ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA …repository.unair.ac.id/54396/20/MPK_75-16_Bal_i-min-min.pdfdan dikenal dengan nama daerah sonokeling. Senyawa yang banyak ditemukan pada tanaman

ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA PTEROKARPAN

DARI KULIT BATANG Dalbergia latifolia Roxb.

SERTA UJI AKTIVITAS SEBAGAI ANTI-HIV

SKRIPSI

RIZKY RATU BALQIS

PROGRAM STUDI S-1 KIMIA

DEPARTEMEN KIMIA

FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI

UNIVERSITAS AIRLANGGA

2016

ADLN_PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

SKRIPSI ISOLASI DAN IDENTIFIKASI... RIZKY RATU BALQIS





PEDOMAN PENGGUNAAN SKRIPSI

Skripsi ini tidak dipublikasikan, namun tersedia di perpustakaan dalam

lingkungan Universitas Airlangga, diperkenankan untuk dipakai sebagai referensi

kepustakaan, tetapi pengutipan harus seizin penyusun dan harus menyebutkan

sumbernya sesuai kebiasaan ilmiah.

Dokumen skripsi ini merupakan hak milik Universitas Airlangga.



KATA PENGANTAR

Puji syukur kepada Allah S.W.T. yang telah melimpahkan rahmat dan hidayahNya sehingga penyusun dapat menyelesaikan penyusunan naskah skripsi yang berjudul “Isolasi dan Identifikasi Senyawa Pterokarpan dari Kulit Batang Dalbergia latifolia Roxb. serta Uji Aktivitas sebagai Anti-HIV”. Naskah skripsi ini dibuat untuk memenuhi persyaratan akademis pendidikan pada program studi S-1 Kimia di Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Airlangga.

Pada kesempatan ini, penyusun mengucapkan terima kasih kepada semua pihak yang telah membantu menyelesaikan penelitian skripsi ini terutama kepada :

1. Tjitjik Srie Tjahjandarie, Ph.D selaku dosen pembimbing I yang telah membimbing penyusun selama penyusunan dan penyelesaian naskah skripsi.

2. Dr. Mulyadi Tanjung, M.S selaku dosen pembimbing II yang telah membimbing penyusun selama penyusunan dan penyelesaian naskah skripsi.

3. Dr. Purkan, M.Si sebagai Ketua Departemen Kimia Fakultas Sains dan Teknologi, yang telah memberikan motivasi.

4. Drs. Handoko Darmokoesoemo, DEA selaku dosen wali yang telah memberikan nasihat dan motivasi.

5. Seluruh staf pengajar atas ilmu yang diberikan. 6. Ratih Dewi Saputri, S.Si., M.Si. yang banyak memberikan masukan selama

proses penyelesaian skripsi. 7. Nur Cholid Djauhari, Anik Julaila, Izzul Haq Raja Sulaiman dan keluarga

atas dukungan serta doa untuk selesainya penulisan naskah skripsi. 8. Wahyu Sara Novita, Okky Putri Rahayu, Dian Ningsih, Baharrani Dwi

Kurnia, Muafillah Shofah, Murobbiyatul Wathoniyyah, Dini Oktavia dan Erika Herdiana yang telah menmberikan dukungan dan motivasi selama menempuh kuliah.

9. Mahasiswa kimia angkatan 2012 yang selalu memberikan dukungan. Penyusun menyadari bahwa masih terdapat kekurangan dalam naskah

skripsi ini. Oleh karena itu, penyusun mengharapkan kritik dan saran yang bersifat membangun untuk kesempurnaan naskah skripsi ini.

Surabaya, 30 Mei 2016 Penulis, Rizky Ratu Balqis



Balqis, R. R., 2016, Isolasi dan Identifikasi Senyawa Pterokarpan dari Kulit Batang Dalbergia latifolia Roxb. serta Uji Aktivitas sebagai Anti-HIV. Skripsi ini di bawah bimbingan Tjitjik Srie Tjahjandarie, Ph.D, dan Dr. Mulyadi Tanjung, M.S, Departemen Kimia, Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Airlangga, Surabaya.

ABSTRAK

Dalbergia latifolia Roxb. merupakan salah satu spesies dari famili Fabaceae dan dikenal dengan nama daerah sonokeling. Senyawa yang banyak ditemukan pada tanaman ini adalah dari golongan isoflavonoid. Pterokarpan merupakan salah satu jenisnya. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menentukan struktur kimia senyawa pterokarpan dari kulit batang Dalbergia latifolia Roxb. serta menentukan aktivitas anti-HIV senyawa pterokarpan hasil isolasi terhadap virus HIV-1. Ekstraksi dan isolasi senyawa pterokarpan dari kulit batang Dalbergia latifolia Roxb. menggunakan pelarut metanol yang dilanjutkan dengan fraksinasi dan pemurnian menggunakan berbagai teknik kromatografi meliputi kromatografi cair vakum, kromatografi kolom tekan dan kromatografi radial menghasilkan satu senyawa pterokarpan, medikarpin dan satu senyawa isoflavan, (3R)-vestitol. Struktur keduanya ditetapkan berdasarkan metode spektroskopi meliputi UV, IR, HR-ESI-MS, 1D NMR (1H-NMR dan 13C-NMR) serta 2D NMR (HMBC dan HMQC). Uji aktivitas anti-HIV ektrak etilasetat dan kedua senyawa hasil isolasi menggunakan metode pembentukan syncytia terhadap virus HIV-1 memperlihatkan nilai IC50 berturut-turut 0,78; 23,26 dan 26,45 ppm. Hal ini menunjukkan bahwa senyawa hasil isolasi berpotensi sebagai anti-HIV.

Kata kunci :Dalbergia latifolia Roxb., medikarpin, (3R)-vestitol, anti-HIV



Balqis, R. R., 2016, Isolation and Identification Pterocarpan Compound from The Stem Bark of Dalbergia latifolia Roxb. and Anti-HIV Activity. This thesis is under the guidance of Tjitjik Srie Tjahjandarie, Ph.D, and Dr. Mulyadi Tanjung, M.S, Departement of Chemistry, Faculty of Science and Technology, Airlangga University, Surabaya.

ABSTRACT

Dalbergia latifolia Roxb. is one species of Fabaceae family and known as sonokeling in local name. The compound that mostly found from this plant is isoflavonoid. Pterocarpan is one type of this group. The objectives of this research are to determine the chemical structure of pterocarpan compound from the stem bark of Dalbergia latifolia Roxb. and to determine anti-HIV activity of isolated compound against HIV-1 virus. Extraction and isolation of pterocarpan compound from the stem bark of Dalbergia latifolia Roxb. were using methanol solvent followed by fractination and purification using various chromatographic techniques including vacuum liquid chromatography, flash chromatography and radial chromatography, yielded one pterocarpan compound, medicarpin, and one isoflavan compound, (3R)-vestitol. The structure of both compounds was determined by spectroscopic methods, including UV, IR, HR-ESI-MS, 1D NMR (1H-NMR and 13C-NMR) and 2D NMR (HMBC and HMQC). The anti-HIV activities of etilacetate extract and isolated campounds against HIV-1 virus by syncytia assay showed IC50 values of 0,78; 23,26 dan 26,45 ppm, respectively. It shows that isolated compounds potential to be anti-HIV agent.

Keywords : Dalbergia latifolia Roxb., medicarpin, (3R)-vestitol, anti-HIV



PERNYATAAN ORISINALITAS

Yang bertanda tangan di bawah ini, saya :

Nama : Rizky Ratu Balqis

NIM : 081211531128

Program Studi : Kimia

Fakultas : Sains dan Teknologi

Jenjang : Sarjana (S1)

Menyatakan bahwa saya tidak melakukan kegiatan plagiat dalam penulisan skripsi saya yang berjudul :

Isolasi dan Identifikasi Senyawa Pterokarpan dari Kulit Batang Dalbergia

latifolia Roxb. serta Uji Aktivitas sebagai anti-HIV

Apabila suatu saat nanti terbukti melakukan tindakan plagiat, maka saya akan menerima sanksi yang telah diterapkan.

Demikian pernyataaan ini saya buat dengan sebenar-benarnya.

Surabaya, 30 Mei 2016

Rizky Ratu Balqis NIM 081211531128



DAFTAR ISI

Halaman LEMBAR JUDUL............................................................................................... i LEMBAR PERNYATAAN ............................................................................... ii LEMBAR PENGESAHAN ............................................................................... iii LEMBAR PEDOMAN PENGGUNAAN SKRIPSI ......................................... iv KATA PENGANTAR ........................................................................................ v ABSTRAK ......................................................................................................... vi ABSTRACT ..................................................................................................... vii PERNYATAAN ORISINALITAS ................................................................. viii DAFTAR ISI ..................................................................................................... ix DAFTAR TABEL ............................................................................................. xi DAFTAR GAMBAR ........................................................................................ xii DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................... xiii BAB I PENDAHULUAN ................................................................................... 1

1.1 Latar Belakang Permasalahan .................................................................... 1 1.2 Rumusan Masalah ..................................................................................... 4 1.3 Tujuan Penelitian ....................................................................................... 4 1.4 Manfaat Penelitian ..................................................................................... 4

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ........................................................................ 5

2.1 Dalbergia latifolia Roxb. ........................................................................... 5 2.2 Profil Fitokimia Dalbergia ........................................................................ 6 2.3 Flavonoid .................................................................................................. 8 2.4 Isoflavonoid .............................................................................................. 9

2.4.1 Isoflavon ........................................................................................ 10 2.4.2 Pterokarpan .................................................................................... 12 2.4.3 Rotenoid ........................................................................................ 14 2.4.4 Isoflavan ........................................................................................ 15 2.4.5 Isoflavanon .................................................................................... 16

2.5 Biosintesis Senyawa Pterokarpan ............................................................. 17 2.6 Ekstraksi dan Isolasi Senyawa Pterokarpan .............................................. 19 2.7 Analisis Spektroskopi Senyawa Pterokarpan ............................................ 20 2.8 Bioaktivitas Senyawa Fenolik Dalbergia ................................................. 22 2.9 Tinjauan tentang HIV .............................................................................. 23

BAB III METODE PENELITIAN .................................................................. 25

3.1 Waktu dan Tempat Penelitian .................................................................. 25 3.2 Sampel dan Bahan Penelitian ................................................................... 25

3.2.1 Sampel penelitian........................................................................... 25 3.2.2 Bahan penelitian ............................................................................ 26

3.3 Peralatan Penelitian ................................................................................. 26 3.4 Prosedur Kerja ......................................................................................... 27

3.4.1 Ekstraksi dan pemurnian senyawa pterokarpan .............................. 27



3.4.2 Penentuan struktur molekul senyawa pterokarpan .......................... 28 3.4.3 Penentuan aktivitas anti-HIV ......................................................... 29

3.4.3.1 Penyiapan kultur ................................................................ 29 3.4.3.2 Penentuan aktivitas anti-HIV ............................................. 30 3.4.3.3 Analisis data ...................................................................... 30

3.5 Diagram Alir Penelitian ........................................................................... 31 BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN........................................................... 32

4.1 Ekstraksi dan Pemurnian Senyawa Fenolik .............................................. 32 4.2 Penentuan Struktur Senyawa Hasil Isolasi ............................................... 34

4.2.1 Senyawa medikarpin (DL1) ............................................................ 34 4.2.2 Senyawa (3R)-vestitol (DL2) .......................................................... 44

4.3 Penentuan Aktivitas Anti-HIV Senyawa Hasil Isolasi .............................. 53 BAB V PENUTUP ........................................................................................... 56

5.1 Kesimpulan ............................................................................................. 56 5.2 Saran ....................................................................................................... 57

DAFTAR PUSTAKA ....................................................................................... 58 LAMPIRAN



DAFTAR TABEL

Tabel Judul Tabel Halaman

2.1 Keragaman senyawa fenolik tumbuhan Dalbergia ................................... 7 2.2 Distribusi senyawa isoflavon tumbuhan Dalbergia ................................ 10 2.3 Distribusi senyawa pterokarpan tumbuhan Dalbergia ............................ 13 2.4 Distribusi senyawa rotenoid tumbuhan Dalbergia ................................. 14 2.5 Distribusi senyawa isoflavan tumbuhan Dalbergia ................................ 15 2.6 Distribusi senyawa isoflavanon tumbuhan Dalbergia ............................ 16 2.7 Ekstraksi dan isolasi senyawa pterokarpan Dalbergia ............................ 20 2.8 Distribusi bioaktivitas senyawa fenolik tumbuhan Dalbergia ................ 22 4.1 Data spektrum HMQC senyawa pterokarpan hasil isolasi dalam

iCDCl3.................................................................................................... 38 4.2 Data spektrum 1H dan 13C-NMR senyawa medikarpin dalam CDCl3 ..... 42 4.3 Perbandingan data spektrum NMR senyawa medikarpin ........................ 43 4.4 Data spektrum HMQC senyawa isoflavan hasil isolasi dalam bCDCl3 ... 46 4.5 Data spektrum 1H dan 13C NMR senyawa vestitol hasil isolasi

Idalam aseton-d6 .................................................................................... 51 4.6 Perbandingan data spektrum NMR senyawa (3R)-vestitol ..................... 52



DAFTAR GAMBAR

Gambar Judul Gambar Halaman

2.1 Kerangka dasar senyawa flavonoid, isoflavonoid dan neoflavonoid ......... 9 2.2 Kerangka dasar senyawa turunan isoflavonoid ....................................... 10 2.3 Senyawa jenis isoflavon pada tumbuhan Dalbergia ............................... 12 2.4 Senyawa jenis pterokarpan pada tumbuhan Dalbergia ........................... 14 2.5 Senyawa jenis rotenoid pada tumbuhan Dalbergia................................. 15 2.6 Senyawa jenis isoflavan pada tumbuhan Dalbergia ............................... 16 2.7 Senyawa jenis isoflavanon pada tumbuhan Dalbergia ........................... 17 2.8 Biosintesis senyawa pterokarpan ........................................................... 19 2.9 Struktur senyawa velukarpin A .............................................................. 21 3.1 Diagram alir penelitian .......................................................................... 31 4.1 Struktur senyawa pterokarpan ................................................................ 35 4.2 Pola substitusi senyawa pterokarpan DL1............................................... 36 4.3 Kemungkinan struktur senyawa pterokarpan DL1 .................................. 36 4.4 Korelasi sinyal proton H-6 dengan C-4a, C-6a, C-6b dan C-11a ............ 39 4.5 Korelasi sinyal proton H-1 dengan C-4a dan C-11a ............................... 40 4.6 Korelasi sinyal proton H-2 dengan C-3, C-4 dan C-11b ......................... 40 4.7 Korelasi sinyal proton H-4 dengan C-2, C-4a dan C-11b ....................... 41 4.8 Struktur medikarpin hasil isolasi ............................................................ 41 4.9 Korelasi H-7, H-8 dan H-10 pada spektrum HMBC ............................... 42 4.10 Pola substitusi senyawa isoflavan DL2 ................................................... 45 4.11 Korelasi antara sinyal proton H-2 dengan sinyal karbon C-4, C-8a dan bbbbbb.dan C-1’ ................................................................................................ 47 4.12 Korelasi antara sinyal proton H-2 dengan sinyal karbon C-2; C-3, C-4a; C-5; C-8a dan C-1’ ...................................................................... 47 4.13 Senyawa isoflavan yang tersubstitusi di C-7/2’/C-4’ .............................. 48 4.14 Korelasi antara H-6 dengan sinyal karbon di C-4a; C-6; dan C-8a ......... 48 4.15 Korelasi antara 7-OH dengan sinyal karbon di C-6; C-7; dan C-8 .......... 49 4.16 Korelasi antara H-3 dengan sinyal karbon di C-2; C-4; C-4a; bC-1’; C-2’idan C-6’ ........................................................................................ 50 4.17 Korelasi antara 2’-OH dengan sinyal karbon di C-1’; C-2’dan C-3’ ....... 50 4.18 Struktur senyawa vestitol hasil isolasi .................................................... 51 4.19 Struktur senyawa (3R)-vestitol hasil isolasi ........................................... 52 4.20 Hubungan biosintesis senyawa medikarpin dan (3R)-vestitol ................. 53 5.1 Struktur senyawa medikarpin (1) dan (3R)-vestitol (2) .......................... 56



DAFTAR LAMPIRAN

No. Judul Lampiran

1. Hasil pengukuran spektrum UV senyawa medikarpin dalam metanol 2. Hasil pengukuran spektrum IR senyawa medikarpin 3. Hasil pengukuran spektrum 1H-NMR senyawa medikarpin 4. Hasil pengukuran spektrum 13C-NMR senyawa medikarpin 5. Hasil pengukuran spektrum HMQC senyawa medikarpin 6. Hasil pengukuran spektrum HMBC senyawa medikarpin 7. Hasil pengukuran spektrum UV senyawa (3R)-vestitol dalam metanol 8. Hasil pengukuran spektrum IR senyawa (3R)-vestitol 9. Hasil pengukuran spektrum HRESIMS senyawa (3R)-vestitol 10. Hasil pengukuran spektrum 1H-NMR senyawa (3R)-vestitol 11. Hasil pengukuran spektrum 13C-NMR senyawa (3R)-vestitol 12. Hasil pengukuran spektrum HMQC senyawa (3R)-vestitol 13. Hasil pengukuran spektrum HMBC senyawa (3R)-vestitol 14. Data hasil uji aktivitas anti-HIV ekstrak etilasetat, senyawa bmedikarpin dan

(3R)-vestitol



BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang Permasalahan

Dalbergia latifolia Roxb. merupakan salah satu spesies tumbuhan dari

famili Fabaceae dan dikenal dengan nama daerah sonokeling. Tumbuhan ini

termasuk jenis rosewood setelah pohon jati. Dalbergia merupakan jenis tumbuhan

yang dilindungi mengingat banyaknya dieksploitasi masyarakat untuk digunakan

sebagai furniture karena sifatnya yang tahan lama dan resisten terhadap hama

(Chibber, et al., 1978). Di Thailand, tumbuhan ini digunakan sebagai obat-obatan

tradisional diantaranya untuk ekspektoran, kardiotonik, dan tonik untuk

melancarkan menstruasi (Songsiang, et al., 2011). Hal ini tentu saja berhubungan

dengan senyawa metabolit sekunder yang dikandungnya.

