Embed Size (px)
Citation preview
7/25/2019 J. Clin. Microbiol.-1992-Thieme-1076-9
http://slidepdf.com/reader/full/j-clin-microbiol-1992-thieme-1076-9 1/5
1992, 30(5):1076.J. Clin. Microbiol.
T Thieme, P Yoshihara, S Piacentini and M Beller diagnosis of viral hepatitis.Clinical evaluation of oral fluid samples for
http://jcm.asm.org/content/30/5/1076Updated information and services can be found at:
These include:
CONTENT ALERTS
more»cite this article),Receive: RSS Feeds, eTOCs, free email alerts (when new articles
http://journals.asm.org/site/misc/reprints.xhtmlInformation about commercial reprint orders: http://journals.asm.org/site/subscriptions/To subscribe to to another ASM Journal go to:
7/25/2019 J. Clin. Microbiol.-1992-Thieme-1076-9
http://slidepdf.com/reader/full/j-clin-microbiol-1992-thieme-1076-9 2/5
JOURNAL OF C L I N IC A L M I C R O BI O L O G Y,
May
1 9 9 2 ,
p .
1 0 7 6 - 1 0 7 9
V o l . 3 0 , N o . 5
0 0 9 5 - 1 1 3 7 / 9 2 / 0 5 1 0 7 6 - 0 4 0 2 . 0 0 / 0
C o p y r i g h t C )
1 9 9 2 ,
A m e r i c a n
S o c i e t y
f o r M i c r o b i o l o g y
C l i n i c a l
E v a l u a t i o n
o f O r a l F l u i d
S a m p l e s
f o r
D i a g n o s i s
o f
V i r a l
H e p a t i t i s
THOMAS T H I E M E , 1 *
PA U L
YOSHIHARA,1
STEPHEN
PIACENTINI,1 AN D M I C H A E L BELLER2t
E p i t o p e ,
I n c . ,
8 5 0 5 C r e ek s i d e
P l a c e , B e a v e r t o n , O r e g o n 9 7 0 0 5 , 1
a n d
W a s h i n g t o n C o u n t y
D e p a r t m e n t
o f
H e a l t h a n d Human
S e r v i c e s , H i l l s b o r o ,
O r e g o n
9 7 1 2 4 2
R e c e i v e d
9
O c t o b e r 1 9 9 1 / A c c e p t e d
3 0
J a n u a r y
1 9 9 2
O r a l f l u i d
s a m p l e s
w e r e
c o m p a r e d
w i t h s e r u m
s a m p l e s
a s
a
s p e c i m e n
s o u r c e
f o r
h e p a t i t i s
A ,
B ,
a n d C
v i r u s
m a r k e r s .
O r a l f l u i d w a s
o b t a i n e d w i t h
a
t r e a t e d
a b s o r b e n t
p a d
a n d t e s t e d
b y u s i n g e x i s t i n g
c o m m e r c i a l
e n z y m e
i m m u n o a s s a y s w i t h
o n l y
m i n o r
m o d i f i c a t i o n s .
C o m p a r e d
w i t h s e r u m
s a m p l i n g
t h e
s e n s i t i v i t y
a n d
s p e c i f i c i t y
o f
o r a l s a m p l i n g
w e r e 100 ( 5 1
o f
5 1
s a m p l e s )
a n d
98
( 4 6
o f
4 7
s a m p l e s )
f o r
h e p a t i t i s
A
v i r u s
i m m u n o g l o b u l i n
M,
100
( 2 9
o f
2 9
s a m p l e s )
a n d 100
( 2 9
o f 2 9
s a m p l e s )
f o r
h e p a t i t i s
B v i r u s
s u r f a c e
a n t i g e n ,
a n d
100
( 1 3
o f
1 3
s a m p l e s )
a n d
100
( 1 3
o f 3
s a m p l e s )
f o r
h e p a t i t i s
C v i r u s
a n t i b o d y , r e s p e c t i v e l y .
The d e c l i n e
o f
h e p a t i t i s
A
v i r u s
i m m u n o g l o b u l i n
M
i n
o r a l
s a m p l e s
w a s
p a r a l l e l t o , t h o u g h
s o m e w h a t
more
r a p i d t h a n ,
t h a t o f
h e p a t i t i s
A
v i r u s i m m u n o g l o b u l i n
M
i n
s e r u m
s a m p l e s .
I t
i s
p r o p o s e d
t h a t
o r a l
s a m p l i n g
r e p r e s e n t s
a
s a f e r a n d more
c o n v e n i e n t p r o c e d u r e
f o r
r e l i a b l e
h e p a t i t i s
v i r u s
t e s t i n g
t h a n
b l o o d
s a m p l i n g
a n d
t h a t i t
h a s w i d e
a p p l i c a t i o n
i n
p a t i e n t
a n d o u t b r e a k
m a n a g e m e n t .
A l t h o u g h
t h e
m o d e s o f t r a ns mi s s i o n
a r e d i f f e r e n t
f o r
h e p a t i t i s
A v i r u s
( 1 L A V ) , h e p a t i t i s
B v i r u s
( H B V ) ,
a n d
h e p a t i t i s
C
v i r u s
( H C V ) , p a t i e n t s
o f t e n
d i s p l a y
s i m i l a r
s y m p -
t o m s a n d i n f e c t i o n c a n
b e
s p r e a d
b y
p e r s o n s
w i t h
i n a p p a r e n t
i n f e c t i o n s . A n u m b e r o f v e r y
s e n s i t i v e
a n d
s p e c i f i c
s e r o l o g i c
t e s t s
f o r v i r a l
h e p a t i t i s
a r e
c o m m e r c i a l l y a v a i l a b l e ,
b u t t h e
r e l a t i v e
i n c o n v e n i e n c e o f o b t a i n i n g
b l o o d
s a m p l e s
a n d
t h e
r i s k
o f d i s ea s e
t r a n s m i s s i o n
a s s o c i a t e d
w i t h
n e e d l e s t i c k
i n j u r i e s
m a k e s
s e r o l o g i c
t e s t i n g
s o m e w h a t u n a t t r a c t i v e .
