Infecciones del tracto gastrointestinal. Análisis microbiológico de

Infecciones del tracto gastrointestinal.

Análisis microbiológico de

muestras fecales.

TEMA 17

muestras fecales.

1. Características generales del tracto gastrointestinal

2. Microbiota normal del tracto gastrointestinal

3. Afecciones del tracto gastrointestinal

4. Patología de las infecciones del tracto gastrointestinal

4.1. Mecanismos inespecíficos de defensa del hospedador

4.2. Participación de la microbiota normal en la defensa del hospedador

4.3. Mecanismos patogénicos de agentes que causan infecciones del

Tema 19. Infecciones del tracto gastrointestinal.

Análisis microbiológico de muestras de heces.

4.3. Mecanismos patogénicos de agentes que causan infecciones del

tracto gastrointestinal

4.3.1. Enfermedades gastrointestinales asociadas con

microorganismos productores de toxinas

4.3.2. Enfermedades gastrointestinales asociadas con

microorganismos invasores

5. Toma de muestras

6. Transporte de muestras al laboratorio

7. Detección directa en heces de agentes de gastroenteritis

8. Cultivo de materia fecal


- Esófago, estómago, intestino delgado (ID)

(duodeno, yeyuno, íleon), intestino grueso

(IG) (ciego, colon) y ano

- Mucosa: capa que tapiza TGI incluyendo

células y secreciones adyacentes

- Células epiteliales diferentes según - Células epiteliales diferentes según

segmento:

- Microvellosidades (ID)

- Mucus (IG)

- Incorporación de líquidos y secreciones (8L/día)

- Absorción de sustancias (epitelio intestinal)

- TGI de adulto sano recibe

hasta 8 litros líquido/día, por

ingestión y por secreción

glandular (salivares,

páncreas, vesícula biliar y

estómago)

- La mayor parte de este


- La mayor parte de este

líquido debe ser reabsorbida

- Cualquier alteración en el

flujo normal o en la

reabsorción del líquido

afecta profundamente al

hospedador


- Neonatos colonizados por microbiota epitelial normal en las primeras horas

- Posteriormente, al deglutir más bacterias, varía microbiota

- Microbiota de IG se establece relativamente pronto


- Acidez de estómago impide colonización

(excepción Helicobacter pylori)

- En primer tramo de ID microbiota escasa (10 –

103 bacterias/mL) (principalmente, lactobacilos,

estreptococos y levaduras)

- Aumenta a 106 – 107 bacterias/mL en el íleon - Aumenta a 106 – 107 bacterias/mL en el íleon

distal (aparecen enterobacterias y Bacteroides)

- En IG (adultos) predominan especies anaerobias

(Bacteroides, Clostridium, Peptostreptococcus,

Bifidobacterium, etc.) que superan 1.000 a 1 a

aerobias y facultativas (E. coli, otras

enterobacterias, enterococos y estreptococos,

principalmente)

- Bacterias 80% peso seco heces persona sana

(1011 – 1012 bacterias/gramo)

3. Afecciones del tracto gastrointestinal

Gastroenteritis

- Náuseas, vómitos, diarreas de poca intensidad, dolor abdominal

Diarrea

- Heces líquidas, afectación del intestino delgado, pérdida abundante de - Heces líquidas, afectación del intestino delgado, pérdida abundante de

líquidos

Disentería

-Afectación del intestino grueso, inflamación, heces líquidas con sangre

y mucosidad, dolor abdominal

Enterocolitis

- Inflamación de la mucosa intestinal (ID e IG)

4. Patología de las infecciones del

tracto gastrointestinal

4.1. Mecanismos inespecíficos de defensa del hospedador: Para causar

infección del TGI sobrepasar defensas del hospedador

Acidez del estómago

Peristaltismo

MocoMoco

IgA secretora

Presencia de eosinófilos

-Microbiota normal participa como mecanismo de defensa

Síndrome de colitis seudomembranosa (colitis asociada a los

antibióticos)

- Tratamiento prolongado con antimicrobianos

- C. difficile, presente en número escaso y controlado por microbiota

4.2. Participación de la microbiota normal en la

defensa del hospedador

- C. difficile, presente en número escaso y controlado por microbiota

normal, es resistente natural a muchos antibióticos

- Cuando se reduce microbiota, Clostridium prolifera y sintetiza toxinas

(enterotoxina y citotoxina)

- Provoca diarrea moderada que remite tras suspender tratamiento

- Existen, generalmente, varios mecanismos para causar infección:

a) Producción de toxinas que afectan a la secreción de líquidos, las

funciones celulares o las funciones neurológicas

b) Invasión del epitelio de la mucosa, provocando o no la

destrucción celular

4.3. Mecanismos patogénicos de agentes que causan

infecciones del tracto gastrointestinal

destrucción celular

c) Invasión de la mucosa y enfermedad sistémica

- Virus (rotavirus, hepatitis A, B, C, Norwalk)