Senyawa metabolit sekunder yang telah dilaporkan dalam tumbuhan

Dalbergia diantaranya dari golongan flavonoid, isoflavonoid, neoflavonoid,

alkaloid, aril benzofuran, benzofenon dan terpenoid. Dalbergia merupakan satu-

satunya genus tumbuhan yang menghasilkan ketiga golongan flavonoid,

isoflavonoid dan neoflavonoid sekaligus (Beldjoudi, et al., 2003; Parthasarathy, et

al., 1976; Sripathi, et al., 1994; Gregson, et al., 1978; Muangnoucharoen, et al.,

1981). Bioaktivitas dari tumbuhan ini adalah positif sebagai antioksidan,

antiinflamasi, antifungi, antiandrogenik, anti-TBC, antitumor, analgesik, antidiare,

antigiardial dan antikanker (Cheng, et al., 1998; Kale, et al., 2007; Hamburger, et

1



al., 1987; Pathak, et al., 1997; Wang, et al., 2014; Khan, et al., 2000; Umehara, et

al., 2009).

Berdasarkan studi pustaka, senyawa metabolit sekunder yang paling

banyak dikandung dalam tumbuhan Dalbergia adalah senyawa isoflavonoid.

Senyawa golongan isoflavonoid yang terdapat pada tumbuhan ini diantaranya dari

jenis isoflavon, pterokarpan, rotenoid, isoflavan dan isoflavanon (Donnelly, et al.,

1968; Cheenpracha, et al., 2009; Sripathi, et al., 1994; Umehara, et al., 2009).

Senyawa-senyawa ini ditemukan baik dalam akar, batang, kulit batang, daun,

maupun bijinya.

Pterokarpan merupakan salah satu jenis senyawa isoflavonoid yang

memiliki cincin benzofuran dan benzopiran. Senyawa pterokarpan yang ditemukan

pada tumbuhan Dalbergia sebagian telah diuji aktivitas biologisnya, diantaranya

adalah aktif melawan sel kanker usus besar, payudara dan serviks (Cheenpracha, et

al., 2009). Berdasarkan keterangan tersebut hingga saat ini belum ada data

publikasi senyawa pterokarpan Dalbergia tentang aktivitas sebagai anti-HIV. 9-

Benziloksi-3,8-dimetoksipterokarpan dan 9-benziiloksi-8-metoksipterokarpan

merupakan senyawa turunan pterokarpan yang memperlihatkan aktivitas sebagai

anti-HIV (Engler et al., 1996; Ye et al., 2000). Oleh karena itu, perlu untuk diteliti

bioaktivitas senyawa pterokarpan hasil isolasi dari tumbuhan Dalbergia dalam

melawan virus HIV-1.

Human immunodeficiency virus (HIV) merupakan penyakit yang

disebabkan virus dimana menyerang sel limfosit sehingga menyebabkan

berkurangnya sistem imun tubuh. Mekanisme kerja virus dalam replikasi



dipengaruhi oleh dua hal yakni enzim reverse transcriptase dan protease. Oleh

karena itu, sistem kerja reverse transcriptase dan protease perlu dihambat dengan

senyawa aktif. Senyawa pterokarpan dari Dalbergia latifolia Roxb diharapkan

mempunyai bioaktivitas dalam menghambat sistem kerja tersebut.

Berdasarkan studi pendahuluan, hasil kromatografi lapis tipis kulit batang

Dalbergia latifolia Roxb. yang mengandung senyawa pterokarpan menghasilkan

noda warna merah dengan pereaksi anisaldehida dan berfluororesensi di bawah

lampu UV.

Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan identifikasi senyawa

pterokarpan dari kulit batang tumbuhan Dalbergia latifolia Roxb. serta menentukan

aktivitas sebagai anti-HIV.

Metode yang digunakan dalam penelitian ini diantaranya adalah ektraksi

dengan pelarut metanol dilanjutkan dengan partisi, fraksinasi dan pemurnian

menggunakan kromatografi cair vakum (KCV), kromatografi kolom tekan dan

kromatografi radial. Penentuan struktur molekul dilakukan berdasarkan cara-cara

spektroskopi diantaranya spektroskopi ultraviolet (UV), inframerah (IR),

spektroskopi massa (MS) dan resonansi magnet inti (NMR). Uji terhadap ekstrak

dan senyawa pterokarpan hasil isolasi dalam berbagai konsentrasi sebagai anti-HIV

menggunakan sel limfosit manusia (MOLT4) dalam media RPMI-1640. Evaluasi

nilai potensial sitotoksik anti-HIV dari ekstrak dan senyawa pterokarpan hasil

isolasi ditentukan berdasarkan nilai daya hambat konsentrasi IC50.



1.2 Rumusan Masalah

Berdasarkan latar belakang permasalahan, maka rumusan masalah

penelitian ini adalah sebagai berikut :

1. Bagaimanakah struktur senyawa pterokarpan yang terdapat pada kulit batang

Dalbergia latifolia Roxb. ?

2. Bagaimanakah aktivitas anti-HIV ekstrak etilasetat dan senyawa pterokarpan

hasil isolasi ?

1.3 Tujuan Penelitian

Penelitian ini bertujuan untuk :

1. Menentukan struktur senyawa pterokarpan yang terdapat pada kulit batang

Dalbergia latifolia Roxb.

2. Menentukan aktivitas anti-HIV berdasarkan nilai IC50 ekstrak etilasetat dan

senyawa pterokarpan hasil isolasi yang terdapat pada kulit batang Dalbergia

latifolia Roxb.

1.4 Manfaat Penelitian

Manfaat penelitian ini adalah diharapkan senyawa hasil isolasi menambah

keragaman senyawa pterokarpan dari tumbuhan Dalbergia latifolia Roxb. Selain

itu, memberikan informasi tentang aktivitas senyawa tersebut sebagai anti-HIV.



BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Dalbergia latifolia Roxb.

Dalbergia latifolia Roxb. merupakan salah satu spesies dari genus

Dalbergia yang hanya terdapat di Pulau Jawa dan dikenal dengan nama daerah

sonokeling. Kayu Dalbergia latifolia Roxb. mempunyai nilai ekonomi yang tinggi

dan dikategorikan jenis kayu rosewood setelah pohon jati. Kayu tumbuhan ini tahan

terhadap rayap dan kuat, sehingga masyarakat memanfaatkannya sebagai bahan

bangunan seperti mebel, kusen, pintu dan jendela. Selain itu, kayu tumbuhan ini

memiliki tekstur yang khas dan halus sehingga digunakan sebagai bahan handcraft.

Berdasarkan nilai ekonomi tersebut maka menjadi ancaman utama kelestarian

Dalbergia latifolia Roxb. sehingga populasi tumbuhan ini sulit ditemukan (Heyne,

1987). Oleh karena itu, tumbuhan ini termasuk daftar tumbuhan yang dilindungi

oleh Badan Konservasi Dunia. Berdasarkan data Tabel 2.1, telah dilaporkan

senyawa isoflavonoid pada biji Dalbergia latifolia dari India namun sampai saat ini

belum ada data laporan ilmiah senyawa metabolit sekunder tumbuhan tersebut dari

Indonesia.

Berikut adalah klasifikasi tumbuhan Dalbergia latifolia Roxb. secara

taksonomi

Kingdom : Plantae

Kelas : Magnoliopsida

Superordo : Rosanae

5



Ordo : Fabales

Famili : Fabaceae

Genus : Dalbergia latifolia

Spesies : Dalbergia latifolia Roxb.

2.2 Profil Fitokimia Dalbergia

Senyawa metabolit sekunder tumbuhan Dalbergia menghasilkan senyawa

golongan flavonoid, isoflavonoid, neoflavonoid, alkaloid, aril benzofuran,

benzofenon dan terpenoid. Dalbergia merupakan satu-satunya genus tumbuhan

yang menghasilkan ketiga golongan flavonoid, isoflavonoid dan neoflavonoid

sekaligus (Beldjoudi, et al., 2003; Parthasarathy, et al., 1976; Sripathi, et al., 1994;

Gregson, et al., 1978; Muangnoucharoen, et al., 1981).

Berdasarkan studi pustaka, senyawa metabolit sekunder yang paling

banyak dikandung dalam tumbuhan Dalbergia adalah senyawa isoflavonoid.

Senyawa golongan isoflavonoid yang terdapat pada tumbuhan ini diantaranya dari

jenis isoflavon, pterokarpan, rotenoid, isoflavan dan isoflavanon (Donelly, et al.,

1968; Cheenpracha, et al., 2009; Sripathi, et al., 1994; Umehara, et al., 2009).

Senyawa golongan flavonoid Dalbergia terdistribusi pada akar, batang, kulit

batang, daun, maupun bijinya. Substituen yang terikat pada inti aromatis antara lain

hidroksi, metoksi, metilendioksi, isoprenil dan geranil yang membuat keragaman

struktur senyawa sangat bervariasi. Kombinasi antara substituen hidroksi dengan

isoprenil menghasilkan senyawa jenis piranoflavonoid, piranoisoflavonoid,

furanoflavonoid, dan furanoisoflavonoid.



Tabel 2.1 Keragaman senyawa fenolik tumbuhan Dalbergia

Spesies Bagian Tumbuhan

Asal Golongan Senyawa

Pustaka

D. baroni Batang Madagaskar Neoflavonoid Donnelly, et al.,1968; 1965

D. candenatensis Batang Thailand Flavonoid, isoflavonoid

Cheenpracha, et al., 2009; Hamburger, et al.,1987

D. cearensis Batang Brasil Isoflavonoid, benzofenon

Souza, et al.,1975

D. cochinchinensis Batang Vietnam Flavonoid, isoflavonoid, neoflavonoid, benzofuran

Shirota, et al., 2003

D. congesta Akar India Isoflavonoid Rao, et al., 2007 D. congestiflora Batang Meksiko Isoflavonoid Huerta, et al., 2004 D. coromandeliana Daun India Isoflavonoid,

benzofenon, alkaloid

Ramesh, et al., 1995; Edayadulla, et al., 2012

D. cochinchinensis Batang Vietnam Isoflavonoid Ramesh, et al., 1995 D. cultrata Batang Birma Neoflavonoid Donnelly, et al.,1972 D. decipularis Batang Brasil Isoflavonoid Alencar, et al.,1972 D. ecastophyllum Batang Nigeria Isoflavonoid Donnelly, et al.,

1973 D. frutescens Kulit

batang Venezuela Isoflavonoid Khan, et al., 2000

D. horrida Akar India Isoflavonoid Narayanan, et al., 2007

D. lanceolaria Akar India Isoflavonoid Malhotra, et al.,1967 D. latifolia Biji India Isoflavonoid Chibber, et al., 1979 D. louvelii Batang Madagaskar Neoflavonoid Beldjoudi, et al.,

2003 D. melanoxylon Batang Mozambik Neoflavonoid Donnelly, et al.,

1975 D. miscolobium Batang Brasil Flavonoid,

isoflavonoid Gregson, et al., 1978

D. monetaria Biji Francis Isoflavonoid Abe, et al., 1985 D. nigra Daun Brasil Isoflavonoid Mathias, et al., 1998 D. nigrescens Biji Thailand Isoflavonoid Chuankhayan, et al.,

2007, 2005 D. nitidula Batang Rhodesia Isoflavonoid,

neoflavonoid Bekker, et al., 2002



Lanjutan Tabel 2.1

Spesies Bagian Tumbuhan

Asal Golongan Senyawa

Pustaka

D. odorifera Akar, Batang

China Flavonoid, isoflavonoid, neoflavonoid

Chan, et al., 1997. Liu, et al., 2005, Wang, et al., 2014, Yu, et al., 2007

D. olivari Kulit batang

Thailand Isoflavonoid Ito, et al., 2003

D. oliveri Batang Thailand Isoflavonoid Pluempanupat, et al., 2013

D. paniculata Biji India Isoflavonoid Rao, et al., 1991 D.parviflora Batang Thailand Flavonoid,

isoflavonoid, benzofuran

Umehara, et al., 2009, 2008; Muangnoicharoen, et al., 1981

D. retusa Batang Panama Flavonoid, isoflavonoid, neoflavonoid

Gregson, et al., 1978

D. sericea Batang India Flavonod, terpenoid

Parthasarathy, et al., 1976

D. sissoides Kulit batang

India Flavonoid, isoflavonoid

Sriphati, et al., 1994

D. sissoo Getah Nepal Flavonoid, neoflavonoid

Shrestha, et al., 2008

D. spinosa Daun India Isoflavonoid Narayanan, et al., 1988

D. sympathetica Daun India Isoflavonoid Nagarajan, et al., 2006

2.3 Flavonoid

Flavonoid merupakan senyawa fenolik terbesar yang ditemukan di alam

dan hanya ditemukan pada dunia tumbuh-tumbuhan. Senyawa flavonoid Dalbergia

secara biosintesis merupakan penggabungan jalur skhimat dan asetat malonat

dengan prekusor asam amino tirosin, yakni ditandai adanya substituen teroksigenasi

pada C-4’ di cincin B. Senyawa golongan flavonoid Dalbergia yang sering

ditemukan antara lain dari jenis flavonoid, isoflavonoid dan neoflavonoid.



Klasifikasi kerangka dasar senyawa golongan flavonoid, isoflavonoid, dan

neoflavonoid dari Dalbergia dapat dilihat pada Gambar 2.1.

Senyawa golongan flavonoid, isoflavonoid, dan neoflavonoid mempunyai

kerangka dasar karbon yang terdiri dari 15 atom karbon, dimana dua cincin benzena

(C6) terikat pada satu rantai propana (C3) sehingga membentuk susunan C6-C3-C6

(Manitto, 1992). Berdasarkan susunan kerangka dasar tersebut senyawa golongan

flavonoid mempunyai jenis kerangka 1,3-diarilpropan, isoflavonoid 1,2-

diarilpropan, dan neoflavonoid 1,1-diarilpropan. Keragaman struktur senyawa

flavonoid, isoflavonoid, dan neoflavonoid diperluas dengan adanya tambahan

substituen isoprenil dan geranil. Kombinasi antara substituen hidroksi dengan

isoprenil maupun geranil menghasilkan jenis pirano dan furano.