T h e s e p r o b l e m s
a r e
c o m p o u n d e d
i f
t h e
p e r s o n
t o
b e t e s t e d i s
a
y o u n g c h i l d ,
w h i c h
i s s o m e t i m e s
t h e c a s e .
The u s e o f a n
o r a l
s a m p l e
a s
a n a l t e r n a t i v e
t o b l o o d c o u l d
p r o v i d e
a
s u b s t a n t i a l
a d v a n t a g e
i n
s a m p l i n g
c o n v e n i e n c e .
A
n u m b e r
o f
e n c o u r a g i n g
s t u d i e s i n d i c a t e
t h a t s a l i v a
c a n
b e
a r e l i a b l e s o u r c e o f a nt i b o d i e s
f o r
t h e
d i a g n o s t i c t e s t i n g
o f
HAV a n d HBV
( 2 , 4 , 6 , 7 ) .
We h a v e
e x p l o r e d
t h i s
a r e a
f u r t h e r ,
n o t
o n l y
t o c o n f i r m t h e
p r e v i o u s
r e p o r t s
b u t
a l s o
t o
t e s t
a
n e w l y
d e v e l o p e d
o r a l
s a m p l i n g
s y s t e m
a n d
t o e x a m i n e
t h e
a d a p t a b i l i t y
o f
c o m m e r c i a l l y
a v a i l a b l e
s e r o l o g i c
t e s t k i t s
t o
t e s t i n g
o r a l
s a m p l e s .
We
r e p o r t
h e r e t h e r e s u l t s
o f
o r a l
s a m p l e
t e s t i n g
f o r a n t i - H A V
i m m u n o g l o b u l i n
M
( I g M )
a n d
I g G , HBV
s u r f a c e
a n t i g e n
( H B s A g ) ,
a n d
a n t i - H C V
a n t i -
b o d y .
MATERIALS
AND
METHODS
I n i t i a l HAV s t u d y .
I n
a n
i n i t i a l
s t u d y , we t e s t e d o r a l
s a m p l e s
( t h r o u g h o u t t h i s
p a p e r ,
we
u s e t h e
t e r m
o r a l
s a m p l e
r a t h e r
t h a n
s a l i v a ,
s i n c e
we b e l i e v e
t h a t
t h e s a m -
p l i n g
t e c h n i q u e
[ t o
b e
d e s c r i b e d ]
c o l l e c t s
a
m i x t u r e
o f
g i n g i v a l c r e v i c u l a r f l u i d a n d s a l i v a , r a t h e r t h a n
s a l i v a
a l o n e )
f r o m
2 1
p e r s o n s
wh o
r e c e n t l y h a d a c u t e
HAV a n d 1 2
p e r s o n s
wh o
w e r e a n t i - H A V IgM
s e r o n e g a t i v e .
P e r s o n s
wh o
r e c e n t l y h a d HAV w e r e r e f e r r e d t o
u s
a f t e r
b e i n g
r e p o r t e d
t o
t h e
W a s h i n g t o n
C o u n t y
D e p a r t m e n t o f H e a l t h
a n d Human
S e r v i c e s a f t e r
d i a g n o s i s b y t h e i r p h y s i c i a n s . S e r o n e g a t i v e
s u b j e c t s w e r e a s y m p t o m a t i c a d u l t
l a b o r a t o r y
w o r k e r s
wh o
*
C o r r e s p o n d i n g
a u t h o r .
t
P r e s e n t
a d d r e s s :
S e c t i o n
o f
E p i d e m i o l o g y ,
A l a s k a D i vi s i o n o f
P u b l i c H e a l t h ,
A n c h o r a g e ,
AK 9 9 5 2 4 .
v o l u n t e e r e d
t o
u n d e r g o
b l o o d
a n d o r a l
s a m p l e t e s t i n g .
A f t e r
o b t a i n i n g
i n f o r m e d
c o n s e n t ,
we c o l l e c t e d a n d t e s t e d
o r a l
s a m p l e s
a s d e s cr i b e d b e l o w . O r a l
s a m p l e s
were
o b t a i n e d
f r o m
p a t i e n t s
i n f e c t e d w i t h
HAV
w i t h i n 1
week o f
d i a g n o s i s ;
m e d i c a l
r e c o r d s
w e r e n o t r e v i e w e d t o
c o n f i r m t h a t
p a t i e n t s
w e r e ,
i n
f a c t ,
a n t i - H A V
Ig M s e r o p o s i t i v e
a s
r e p o r t e d .
M a i n
HAV
s t u d y .
A f t e r
e n c o u r a g i n g
r e s u l t s were o b t a i n e d
f r o m
t h e i n i t i a l
s t u d y ,
a
b l i n d
s t u d y
wa s
u n d e r t a k e n
w i t h
t h e
M u l t n o m a h
C o u n t y
D e p a r t m e n t
o f Human S e r v i c e s
( P o r t -
l a n d ,
O r e . ) .
S i x t y - f i v e p a t i e n t s b e i n g
e v a l u a t e d a t
a
p r i m a r y
c a r e
c l i n i c
o p e r a t e d b y
t h e H e a l t h
D i v i s i o n w i t h
symptoms
j u d g e d b y
a c l i n i c i a n t o
w a r r a n t
s e r o l o g i c
t e s t i n g
f o r
a c u t e
v i r a l
h e p a t i t i s
p a r t i c i p a t e d
i n t h e
s t u d y .
A f t e r
o b t a i n i n g
i n f o r m e d
c o n s e n t ,
s e r u m
a n d
o r a l
s a m p l e s
were
o b t a i n e d
a t
t h e
c l i n i c a n d c o d e d
b y
c l i n i c
p e r s o n n e l .
T h e
s a m p l e s
were
t h e n
t e s t e d a s d e s c r i b e d b e l o w .