- Protozoos (Entamoeba histolytica, Giardia lamblia)

- Parásitos (Strongyloides, Anisakis, Taenia)

- Cantidad de heces: 5 mL (líquidas), volumen

equivalente a una nuez (sólidas)

- Envase de plástico (con cuchara)

- Las muestras sospechosas de contener sigelas

5. Toma de muestras

- Las muestras sospechosas de contener sigelas

(muy delicadas), si es posible, deben sembrarse al

lado de la cama del paciente

5. Toma de muestras

- Si no se dispone de heces, pueden sustituirse por hisopado rectal

(no válido para detectar parásitos o antígenos virales, pero sí para

virus)

- Si no se aísla un agente en el primer cultivo deben enviarse dos

muestras adicionales en días siguientes

- Otras tomas de muestra menos frecuentes son aspirado duodenal

y proctoscopia

- Como normal general máximo 2h a temperatura ambiente

-Muestra no procesada en dos horas: colocar en medio de transporte

(Cary-Blair); mantener a temperatura ambiente, no refrigerar

- Si se sospecha presencia de Campylobacter: colocar inmediatamente

hisopo en medio de transporte Cary-Blair (evitar desecación)


hisopo en medio de transporte Cary-Blair (evitar desecación)

-Muestras para detectar citotoxina de C. difficile: deben congelarse

(–70ºC ó –20ºC) hasta procesamiento (pueden ser descongeladas,

centrifugadas y filtradas y el filtrado nuevamente congelado)

-Muestras para cultivo de virus no procesada en dos horas: refrigerar

- Hisopo rectal para cultivo de virus: colocar en medio Hansk


- Preparaciones en fresco: detectar parásitos

-Microscopio de contraste de fases o campo oscuro: morfología y

movilidad de Campylobacter y Vibrio

- La presencia de leucocitos indica existencia de proceso inflamatorio

(relacionado con microorganismos de carácter invasivo)

7. Detección directa en heces de agentes de

gastroenteritis

(relacionado con microorganismos de carácter invasivo)

- Tinción de Gram:

- Neutrófilos PMN y acúmulos de cocos Gram positivos: posible infección por

estafilococos

- Bacilos Gram negativos delgados y curvos: posible infección por Campylobacter

- Bacilos Gram positivos grandes y delgados con paredes paralelas: presencia de

C. difficile

- Enzimoinmunoanálisis útil para detectar virus (rotavirus) y otros

patógenos (E. coli)

- Sondas genéticas disponibles para varios patógenos (Salmonella,

Shigella, Yersinia, E. coli)

7.1. Pruebas previas al cultivo

- Rutinariamente: investigar presencia de Campylobacter, Salmonella y

Shigella

- Buscar Yersinia enterocolitica en áreas con incidencia elevada

- Cuando se solicite: búsqueda de vibrios, C. difficile y micobacterias


Rutinariamente sembrar:

- agar sangre (permite crecimiento de levaduras,

estafilococos, enterococos y bacilos Gram negativos)

- medio moderadamente selectivo (MacConkey o EMB)

- medio selectivo y diferencial (agar entérico de

Hektoen, agar xilosa-lisina-desoxicolato XLD)


Hektoen, agar xilosa-lisina-desoxicolato XLD)

- medio muy selectivo (depende del coste) (agar SS,

agar verde-brillante, agar sulfito de bismuto)

Se pueden utilizar caldos de enriquecimiento para aumentar

probabilidad de detección de Salmonella, Shigella (caldo GN,

caldo selenito F, caldo tetrationato)

Caldo selenito

Salmonella en agar Hektoen Salmonella en agar Verde Brillante


- Para detectar Campylobacter: agar Campy con sangre, agar Skirrow

(vancomicina, trimetoprim, anfotericina B, polimixina B y sangre de

oveja)

- Cultivar en microaerofilia y 42ºC

-Se puede aumentar la recuperación de Campylobacter utilizando un caldo

de enriquecimiento (caldo tioglicolato Campy)


Agar Campy con sangre

- Para detectar bacterias Gram positivas: agar Base Columbia con

colistina y ácido nalidíxico (CNA) (Columbia-CNA)

- Para detectar Vibrio cholerae:

- Prueba de la oxidasa sobre agar sangre (positiva)


- Prueba de la oxidasa sobre agar sangre (positiva)

- Agar TCBS (tiosulfato-citrato-sales biliares-sacarosa)

Vibrio cholerae en Agar TCBS

- Para detectar Yersinia enterocolitica:

agar CIN (cefsulodina, irgasán (3,3´,4´,5-

tetraclorosalicilanilida) y novobiocina)


Agar CCF-Para detectar Clostridium difficile: agar

CCF (cicloserina, cefoxitina, huevo,

fructosa). También medio CCYE.

- La citotoxina de C. difficile se detecta

por el efecto citopático en cultivos

celulares (Vero, Hela, etc.)

Agar CIN

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