Gambar 2.1 Kerangka dasar senyawa flavonoid, isoflavonoid dan neoflavonoid

2.4 Isoflavonoid

Isoflavonoid merupakan senyawa golongan flavonoid utama yang

ditemukan pada tumbuhan Dalbergia. Pembentukan senyawa isoflavonoid berasal

dari reaksi penataan ulang senyawa flavanon yakni migrasi cincin aromatik B dari

atom C-3 ke atom C-2 menghasilkan isoflavanon. Reduksi isoflavanon di C2 dan

C-3 menghasilkan senyawa isoflavon. Siklisasi antara gugus karbonil di C-3 dengan



C-2’ cincin B dari isoflavon menghasilkan senyawa turunan pterokarpan (Dewick,

2009). Kerangka dasar senyawa turunan isoflavonoid dapat dilihat pada Gambar

2.2

Gambar 2.2 Kerangka dasar senyawa turunan isoflavonoid

2.4.1 Isoflavon

Isoflavon merupakan senyawa golongan isoflavonoid utama yang

ditemukan pada tumbuhan Dalbergia. Senyawa isoflavonoid yang telah berhasil

diisolasi dari tumbuhan Dalbergia sebanyak 38 senyawa. Senyawa isoflavon

tersebut mempunyai substituen hidroksil, metoksi, dan metilendioksi. Hal ini

tercantum pada Tabel 2.2 dan Gambar 2.3.

Tabel 2.2 Distribusi senyawa isoflavon tumbuhan Dalbergia

Senyawa Spesies Pustaka Formonetin (1) D. baroni Donelly, et al., 1968 5,7-Dihidroksi-2’,3’,5’,6’-tetrametoksi isoflavon (2)

D. congesta Rao, et al., 2007

Kuneatin (3) D. frutescens Khan, et al., 2000 Dalspinosin (4) D. horrida Narayanan, et al., 2007 Dalspinin (5) D. horrida Narayanan, et al., 2007 Fujikinetin (6) D. frutescens Khan, et al., 2000 Pseudobaptigenin (7) D. frutescens Khan, et al., 2000



Lanjutan Tabel 2.2

Senyawa Spesies Pustaka Olibergin A (8) D. oliveri Ito, et al., 2003 Glisitein (9) D. frutescens Khan, et al., 2000 Odoratin (10) D. frutescens Khan, et al., 2000 Kastanin (11) D. frutescens Khan, et al., 2000 Genistein (12) D. frutescens Khan, et al., 2000 Biokanin (13) D. frutescens Khan, et al., 2000 Daidzein (14) D. frutescens Khan, et al., 2000 Kaiunin (15) D. nigra Mathias, et al., 1998 3-Hidroksidaidzein (16) D. nigra Kite, et al., 2010 3’-Metoksidaidzein (17) D. nigra Kite, et al., 2010 Olibergin B (18) D. olivari Ito, et al., 2003 Kaviunin (19) D. paniculata Rao, et al., 1991 Panikulatin (20) D. paniculata Rao, et al., 1991 Dalpanikulin (21) D. paniculata Rao, et al., 1991 Kajanin (22) D. parviflora Umehara, et al., 2008 Khrinone A (23) D. parviflora Umehara, et al., 2008 Khrinone B (24) D. parviflora Umehara, et al., 2008 Khrinone C (25) D. parviflora Umehara, et al., 2008 Khrinone D (26) D. parviflora Umehara, et al., 2008 Khrinone E (27) D. parviflora Umehara, et al., 2008 7-Dimetilrobustigenin (28) D. parviflora Umehara, et al., 2008 Teralin (29) D. parviflora Umehara, et al., 2008 2’-Metoksibiokanin A (30) D. parviflora Umehara, et al., 2008 Pratensein (31) D. parviflora Umehara, et al., 2008 2’-Metoksiformononetin (32) D. parviflora Umehara, et al., 2008 Kalikosin (33) D. parviflora Umehara, et al., 2008 Tektorigenin (34) D. parviflora Umehara, et al., 2008 Retusin (35) D. retusa Jurd, et al., 1972 8-O-Metilretusin (36) D. retusa Gregson, et al., 1978 5-Hidroksibowdikion (37) D. candenatensis Hamburger, et al., 1987 Bowdikione (38) D. parviflora Umehara, et al., 2008



Gambar 2.3 Senyawa jenis isoflavon pada tumbuhan Dalbergia

2.4.2 Pterokarpan

Senyawa jenis pterokarpan merupakan oksidasi isoflavonoid yakni antara

C=O karbonil dengan C-2’ inti aromatik di cincin B dan diikuti dengan reaksi

reduksi. Ditinjau dari struktur senyawanya, pterokarpan mempunyai dua atom C

kiral di C-6a dan C-11a yang tentunya memerlukan perhatian khusus dalam

penentuan struktur kimia pterokarpan. Senyawa pterokarpan umumnya mempunyai

substituen hidroksi, metoksi, dan metilendioksi. Senyawa velukarpin A, B dan C

merupakan senyawa jenis pterokarpan tergeranilasi (Kaennakam, et al., 2015).

Sampai saat ini belum ada laporan senyawa pterokarpan Dalbergia mempunyai

substituen isoprenil. Berdasarkan studi literatur, senyawa jenis pterokarpan yang

berhasil diisolasi dari tumbuhan Dalbergia berkisar 17 senyawa seperti yang dapat

dilihat pada Tabel 2.3 dan Gambar 2.4.



Tabel 2.3 Distribusi senyawa pterokarpan tumbuhan Dalbergia

Senyawa Spesies Pustaka Nitidukol (39) D. candenatensis Cheenpracha, et al.,

2009 4-Hidroksi-3-metoksi-8,9-metilenedioksipterokarpan (40)

D. candenatensis Cheenpracha, et al., 2009

Medikarpin (41) D. congestiflora Martinez, et al., 2012 (-)-3,4-Dihidroksi-8,9-metilendioksipterokarpan (42)

D. spruceana Cook, et al., 1978

(-)-3-Hidroksi-4-metoksi-8,9-metilendioksipterokarpan (43)

D. spruceana Cook, et al., 1978

(+)-Variabilin (44) D. variabilis Kurosawa, et al., 1978 3,8-Dihidroksi-9-metoksipterokarpan (45)

D. parviflora Songsiang, et al., 2011

4-Hidroksi medikarpin (46) D. velutina Kaennakam, et al., 2015

3,8-Dihidroksi-9-metoksipterokarpan (47)

D. velutina Kaennakam, et al., 2015

3,9-Trimetoksipterokarpan (48) D. odorifera Wang, et al., 2014 3-Hidroksi-6a,9-dimetoksipterokarpan (49)

D. odorifera Wang, et al., 2014

Melilotokarpan A (50) D. odorifera Wang, et al., 2014 Melilotokarpan D (51) D. odorifera Wang, et al., 2014 Vestikarpan (52) D. odorifera Wang, et al., 2014 Velukarpin A (53) D. velutina Kaennakam, et al.,

2015 Velukarpin B (54) D. velutina Kaennakam, et al.,

2015 Velukarpin C (55) D. velutina Kaennakam, et al.,

2015



Gambar 2.4 Senyawa jenis pterokarpan pada tumbuhan Dalbergia

2.4.3 Rotenoid

Berdasarkan literatur, senyawa jenis rotenoid yang berhasil diisolasi dari

tumbuhan Dalbergia sebanyak 6 senyawa seperti yang dapat dilihat pada Tabel 2.4

dan Gambar 2.5. Substituen yang dijumpai adalah hidroksi dan metoksi.

Tabel 2.4 Distribusi senyawa rotenoid tumbuhan Dalbergia

Senyawa Spesies Pustaka Dalpanol (45) D. paniculata Adinarayana, et al., 1972 Amorphigenin (46) D. latifolia Chibber, et al., 1978 Dalbinol (47) D. latifolia Chibber, et al., 1978 Dalbin (48) D. latifolia Chibber, et al., 1979 Dehidrodalpanol O-glukosida (49) D. paniculata Rao, et al., 1991 6-Ketodehidroamorfigenin (50) D. sissoides Sripathi, et al., 1994



Gambar 2.5 Senyawa jenis rotenoid pada tumbuhan Dalbergia

2.4.4 Isoflavan

Senyawa jenis isoflavan yang berhasil diisolasi dari tumbuhan Dalbergia

sebanyak 5 senyawa. Substituen yang banyak dijumpai diantaranya adalah hidroksi,

metoksi dan geranil. Hal ini dapat dilihat pada Tabel 2.5 dan Gambar 2.6.

Tabel 2.5 Distribusi senyawa isoflavan tumbuhan Dalbergia

Senyawa Spesies Pustaka Candatenin F (51) D. candenatensis Cheenpracha, et al., 2009 (R)-(-)-Klausekuinon (52) D. candenatensis Hamburger, et al., 1987 Odoriflaven (53) D. odorifera Yu, et al., 2007 5’-Metoksi vestitol (54) D. odorifera Yu, et al., 2007 (3R)-Vestitol (55) D. parviflora Umehara, et al., 2009



Gambar 2.6 Senyawa jenis isoflavan pada tumbuhan Dalbergia

2.4.5 Isoflavanon

Berdasarkan studi literatur, senyawa jenis isoflavanon yang berhasil

diisolasi dari tumbuhan Dalbergia bekisar 15 senyawa seperti yang dapat dilihat

pada Tabel 2.6 dan Gambar 2.7. Substituen yang dijumpai adalah hidroksi, metoksi

dan isoprenil.

Tabel 2.6 Distribusi senyawa isoflavanon tumbuhan Dalbergia

Senyawa Spesies Pustaka (3R)-7,2’-Dihidroksi-4’,5’-dimetoksiisoflavanon (58)

D. louvelii Beldjoudi, et al., 2003

Violanon (59) D. oliveri Pleumpanupat, et al., 2013 Dalparvin A (60) D. parviflora Umehara, et al., 2009 Kenusanon (61) D. parviflora Umehara, et al., 2008 (3R,3S)-Onogenin (62) D. parviflora Umehara, et al., 2009 (3R,3S)-Vestiton (63) D. parviflora Umehara, et al., 2009 (3R,3S)-7,3’-Dihidroksi-4’-metoksiisoflavanon (64)

D. parviflora Umehara, et al., 2009

(3R,3S)-3-O-Metilviolanon (65) D. parviflora Umehara, et al., 2009 (3S)-Sativanon (66) D. parviflora Umehara, et al., 2009 (3S)-Violanon (67) D. parviflora Umehara, et al., 2009 (3S)-Secundiflorol H (68) D. parviflora Umehara, et al., 2009 Dalhorridin (69) D. horrida Narayanan, et al., 2007



Lanjutan Tabel 2.6

Senyawa Spesies Pustaka Dalhorridinin (70) D. horrida Narayanan, et al., 2007 Dalparvin B (71) D. parviflora Umehara, et al., 2009 Dalparvin C (72) D. parviflora Umehara, et al., 2009

Gambar 2.7 Senyawa jenis isoflavanon pada tumbuhan Dalbergia

2.5 Biosintesis Senyawa Pterokarpan

Biosintesis senyawa pterokarpan pada prinsipnya berasal dari biosintesis

flavonoid, yakni penggabungan jalur skhimat unit C6-C3 dengan asetat malonat



menghasilkan unit kerangka C6-C3-(C2+C2+C2). Berdasarkan struktur flavonoid

tersebut, cincin A berasal dari jalur asetat malonat, sedangkan cincin B dan tiga

atom karbon dari rantai propan berasal dari jalur skhimat.

Selanjutnya cincin A melalui reaksi keto-enol secara enzimatik

menghasilkan gugus hidroksi yang selang seling. Dengan demikian oksigenasi di

cincin A satu sama lainya berada dalam posisi meta. Penggabungan jalur skhimat

dan asetat malonat menghasilkan tetraketida sebagai intermediet membentuk

senyawa flavonoid. Reaksi kondensasi tetraketida pada senyawa flavonoid

menghasilkan senyawa calkon. Siklisasi senyawa calkon melalui enzim isomerase

menghasilkan senyawa flavanon. Selanjutnya senyawa flavanon melalui reaksi

penataan ulang atau reaksi oksidasi menghasilkan berbagai jenis golongan

flavonoid seperti turunan isoflavanon, flavon, flavonol, dihidroflavonol, dan

sebagainya. Penataan ulang senyawa turunan flavanon melalui pembentukan

karbokation di C-3 mengakibatkan migrasi aromatik dari C-3 ke C-2 menghasilkan

senyawa isoflavanon. Siklisasi antara gugus karbonil C=O dengan aromatik di C-

2’ menghasilkan senyawa turunan pterokarpan.

Selanjutnya, sebagai akibat dari berbagai perubahan yang disebabkan oleh

enzim, senyawa flavonoid termasuk senyawa pterokarpan mengalami reaksi

sekunder menghasilkan berbagai gugus fungsi, seperti ikatan rangkap, gugus

hidroksil, gugus karbonil, dan sebagainya. Adapun jalur biosintesis flavonoid

membentuk pterokarpan tercantum pada Gambar 2.8.



Gambar 2.8 Biosintesis senyawa pterokarpan

2.6 Ekstraksi dan Isolasi Senyawa Pterokarpan

Ekstraksi senyawa pterokarpan umumnya dilakukan menggunakan pelarut

semi polar seperti diklorometan, kloroform atau etilasetat. Proses ekstraksi senyawa

pterokarpan Dalbergia umumnya dilakukan pada suhu kamar (Cheenpracha, et al.,

2009; Alencar et al.,1972). Selanjutnya, pemisahan dan pemurnian senyawa

pterokarpan menggunakan metode kromatografi seperti kolom kromatografi dan

kromatografi radial (Kaennakam, et al., 2015). Proses ekstraksi, dan isolasi

senyawa pterokarpan Dalbergia tercantum pada Tabel 2.7.



Tabel 2.7 Ekstraksi dan isolasi senyawa pterokarpan Dalbergia

Spesies Ekstrak atau partisi Pustaka D. candenatensis Ekstraksi dengan diklorometana dan

pemisahan dengan kolom kromatografi tekan

Cheenpracha, et al., 2009

D. decipularis Ekstraksi dengan aseton dan pemisahan dengan kolom kromatografi

Alencar et al., 1972

D. odorifera Ekstraksi dengan etanol kemudian partisi dengan n-heksana, etilasetat dan butanol. Pemisahan ekstrak etilasetat yang mengandung pterokarpan menggunakan kolom kromatografi

Wang, et al., 2014

D. velutina Ekstraksi dengan diklorometana selanjutnya pemisahan dengan kolom kromatografi dan kromatografi radial

Kaennakam, et al., 2015

2.7 Analisis Spektroskopi Senyawa Pterokarpan

Struktur molekul senyawa turunan pterokarpan Dalbergia ditetapkan

berdasarkan metode spektroskopi seperti spektrum ultraviolet (UV), inframerah

(IR), nuclear magnetic resonance (NMR) dan spektroskopi massa (MS).

Spektroskopi NMR merupakan spektroskopi yang paling memegang peranan

penting dalam penentuan struktur molekul senyawa organik yang akan dianalisis.

Dalam subbab ini akan dibahas analisis spektroskopi senyawa pterokarpan

velukarpin A (Kaennakam, et. al., 2015). Struktur senyawa velukarpin A dapat

dilihat pada Gambar 2.9.



Gambar 2.9 Struktur senyawa velukarpin A

Spektrum UV senyawa velukarpin A (53) dalam metanol memberikan

serapan maksimum pada λmaks 270 dan 327 nm. Spektrum HRESIMS (high

resolution electron impact mass spectra) memperlihatkan ion molekul pada m/z

443,1838 [M+Na]+ dengan rumus molekul C26H28O5Na yang sesuai dengan struktur

molekul velukarpin A.

Spektrum IR dalam identifikasi senyawa organik berguna untuk

menentukan gugus fungsi senyawa. Spektrum IR senyawa velukarpin A (53)

memperlihatkankan pita serapan pada bilangan gelombang υmaks :3645 cm-1 yang

merupakan ciri khas gugus hidroksi -OH , 1624 cm-1 untuk C=C aromatik dan 1145

cm-1 untuk C-O-C eter.

Spektrum 1H-NMR senyawa velukarpin A (53) dalam CDCl3 (400 MHz)

memperlihatkan empat sinyal proton pada pergeseran kimia δH (ppm) yakni sinyal

triplet pada δH 3,66 (J = 10,1 Hz); sinyal doublet doublet pada δH 4,30 (J= 10,1;

4,8 Hz); sinyal multiplet pada δH 3,49 dan sinyal doublet pada δH 5,52 (J = 7,2 Hz)

merupakan ciri khas dari kerangka struktur senyawa pterokarpan pada H-6, H-6a

dan H-11a.



Dua sinyal singlet proton aromatik pada δH 6,75 dan 6,48 ppm serta

sepasang sinyal doublet ortho proton aromatik dengan (J=8,4 Hz) pada δH 7,27 dan

6,57 (J=8,4) ppm merupakan sinyal proton aromatik senyawa velukarpin A (53).