I n m o s t
c a s e s ,
t h r e e t o
s i x
s e t s o f
s a m p l e s
were t e s t e d
a t
o n e
t i m e ,
w i t h b o t h
p o s i t i v e
a n d
n e g a t i v e
s a m p l e s
b e i n g
p r e s e n t .
T h e
r e s u l t s w e r e
l a t e r
d e c o d e d
b y
o n e o f u s
( M . B . ) .
L o n g i t u d i n a l
HAV
s t u d y .
I n
o r d e r t o
d e t e r m i n e w h e t h e r
o r a l a n t i - H A V
I g M
d e c l i n e d i n
p a r a l l e l
w i t h
b l o o d a n t i - H A V
I g M , a
l o n g i t u d i n a l
s t u d y
wa s
u n d er t a k e n w i t h f i v e
p e r s o n s
wh o
h a d
r e c e n t HAV i n f e c t i o n s .
S u b j e c t s
w e r e
e n r o l l e d i n
t h e s ame m anner
a s i n
t h e i n i t i a l HAV
s t u d y
a n d
a s k e d
t o
r e t u r n
a t
a p p r o x i m a t e l y m o n t h l y
i n t e r v a l s ( f o r u p t o 3 2 0
d a y s )
f o r
r e p e a t
b l o o d
a n d o r a l
s a m p l i n g .
S i n c e t h e a n t i -
HAV
I g G
t i t e r
wa s a l s o
o f i n t e r e s t , t o t a l
HAV
a n t i b o d y
wa s
m e a s u r e d .
HBV
a n d
HCV
s t u d i e s .
F o r t y - n i n e
s u b j e c t s
i n
t h e
m a i n
HAV
s t u d y
wh o
h a d a p o s i t i v e b l o o d
t e s t
f o r
HBsAg
w e r e
e n r o l l e d i n
t h e
HBV
s t u d y .
I n a d d i t i o n , n i n e
p a t i e n t s
f r o m
a
p r i v a t e c l i n i c i n P o r t l a n d ,
O r e . ,
wh o h a d symptoms o f
a c u t e
h e p a t i t i s
p a r t i c i p a t e d
i n t h e HBV s t u d y . A f t e r o b t a i n i n g
i n f o r m e d
c o n s e n t ,
we
c o l l e c t e d
s e r u m
a n d o r a l s a m p l e s .
F o r ty - s i x ( 7 9 . 3 )
o f t h e 5 8 s u b j e c t s w e r e t e st e d b l i nd i n t h a t
we
h a d n o k n o w l e d g e b e f o r e
t e s t i n g
o f w h i c h s e r u m
s a m p l e
c o r r e s p o n d e d
t o
e a c h
o r a l
s p e c i m e n .
We a l s o
t e s t e d
t h e
o r a l
a n d
s e r u m s a m p l e s o f 2 0 s u b j e c t s
f r o m
t h e
p r i v a t e
c l i n i c
f o r
a n t i b o d i e s
t o
HCV. S p e c i m e n s i n
t h e
HCV
s t u d y w e r e n o t t e s t e d
b l i n d l y .
S i x
a d d i t i o n a l
s u b j e c t s w e r e e n r o l l e d
i n
t h e HCV
s t u d y
f r o m among
1 0 7 6
7/25/2019 J. Clin. Microbiol.-1992-Thieme-1076-9
http://slidepdf.com/reader/full/j-clin-microbiol-1992-thieme-1076-9 3/5
O R A L
FLUID
SAMPLES
FO R
DIAGNOSIS O F VIRA L
HEPATITIS
1 0 7 7
a s y m p t o m a t i c
a d u l t
l a b o r a t o r y
w o r k e r s
who
v o l u n t e e r e d
t o
u n d e r g o
b l o o d
a n d o r a l s a m p l e t e s t i n g .
S a m p l e
c o l l e c t i o n . O r a l
s a m p l e s f o r t h e f i v e s t u d i e s w e r e
c o l l e c t e d
w i t h
a
p a p e r p a d ( a p p r o x i m a t e l y 2 . 5 cm b y
1 . 5
cm
b y
2 . 0
mm; l i q u i d h o l d i n g c a p a c i t y ,
a p p r o x i m a t e l y
1 m l )
a t t a c h e d t o a
p l a s t i c
h a n d l e . T h e
p a d wa s s a t u r a t e d w i t h a
s o d i u m
c h l o r i d e
s o l u t i o n
( 3 . 5 s o d i u m c h l o r i d e , 0 . 3 c i t r i c
a c i d ,
0 . 1 p o t a s s i u m
s o r b a t e ,
0 . 1 s o d i u m
b e n z o a t e ,
p H
7 . 2
[ a d j u s t e d
w i t h
s o d i u m h y d r o x i d e ] )
a n d
t h e n
d r i e d .
S u b -
j e c t s
p l a c e d
t h e d r i e d
p a d
b e t w e e n
t h e
l o w e r
gum
a n d c h e e k
f o r 2
m i n .
I m m e d i a t e l y
a f t e r
c o l l e c t i o n , t h e p a d wa s p l a c e d
i n
a t u b e
c o n t a i n i n g
1 m l
o f
a
b a c t e r i o s t a t i c
s o l u t i o n .
T h e
d i l u t e d
s a m p l e
was
l a t e r
r e c o v e r e d f r o m t h e p a d b y c e n t r i f -
u g a t i o n .
S a m p l e s
c o l l e c t e d
w i t h
t h i s
p a d - b a s e d o r a l
c o l l e c -
t i o n
s y s t e m
( p a t e n t
p e n d i n g )
w i l l
b e r e f e r r e d
t o
a s O r a S u r e
s a m p l e s . S t u d y p r o t o c o l s
w e r e
r e v i e w ed a n d
a p p r o v e d b y
t h e I n s t i t u t i o n a l
R e v i e w B o a r d o f t h e
M u l t n o m a h
C o u n t y
D e p a r t m e n t
o f Human S e r v i c e s .
S a m p l e t e s t i n g .
