Upload
alma
View
40
Download
0
Embed Size (px)
DESCRIPTION
FLUOREK JAKO CZYNNIK PROZAPALNY I OGRANICZAJĄCY BIODOSTĘPNOŚĆ ATP W KOMÓRKACH MAKROFAGÓW Krzysztof Woźniak Studenckie Koło Naukowe przy Samodzielnej Pracowni Biochemii i Chemii Medycznej, Wydział Nauk o Zdrowiu. SĄ JEDNYM Z NIEBEZPIECZNIEJSZYCH ZAGROŻEŃ PRZEMYSŁOWYCH - PowerPoint PPT Presentation
Citation preview
FLUOREK JAKO CZYNNIK PROZAPALNY I FLUOREK JAKO CZYNNIK PROZAPALNY I
OGRANICZAJĄCY BIODOSTĘPNOŚĆ ATP W OGRANICZAJĄCY BIODOSTĘPNOŚĆ ATP W
KOMÓRKACH MAKROFAGÓWKOMÓRKACH MAKROFAGÓW
Krzysztof Woźniak
Studenckie Koło Naukowe przy Samodzielnej Pracowni Biochemii i Chemii Medycznej, Wydział Nauk o Zdrowiu
• SĄ JEDNYM Z NIEBEZPIECZNIEJSZYCH ZAGROŻEŃ PRZEMYSŁOWYCH
• ZWIĄZKI FLUORU WYSTĘPUJĄ W WODZIE, POWIETRZU I ŻYWNOŚCI
•ZATRZYMYWANE W TKANKACH TWARDYCH MOGĄ BYĆ Z NICH STOPNIOWO UWALNIANE
• DŁUGOTRWAŁA EKSPOZYCJA NA FLUOREK STYMULUJE STRES OKSYDACYJNY
• STRES OKSYDACYJNY JEST STYMULATOREM PROCESU MIAŻDŻYCOWEGO
• W POWSTAWANIU BLASZKI MIAŻDŻYCOWEJ UCZESTNICZĄ MAKROFAGI
Uproszczony schemat powstawania miażdżycy
LDL Ox-LDL
Monocyt
Makrofag
Komórka piankowata
ROSROS
(Reaktywne formy tlenu)(Reaktywne formy tlenu)ROS ROS - - Reactive Oxygen SpeciesReactive Oxygen Species
Receptor LDL
ReceptorZmiatający CD36
• GŁÓWNYM MIEJSCEM POWSTAWANIA REAKTYWNYCH FORM TLENU (ROS) W MAKROFAGACH SĄ MITOCHONDRIALNE ENZYMY ŁAŃCUCHA ODDECHOWEGO
• ŹRÓDŁEM ROS W MAKROFAGACH SĄ TAKŻE ENZYMY AKTYWOWANE PODCZAS RÓŻNICOWANIA MONOCYTÓW W MAKROFAGI (LIPOKSYGENZY, CYKLOOKSYGENAZY, OKSYDOREDUKTAZA NADP)
Mając na uwadze, że zwiększona synteza ROS w makrofagach jest czynnikiem ryzyka rozwoju procesu miażdżycowego za cel pracy przyjęto próbę oceny wpływu fluorków na:
• WEWNĄTRZKOMÓRKOWĄ SYNTEZĘ ROS
• AKTYWNOŚĆ ENZYMÓW ŁAŃCUCHA ODDECHOWEGO
• SYNTEZĘ ATP
• BADANIA BYŁY PRZEPROWADZONE NA MAKROFAGACH UZYSKANYCH Z LINII KOMÓREK MONOCYTARNYCH THP-1
• MAKROFAGI HODOWANO Z ROZTWORAMI FLUORKÓW O STĘŻENIU 1,3 i 10 μΜ
• STRES OKSYDACYJNY OZNACZANO POPRZEZ POMIAR WEWNĄTRZKOMÓRKOWEGO UTLENIANIA DCFH-DA PRZY UŻYCIU CYTOMETRU PRZEPŁYWOWEGO
• SYNTEZĘ ATP OZNACZANO PRZY UŻYCIU KITU I CZYTNIKA PŁYTEK ELIZA
1. Inkubacja makrofagów z roztworami fluorków spowodowała istotne obniżenie ilości ATP w komórkach wraz ze wzrostem stężenia dodanego roztworu fluorku,
Ilość syntetyzowanego ATP
0
100
200
300
400
500
600
700
800
900
% fl
uore
scen
cji
K neg H2O F 1μM F 3μM F 10μM
44%44%
96%96%92%92%
- Różnice w odniesieniu do kontroli pozytywnej.
2. W tym samym czasie rosła produkcja wolnych rodników tlenowych (ROS) wraz ze wzrostem stężenia dodanego roztworu fluorku
Ilość syntetyzowanych ROS
0
50
100
150
200
250
300
350
% f
luor
esce
ncji
K neg H2O F 1μM F 3μM F 10μM
P< 0,05
P< 0,05
3. Dodanie do hodowli inhibitorów łańcucha oddechowego spowodowało istotne, ale nie całkowite obniżenie ilości syntetyzowanych ROS
Ilość syntetyzowanego ROS przy dodaniu
inhibitorów łańcucha oddechowego
0
50
100
150
200
250
300
350
% f
luor
esce
ncji
K neg H2O F 1μM F 3μM F 10μM
93%93%92%92% 94%94%94%94%94%94%
- Różnice w odniesieniu do syntezy ROS bez inhibitorów
4. Dodanie do hodowli apocyniny (inhibitora oksydoreduktazy NADH) spowodowało nieznaczne obniżenie syntezy ROS w makrofagach.
0
50
100
150
200
250
300
350
% f
luor
esce
ncji
K neg H2O F 1μM F 3μM F 10μM
Ilość syntetyzowanego ROS
przy dodaniu apocyniny 3%3%
25%25%5%5%
25%25%29%29%
- Różnice w odniesieniu do syntezy ROS bez inhibitorów
• FLUOREK SODU DODANY DO MAKROFAGÓW PRAWDOPODOBNIE STYMULUJE STRES OKSYDACYJNY
• OBJAWIA SIĘ TO WZROSTEM SYNTEZY ROS ORAZ OBNIŻENIEM ILOŚCI SYNTETYZOWANEGO ATP
• PRAWDOPODOBNIE DZIAŁANIE FLUORKU POLEGA NA ROZPRZĘGANIU ŁAŃCUCHA ODDECHOWEGO
• ZASTOSOWANIE APOCYNINY POTWIERDZIŁO UDZIAŁ KOMPLEKSU I ŁAŃCUCHA ODDECHOWEGO W SYNTEZIE ROS
• WZRASTAJĄCE STĘŻENIE FLUORKU BYŁO ISTOTNIE SKORELOWANE ZE WZROSTEM SYNTEZY ROS ORAZ ZE SPADKIEM STĘŻENIA ATP