Sinyal proton metilendioksi mempunyai multiplisitas doublet (J= 1,2 Hz)

pada δH 5,94 dan 5,92 ppm. Sinyal proton geranil pada velukarpin A (53) terdiri

dari dua sinyal proton olefin pada δH 5,28 dan 5,11 ppm, tiga sinyal metilen pada

δH 3,46; 2,13 dan 2,08 ppm dan tiga sinyal singlet metil pada δH 1,84 , 1,72, dan

1,63 ppm (Kaennakam, et. al., 2015).

2.8 Bioaktivitas Senyawa Fenolik Dalbergia

Senyawa-senyawa fenolik khususnya flavonoid pada Dalbergia, sebagian

telah diuji aktivitasnya sebagai antioksidan, antifungi, antikanker, antiandrogenik,

antigiardial, antidiare, analgesik, antiinflamasi, antitumor dan anti-TBC. Hasil uji

aktivitas tersebut dapat dilihat pada Tabel 2.8

Tabel 2.8 Distribusi bioaktivitas senyawa fenolik tumbuhan Dalbergia

Spesies Golongan Uji Aktivitas Pustaka D. candenatensis Flavonoid Antifungi,

antikanker Hamburger, et al., 1987; Cheenpracha, et al., 2009

D. cochinchinensis Flavonoid Antiandrogenik Pathak, et al., 1997 D. congestiflora Flavonoid Antifungi Martinez, et al., 2012 D. frutescens flavonoid Antigiardial Khan, et al., 2000 D. lanceolaria Flavonoid Antidiare,

analgesik, antiinflamasi

Kale, et al., 2007

D. odorifera Flavonoid Antioksidan, antikanker, antitumor

Cheng, et al., 1998; Yu, et al., 2007; Wang, et al., 2014

D. parviflora Flavonoid Antikanker Umehara, et al., 2009; Songsiang, et al., 2011

D. melanoxylon Flavonoid Anti-TBC Mutai, et al., 2013



2.9 Tinjauan tentang HIV

HIV (human immunedeficiency virus) merupakan jenis virus yang

menyerang sel darah putih (sel limfosit) dan menyebabkan sistem imun berkurang.

Virus ini juga dapat menimbulkan penyakit AIDS (acquired immuno deficiency

syndrome). Pengobatan yang sering digunakan untuk pasien HIV antara lain

inhibitor nucleoside reverse transcriptase, inhibitor non-nucloside reverse

transcriptase dan penghambat protease. HIV protease sebagai target utama terapi

anti-HIV (Sharma, et al., 2014).

Reverse transcriptase merupakan jenis enzim yang berfungsi mengubah

RNA virus menjadi DNA yang kemudian diintregasikan ke dalam sel limfosit dan

mengkopi dirinya menjadi virus baru. HIV menyerang sistem imun manusia yakni

menyerang sel limfosit T helper yang memiliki reseptor CD4 dipermukaannya.

Limfosit T helper berfungsi menghasilkan zat kimia yang berperan sebagai

perangsang pertumbuhan dan pembentukan sel-sel lain dalam sistem imun dan

antibodi. Oleh karena itu, ketika virus HIV menyerang sel limfosit T helper maka

yang terganggu bukan hanya fungsi limfosit T tetapi juga limfosit B, monosit,

makrofag, dan merusak sistem imunitas (Jayanti, 2008).

Pengobatan yang selama ini dilakukan untuk pengidap virus HIV adalah

dengan terapi antiretroviral (ARV) dengan obat-obatan. Obat yang digunakan dapat

memperlambat pertumbuhan virus dan meningkatkan atau mempertahankan fungsi

imun. Dengan demikian, waktu pertumbuhan virus diperlambat serta penyebaran

penyakit HIV dapat ditekan. Setiap golongan obat ARV menyerang HIV dengan

cara yang berbeda. Golongan obat ARV yang pertama adalah nucleoside reverse



transcriptase inhibitor (NRTI) atau disebut juga analog nukleosida. Obat NRTI

bekerja dengan cara menghambat kerja enzim reverse transcriptase yang dapat

mengubah kode genetik HIV, yakni RNA virus menjadi DNA. Obat yang kedua

adalah Non-nucleoside reverse transcriptase inhibitor (NNRTI) yang spesifik

dalam menghambat enzim reverse trancriptase HIV-1 (Hunter, et al., 2007). Obat

yang ketiga adalah protease inhibitor (PI) yang bekerja dengan cara menghambat

pematangan virus baru oleh enzim protease, sehingga akan terbentuk partikel virus

yang tidak dapat menginfeksi. Obat golongan ARV yang keempat adalah entry

inhibitor yang dibagi menjadi attachment inhibitor, coreceptor antagonist, dan

fusion inhibitor (Bakty, 2010).

Berdasarkan studi literatur, sampai saat ini belum pernah dilaporkan

senyawa pterokarpan yang menghambat virus HIV-1 dari genus Dalbergia.



BAB III

METODE PENELITIAN

3.1 Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian ini dilakukan pada bulan November 2015-Mei 2016 di

Laboratorium Penelitian, Departemen Kimia, Fakultas Sains dan Teknologi,

Universitas Airlangga, Surabaya. Analisis spektroskopi UV-Vis dilakukan di

Laboratorium Kimia Analitik, Departemen Kimia, Fakultas Sains dan Teknologi,

Universitas Airlangga, Surabaya. Analisis spektroskopi massa dilakukan di

Laboratorium Basic Science, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam,

Institut Teknologi Bandung, Bandung. Analisis spektroskopi IR dilakukan di

Laboratorium Instrumen, Departemen Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu

Pengetahuan Alam, Universitas Pendidikan Indonesia, Bandung. Analisis

spektroskopi NMR dan uji aktivitas anti-HIV dilakukan di Laboratorium Institute

of Tropical Disease, Universitas Airlangga, Surabaya.

3.2 Sampel dan Bahan Penelitian

3.2.1 Sampel penelitian

Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah kulit batang Dalbergia

latifolia Roxb. yang diperoleh dari Desa Purwodadi, Kecamatan Purwosari,

Kabupaten Pasuruan, Jawa Timur. Identifikasi tumbuhan ditentukan di Herbarium

Kebun Raya LIPI Purwodadi.

25



3.2.2 Bahan penelitian

Pelarut yang digunakan untuk keperluan ekstraksi berasal dari kualitas

teknis yang sudah didestilasi dan kualitas pro analisis untuk pemurnian dan analisis

seperti metanol, n-heksana, etilasetat, kloroform, diisopropileter, dan aseton. Fasa

diam yang digunakan dalam pemisahan dan pemurnian adalah silika gel 60 G250

untuk keperluan KCV dan kromatografi kolom tekan, plat silika gel 60 GF254 0.25

mm (Merck) untuk keperluan kromatografi lapis tipis (KLT), serta silika gel 60

PF254 untuk keperluan kromatografi radial. Pereaksi yang digunakan untuk

penampak noda ialah pereaksi cerium sulfat, anisaldehida dan lampu UV. Sel yang

digunakan untuk uji aktivitas anti-HIV adalah HIV-1 presistenly infected MT4

sedangkan sel limfosit yang digunakan adalah sel T MOLT4. Bahan yang

digunakan dalam pembuatan kultur sel dan virus diantaranya adalah media RPMI

1640 dengan ditambahkan fetal bovine serum (FBS) dan natrium bikarbonat.

Pereaksi yang digunakan adalah trypan biru..

3.3 Peralatan Penelitian

Peralatan yang digunakan dalam penelitian ini adalah alat destilasi, rotary

vacuum evaporator, KCV, kromatografi kolom gravitasi, kromatografi radial, pipet

mikro, kuvet mikro, lampu UV serta alat gelas yang umum. Peralatan

spektrofotometer antara lain spektrofotometer UV-Vis Shimadzu 1800,

spektrofotometer FTIR Perkin Elmer, spektrometer HR-ESI-MS merck Waters

LCT XE ESI-TOF (electro spray ionization-time of flight), serta spektrofotometer

NMR JEOL ECA 400 yang beroperasi pada 400 MHz (1H-NMR) dan 100 MHz



(13C-NMR). Peralatan yang digunakan untuk uji anti-HIV adalah 96 well plate,

tabung T75 dan hemositometer.

3.4 Prosedur Kerja

3.4.1 Ekstraksi dan pemurnian senyawa

Kulit batang Dalbergia latifolia Roxb. sebanyak 5,0 kg dikeringkan dan

digiling hingga berbentuk serbuk. Serbuk kulit batang tumbuhan diekstraksi dengan

metanol selama 24 jam pada suhu kamar dengan cara maserasi. Proses ekstraksi

dilakukan sebanyak dua kali kemudian dipekatkan menggunakan rotary vacum

evaporator sehingga didapatkan ekstrak metanol pekat.

Ekstrak metanol pekat tersebut diekstraksi dengan cara partisi

menggunakan n-heksana dan menghasilkan dua lapisan yakni lapisan atas (ekstrak

n-heksana) dan lapisan bawah (ekstrak metanol). Selanjutnya ekstrak n-heksana

yang mengandung senyawa non polar yang dapat menganggu dalam proses

pemisahan senyawa target dipisahkan. Ekstrak metanol 450 mL kemudian

ditambah air sebanyak 50 mL dan dipartisi dengan etilasetat. Ekstrak etilasetat hasil

partisi mengandung senyawa pterokarpan yang jadi target penelitian dan senyawa

fenolik lainnya. Monitoring senyawa pterokarpan dalam ekstrak etilasetat dapat

diketahui dengan pereaksi anisaldehid yakni ditandai adanya warna merah pekat

dan berfluorisensi di bawah lampu UV.

Ekstrak etilasetat sebelum dilakukan proses pemisahan dengan KCV,

terlebih dahulu dilakukan analisis KLT untuk mengetahui kondisi eluen yang

terbaik dalam pemisahan KCV. Pemisahan ekstrak etilasetat dengan KCV

dilakukan menggunakan campuran eluen yang ditingkatkan kepolarannya secara



gradien dengan campuran 9:1, 4:1, 7:3, 1:1 dan 3:7. Hasil elusi ini akan

menghasilkan beberapa fraksi utama dan selanjutnya dilakukan pemisahan

menggunakan kromatografi kolom cepat yang dimonitoring dengan pereaksi

anisaldehid. Pemurnian senyawa pterokarpan dilakukan menggunakan

kromatografi radial dan dilakukan analisis kemurnian dengan KLT dengan eluen

yang berbeda, minimal menggunakan tiga sistem eluen yang berbeda. Senyawa

dianggap murni jika memperlihatkan satu noda dengan berbagai eluen.

3.4.2 Penentuan struktur molekul senyawa hasil isolasi

Penentuan struktur molekul senyawa hasil isolasi ditentukan dengan

analisis spektroskopi ultraviolet (UV), inframerah (IR), mass spectra (MS) dan

nuclear magnetic resonance (NMR).

Pengukuran spektrum UV senyawa pterokarpan hasil isolasi dalam

metanol dilakukan untuk mengetahui panjang gelombang maksimum (λmaks) dan

pola serapan inti aromatik pterokarpan.

Pengukuran spektrum IR dalam KBr dilakukan untuk menentukan gugus

fungsi senyawa pterokarpan. Senyawa pterokarpan dalam KBr dibuat dalam bentuk

pelet. Pelet tersebut diukur pita serapannya berdasarkan bilangan gelombang (υmaks)

senyawa pterokarpan.

Pengukuran spektrum MS dilakukan untuk menentukan massa relatif Mr

dan rumus molekul senyawa pterokarpan hasil isolasi menggunakan HR-ESI-MS.

Senyawa pterokarpan hasil isolasi dilarutkan dengan campuran air:asam formiat

(1:1) melalui percobaan ionisasi kuasi molekul positif menghasilkan ion pada m/z



[M+H]+ atau percobaan ionisasi kuasi molekul negatif menghasilkan ion pada m/z

[M-H]-.

Pengukuran NMR dapat dilakukan dengan cara satu dimensi 1D NMR dan

dua dimensi 2D NMR. Analisis 1D NMR meliputi pengukuran 1H dan 13C-NMR

untuk pengukuran proton dan karbon. Daerah pengukuran pergeseran kimia 1H-

NMR adalah pada δH 0-14 ppm, sedangkan daerah pengukuran pergeseran kimia

13C-NMR adalah pada δC 0-220 ppm. Pelarut yang digunakan dalam pengukuran

NMR menggunakan CDCl3 yang diketahui pergeseran kimianya pada δH 7,26 ppm

untuk proton dan δC 77,0 ppm untuk karbon. Pengukuran spektrum 2D NMR

senyawa pterokarpan dengan menggunakan pengukuran HMQC dan HMBC

dengan tujuan untuk justifikasi substituen yang terikat pada inti aromatik

pterokarpan. Analisis spektrum HMQC berguna untuk mengetahui korelasi antara

proton dan karbon dalam satu ikatan, sedangkan analisis spektrum HMBC berguna

untuk mengetahui korelasi antara proton dan karbon dalam dua atau tiga ikatan.

3.4.3 Penentuan aktivitas anti-HIV-1

3.4.3.1 Penyiapan kultur

Kultur sel limfosit T MOLT-4 dan virus HIV-1 MT4 dibiakkan dalam

media RPMI-1640 yang mengandung 10% fetal bovine serum dan 1% natrium

bikarbonat. Pemisahan pellet dan supernatan dalam tabung berisi 5 mL RPMI

dilakukan dengan cara sentrifuge dengan kecepatan 1500 rpm. Pellet yang

terbentuk selanjutnya ditransfer ke dalam tabung T75 yang telah berisi 15 mL

RPMI. Kemudian dilakukan penghitungan konsentrasi sel dan virus menggunakan

pereaksi trypan biru.



3.4.3.2 Penentuan aktivitas anti-HIV

Uji aktivitas anti-HIV dilakukan menggunakan uji syncytia. Senyawa uji

ditempatkan dalam 96 well plate dengan kontrol negatif berupa media RPMI-1640

ditambah sel HIV-1 MT4 dan sel T MOLT-4 serta senyawa uji. Konsentrasi

senyawa uji yang digunakan diantaranya 25; 12,5; 6,25; 3,125; 1,54 dan 0,78 ppm.

Sel HIV-1 MT4 sebanyak 50 µL ditambahkan ke dalam well yang mengandung

20.000 sel/well. Sel tersebut kemudian diinkubasi dengan karbondioksida. Setelah

2 jam, ditambahkan 50 µL sel T MOLT-4 dan dalam setiap well mengandung

400.000 sel. Sel diinkubasi selama 7 hari dengan karbondioksida kemudian

dilakukan observasi sel dan menghitung pembentukan syncytia untuk mendapatkan

nilai IC50.

3.4.3.3 Analisis data

Analisis data untuk menentukan nilai konsentrasi daya hambat IC50

senyawa pterokarpan hasil isolasi dalam berbagai konsentrasi diamati melalui

menghitung pembentukan syncytia (sel tunggal yang memiliki beberapa inti karena

fusi sel atau pembelahan inti). Jumlah syncytia ini kemudian digunakan untuk

menghitung persentase hambatan menggunakan rumus berikut :

Dengan ketentuan a adalah jumlah syncytia pada kontrol negatif dan b adalah

jumlah syncytia pada senyawa uji.

% Hambatan = a − b𝑎 x %



Berdasarkan data persentase hambatan setiap konsentrasi tersebut,

dihitung nilai IC50 (konsentrasi senyawa uji yang dapat menghambat pertumbuhan

virus HIV-1 sebesar 50%) dengan fungsi forecast pada aplikasi microsoft excel.

3.5 Diagram Alir Penelitian

Berikut adalah diagram alir penelitian:

Gambar 3.1. Diagram alir penelitian

Serbuk kulit batang Dalbergia latifolia Roxb.

Maserasi dengan metanol

Ekstrak metanol pekat

Kromatografi kolom tekan Kromatografi radial

Spektroskopi UV, IR, MS, NMR Uji aktivitas melawan virus HIV-1

Ekstrak n-heksana Ekstrak metanol bebas lemak

Ekstrak metanol sisa

Ekstrak etilasetat

Analisis KLT KCV

Fraksi-fraksi utama

Senyawa pterokarpan

Struktur pterokarpan

Ekstraksi dengan n-heksana

Aktivitas anti-HIV

Ditambah air 10%

Ekstraksi dengan etilasetat



BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Ekstraksi dan Pemurnian Senyawa Fenolik

Ekstraksi senyawa pterokarpan dan isoflavan yang terkandung dalam

serbuk kulit batang Dalbergia latifolia Roxb. sebanyak 3,0 kg menggunakan

metode ekstraksi padat-cair yakni maserasi dengan pelarut metanol pada suhu

kamar. Proses maserasi ini dilakukan sebanyak dua kali dalam 48 jam. Hasil

ekstraksi diuapkan dengan rotary vacum evaporator sehingga diperoleh ekstrak

metanol pekat. Ekstrak metanol pekat yang diperoleh diekstraksi dengan metode

ekstraksi cair-cair secara partisi dengan pelarut n-heksana untuk menghilangkan

lemak dan senyawa-senyawa non polar yang mengganggu analisis. Hasil partisi

tersebut menghasilkan dua lapisan yakni lapisan atas adalah fraksi mengandung

senyawa non polar dan lapisan bawah adalah fraksi polar yang mengandung

senyawa fenolik. Ekstrak metanol ditambahkan dengan air 10% kemudian dipartisi

dengan etilasetat. Ekstraksi tersebut menghasilkan dua lapisan diantaranya lapisan

bawah berupa ekstrak metanol-air dan lapisan atas merupakan fraksi semipolar.