T h e
A b b o t t HA V A B-M
enzyme
i m m u -
n o a s s a y ( E I A )
k i t
wa s
u s e d t o
d e t e c t a n t i - H A V
I g M .
T h e
o n l y c h a n g e
made
f o r
a s s a y i n g
o r a l
s a m p l e s
wa s
t h a t ,
i n s t e a d
o f
a d d i n g
1 0
, u l
o f
d i l u t e d
( 1 : 2 0 0 ) s e r u m a s r e c o m -
m e n d e d
b y
t h e
m a n u f a c t u r e r ,
we
u s e d
1 0 0
, u l
o f
o r a l
s p e c i -
me n a n d 1 0 0
, u l
o f
d i l u e n t
i . e . ,
2 0 0
, u l
o f
a 1 : 2
d i l u t i o n ) .
T h i s
m o d i f i c a t i o n
r e s u l t e d
i n
a 2 , 0 0 0 - f o l d - h i g h e r
v o l u m e o f o r a l
s a m p l e
p e r
t e s t
t h a n
t h e
c o r r e s p o n d i n g
s e r u m
s a m p l e .
S e r u m
s a m p l e s
were
t e s t e d
w i t h o u t
a n y
m o d i f i c a t i o n
o f
t h e manu-
f a c t u r e r s
p r o t o c o l ,
a n d t h e c u t o f f
f o r
a s s i g n i n g
a p o s i t i v e
o r
n e g a t i v e
r e s u l t f o r e a c h s e r u m o r
o r a l
s a m p l e
wa s c a l c u l a t e d
on t h e
b a s i s o f t h e
a b s o r b a n c e
v a l u e s o b t ai n ed w i t h
t h e
p o s i t i v e
a n d
n e g a t i v e
c o n t r o l s
s u p p l i e d b y
t h e
m a n u f a c t u r e r .
A
s i g n a l - t o - c u t o f f
r a t i o
o f > 1 . 0 i n d i c a t e d
a p o s i t i v e t e s t .
T h e
A b b o t t
HAVAB
EIA
k i t
was
u s e d t o
d e t e c t
t o t a l
a n t i - H A V
a n t i b o d y .
F o r
s e r u m
s p e c i m e n s ,
we
f o l l o w e d t h e
m a n u f a c t u r e r ' s i n s t r u c t i o n s .
F o r
o r a l
s a m p l e s ,
2 0 0
, u l
o f
a n t i - H A V - p e r o x i d a s e
c o n j u g a t e
was
a d d e d
t o
4 0 0 , u l
o f
s p e c i m e n .
N o
o t h e r m o d i f i c a t i o n s t o
t h e
m a n u f a c t u r e r ' s
p r o t o c o l
were
made
t o
a s s a y
o r a l
s a m p l e s .
T h e
o p t i o n a l
i n c u b a t i o n
t i m e o f 3 h a t
4 0 ° C
f o r t h e
q u a l i t a t i v e
p r o c e d u r e
was
c h o s e n . T h e
m a n u f a c t u r e r ' s
c o n t r o l s
w e r e u s e d t o
d e t e r m i n e c u t o f f s f o r b o t h serum
a n d
o r a l
s a m p l e s . N o t e t h a t
a
s i g n a l - t o - c u t o f f
r a t i o o f
< 1 . 0
i n d i c a t e d a
p o s i t i v e
r e s u l t
i n
t h i s
c o m p e t i t i v e
a s s a y .
S e v e r a l
s a m p l e s
w e r e
t e s t e d f o r
t o t a l
a n t i - H A V
a n t i b o d y
w i t h t h e
O r g a n o n T e k n i k a
H e p a n o s t i k a
Anti-HAV
EIA k i t .
T h e
A b b o t t
A u s z y m e
I V
o r
A u s z y m e
M o n o c l o n a l
EIA
k i t
was
u s e d
t o
d e t e c t
H B s A g .
F o r serum
s p e c i m e n s
a n d
c o n t r o l s ,
w e
f o l l o w e d t h e
m a n u f a c t u r e r ' s i n s t r u c t i o n s . F o r
o r a l
s a m p l e s ,
w e u s e d
e i t h e r
1 5 0 o r 4 0 0
, u l
o f
s p e c i m e n
a n d
a n
i n i t i a l i n c u b a t i o n
p e r i o d
o f
3
h . C o n t r o l s
s u p p l i e d
b y
t h e
m a n u f a c t u r e r were u s e d t o d e t e r m i n e c u t o f f s .
A b b o t t
EIA
k i t s were
u s e d
t o
d e t e c t t o t a l HBV
c o r e
a n t i b o d y ( a n t i - H B c )
a n d
a n t i - H B c
I g M i n
t h e
b l o o d
s a m p l e s
o f
s u b j e c t s
i n
t h e
HBV
s t u d y .
T h e
A b b o t t
C o r z y m e
a n d
C o r z y m e - M
t e s t s
were
u s e d w i t h serum
s a m p l e s
a c c o r d i n g
t o t h e m a n u f a c t u r -
e r s
d i r e c t i o n s .
T h e A b b o t t HCV
EIA
k i t
wa s u s e d t o d e t e c t t o t a l
a n t i -
b o d y
t o
HCV.
S e r u m
a n d c o n t r o l
s p e c i m e n s
were
a s s a y e d
a c c o r d i n g
t o t h e
m a n u f a c t u r e r ' s
d i r e c t i o n s .
F o r o r a l sam-
p l e s ,
4 0 0
p l
o f
s a m p l e
wa s c o m b i n e d
w i t h
e i t h e r 1 0 0 o r 2 0 0
l I
o f
d i l u e n t
a n d
i n c u b a t e d
f o r e i t h e r
1
or
2
h .
S u b s e q u e n t
s t e p s
a n d t h e
i n t e r p r e t a t i o n
o f
r e s u l t s
w e r e
a c c o r d i n g
t o
t h e
m a n u f a c t u r e r ' s
i n s t r u c t i o n s
b y u s i n g
t h e
p o s i t i v e
a n d
n e g a -
t i v e
c o n t r o l s
p r o v i d e d
t o
d e t e r m i n e c u t o f f v a l u e s .
