ lục 3.5 Phổ 13C- NMR giãn rộng của ORI.P2

C3

C1C4

C6

C4

C2C5

C9

C3 C5

C2 C6

C8

C10







Phụ lục 3.6 Phổ DEPT của ORI.P2











Phụ lục 4.2: Phổ 1H- NMR của ORI.P3

H2’H6’

H3’H4’H5’

H3

H8








C4

C4

C2

C7C9

C5

C3 C5 C2 C6

C8

C6C1

C3 C10








C10C3

C4 C6

C1

C4

C2

C7

C9

C5

C3 C5

C2 C6

C8







Phụ lục 4.4: Phổ DEPT của ORI.P3






Phụ lục 4.5: Phổ DEPT giãn rộng của ORI.P3


Documents

Khảo sát thành phần hóa học và định lượng Flavonoid toàn phần trong vỏ thân cây Núc nác (Oroxylum indicum (L.) Vent.)