Pelarut etil asetat dari fraksi semipolar diuapkan dengan rotary vacum eveporator

sehingga diperoleh ekstrak pekat etilasetat sebanyak 25 g yang mengandung

senyawa pterokarpan dan isoflavan.

Ekstrak etil asetat, sebelum dilakukan pemisahan dengan kromatografi cair

vakum (KCV) terlebih dahulu dilakukan analisis kromatografi lapis tipis untuk

menentukan kompleksitas senyawa yang terkandung dalam ekstrak tersebut serta

untuk menentukan eluen yang tepat dalam pemisahan.

32



Pemisahan ekstrak etilasetat (24 g) dengan KCV menggunakan eluen n-

heksana : etilasetat yang ditingkatkan secara gradien dengan perbandingan 9:1; 8:2;

7:3; 1:1; dan 3:7 menghasilkan tiga fraksi utama yaitu fraksi A-C.

Fraksi A sebanyak 796 mg memperlihatkan noda merah dengan pereaksi

anisaldehida yang merupakan ciri khas senyawa pterokarpan untuk target

pemisahan dan pemurnian. Pemisahan menggunakan kromatografi kolom tekan

terhadap fraksi A dengan campuran eluen n-heksana : etilasetat (9:1 sampai 7:3)

menghasilkan empat subfraksi utama yakni A1-A4. Pemisahan dan pemurnian

subfraksi A3 (216,8 mg) menggunakan kromatografi radial dengan eluen n-heksana

: aseton (9,5:0,5 sampai 7:3) menghasilkan senyawa murni pterokarpan DL1

sebanyak 10,2 mg berwujud padatan putih.

Pemisahan fraksi C sebanyak 1652 mg menggunakan kromatografi kolom

tekan dengan campuran eluen n-heksana : etil asetat (9:1 sampai 7:3) menghasilkan

dua subfraksi C1 dan C2. Pemisahan subfraksi C1 menggunakan kromatografi radial

dengan eluen n-heksana : etilasetat (9,5 : 0,5 sampai 8:2) menghasilkan subfraksi

C11, C12 dan C13. Pemurnian fraksi C12 menggunakan kromatografi radial dengan

campuran eluen n-heksana : kloroform (1:1) sampai kloroform 100% menghasilkan

senyawa murni isoflavan DL2 sebanyak 4,0 mg berwujud padatan putih.

Uji kemurnian senyawa pterokarpan DL1 dengan analisis KLT

menggunakan tiga sistem eluen yang berbeda yakni campuran n-heksana : aseton

(8,5:1,5), n-heksana : kloroform (1:1) dan n-heksana : eter (8:2) memperlihatkan

spot tunggal. Uji kemurnian senyawa DL2 dengan analisis KLT menggunakan eluen

yang berbeda yakni kloroform : metanol (9,5:0,5), kloroform : etil asetat (9:1) dan



n-heksana : etilasetat (1:1) memperlihatkan spot tunggal. Senyawa pterokarpan DL1

mempunyai titik leleh sebesar 132-133oC. Senyawa DL2 tidak diukur titik lelehnya

karena jumlahnya yang sedikit.

Senyawa pterokarpan hasil isolasi DL1 dan isoflavan DL2 selanjutnya

ditentukan struktur molekulnya menggunakan spektroskopi UV, HRESIMS, 1D

dan 2D NMR serta uji aktivitas anti-HIV.

4.2 Penentuan Struktur Senyawa Hasil Isolasi

4.2.1 Senyawa medikarpin (DL1)

Senyawa DL1 hasil isolasi berwujud padatan berwarna putih mempunyai

titik leleh sebesar 132-133oC. Spektrum UV senyawa DL1 dalam metanol

memberikan serapan maksimum pada λmaks nm (log ε): 231 (4,40); 267 (3,89);

281sh (4,32); 286 (4,36) yang merupakan ciri khas senyawa turunan pterokarpan

(Maekawa, et al., 1970). Analisis spektrum UV senyawa DL1 hasil isolasi dapat

dilihat pada Lampiran-1.

Spektrum IR senyawa DL1 hasil isolasi dalam KBr memperlihatkan pita

serapan bilangan gelombang maksimum υmaks (cm-1) pada 3437 (vibrasi ulur O-H),

2920 dan 2851 (vibrasi ulur C-H aromatik), 1622; 1599; 1497; 1470 dan 1446

(vibrasi ulur C=C aromatik), 1157 dan 1115 (vibrasi ulur C-O-C eter). Berdasarkan

spektrum IR, senyawa DL1 hasil isolasi diketahui mempunyai gugus fungsi

hidroksi, aromatik dan eter. Hasil pengukuran spektrum IR senyawa DL1 terlampir

pada Lampiran-2.



Spektrum 1H-NMR senyawa pterokarpan DL1 dalam CDCl3 (400 MHz)

memperlihatkan empat sinyal proton yakni sinyal triplet pada δH 3,62 ppm (1H, J

= 11,0 Hz); sinyal doublet doublet pada δH 4,24 ppm (1H, J=11,0 dan 5,3 Hz);

sinyal multiplet pada δH 3,52 ppm (1H) dan sinyal doublet pada δH 5,49 ppm (1H,

J = 6,7 Hz) yang merupakan ciri khas dari kerangka struktur senyawa pterokarpan

pada H-6, H-6a dan H-11a (Abdel-Kader, 2004) seperti terlihat pada Gambar 4.1.

Gambar 4.1. Struktur senyawa pterokarpan

Spektrum 1H-NMR memperlihatkan adanya sepasang sinyal proton

aromatik dengan sistem ABX. Sinyal proton aromatik sistem ABX dari salah satu

inti aromatik pada δH 7,39 ppm (1H, d, J = 8,4 Hz); 6,55 ppm (1H, dd, J = 2,4 dan

8,4 Hz) dan 6,42 ppm (1H, d, 2,4 Hz). Sinyal proton aromatik sistem ABX yang

lain pada δH 7,13 ppm (1H, d, J = 8,8 Hz); δH 6,46 ppm (1H, dd, J = 2,3 dan 8,8

Hz) dan 6,45 ppm (1H, d, J = 2,3 Hz). Berdasarkan sinyal proton kedua aromatik

dengan sistem ABX, maka senyawa pterokarpan DL1 merupakan senyawa

pterokarpan disubstitusi pada C-3/9 atau C-2/9 seperti terlihat pada Gambar 4.2.

Analisis spektrum 1H-NMR senyawa DL1 hasil isolasi terlampir pada Lampiran-3.



Gambar 4.2. Pola substitusi senyawa pterokarpan DL1

Satu sinyal singlet dari gugus metoksi (-OCH3) pada δH 3,77 ppm

menunjukkan bahwa gugus metoksi tersebut terikat pada salah satu inti aromatik

senyawa pterokarpan hasil isolasi. Berdasarkan analisis spektrum 1H-NMR maka

kemungkinan struktur kimia senyawa pterokarpan hasil isolasi adalah 3-hidroksi-

9-metoksi pterokarpan, 2-hidroksi-9-metoksi pterokarpan, 9-hidroksi-3-metoksi

pterokarpan, atau 9-hidroksi-2-metoksi pterokarpan seperti terlihat pada Gambar

4.3.

Gambar 4.3. Kemungkinan struktur senyawa pterokarpan DL1

Analisis spektrum APT 13C-NMR (100 MHz) senyawa DL1 hasil isolasi

(Lampiran-4) memperlihatkan 16 sinyal karbon yang terpisah secara sempurna.

Berdasarkan spektrum APT 13C-NMR diketahui senyawa DL1 terdiri dari enam



atom kuartener (termasuk empat karbon oksiaril pada δC 161,0; 160,6; 157,0 dan

156,6 ppm), delapan karbon metin (CH), satu karbon metilen (CH2) dan satu karbon

metil dari metoksi yang mendukung struktur senyawa pterokarpan pada Gambar

4.3.

Selanjutnya untuk memastikan struktur kimia senyawa DL1 adalah senyawa

3-hidroksi-9-metoksi pterokarpan, 2-hidroksi-9-metoksi pterokarpan, 9-hidroksi-3-

metoksi pterokarpan atau 9-hidroksi-2-metoksi pterokarpan ditentukan berdasarkan

analisis 2D NMR yakni menggunakan spektrum HMQC (Heteronuclear Multiple

Quantum Coherence) pada Lampiran-5 dan HMBC (Heteronuclear Multiple Bond

Correlation) pada Lampiran-6. Analisis spektrum HMQC dan HMBC selain

menentukan struktur molekulnya sekaligus menempatkan posisi atom hidrogen dan

karbon pada struktur senyawa pterokarpan hasil isolasi.

Analisis spektrum HMQC senyawa pterokarpan hasil isolasi bertujuan

untuk menentukan korelasi antara sinyal proton pada 1H-NMR dengan sinyal

karbon pada 13C-NMR dalam satu ikatan. Berdasarkan hasil pengukuran spektrum

HMQC senyawa pterokarpan hasil isolasi memperlihatkan 11 sinyal proton pada

1H-NMR berkorelasi dengan 10 sinyal karbon pada 13C-NMR dalam satu ikatan.

Sebagai contoh, sinyal proton aromatik pada δH 7,39 ppm (1H, d, J = 8,4

Hz) diketahui berkorelasi dengan sinyal karbon pada δC 132,2 ppm, sinyal proton

metilen (CH2) pada δH 3,62 ppm (1H, J = 11,0 Hz) dan δH 4,24 ppm (1H, dd , J =

11,0 dan 5,3 Hz) berkorelasi dengan sinyal karbon pada δC 66,5 ppm serta sinyal

proton metoksi (–OCH3) pada δH 3,77 ppm (3H, s) berkorelasi dengan sinyal

karbon pada δC 55,5 ppm seperti terlihat pada Tabel 4.1.



Tabel 4.1 Data spektrum HMQC senyawa pterokarpan hasil isolasi dalam iCDCl3

δH (mult, J Hz, integritas) δC 7,39 (d, 8,4, 1H) 132,2 7,13 (d, 8,8, 1H) 124,8 6,55 (dd, 8,4; 2,4, 1H) 109,7 6,46 (dd, 8,8; 2,3, 1H) 106.3 6,45 (d, 2,3, 1H) 96,7 6,42 (d, 2,4, 1H) 103,6 5,49 (d, 6,7, 1H) 78,5 3,77 (s, 3H) 55,5 3,62 (t, 11,0, 1H) dan 4,24 (dd, 11,0; 5,3, 1H) 66,5 3,52 (m, 1H) 39,4

Analisis spektrum HMQC hanya dapat menentukan korelasi antara sinyal

proton dengan sinyal karbon dalam satu ikatan sehingga tidak dapat menentukan

sinyal karbon kuarterner serta menentukan kedudukan sinyal proton dan sinyal

karbon senyawa peterokarpan hasil isolasi. Oleh karena itu, analisis spektrum

HMBC sangat diperlukan untuk menentukan kedudukan sinyal proton dan sinyal

karbon senyawa peterokarpan hasil isolasi. Analisis spektrum HMBC berguna

untuk menentukan korelasi jarak jauh antara sinyal proton pada 1H-NMR dengan

sinyal karbon 13C-NMR dalam dua atau tiga ikatan.

Berdasarkan kerangka struktur senyawa pterokarpan hasil isolasi pada

Gambar 4.4 dan spektrum HMBC (Lampiran-6) terlihat adanya korelasi sinyal

metilen H-6 (δH 3,62 dan 4,24 ppm) dengan empat sinyal karbon yakni dua atom

karbon kuartener pada δC 156,6 dan 119,1 ppm serta dua sinyal metin pada δC 78,5

dan 39,4 ppm. Hasil korelasi tersebut menunjukkan bahwa δC 156,6 ppm



berkedudukan di C-4a, δC 119,1 ppm berkedudukan di C-6b, δC 78,5 ppm

berkedudukan di C-11a dan δC 39,4 ppm berkedudukan di C-6a. Korelasi sinyal

proton H-6 (δH 3,62 dan 4,24 ppm) dengan sinyal karbon δC 156,6; 119,1; 78,5 dan

39,4 ppm dapat dilihat pada Gambar 4.4.

Gambar 4.4. Korelasi sinyal proton H-6 dengan C-4a, C-6a, C-6b dan C-11a

Sinyal doublet (1H, J = 8,4 Hz) pada δH 7,39 ppm dari sinyal proton

aromatik sistem ABX memperlihatkan korelasi dengan dua atom karbon kuartener

yakni pada δC 156,6 ppm (C-4a) dan 78,5 ppm (C-11a). Hasil ini menunjukkan

bahwa sinyal proton aromatik pada δH 7,39 ppm (1H, d, J = 8,4 Hz) mempunyai

kedudukan di H-1 dengan multiplisitas ortho. Dengan demikian senyawa

pterokarpan hasil isolasi adalah 3-hidroksi-9-metoksipterokarpan atau 9-hidroksi-

3-metoksipterokarpan. Jika senyawa hasil isolasi adalah 2-hidroksi-9-

metoksipterokarpan atau 9-hidroksi-2-metoksipterokarpan maka sinyal proton pada

δH 7,39 ppm mempunyai multiplisitas meta. Korelasi antara sinyal proton aromatik

di H-1 dengan sinyal karbon pada δC 156,6 ppm (C-4a) dan 78,5 ppm (C-11a) dapat

dilihat pada Gambar 4.5.



Gambar 4.5. Korelasi sinyal proton H-1 dengan C-4a dan C-11a

Korelasi sinyal proton aromatik dari sistem ABX pada δH 6,55 ppm (1H, dd,

J = 8,4 dan 2,4 Hz) dengan dua sinyal karbon kuarterner dan satu sinyal metin pada

δC 157,0 (karbon oksiaril); 112,6; dan 103,6 ppm seperti terlihat pada Gambar 4.6

menunjukkan bahwa δH 6,55 ppm berkedudukan di H-2 serta sinyal karbon δC 157,0

di C-3, δC 112,6 ppm di C-11b dan δC 103,6 ppm di C-4. Penempatan kedudukan

sinyal karbon δC 103,6 ppm di C-4 diperkuat oleh data spektrum HMQC

berdasarkan data Tabel 4.1 yakni sinyal proton aromatik δH 6,42 ppm (1H, d, J =

2,4 Hz) di H-4 berkorelasi dengan sinyal karbon δC 103,6 ppm. Korelasi sinyal

proton H-2 (δH 6,55 ppm) dengan sinyal karbon δC 157,0 ppm (C-3), 103,6 ppm (C-

4) dan 112,6 ppm (C-11b) dapat dilihat pada Gambar 4.6.

Gambar 4.6. Korelasi sinyal proton H-2 dengan C-3, C-4 dan C-11b

Korelasi sinyal proton aromatik H-4 pada δH 6,42 ppm (1H, d, J = 2,4 Hz)

dengan dua sinyal karbon kuarterner dan satu sinyal metin pada δC 157,0 ppm (C-

3); 112,6 ppm (C-11b) dan 109,7 ppm menunjukkan bahwa δC 109,7 ppm di C-2.



Korelasi sinyal proton di H-4 (δH 6,42 ppm) dengan sinyal karbon δC 157,0 ppm (C-

3); 112,6 ppm (C-11b) dan 109,7 ppm (C-4) dapat dilihat pada Gambar 4.7.

Gambar 4.7. Korelasi sinyal proton H-4 dengan C-2, C-4a dan C-11b

Dengan spektrum 1H-NMR dan spektrum HMQC dapat ditentukan sinyal

proton H-7 adalah δH 7,13 ppm (1H, d, J = 8,8 Hz) dengan sinyal karbon δC 124,8

ppm, sinyal proton di-H-8 adalah δH 6,46 ppm (1H, dd, J = 8,8 dan 2,3 Hz) dengan

sinyal karbon δC 106.3 ppm dan sinyal proton di H-10 adalah 6,45 ppm (1H, d, J

=2,3 Hz) dengan sinyal karbon δC 96,7 ppm.