RESULTS
I n i t i a l HAV s t u d y . A l l O r a S u r e
s a m p l e s
f r o m t h e 2 1
p e r s o n s
w i t h
r e c e n t HAV w e r e
a n t i - H A V
IgM p o s i t i v e .
None o f t h e O r a S u r e s a m p l es f r o m
t h e s e r o n e g a t i v e
s u b j e c t s
w e r e
p o s i t i v e .
M a i n HAV s t u d y . T h i r t y
( 4 6 . 2 )
o f t h e
6 5
s u b j e c t s h a d
s e r u m
s a m p l e s
w h i c h w e r e p o s i t i v e f o r a n t i - H A V I g M . T h e
mean ( ±
1 . 0
s t a n d a r d d e v i a t i o n )
s i g n a l - t o - c u t o f f r a t i o
f o r
t h e s e
s e r u m
s a m p l e s
wa s 5 . 7 3 ( ± 1 . 1 9 ) . A l l
3 0 m a t c h i n g
o r a l
s a m p l e s
w e r e
a n t i - H A V Ig M p o s i t i v e w i t h a mean
s i g n a l - t o -
c u t o f f
r a t i o
o f
5 . 5 8 ( + 1 . 3 5 ) .
T h e
3 5 n e g a t i v e
s e r u m
s a m p l e s
h a d a mean
s i g n a l - t o - c u t o f f
r a t i o
o f 0 . 3 6 ( + 0 . 1 2 ) .
Among
t h e
3 5 m a t c h i n g o r a l
s a m p l e s ,
t h e r e was o n e
p o s i t i v e
r e s u l t .
T h e mean
s i g n a l - t o - c u t o f f r a t i o
i n t h i s
g r o u p wa s
0 . 3 7
( + 0 . 2 4 ) , i n c l u d i n g
a
r a t i o o f 1 . 4 6 f o r
t h e
p o s i t i v e
r e s u l t .
I f a
s l i g h t l y h i g h e r c u t o f f w e r e u s e d
f o r
o r a l
s a m p l e s ,
f a l s e
p o s i t i v e s c o u l d
p r o b a b l y
b e
e l i m i n a t e d
w i t h o u t
s a c r i f i c i n g s e n s i t i v i t y .
T h e
c o m b i n e d
r e s u l t s o f t h e i n i t i a l a n d
m a i n HAV
s t u d i e s
s h o w e d
t h a t
a l l 5 1
s e r o p o s i t i v e s u b j e c t s ( o r
r e c e n t
HAV
p a t i e n t s )
w e r e
O r a S u r e p o s i t i v e
( s e n s i t i v i t y
o f O r a S u r e ,
1 0 0 )
a n d
t h a t 4 6 o f
4 7
s e r o n e g a t i v e
s u b j e c t s w e r e O r a S u r e
n e g a t i v e
( s p e c i f i c i t y ,
9 8 ) .
L o n g i t u d i n a l
HAV
s t u d y .
T h e
f i v e
s u b j e c t s
i n t h i s s t u d y a l l
h a d
s i m i l a r
r e s u l t s ;
o n e
r e p r e s e n t a t i v e
p a t i e n t s
r e s u l t s a r e
s h o w n i n
F i g .
1 .
O v e r a l l , t h e d e c l i n e o f
o r a l a n t i - H A V
Ig M
p a r a l l e l e d
t h e l e v e l s
i n
s e r u m , a l t h o u g h
f o r
t w o s u b j e c t s , t h e
o r a l
I g M
l e v e l s f e l l
b e l o w
t h e
c u t o f f e a r l i e r t h a n l e v e l s i n
s e r u m .
H o w e v e r , o r a l
Ig M l e v e l s w e r e
s t r o n g l y p o s i t i v e
d u r i n g
t h e
f i r s t
6 0
d a y s
a f t e r t h e
o n s e t o f
s y m p t o m s , t h e t i m e
m o s t
i m p o r t a n t
f o r
t h e
d i a g n o s i s o f
a c u t e
HAV. I n
t h e
t o t a l
a n t i b o d y
t e s t s
( p r i n c i p a l l y ,
Ig M a n d I g G ) ,
t h e r e s u l t s o f t h e
o r a l
a n d
s e r u m
s a m p l e s p a r a l l e l e d e a c h
o t h e r ,
g i v i n g
s t r o n g l y p o s i t i v e v a l u e s f o r a s l o n g a s
3 2 0
d a y s a f t e r t h e
o n s e t
o f
s y m p t o m s .
E q u i v a l e n t
r e s u l t s w e r e o b t ai n ed w i t h
t h e
A b b o t t a n d
O r g a n o n t e s t k i t s .
HBV
s t u d y .
O r a l a n d s e r u m s p e c i m e n s
f r o m 3 1 s u b j e c t s
w e r e
t e s t e d
w i t h Auszyme
I V
k i t s ,
a n d
t h o s e
f r o m
2 7
s u b j e c t s
were
t e s t e d
w i t h Auszyme M o n o c l o n a l
EI A
k i t s .
T h i r t y - f i v e
o r a l
s p e c i m e n s
w e r e t e s t e d
b y
u si ng a
v o l u m e
o f
4 0 0
, u l ,
a n d
2 3
were
t e s t e d
b y u s i n g
a
v o l u m e o f 2 0 0 , u l .
N o
d i f f e r e n c e s
b e t w e e n t h e t w o
k i t s o r s p e c i m e n
v o l u m e s w e r e
n o t e d .
O f 2 9
HBsAg
s e r o p o s i t i v e
s u b j e c t s ,
a l l
h a d HBsAg-
p o s i t i v e
O r a S u r e
s a m p l e s ( s e n s i t i v i t y , 1 0 0 ) .
F o u r t e e n o f
t h e
H B s A g - p o s i t i v e s u b j e c t s
w e r e t o t a l
a n t i - H B c s e r o p o s i -
t i v e a n d
a n t i - H B c
I g M s e r o n e g a t i v e .