Berdasarkan data analisis spektrum 1H NMR, 13C NMR, HMQC dan

HMBC maka diketahui struktur senyawa pterokarpan hasil isolasi adalah 3-

hidroksi-9-metoksipterokarpan seperti terlihat pada Gambar 4.8. Senyawa 3-

hidroksi-9-metoksipterokarpan dikenal dengan nama medikarpin (Martínez-Sotres,

et al., 2012).

Gambar 4.8. Struktur medikarpin hasil isolasi



Sinyal singlet gugus metoksi pada δH 3,77 ppm memperlihatkan korelasi

dengan sinyal karbon pada δC 161,0 ppm. Sinyal karbon pada δC 161,0 ppm

berkedudukan di C-9 didukung oleh korelasi antara H-7, H-8 dan H-10 dengan

sinyal karbon dalam dua atau tiga ikatan seperti pada Gambar 4.9. Berdasarkan data

spektrum HMBC (Lampiran-6) ditunjukkan bahwa gugus metoksi (-OCH3) terikat

di C-9 dan gugus hidroksi (-OH) di C-3.

Gambar 4.9. Korelasi H-7, H-8 dan H-10 pada spektrum HMBC

Tabel 4.2. Data spektrum 1H dan 13C-NMR senyawa medikarpin dalam CDCl3.

No.C δH (mult, J Hz) δC HMBC 1 7,39 (d, 8,4) 132,2 C-4a, C-11a 2 6,55 (dd, 8,4; 2,4) 109,7 C-3; C-4; C-11b 3 - 157,0 - 4 6,42 (d, 2,4) 103,6 C-2; C-3, C-11b 4a - 156,6 - 6 3,62 (t, 11,0)

4,24 (dd, 11,0; 5,3) 66,5 C-4a; C-6a; C-6b, C-11a

6a 3,52 (m) 39,4 C-6; C-6b, C-10a 6b - 119,1 - 7 7,13 (d, 8,8) 124,8 C-6a; C-10a 8 6,46 (dd,8,8; 2,3) 106.3 C-6b; C-10 9 - 161,0 - 10 6,45 (d, 2,3) 96,7 C-6b; C-8; C-9 10a - 160,6 - 11a 5,49 (d, 6,7) 78,5 C-1; C-4a. C-6; C-11b 11b - 112,6 - 9-OCH3 3,77 (s) 55,5 C-9



Berdasarkan data analisis 1H NMR, 13C NMR, HMQC dan HMBC maka

kedudukan atau posisi sinyal proton, sinyal karbon serta korelasi dalam satu ikatan,

dua ikatan atau tiga ikatan untuk senyawa medikarpin hasil isolasi dapat dilihat

pada Tabel 4.2.

Tabel 4.3 Perbandingan data spektrum NMR senyawa medikarpin

No.C Medikarpin Hasil Isolasi Medikarpin (Abdel-Kader, 2004)

δH (mult, J Hz) δC δH (mult, J Hz) δC 1 7,39 (d, 8,4) 132,2 7,37 (d, 8,5) 132,4 2 6,55 (dd, 8,4; 2,4) 109,7 6,54 (dd, 8,5; 2,3) 110,1 3 - 157,0 - 157,4 4 6,42 (d, 2,4) 103,6 6,41 (d, 2,3) 103,9 4a - 156,6 - 156,8

6 3,62 (t, 11,0) 4,24 (dd, 11,0; 5,3)

66,5 3,62 (t, 10,9) 4,23 (dd, 10,9; 4,9)

66,8

6a 3,52 (m) 39,4 3,52 (m) 39,7 6b - 119,1 - 119,4 7 7,13 (d, 8,8) 124,8 7,12 (d, 8,8) 125,0 8 6,46 (dd,8,8; 2,3) 106.3 6,45 (dd, 8,8; 2,5) 106,7 9 - 161,0 - 160,9 10 6,45 (d, 2,3) 96,7 6,43 (d, 2,5) 97,2 10a - 160,6 - 161,3 11a 5,49 (d, 6,7) 78,5 5,49 (d, 6,5) 78,8 11b - 112,6 - 112,7 9-OCH3 3,77 (s) 55,5 3,76 (s) 55,8

Data titik leleh senyawa medikarpin hasil isolasi memperlihatkan

kesesuaian dengan titik leleh medikarpin yang diisolasi dari Dalbergia oliveri yakni

sebesar 132-133,5oC (Pleumpanupat, et al., 2013). Data spektrum NMR senyawa

medikarpin hasil isolasi juga memperlihatkan kesesuaian yang tinggi dengan

senyawa medikarpin pembanding yang diisolasi dari tumbuhan Ononis serrata

Forssk (Abdel-Kader, 2004). Perbandingan data spektrum NMR senyawa

medikarpin hasil isolasi dan medikarpin pembanding dalam CDCl3 dapat dilihat

pada Tabel 4.3.



4.2.2 Senyawa (3R)-vestitol (DL2)

Senyawa DL2 hasil isolasi diperoleh berupa padatan berwarna putih.

Spektrum UV (Lampiran-7) senyawa hasil isolasi dalam metanol memberikan

serapan maksimum pada λmaks nm (log ε): 229 (4,52); 268sh (3,87); 281 (4,31) dan

284 (4,31) yang merupakan ciri khas serapan isoflavan (Abe, et. al., 2014).

Dalam spektrum IR senyawa DL2 hasil isolasi dalam KBr menunjukkan

υmaks (cm-1) pada 3404 (vibrasi ulur O-H), 2941 dan 2847 (vibrasi ulur C-H

aromatik), 1622; 1506; 1456 dan 1433 (vibrasi ulur C=C aromatik), 1161 dan 1119

(vibrasi ulur C-O-C eter). Berdasarkan spektrum IR, senyawa DL2 hasil isolasi

diketahui mempunyai gugus fungsi hidroksi, aromatik dan eter. Hasil pengukuran

spektrum IR senyawa DL2 terlampir pada Lampiran-8.

Spektrum massa senyawa DL2 memperlihatkan massa ion kuasi molekul

negatif m/z 271,0965 yang sesuai dengan rumus molekul C16H15O4 (perhitungan

[M-H]- 271,0970). Bedasarkan data HRESIMS senyawa DL2 mempunyai Derajat

Bond Equivalent (DBE) berjumlah 9. Spektrum HRESIMS senyawa DL2 dapat

dilihat pada Lampiran-9. Berdasarkan data HRESIMS dan 13C-NMR maka

disarankan senyawa hasil isolasi DL2 merupakan senyawa turunan flavan atau

isoflavan (Martinez-Sotres, et al., 2012).

Spektrum APT 13C-NMR (100 MHz) senyawa hasil isolasi memperlihatkan

16 sinyal karbon yang terpisah dengan sempurna. Sinyal karbon senyawa DL2

terdiri dari enam sinyal karbon kuarterner (termasuk empat sinyal karbon oksiaril

pada δC 160,3; 157,5; 156,7 dan 156,0 ppm), tujuh sinyal karbon metin (CH), dua



sinyal karbon metilen (CH2) dan satu sinyal karbon metil dari metoksi (-OCH3).

Analisis spektrum APT 13C-NMR dapat dilihat pada Lampiran-11.

Spektrum 1H-NMR senyawa DL2 dalam CDCl3 (400 MHz) memperlihatkan

sinyal proton pada δH 4,23 ppm (1H, m), 3,97 ppm (1H, t, J = 10,2 Hz), 3,46 (1H,

m), 2,96 (1H, m) dan 2,81 (1H, m) yang merupakan sinyal proton khas dari senyawa

turunan isoflavan pada H-2, H-3 dan H-4 (Jie, et al; 2006). Spektrum 1H-NMR

senyawa DL2 dapat dilihat pada Lampiran-10.

Spektrum 1H-NMR senyawa DL2 memperlihatkan sepasang sinyal proton

aromatik dengan sistem ABX. Sinyal proton dari salah satu unit aromatik

mempunyai sinyal proton pada pergeseran kimia δH 6,89 ppm (1H, d, J = 8,2 Hz),

6,35 ppm (1H, dd, J = 8,2 dan 2,5 Hz) dan 6,26 ppm (1H, d, J = 2,5 Hz). Sinyal

proton sistem ABX dari unit aromatik lainnya mempunyai sinyal proton pada

pergeseran kimia δH 7,04 ppm (1H, d, J = 8,5 Hz), 6,48 ppm (1H, d, J = 2,6 Hz)

dan 6,41 ppm (1H, dd, J = 8,5 dan 2,6 Hz). Berdasarkan data spektrum 1H-NMR

maka disarankan senyawa fenolik hasil isolasi merupakan senyawa isoflavan yang

tersubstitusi di C-6/2’/4’ atau C-7/2’/4’ seperti terlihat pada Gambar 4.10.

Gambar 4.10. Pola substitusi senyawa isoflavan DL2



Justifikasi tiga buah substituen oksiaril seperti terlihat pada Gambar 4.10

serta penempatan posisi proton dan karbon senyawa isoflavan hasil isolasi

ditentukan dengan pengukuran 2D NMR yakni HMQC dan HMBC.

Analisis spektrum HMQC (Lampiran-12) memperlihatkan korelasi antara

sinyal proton pada δH 4,23 ppm (1H, m) dan 3,97 ppm (1H, t, J = 10,2 Hz) dengan

sinyal karbon metilen (CH2) pada δC 70,4 ppm, sinyal proton aromatik pada δH 7,04

ppm (1H, d, J = 8,5 Hz) memperlihatkan korelasi dengan sinyal karbon metin (CH)

pada δC 128,7 ppm dan sinyal proton metoksi (-OCH3) pada δH 3,71 ppm berkorelasi

dengan sinyal karbon pada δC 55,3 ppm. Dengan demikian dua buah sinyal singlet

proton pada δH 8,54 dan 8,10 ppm merupakan sinyal proton dari gugus hidroksi (–

OH). Data analisis spektrum HMQC senyawa isoflavan hasil isolasi dapat dilihat

pada Tabel 4.4.

Tabel 4.4. Data spektrum HMQC senyawa isoflavan hasil isolasi dalam bCDCl3.

δH (mult, J Hz, integritas) δC 7,04 (d, 8,5, 1H) 128,7 6,89 (d, 8,2, 1H) 131,0 6,48 (d, 2,6, 1H) 102,4 6,41 (dd,8,5; 2,6, 1H) 105.5 6,35 (dd, 8,2; 2,5, 1H) 108,7 6,26 (d, 2,5, 1H) 103,6 4,23 (m, 1H) dan 3,97 (t, 10,2, 1H) 70,4 3,71 (s, 3H) 55,3 3,46 (m, 1H) 32,5 2,96 (m, 1H) dan 2,81 (m, 1H) 31,0

Berdasarkan struktur isoflavan pada Gambar 4.10 maka sinyal proton pada

δH 4,23 dan 3,97 ppm merupakan metilen yang mempunyai posisi di H-2.

Kemudian pada spektrum HMBC (Lampiran-13) kedua sinyal proton δH 4,23 dan



3,97 ppm berkorelasi dengan dua sinyal karbon kuarterner (salah satunya sinyal

karbon oksiaril) dan satu karbon metilen yakni δC 156,0; 120,8 dan 31,0 ppm. Hasil

korelasi tersebut menunjukkan bahwa δC 156,0 ppm berkedudukan di C-8a, δC 120,8

ppm di C-1’ dan δC 31,0 ppm di C-4 seperti terlihat pada Gambar 4.11.

Gambar 4.11. Korelasi antara sinyal proton H-2 dengan sinyal karbon C-4, bC-8a dan C-1’

Berdasarkan analisis HMQC sinyal karbon δC 31,0 ppm (C-4) berkorelasi

dengan sinyal proton metilen pada δH 2,96 dan 2,81 ppm. Dengan demikian sinyal

proton pada δH 2,96 dan 2,81 ppm mempunyai posisi di H-4. Sinyal proton pada δH

2,96 dan 2,81 ppm berkorelasi dengan tiga buah sinyal karbon kuarterner (δC 156,0;

120,8 dan 114,2 ppm), dua buah sinyal karbon metin (δC 131,0 dan 32,5 ppm) dan

satu buah sinyal karbon metilen (δC 70,4 ppm). Hasil korelasi tersebut menunjukkan

bahwa δC 113,0 ppm berkedudukan di C-5; δC 114,2 ppm di C-4a; δC 70,4 ppm di

C-2 dan δC 32,5 ppm di C-3. Korelasi antara sinyal proton di H-4 dengan sinyal

karbon di C-2; C-3, C-4a; C-5; C-8a dan C-1’ dapat dilihat pada Gambar 4.12.

Gambar 4.12. Korelasi antara sinyal proton H-2 dengan sinyal karbon C-2;

xC-3, C-4a; C-5; C-8a dan C-1’



Berdasarkan data Tabel 4.2 spektrum HMQC sinyal karbon δC 113,0 ppm

berkorelasi satu ikatan dengan sinyal proton aromatik δH 6,89 ppm (1H, d, J = 8,2

Hz). Sinyal proton aromatik δH 6,89 dengan multiplisitas ortho menunjukkan bahwa

senyawa isoflavan tersubstitusi di C-7/2’/C-4’ seperti terlihat pada Gambar 4.13.

Gambar 4.13. Senyawa isoflavan yang tersubstitusi di C-7/2’/C-4’

Korelasi dua atau tiga ikatan antara sinyal proton aromatik δH 6,26 (1H, d, J

= 2,5 Hz) dengan dua sinyal karbon kurtener [δC 156,0 ppm (8a) dan 114,2 ppm

(4a)] serta satu sinyal karbon metin pada δC 108,7 ppm menunjukkan bahwa δH 6,26

ppm di H-8. Sinyal karbon metin aromatik δC 108,7 ppm pada spektrum HMQC

mempunyai sinyal proton aromatik pada δH 6,35 ppm (1H, dd, J = 8,2 dan 2,5 Hz)

multiplisitas ortho dan meta yang mendukung struktur isoflavan pada Gambar 4.13.

Dengan demikian, sinyal karbon δC 108,7 ppm berkedudukan di C-6. Korelasi

antara sinyal proton aromatik di H-8 dengan sinyal karbon di C-4a; C-6; dan C-8a

dapat dilihat pada Gambar 4.14.

Gambar 4.14. Korelasi antara H-6 dengan sinyal karbon di C-4a; C-6; dan C-8a



Pada spektrum HMBC terlihat korelasi antara sinyal proton gugus hidroksi

(-OH) fenol pada δH 8,10 ppm dengan satu sinyal karbon kuarterner (δC 157,5 ppm)

serta dua sinyal karbon metin [δC 108,7 ppm (C-6) dan 103,6 ppm (C-8)]. Hasil ini

menunjukkan sinyal karbon δC 157,5 ppm berkedudukan di C-7. Berdasarkan hasil

korelasi tersebut diketahui substituen yang terikat di C-7 adalah hidroksi (-OH).

Korelasi antara sinyal proton 7-OH dengan sinyal karbon di C-6; C-7; dan C-8

dapat dilihat pada Gambar 4.15.

Gambar 4.15. Korelasi antara 7-OH dengan sinyal karbon di C-6; C-7; dan C-8

Analisis spektrum HMBC antara sinyal proton metin pada 3,46 (m) di H-3

mempunyai korelasi dengan tiga buah sinyal karbon kuarterner [δC 156,7 ppm;

120,8 ppm (C-1’) dan 114,2 ppm (C-4a)], satu sinyal karbon metin δC 128,7 ppm

dan dua sinyal karbon metilen [δC 70,4 ppm (C-2) dan 31,0 ppm (C-4)].

Berdasarkan hasil korelasi ini menunjukkan bahwa δC 128,7 ppm berkedudukan di

C-6’ dan δC 156,7 ppm berkedudukan di C-2’. Korelasi antara H-3 dengan sinyal

karbon di C-2; C-4; C-4a; C-1’; C-2’ dan C-6’ dapat dilihat pada Gambar 4.16.



Gambar 4.16. Korelasi antara H-3 dengan sinyal karbon di C-2; C-4; C-4a;

C-1’; C-2’ dan C-6’

Korelasi antara sinyal proton gugus hidroksi (-OH) pada δH 8,54 ppm

dengan dua sinyal karbon kuarterner [(δC 156,7 ppm (C-2’) dan 120,8 ppm (C-1’)]

serta satu sinyal karbon metin pada δC 102,4 ppm menunjukkan sinyal karbon

oksiaril (-OR2) merupakan hidroksi (-OH) dan sinyal karbon metin pada δC 102,4

ppm berkedudukan di C-3’. Korelasi antara sinyal proton 2’-OH dengan sinyal

karbon di C-1’; C-2’; dan C-3’ dapat dilihat pada Gambar 4.17.

Gambar 4.17. Korelasi antara 2’-OH dengan sinyal karbon di C-1’; C-2’dan C-3’

Analisis spektrum 1H NMR (Lampiran-10) senyawa isoflavan hasil isolasi

mempunyai satu buah gugus metoksi pada δH 3,71 ppm dan mempunyai sinyal

karbon δC 55,3 ppm pada spektrum 13C NMR (Lampiran-11). Dengan demikian

substituen –OR3 di C-4’ merupakan gugus metoksi. Berdasarkan hasil analisis 1H

NMR, 13C NMR, HMQC dan HMBC maka senyawa isoflavan hasil isolasi adalah

7,2’-dihidroksi-4’-metoksiisoflavan (Gambar 4.18).



Gambar 4.18. Struktur senyawa vestitol hasil isolasi

Data spektrum NMR yang mendukung struktur senyawa 7,2’-dihidroksi-4’-

metoksiisoflavan dapat dilihat pada Tabel 4.5. Senyawa 7,2’-dihidroksi-4’-

metoksiisoflavan dikenal dengan nama vestitol. Stereokimia senyawa vestitol

mempunyai atom C-khiral pada C-3.

Tabel 4.5. Data spektrum 1H dan 13C NMR senyawa vestitol hasil isolasi dalam aseton-d6

No.C δH (mult, J Hz) δC HMBC 2 3,97 (t, 10,2)

4,23 (m) 70,4 C-4; C-8a; C-1’

3 3,46 (m) 32,5 C-2; C-4; C-4a; C-1’; C-2’; C-6’

4 2,81 (m) 2,96 (m)

31,0 C-2; C-3, C-4a; C-5; C-8a; C-1’

4a - 114,2 - 5 6,89 (d, 8,2) 131,0 C-4; C-8a 6 6,35 (dd, 8,2; 2,5) 108,7 C-4a; C-7, C-8 7 - 157,5 - 8 6,26 (d, 2,5) 103.6 C-4a; C-6; C-8a 8a - 156,0 - 1’ - 120,8 - 2’ - 156,7 - 3’ 6,48 (d, 2,6) 102,4 C-1’, C-2’; C-4’; C-5’ 4’ - 160,3 - 5’ 6,41 (dd, 8,5; 2,6) 105,5 C-1’, C-3’; C-4’ 6’ 7,04 (d, 8,5) 128,7 C-3; C-2’; C-4’ 7-OH 8,10 (s) - C-6; C-7; C-8 2’-OH 8,54 (s) - C-1’; C-2’; C-3’ 4’-OCH3 3,71 (s) 55,3 C-4’



Gambar 4.19. Struktur senyawa (3R)-vestitol hasil isolasi

Tabel 4.6. Perbandingan data spektrum NMR senyawa (3R)-vestitol

No.C

(3R)-vestitol hasil isolasi

(3R)-vestitol (Jie, et al; 2006)

(3S)-vestitol (Jie, et al; 2006)

δH (mult, J Hz)

δC δH (mult, J Hz)

δC δH (mult, J Hz) δC

2 3,97 (t, 10,2) 4,23 (m)

70,4 3,97 (t, 10,2) 4,23 (m)

70,5 4,25 (t, 9,9) 4,59 (m)

70,9

3 3,46 (m) 32,5 3,47 (m) 32,6 3,96 (m) 32,7 4 2,81 (m)

2,96 (m) 31,0 2,76 (m)

2,96 (m) 31,0 3,01 (m)

3,20 (m) 31,0

4a - 114,2 - 114,3 - 115,4 5 6,89 (d, 8,2) 131,0 6,89 (d, 8,0) 131,0 7,10 (d, 8,3) 131,6 6 6,35 (dd, 8,2;

2,5) 108,7 6,35 (dd, 8,0;

2,0) 108,7 6,85 (dd, 8,3;

2,2) 109,2

7 - 157,5 - 157,5 - 156,9 8 6,26 (d, 2,5) 103.6 6,27 (d, 2,0) 103.6 6,92 (d, 2,2) 103.6 8a - 156,0 - 156,1 - 156,0 1’ - 120,8 - 120,9 - 121,5 2’ - 156,7 - 156,7 - 156,7 3’ 6,48 (d, 2,6) 102,4 6,48 (d, 2,5) 102,4 6,85 (d, 2,2) 101,7 4’ - 160,3 - 160,4 - 160,4 5’ 6,41 (dd, 8,5;

2,6) 105,5 6,42 (dd, 8,5;

2,5) 105,7 6,58 (dd, 8,3;

2,2) 105,5

6’ 7,04 (d, 8,5) 128,7 7,05 (d, 8,5) 128,7 7,20 (d, 8,5) 128,7 7-OH 8,10 (s) - 8,06 (s) - 8,10 (s) - 2’-OH 8,54 (s) - 8,48 (s) - 8,54 (s) - 4’-OCH3 3,71 (s) 55,3 3,71 (s) 55,3 3,68 (s) 55,1



Data spektrum NMR senyawa vestitol hasil isolasi memperlihatkan

kesesuaian yang tinggi dengan pembanding yakni (3R)-vestitol yang diisolasi dari

tumbuhan Millettia nitita var hirsutissima (Jie, et. al., 2006). Perbandingan data

spektrum NMR senyawa (3R)-vestitol hasil isolasi dan pembanding dalam aseton-

d6 dapat dilihat pada Tabel 4.6.

Berdasarkan hasil penelitian, dua senyawa fenolik telah dipisahkan dan

dimurnikan dari ekstrak etilasetat kulit batang Dalbergia latifolia Roxb. Dua

senyawa fenolik tersebut adalah medikarpin dan (3R)-vestitol. Senyawa medikarpin

merupakan senyawa turunan pterokarpan sedangkan senyawa (3R)-vestitol

merupakan senyawa turunan isoflavan. Senyawa (3R)-vestitol merupakan senyawa

turunan isoflavan yang pertama kali ditemukan pada kulit batang Dalbergia

latifolia Roxb. Secara biogenetik, pembentukan senyawa medikarpin berasal dari

reaksi oksidasi (3R)-vestitol seperti terlihat pada Gambar 4.18

Gambar 4.20 Hubungan biosintesis senyawa medikarpin dan (3R)-vestitol

4.3 Penentuan Aktivitas Anti-HIV Senyawa Hasil Isolasi

Senyawa medikarpin dan (3R)-vestitol hasil isolasi ditentukan aktivitas

anti-HIVnya terhadap sel HIV-1 MT4 dengan bantuan sel limfosit T MOLT 4

secara in vitro menggunakan metode pembentukan syncytia. Syncytia adalah sel



tunggal yang memiliki beberapa inti karena fusi sel atau pembelahan inti.

Pembentukan syncytia dihitung dengan bantuan pereaksi trypan blue.

Aktivitas sitotoksik dinyatakan dalam daya hambat IC50 yaitu konsentrasi

senyawa aktif yang diperlukan untuk menghambat 50% sel virus HIV-1. Nilai IC50

dihitung menggunakan analisis data forecast pada microsoft excel antara nilai

persentase hambatan senyawa aktif terhadap berbagai konsentrasi. Suatu ekstrak

tanaman dikategorikan berpotensi menghambat aktivitas anti-HIV pada konsentrasi

<50 ppm (Cesar, et al., 2011)

Konsentrasi ekstrak etilasetat, senyawa murni medikarpin dan (3R)-vestitol

yang digunakan diantaranya adalah 25; 12,5; 6,25; 3,125; 1,56 dan 0,78 ppm. Hal

ini dilakukan karena pada pengukuran sebelumnya sampai konsentrasi 50 ppm,

semua virus maupun sel T mati, sehingga variasi konsentrasi diperkecil menjadi

<25 ppm. Hasil yang didapatkan adalah senyawa murni medikarpin dan (3R)-

vestitol memiliki nilai IC50 masing-masing sebesar 23,26 (8,61x10-5 M) dan 26,45

ppm (9,72x10-5 M). Sedangkan untuk ekstrak etilasetat memiliki nilai IC50 pada

0,78 ppm (Lampiran-14). Hal ini menunjukkan bahwa ketiganya memiliki daya

hambat terhadap perkembangan virus HIV-1, sehingga baik senyawa murni

medikarpin maupun (3R)-vestitol memiliki potensi sebagai anti-HIV.

Ekstrak etilasetat pada konsentrasi >0,78 ppm baik virus maupun sel

limfosit mati. Hal ini dapat disebabkan oleh toksisitas ekstrak tersebut atau adanya

beberapa komponen dalam ekstrak yang saling bersinergi sehingga aktivitasnya

menjadi tinggi.



Berdasarkan studi pustaka, senyawa pterokarpan yang memiliki aktivitas

anti-HIV seperti 9-benziloksi-3,8-dimetoksipterokarpan memiliki nilai IC50 sebesar

6,94x10-5 M (Engler, et. al., 1996). Dalam literatur tersebut juga disebutkan bahwa

pterokarpan memberikan aktivitas anti-HIV yang tinggi jika memiliki substituen

metoksi (OCH3) pada C-3 dan atau hidroksi (OH) pada C-8 dan metoksi

tersubstitusi (OCH2R) pada C-9. Hal ini dibuktikan dengan aktivitas pterokarpan

hasil isolasi yakni medikarpin yang terikat substituen hidroksi (OH) pada C-3 dan

metoksi (OCH3) pada C-9 memiliki aktivitas anti-HIV yang lebih rendah dari pada

senyawa pterokarpan literatur. Senyawa pterokarpan pada literatur memiliki

substituen metoksi (OCH3) pada C-3 dan substituen metoksi tersubstitusi yakni

benziloksi (OCH2Ph) pada C-9.



BAB V

PENUTUP

5.1 Kesimpulan

Berdasarkan hasil penelitian, maka kesimpulan penelitian ini adalah sebagai

berikut:

1. Senyawa pterokarpan berhasil diisolasi dari kulit batang Dalbergia latifolia

Roxb. yakni 3-hidroksi-9-hidroksipterokarpan (medikarpin). Selain itu, telah

diisolasi juga prekursor senyawa tersebut dari golongan isoflavan yakni 7,2’-

dihidroksi-4’-metoksiisoflavan ((3R)-vestitol). Struktur keduanya (Gambar

5.1) ditetapkan berdasarkan data pengukuran spektroskopi UV, IR, HRESIMS,

1D NMR (1H-NMR dan 13C-NMR), dan 2D NMR (HMQC dan HBMC).

Gambar 5.1 Struktur senyawa medikarpin (1) dan (3R)-vestitol (2)

56



2. Uji aktivitas anti-HIV ekstrak etilasetat, senyawa medikarpin dan (3R)-vestitol

yang diisolasi dari kulit batang Dalbergia latifolia Roxb. memiliki nilai IC50

masing-masing sebesar 0,78; 23,26 dan 26,45 ppm. Hal ini menunjukkan

bahwa ketiganya mampu menghambat pertumbuhan sel HIV-1 MT 4.

5.2 Saran

Mengingat senyawa medikarpin dan (3R)-vestitol relatif mampu

menghambat perkembangan sel HIV-1 MT4 maka disarankan untuk dilakukan uji

lebih lanjut seperti uji toksisitas, in vivo dan pra klinis sehingga diketahui potensi

keduanya sebagai obat penyakit AIDS.



DAFTAR PUSTAKA

Abdel-Kader, M.S., 2004, Two Isoflavonoid Glucoside from Ononis serrata Growing in Egypt, Nat. Prod. Sci., 10 (6), 321-324

Abe, N., Sato, H., dan Sadao S., 1987, Antifungal Stress Compounds from Adzuki Bean, Vigna angularis, Treated with Chephalosporium gregatum Type B, Agric. Biol. Chem., 51 (2), 349-353

Abe, F., Donelly, D.M.X., Moretti, C., dan Judith P., 1985, Isoflavonoid Constituents from Dalbergia monetaria, Phytochem., 24 (5), 1071-1076

Adinarayana, D., dan J. Rajasekhara R., 1972, Isoflavonoid Glycosides of Dalbergia Paniculata, The Constituent of Dalpanitin and Dalpatin, Tetrahedron, 28, 5377-5384

Alencar, R.D., Filho, R.B., dan O.R. Gottlieb, 1972, Pterocarpanoids from Dalbergia decipularis, Phytochem., 11, 1517

Anonim, 2015, http://www.itis.gov/servlet/SingleRpt/SingleRpt?search_topic= TSN&search_value=506331, akses pada 3 Desember 2015 pukul 12.15

Bakty, Y., 2010, Pengaruh Ekstrak heksan, Metanol dan Etanol Tanaman Obat Justicia gendarusa Burm. f. terhadap Virus HIV In Vitro, Skripsi Fakultas Farmasi UNAIR, Surabaya

Bekker, M., Malan, E., Steenkamp, J.A., dan E. Vincent B., 2002, An Isoflavonoid-Neoflavonoid and An O-Methylated Isoflavone from The Heartwood of Dalbergia nitidula, Phytochem., 59, 415-418

Beldjoudi, N., Mambu, L., Labaied, M., Grellier, P., Ramanitrahasimbola, D., Rasoanaivo, P., Martin, M.T., dan Francois F., 2003, Flavonoids from Dalbergia louvelii and Their Antiplasmodial Activity, J. Nat. Prod.., 66, 1447-1450

Cesar, G.J., Alfonso, M.G., Marius, M., Elizabeth, E., Angel, C.M., Maira, H., Guadalupe, C.M., Manuel, J., dan Reyes-Chilpa Ricardo, 2011. Inhibition of HIV-1 Reverse Transcriptase, Toxicological and Chemical Profile of Calophyllum brasiliense Extracts from Chiapas, Mexico, Fito.. 82, 1027-1034

Chan, S., Chang, Y., dan Kuo S., 1997, Neoflavonoids from Dalbergia odorifera, Phytochem., 46 (5), 947-949

Cheenpracha, S., Karalai, C., Ponglimanont, C., Akharawait K., 2009, Candenatenins A-F, Phenolic Compound from the Heartwood of Dalbergia candenatensis, J. Nat Prod., 72, 1395-1398

58



http://www.itis.gov/servlet/SingleRpt/SingleRpt?search_topic=%20TSN&search_value=506331

http://www.itis.gov/servlet/SingleRpt/SingleRpt?search_topic=%20TSN&search_value=506331

Cheng, Z., Kuo, S., Chan, S., Ko, F., dan Cheng-Ming T., 1998, Antioxidant Properties of Butein Isolated from Dalbergia odorifera, Biochem. et Biophys., 1392, 291-299

Chibber, Shyam S., dan Urmil Khera, 1978, Dalbinol-A New 12a-hydroxyrotenoid From Dalbergia latifolia Seeds, Phytochem., 17, 1442-1443

Chibber, Shyam S., dan Urmil Khera, 1979, Dalbin: A 12a-hidroxy rotenoid glycoside from Dalbergia latifolia, Phytochem., 18, 188-189

Chuankhayan, P., Hua, Y., Svasti, J., Sakdarat, S., Sullivan, P.A., dan James R.K.C., 2005, Purification of An Isoflavonoid 7-O- β-apiosyl-glucoside β-glycosidase and Its Substrates from Dalbergia nigrescens Kurz, Phytochem., 66, 1880-1889

Chuankhayan, P., Rimlumduan, T., Tantanuch, W., Mothong, N., Kongsaeree P.T., Metheenukul, P., Svasti, J., Jensen, O.N., dan James R.K.C., 2007, Functional and Structural Differences Between Isoflavonoid β-glycosidases from Dalbergia sp., Biochem. and Biophys., 468, 205-216

Cook, J.T., Ollis, W.D., Sutherland, I.O., dan Otto R.G., 1978, Pterocarpans from Dalbergia spruceana, Phytochem., 17, 1419-1422

Dewick, P.M., 2009, Medicinal Natural Products: A Biosynthetic Approach, 3rd Ed., John Wiley and Sons, Inggris,154-155

Donnelly, B.J., Donnelly, D.M.X., dan A.M. O’Sullivan, 1968, The occurrence of Melannein in The Genus Dalbergia, Tetrahedron, 24, 2617-2622

Donnelly, D.M.X., Geoghegan, M.R., dan B.J. Nangle, 1965, Dalbergia Species-III, Tetrahedron, 49, 4451-4455

Donnelly, D.M.X., dan Joseph O., 1975, Neoflavonoids of Dalbergia melanoxylon, Phytochem., 14, 2287-2290

Donnelly, D.M.X., Keenan P.J. dan J.P. Prendergast, 1973, Isoflavonoids of Dalbergia ecastophyllum, Phytochem., 12, 1157-1161

Donnelly, D.M.X., Nangle, B.J., Prendergast, J.P., dan A.M. O’Sullivan, 1968, Isolation of R-5-O-methyllatifolin from Dalbergia cochinchinensis, Phytochem., 7, 647-649

Donnelly, D.M.X., O’Reilly, J., dan J. Thompson, 1972, Neoflavanoids of Dalbergia cultrata, Phytochem., 11, 823-826

Edayadulla, N. dan Penugonda R., 2012 Antibacterial Activity of Various Stem Extracts of Dalbergia coromandeliana, J. Trop. Biomed., 1388-1391

57



Engler, T.A., LaTessa, K.O., Iyengar, R., Chai, W., dan Konstatinos A., 1996, Stereoselective Syntheses of Substitued Pterocarpans with Anti-HIV Activity, and 5-Aza-/5-Thia-pterocarpan and 2-Aryl-2,3-dihydrobenzofuran Analogues, Bioorg. & Medi. Chem., 4 (10), 1755-1769

Gregson, M., Ollis, W.D., redman, B.T., Sutherland, I.O., Dietrichs, H.H. dan Otto R.G., 1978, Obtusastyrene and Obtustyrene, Cinnamylphenols from Dalbergia retusa, Phytochem., 17, 1395-1400

Gregson, M., Ollis, W.D., Sutherland, I.O., Gottlier, O.R., dan Mauro, T.M., 1978, Violastyrene and Isoviolastyrene Cinnamylphenols from Dalbergia miscolobium, Phytochem., 17, 1375-1377

Hamburger, M.O., Cordell G.A., 1987, Traditional Medicinal Plants of Thailand, VIII. Isoflavonoids of Dalbergia Candenatensis, J. Nat. Prod.., 50, 696-699

Heyne, K., 1987, Tumbuhan Berguna Indonesia Jilid II, Badan Litbang Kehutanan, Jakarta.