O f 2 9
H B s A g - s e r o n e g -
a t i v e
s u b j e c t s ,
a l l
h a d
H B s A g - n e g a t i v e
O r a S u r e
s a m p l e s
( s p e c i f i c i t y , 1 0 0 ) .
T h e
s i g n a l - t o - c u t o f f
r a t i o s were s i m i l a r f o r
serum
a n d o r a l
s a m p l e s .
Among
s e r o p o s i t i v e s u b j e c t s ,
t h e mean
r a t i o s
were
3 1 . 2 7
( + 6 . 1 8 )
f o r serum a n d
3 0 . 2 1
( ± 1 5 . 8 3 )
f o r
O r a S u r e ;
w h i l e
among s e r o n e g a t i v e s u b j e c t s ,
t h e mean r a t i o s
were
0 . 3 2
( + 0 . 2 7 )
f o r
serum
a n d
0 . 3 2
( + 0 . 1 7 )
f o r
O r a S u r e .
F o r
s e r o p o s i t i v e
s u b j e c t s ,
t h e
s i g n a l - t o - c u t o f f
r a t i o s
o b t a i n e d
w i t h t h e
o r a l
s a m p l e s
were
o n l y m o d e s t l y
l o w e r
t h a n t h e
c o r r e s p o n d i n g
serum
v a l u e s ,
a n d
i n
some
c a s e s
t h e o r a l
v a l u e
wa s
e q u i v a l e n t
o r
h i g h e r .
HCV
s t u d y .
S i m i l a r r e s u l t s were
o b t a i n e d
f o r t h e
2 6 o r a l
s p e c i m e n s
t e s t e d
a t e i t h e r d i l u e n t
v o l u m e a n d
i n c u b a t i o n
t i m e .
T h e r e was 1 0 0
a g r e e m e n t
b e t w e e n t h e
serum a n d
o r a l
s a m p l e s .
T h e
m e a n
s i g n a l - t o - c u t o f f
r a t i o f o r 1 3
p o s i t i v e
s a m p l e s
wa s 4 . 8 3
( + 1 . 5 1 )
f o r
serum a n d
4 . 3 8
( ± 2 . 0 9 )
f o r
O r a S u r e ;
f o r 1 3
n e g a t i v e s a m p l e s ,
t h e m e a n
s i g n a l - t o - c u t o f f
r a t i o
wa s
0 . 3 0
( + 0 . 1 3 )
f o r serum
a n d
0 . 3 6
( + 0 . 2 4 )
f o r
O r a S u r e .
VOL.
3 0 ,
1 9 9 2
7/25/2019 J. Clin. Microbiol.-1992-Thieme-1076-9
http://slidepdf.com/reader/full/j-clin-microbiol-1992-thieme-1076-9 4/5
1 0 7 8
THIEME ET A L .
8
7
6
5
3
IK
~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ 0
e rum
1 g M
r a S u r e I g M
A
S erum T o t a l Ab
A
O r a S u r e T o t a l Ab
0
40
80
120 160 200 240 280 320
0.0
0.2
t
0 . 6 4
4.
0.8
M o
0
1
- 1 . 2
Days
a f t e r
Onset
F I G .
1 . D a t a f o r o n e
p a t i e n t
i n t h e
l o n g i t u d i n a l
HAV
s t u d y .
Th e r e s u l t s
ar e
p l o t t e d
as
s i g n a l - t o - c u t o f f
r a t i o s ,
w i t h
open
s y m b o l s
f o r s e r u m
s a m p l e s
a n d s o l i d
s y m b o l s
f o r o r al
s a m p l e s .
T o t a l
a n t i b o d y
r e s u l t s
ar e
p l o t t e d
on a n i n v e r t e d v e r t i c a l
a x i s ,
s i n c e
t h i s
c o m p e t i t i v e a s s a y g i v e s
a
s i g n a l - c u t o f f
r a t i o o f <1
f o r
a
p o s i t i v e s a m p l e .
DISCUSSION
We h a v e
d e m o n s t r a t e d t h e
p r e s e n c e
o f
a n t i - H A V
I g M
i n
o r a l
s a m p l e s
f r o m
5 1
s u b j e c t s
w i t h r e c e n t HAV
i n f e c t i o n .
E x c e l l e n t
s e n s i t i v i t y
a n d
s p e c i f i c i t y
were
o b t a i n e d
w i t h
o r a l
s a m p l i n g
when
c o m p a r e d
w i t h m a t c h e d
serum
s a m p l e s .
F o u r t e e n
o f t h e
H A V - s e r o n e g a t i v e
s u b j e c t s
were
p o s i t i v e
f o r
H B s A g .
T h i s
i n d i c a t e s
t h a t t h e
p r e s e n c e
o f
HBV
i n f e c -
t i o n d o e s
n o t
c a u s e f a l s e
p o s i t i v e s
i n
t h e d e t e c t i o n
o f
a n t i - H A V
I g M
i n o r a l
s a m p l e s .
I n
l o n g i t u d i n a l
s t u d i e s
w i t h
f i v e
s u b j e c t s
w i t h
a c u t e
HAV,
i t was
d e m o n s t r a t e d
t h a t o r a l
a n t i - H A V
I g M
l e v e l s
r e m a i n e d
p o s i t i v e
f o r
a t l e a s t
6 0
d a y s
a f t e r
t h e o n s e t
o f
s y m p t o m s
a n d
d e c l i n e d
i n
p a r a l l e l
w i t h
l e v e l s
i n s e r u m . F o r tw o
s u b j e c t s ,
O r a S u r e
a n t i - H A V
I g M
b e c a m e
n e g a t i v e
e a r l i e r t h a n serum
a n t i - H A V
I g M .
T h i s
ma y
b e
d u e t o
a r e l a t i v e
i n s e n s i t i v i t y
o f
t h e
A b b o t t
EIA
when u s e d t o t e s t o r a l s e c r e t i o n s
w i t h
a
w a n i n g
c o n c e n t r a t i o n o f a n t i - H A V
I g M ,
a
more
r a p i d
d i s a p -
p e a r a n c e
o f
a n t i - H A V
I g M
f r o m
o r a l
s e c r e t i o n s t h a n f r o m
s e r a ,
o r
t h e
d e g r a d a t i o n
o f
o r a l
a n t i b o d i e s
b y s a l i v a r y
e n z y m e s .
O u r
d a t a
c a n n o t
d i s t i n g u i s h among
t h e s e
p o s s i b i l -
i t i e s .
T h e
l o n g i t u d i n a l
s t u d y
a l s o d e m o n s t r a t e d t h a t
a n t i - H A V
I g G wa s
p r e s e n t i n o r a l
s a m p l e s
i n
p a r a l l e l w i t h
l e v e l s i n
s e r u m
a n d t h a t
I g G
t i t e r s
r e m a i n e d
e l e v a t e d f o r t h e
d u r a t i o n
o f t h e
s t u d y , u p
t o 3 2 0
d a y s
a f t e r t h e
o n s e t o f
s y m p t o m s .
A
r e p o r t b y
P a r r y
e t
a l .
( 7 ) s h o w e d
s i m i l a r
r e s u l t s
b y
u s i n g
a
s p e c i a l i z e d
t e s t i n g
p r o c e d u r e
f o r
s a l i v a r y
a n t i - H A V IgM a n d
I g G .
One o f
t h e
m o s t
u s e f u l
m a r k e r s f o r
d i a g n o s i n g a c u t e
h e p a t i t i s
i s
HBsAg.
T h e
r e s u l t s
r e p o r t e d h e r e d e m o n s t r a t e
t h a t
HBsAg c a n
b e
d e t e c t e d
w i t h
e q u a l r e l i a b i l i t y i n o r a l
a n d
b l o o d
s a m p l e s .
I n
a s t u d y w i t h
2 9
s u b j e c t s
wh o w e r e HBsAg
s e r o p o s i t i v e ,
t h e
O r a S u r e c o l l e c t i o n
t e c h n i q u e
d e m o n s t r a t e d
HBsAg
i n
t h e
o r a l
s a m p l e s
o f
a l l
s u b j e c t s .
S i n c e
1 4
o f t h e se
s u b j e c t s
w e r e
a n t i - H B c
s e r o p o s i t i v e
a n d a nt i - HB c
Ig M
s e r o n e g a t i v e ,
we
f e e l t h a t o r a l s a m p l i n g
c a n b e
u s e d s u c -
c e s s f u l l y w i t h
HBV c a r r i e r s a s
w e l l
a s
p e r s o n s w i t h a c u t e
HBV. W i t h
2 9 H B s A g - s e r o n e g a t i v e s u b j e c t s ,
2 4 o f
w h o m
h a d
a n t i b o d y
t o
HAV o r
HCV,
no
f a l s e - p o s i t i v e HBsAg
r e s u l t s
were o b t a i n e d
w i t h t h e O r a S u r e
s y s t e m .
R e p o r t s
o f
m e a s u r a b l e
l e v e l s
o f
HBsAg
i n
s a l i v a
h a v e
a p p e a r e d
s i n c e 1 9 7 4
3 , 4 .
As
d i s c u s s e d i n
t h e s e
r e p o r t s ,
t h e
p r e s e n c e
o f
HBsAg
i n o r a l
s a m p l e s
h a s
s i g n i f i c a n c e
b o t h f o r
i t s d i a g n o s t i c p o t e n t i a l
a n d a s a
p o s s i b l e
m e c h a n i s m o f
t r a n s m i s s i o n .
P r e v i o u s
r e p o r t s
h a v e
d e t e c t e d
HBsAg
i n
t h e
s a l i v a
s a m p l e s
o f
2 0 t o 90
o f
s e r o p o s i t i v e s u b j e c t s
1 ,
5 .
H o w e v e r ,
a
1 0 0
c o r r e l a t i o n
wa s
r e p o r t e d
b y
P o l l o c k e t a l .
( 8 )
when
t h e y
c o m p a r e d g i n g i v a l
c r e v i c u l a r f l u i d
t o s e r a f r o m
s e r o p o s i t i v e s u b j e c t s .
I t i s r e a s o n a b l e
t o
s p e c u l a t e
t h a t
t h e
O r a S u r e
s y s t e m
c o l l e c t s
a
s i g n i f i c a n t
amount o f
g i n g i v a l
f l u i d ,
s i n c e
t h e
p a d
i s
p l a c e d
b e t w e e n
t h e
c h e e k
a n d
g u m s .
T h i s
may
a c c o u n t
f o r t h e
h i g h
s e n s i t i v i t y
w e
f o u n d a n d
i n d i c a t e s t h a t t h e s e
t e c h n i q u e s
a r e
r e a d y
f o r
c l i n i c a l
a p p l i -
c a t i o n .
In
c o n t r a s t
t o
p r e v i o u s
r e p o r t s 2 ,
6 ,
7 ) ,
o u r r e s u l t s were
o b t a i n e d
b y
u s i n g
c o m m e r c i a l l y
a v a i l a b l e
a s s a y s
w h i c h
h a v e
b e e n
a p p r o v e d
b y
t h e
U . S .
F o o d
a n d
D r u g
A d m i n i s t r a t i o n
f o r u s e w i t h
s e r u m
s a m p l e s .
I n
o r d e r t o
u s e
t h e s e
t e s t k i t s
w i t h
o r a l
s a m p l e s ,
we n e e d e d
o n l y
t o
m o d i f y
t h e
p r o c e d u r e s
s l i g h t l y
w i t h
r e s p e c t
t o t h e
s a m p l e
v o l u m e a n d d i l u t i o n .