Huerta, B.E.B., Peralta, J., Gonzalez, R.F., dan Joe K., 2004, Neocandenatone, An Isoflavan-Cinnamylphenol Quinone Methide Pigment from Dalbergia congestiflora, Phytochem., 65, 925-928

Hunter, R., Muhanji, C.I., Hale, I., Bailey, C.M., Basavapathruni, A., dan Karen S.A., 2007, [d4U]-butyne-[HI-236] As A Non-Cleavable, Bifunctional NRTI/NNRTI HIV-1 Reverse-Transcriptase Inhibitor, Bioorg. And Med. Chem, 17, 2614-2617

Ito, C., Itoigawa, M., Kanematsu, T., Ruangrungs, N., Mukainaka, T., Tokuda, H., Nishino, H., dan Hiroshi F., 2003, Isoflavonoids from Dalbergia olivari, Phytochem., 64, 1265-1268

Jayanti, E., 2008, Deskripsi dan Faktor yang Berpengaruh Terhadap Status HIV pada Penggunaan Klinik-Klinik Layanan Tes HIV di DKI Jakarta & Bali Tahun 2007, Skripsi Fakultas Kedokteran Masyarakat UI, Depok.

Jie, F., Hong, L., Yu-ying, Z., dan Wu Z., 2006, Flavonoid from Millettia nitita var. hirrutissima, J. Chinese Pharm. Sci., 15 (3), 178-181

Jurd, L., Stevens, K., dan G. Manners, 1972, Phenolic and Quinoidal Constituents of Dalbergia retusa, Tetrahedron, 21, 2149-2152

Kaennakam, S., Siripong, P., dan Santi T., 2015, Velucarpin A-C, Three New Pterocarpans and Their Cytotoxycity from The Roots of Dalbergia velutina, Fito., 105, 165-168



Kale, M., Misar, A.V., Dave, V., Joshi, M., dan A.M. Mujumdar, 2007, Anti-Inflammatory Activity of Dalbergia lanceolaria Bark Ethanol Extract in Mice and Rats, J. Ethnopharm., 112, 300-304

Khan, I.A., Avery, M.A., Burandt, C.L., Goins, D.K., Mikell, J.R., Nash, T.E., Azadegan, A., dan I.A. Walker, 2000, Antigiardial Activity of Isoflavones from Dalbergia frustescens Bark, J. Nat. Prod.., 63, 1414-1416

Kurosawa, K., Ollis, W.D., Sutherland, I.O., dan Otto R.G., 1978, Variabilin, A 6-aHydroxypterocarpan from Dalbergia Variabilis, Phytochem., 17, 1417-1418

Liu, R., Sun, J., Bi, K., dan De-an G., 2005, Identification and Determination of Major Flavonoids in Rat Serum by HPLC-UV and HPLC-MS Methods Following Oral Administration of Dalbergia odorifera Extract, J. Chrom., 829, 35-44

Maekawa, E. dan Koichiro K., 1970, Isolation of Pterocarpanoid Compounds as Heartwood Constituents of Maackia amurensis RUPR. Et MAXIM var Buergeri SCHNEID, KURENAI, 50, 29-35

Malhotra, A., Murti, V.V.S., dan T.R. Seshadri, 1967, Lanceolarin, A New Isoflavone Glycoside of Dalbergia Lanceolaria, Tetrahedron, 23, 405-409

Manitto, P., 1992, Biosintesis Produk Alami, Terjemahan Koensoemardiyah dan Sudarto, Ellis Horwood Limited, New York.

Martinez-sotres, C.M., Albarran, P., Leon, J.C.D., Moreno, T.G., Quinones, J.G.R., Marrufo, G.V., Mascarua, J.T. dan Rafael H.B., 2012, Medicarpn, An Antifungal Compound Identified in Hexane Extract of Dalbergia congestiflora Pittier Heartwood, International Biodeterioration & Biodegradation, 69, 38-40

Mathias, L., Vieira, I.J.C., Braz-Filho, R., dan Edson R., 1998, A New Isoflavone Glycoside from Dalbergia nigra, J. Nat. Prod.., 61, 1158-1161

Muangnoicharoen, N., dan August W.F., 1981, Arylbenzofurans from Dalbergia parviflora, Phytochem., 20, 291-293

Mutai, P., Heydenreich, M., Thoithi, G., Mugumbate, G., Chibale, K., dan Abiy Y., 2013, 3-Hydroxyisoflavanones from The Stem Bark of Dalbergia melanoxylon: Isolation, Antimycobacterial Evaluaion and Molecular Docking Studies, Phytochem. Lett., 6, 671-675

Nagarajan, N.S., Sethuraman, M.G., Manoj, C.N., dan R. Priya R., 2006. Dalsympathetin-A New isoflavone Gentobioside from Dalbergia sympathetica (Dennst.), Nat. Prod. Res., 20 (2), 195-200



Narayanan, M.C., dan Natesan S.N., 1988, Two Isoflavone Galactosides from Dalbergia spinosa, Phytochem., 27 (7), 2364-2365

Narayanan, M.C., Rao, P.R., Shanmugam, N.N., Gopalakrishnan, S.M., dan Kshama D., 2007, Isolation and Characterisation of Bioactive Isoflavonoids from the Roots of Dalbergia horrida, Nat. Prod. Res., 21 (10), 903-909

Parthasarathy, M.R., Seshadri, T.R., dan R.S. Varma, 1976, New Isoflavonoid Glycosides from Dalbergia paniculata, Phytochem., 15, 1025-1027

Parthasarathy, M.R., Seshadri, T.R., dan R.S. Varma, 1976, Triterpenoids and Flavonoids of Dalbergia sericea Bark, Phytochem., 15, 226-227

Pathak, V., Shirota, O., Sekita, S., Hirayama, Y., Hakamata, Y., Yanagawa, T., dan Motoyashi, S., 1997, Antiandrogenic Phenolic Constituents from Dalbergia cochinchinensis, Phytochem., 7, 1219-1223

Pleumpanupat, S., Kumrungsee, N., Pleumpanupat, W., Ngamkitpinyo, K., Chavasiri, W., Bullangpoti, V., dan Opender K., 2013, Laboratory Evaluation of Dalbergia oliveri (Fabaceae-Fabales) Extracts and Isolated Isoflavonoids on Aedes aegypti (Diptera:Culicidae) Mosquitoes, Indust. Crops and Prod., 44, 653-658

Ramesh, P., dan C.R. Yuvarajan, 1995, Coromandelin, A New Isoflavone Apioglucoside from The Leaves of Dalbergia coromandeliana, J. Nat. Prod.., 58 (2), 1240-1241

Rao, J.R., dan R. Srinivasa R., 1991, Dalpaniculin, A C-Glycosylisoflavone from Dalbergia paniculata Seeds, Phytochem., 30 (2), 715-716

Rao, P.R., Narayanan, M.C., Gopalakrishnan, S.M., dan Nagarajan N.S., 2007, Two New Isoflavonoids from the Roots of Dalbergia congesta, J. Asian Nat. Prod. Res., 8, 1-2

Sharma, M.C., 2014, Structural Requirements of N-aryl-oxazolidinone-5-carboxamide derivatives for anti-HIV protease activity Using Molecular Modelling Techniques, J. Taibah Univ. Sci., 8, 111-123

Shirota, O., Pathak, V., Sekita, S., Satake, M., Nagashima, Y., Hirayama, Y., Hakamata, Y., dan Tatsuo H., 2003, Phenolic Constituents from Dalbergia cochinchinensis, J. Nat. Prod.., 66, 1128-1131

Shrestha, S.P., Amano, Y., Narukawa, Y., dan Tadahiro T., 2008, Nitric Oxide production Inhbitory Activity of Flavonoids Contained in Trunk Exudates of Dalbergia sisso, J. Nat. Prod.., 71, 98-101

Souza, I.S.D., Gottlieb, O.R., Andrade, C.H.S.A., dan Mauro T.M., 1975, Flavonoids from Dalbergia cearensis, Phytochem., 14, 1452-1453



Songsiang, U., Hahnvajanawong, C., dan Chavi Y., 2011, Cytotoxicity of Chamical Constituents from The Stems of Dalbergia parviflora, Fito., 82, 1169-1174

Suzuki, J.I., Kurosaki, N.M., Kuwasaki, T., Takeuchi, H., Kawai, G., dan Hiroshi T., 2002, Inhibition of Human Immunodeficiency Virus Type 1 Activity In Vitro by New Self-Stabilized Oligonucleotide with Guanosine-Thymidine Quadruplex Motifs, J. Viro., 76 (6), 3015-3022

Sripathi, S.K., Gandhidasan, R., Raman, P.V., Krishnasamy, N.R., dan Srinivas N., 1994, First Occurrence of A Xanthone and Isolation of A 6-Ketohydrorotenoid from Dalbergai sissoides, Phytochem., 37(3), 911-912

Umehara, K., Nemoto, K., Matsushita, A., Terada, E., Monthakantirat, O., De-Eknamkul, W., Miyase, T., Warashina, T., Degawa, M., dan Hiroshi N., 2009, Flavonoids from the Heartwood of the Thai Medicinal Plant Dalbergia parviflora and Their Effects on Estrogenic-Responsive Human Breast Cancer Cells, J. Nat. Prod., 72, 2163-2168

Wang, H., Dong, W., Zuo, W., Wang, H., Zhong, H., Mei, W., dan Hao-Fu D., 2014, Three Newe Phenolic Compound from Dalbergia odorifera, J. Asian Nat. Prod. Res., 16 (12), 1109-1118

Ye, X.Y., Wang, H.X., dan T.B. Ng, 2000, Dolichin, A New Chitinase-like Antifungal Protein Isolated from Field Beans (Dolichin lablab), Biochem. and Biophys. Res. Comm., 269, 155-159

Yu, X., Wang, W., dan Ming Y., 2007, Antioxidant activities of compounds Isolated from Dalbergia odorifera T. Chen and Their Inhibition Effects on The Decrease of Glutathione Level of Rat Lens Induced By UV Irradiation, Food Chem., 104, 715-720



LAMPIRAN

Lampiran-1. Hasil pengukuran spektrum UV senyawa medikarpin dalam metanol

λ (nm) Abs

231 0,937

267 0,289

281 0,773

286 0,840



Lampiran-2. Hasil pengukuran spektrum IR senyawa medikarpin

O-H

C-H

aromatik

C=C

C=C

aromatIk

C-O-C

eter



Lampiran-3. Hasil pengukuran spektrum 1H-NMR senyawa medikarpin



Lampiran-4. Hasil pengukuran spektrum 13C-NMR senyawa medikarpin



Lampiran-5 Hasil pengukuran spektrum HMQC senyawa medikarpin



Lampiran-6 Hasil pengukuran spektrum HMBC senyawa medikarpin



Lampiran-7 Hasil pengukuran spektrum UV senyawa (3R)-vestitol dalam metanol

λ (nm) Abs

229 1,231

268 0,273

281 0,757

284 0,756



Lampiran-8 Hasil pengukuran spektrum IR senyawa (3R)-vestitol

C=C

aromatIk

C=C

C-H

aromatIk

C-O-C

eter

O-H



Lampiran-9 Hasil pengukuran spektrum HRESIMS senyawa (3R)-vestitol



Lampiran-10 Hasil pengukuran spektrum 1H-NMR senyawa (3R)-vestitol



Lampiran-11 Hasil pengukuran spektrum 13C-NMR senyawa (3R)-vestitol



Lampiran-12 Hasil pengukuran spektrum HMQC senyawa (3R)-vestitol



Lampiran-13 Hasil pengukuran spektrum HMBC senyawa (3R)-vestitol



Lampiran-14 Data hasil uji aktivitas anti-HIV ekstrak etilasetat, senyawa medikarpin dan (3R)-vestitol

Konsentrasi (ppm)

Jumlah syncytia yang terbentuk

Ekstrak etilasetat Medikarpin (3R)-Vestitol

percobaan 1 percobaan 2 rata-rata percobaan 1 percobaan 2 rata-rata

25 tidak terbentuk syncytia 91 85 88 91 93 92 12,5 tidak terbentuk syncytia 110 138 124 112 115 113.5 6,25 tidak terbentuk syncytia 96 141 118,5 124 124 124 3,125 tidak terbentuk syncytia 107 72 89,5 108 115 111.5 1.56 tidak terbentuk syncytia 69 60 64,5 112 127 119.5 0.78 57 69 53 61 125 108 16,5 Kontrol negatif 113 186 179

Dari data di atas, dilakukan perhitungan persentase hambatan senyawa uji menggunakan rumus :

% Hambatan = jumlah 𝑦𝑛𝑐𝑦 𝑖𝑎 pada kontrol negatif − jumlah 𝑦𝑛𝑐𝑦 𝑖𝑎 pada senyawa ujijumlah 𝑦𝑛𝑐𝑦 𝑖𝑎 pada kontrol negatif x %



sehingga didapatkan persentase hambatan senyawa uji masing-masing sebagai berikut :

Formula yang digunakan pada analisis forecast senyawa medikarpin dan (3R)-vestitol adalah

=FORECAST(x,known_x’s,known_y’s)

dengan x adalah titik data yang diprediksikan, dalam hal ini diisi 50 karena titik yang akan diprediksikan adalah daya hambat 50%. Known_x’s merupakan rentang data terikat sumbu x, dalam hal ini adalah persentase hambatan senyawa uji. Known_y’s merupakan rentang data terikat sumbu y, dalam hal ini adalah konsentrasi senyawa uji yang digunakan. Sehingga didapatkan nilai IC50 sebagai berikut :

Konsentrasi (ppm)

% Hambatan senyawa uji

Ekstrak etilasetat Medikarpin (3R)-Vestitol

25 tidak terbentuk syncytia 52.69 48.60 12,5 tidak terbentuk syncytia 33.33 36.59 6,25 tidak terbentuk syncytia 36.29 30.73 3,125 tidak terbentuk syncytia 51.88 37.71 1,56 tidak terbentuk syncytia 65.32 33.24 0,78 49,56 67.20 34.92

IC50

Senyawa Uji Ekstrak

etilasetat Medikarpin (3R)-Vestitol

0,78 ppm 23,26 ppm 26,45 ppm



Documents

ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA …repository.unair.ac.id/54396/20/MPK_75-16_Bal_i-min-min.pdfdan dikenal dengan nama daerah sonokeling. Senyawa yang banyak ditemukan pada tanaman