T h i s
d e m o n s t r a t e s t h a t
s p e c i a l i z e d
a n d
u l t r a s e n s i t i v e
t e s t s
a r e n o t
r e q u i r e d
t o
s u c c e s s f u l l y
u s e o r a l
s a m p l e s
i n
d i a g n o s t i c
t e s t i n g
f o r v i r a l
h e p a t i t i s . F u r t h e r m o r e ,
o u r
work
s h o w s
t h a t
a n a c c u r a t e
d i a g n o s i s
c a n b e
o b t a i n e d w i t h a c o n v e n i e n t
o r a l
c o l l e c t i o n
s y s t e m
w h i c h
i s
a e s t h e t i c a l l y p l e a s i n g ,
s a f e
t o
h a n d l e ,
a n d
e a s i l y
u s e d i n c o m b i n a t i o n
w i t h a p r e s e r v a t i v e
s y s t e m
f o r
s t o r a g e
a n d
s h i p m e n t .
A l t h o u g h
o u r d a t a
d e m o n s t r a t i n g t h e p r e s e n c e o f o r a l
a n t i b o d i e s t o
HCV s h o u l d b e
c o n s i d e r e d
p r e l i m i n a r y
b e -
c a u s e o f
t h e
l i m i t e d
n u m b e r
o f s u b j e c t s ,
t h e y a r e c o n si s t e nt
w i t h
t h e
o t h e r r e s u l t s . When
c o n s i d e r e d
i n
c o m b i n a t i o n
w i t h
l a r g e r
s t u d i e s a n d
s u p p o r t i n g
r e p o r t s f r o m
o t h e r s ( 2 , 4 , 6 , 7 ) ,
we
f e e l
t h a n a n
u n a p p r e c i a t e d o p p o r t u n i t y e x i s t s f o r t h e u s e
o f o r a l
s a m p l e s
i n
t h e
d i ag no s is o f
v i r a l
h e p a t i t i s
b y m a k i n g
m i n o r
m o d i f i c a t i o n s
t o
c u r r e n t l y a v a i l a b l e c o m m e r c i a l s e r o
l o g i c
t e s t k i t s .
J . C L I N .
M I C R O B I O L .
7/25/2019 J. Clin. Microbiol.-1992-Thieme-1076-9
http://slidepdf.com/reader/full/j-clin-microbiol-1992-thieme-1076-9 5/5
O R A L FLUID SAMPLES FO R
DIAGNOSIS
O F VIRA L HEPATITIS
1 0 7 9
A CKNOW LED G MENTS
t h a n k J a n
P o u j a d e ,
M u l t n o m a h
C o u n t y H e a l t h D i v i s i o n ,
P o r t l a n d , O r e . ,
f o r a s s i s t a n c e
i n
o b t a i n i n g
c l i n i c a l
s p e c i m e n s .
REFERENCES
1 .
B e n - A r y e h ,
H . , I.
U r ,
a n d E .
B e n - P o r a t h .
1 9 8 5 .
T h e
r e l a t i o n s h i p
b e t w e e n
a n t i g e n a e m i a
a n d
e x c r e t i o n
o f
h e p a t i t i s B
s u r f a c e a n t i -
g e n
i n
human
w h o l e
s a l i v a
a n d
i n
g i n g i v a l
c r e v i c u l a r
f l u i d .
A r c h .
O r a l
B i o l .
3 0 : 9 7 - 9 9 .
2 . B u l l , A .
R . ,
K . J . K i m m a n c e , J . V . P a r r y , a n d K .
R .
P e r r y .
1 9 8 9 .
I n v e s t i g a t i o n
o f
a n o u t b r e a k o f h e p a t i t i s
A
s i m p l i f i e d b y s a l i v a r y
a n t i b o d y t e s t i n g . E p i d e m i o l .
I n f e c t .
1 0 3 : 3 7 1 - 3 7 6 .
3 . F e i n m a n , S . V . ,
K r a s s n i t s k i , J .
S i n c l a i r ,
D .
W r o b e l ,
a n d
B .
B e r r i s . 1 9 7 5 . H e p a t i t i s
B s u r f a c e
a n t i g e n
i s s a l i v a o f
HBsAg
c a r r i e r s .
J . L a b . C l i n .
M e d . 8 5 : 1 0 4 2 .
4 . H e a t h c o t e ,
J . ,
C .
H . C a m e r o n , a n d
D .
D .
D a n e . 1 9 7 4 . H e p a t i t i s
B
a n t i g e n
i n
s a l i v a
a n d
s e m e n . L a n c e t i : 7 1 - 7 3 .
5 . N i m a d a v a , P . , K .
T s a t s r a l , Z . O y u u n b i l e g , V . A . A n a n ' e v , a n d M .
D o l g o r .
1 9 8 8 . I n d e p e n d e n c e
o f
HBsAg
a p p e a r a n c e
i n
s a l i v a
a n d
b l o o d s e rum. V o p r . V i r o l o g i i 3 3 : 1 7 3 - 1 7 5 .
6 .
P a r r y ,
J . V . , P . P .
M o r t i m e r ,
a n d K . R .
P a r r y .
1 9 8 7 .
S e n s i t i v e
assays
f o r
v i r a l a n t i b o d i e s
i n
s a l i v a : a n
a l t e r n a t i v e
t o t e s t s on
s e rum.
L a n c e t
i i : 7 2 - 7 5 .
7 . P a r r y , J .
V . , K .
R .
P e r r y ,
S . P a n d a y , a n d P . P . M o r t i m e r .
1 9 8 9 .
D i a g n o s i s
o f
h e p a t i t i s
A
a n d
B
b y
t e s t i n g s a l i v a . J . M e d . V i r o l .
2 8 : 2 5 5 - 2 6 0 .
8 . P o l l o c k ,
J .
J . ,
L .
A n d o r s ,
A .
G u l u m o g l u ,
a n d P . F .
F a l l s .
1 9 8 4 .
D i r e c t measurement o f
h e p a t i t i s
B
v i r a l a n t i b o d y
a n d
a n t i g e n
m a r k e r s
i n
g i n g i v a l c r e v i c u l a r f l u i d .
O r a l S u r g .
5 7 : 4 9 9 - 5 0 3 .
V O L . 3 0 , 1 9 9 2
