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Los antibiticos y su guerra contra enterobacterias de
los alimentos.
RESUMEN
Esta investigacin se divide en dos partes; la primera consisti
en el
aislamiento de coliformes fecales encontradas en los alimentos,
y la segunda
tuvo como objetivo probar la resistencia de los coliformes a
algunos antibiticos
para gram negativos.
Para llevar a cabo la primera etapa se realizaron tres muestreos
de cuatro
alimentos en los que se elaboraron pruebas de aislamiento,
primero de
coliformes totales, despus de coliformes fecales y
posteriormente, de stos se
obtuvieron 10 cepas de la bacteria E. coli y 4 cepas de
Klebsiella.
En la segunda etapa, de las cepas E. coli y Klebsiella
obtenidas, se realizaron
pruebas de resistencia a antibiticos con un multidisco de 12
gram negativos.
El 100% de las cepas presentaron resistencia a la ampicilina y a
la cefalotina y
en menor cantidad a otros antibiticos. A las cepas resistentes
se les aplic la
prueba de resistencia con diferentes concentraciones (50, 10,
150, 250 y 500
g) de ampicilina, obteniendo nuevamente resistencia total por
parte de E. coli;
sin embargo slo una cepa de Klibsiella present resistencia a
dos
concentraciones (250 y 500 g).
Esta resistencia se debe a distintos factores como son: 1) el
uso indiscriminado
de antibiticos, 2) las aguas contaminadas por los desechos de
animales
engordados con antibiticos, dichas aguas son utilizadas para
regar las
hortalizas de las cuales provienen los alimentos vendidos a las
afueras de
Colegio de Ciencias y Humanidades Plantel Naucalpan.
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4. INTRODUCCIN
4.1. Marco terico.
4.1.1. Bacterias Gram Negativas
Los tipos bacterianos se dividen en Gram positivas (cocos) y
Gram negativas
(bacilos). Las bacterias Gram negativas son aquellas que no se
tien de azul
oscuro o violeta por la tincin de Gram, pero s lo hacen de un
color rosado
tenue, por lo que, se denominan Gram negativas. Esto es debido a
que, en
medio de la membrana se localiza un espacio llamado periplsmico,
relleno de
una sustancia denominada periplasma, la cual contiene enzimas
importantes
para la nutricin, que es donde esretenida la safranina, que le
da el
caracterstico color
rosado,(http://es.wikipedia.org/wiki/Bacteria_Gram_negativa,
2014).
4.1.2. Coliformes Totales
La denominacin genrica coliformes designa a un grupo de
especies
bacterianas que tienen ciertas caractersticas bioqumicas en
comn. Las
bacterias de este gnero se encuentran principalmente en el
intestino de los
humanos y de los animales de sangre caliente, es decir,
homeotermos, pero
tambin estn ampliamente distribuidas en la naturaleza,
existiendo muchos
coliformes de vida libre, especialmente en suelos, semillas y
vegetales (Merino
y Lssch,2014; http://es.wikipedia.org/wiki/Coliforme, 2013).
Como mencionamos anteriormente, debido a que una gran cantidad
de
coliformes que se encuentran en el ambiente son de origen fecal;
producto de
la contaminacin por heces fecales de humanos y de animales, por
tanto son
indicadoras del grado de contaminacin del agua y los alimentos.
(Merino y
Lssch,2014; http://es.wikipedia.org/wiki/Coliforme, 2013).
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Tabla 1.Clasificacin cientfica de las Coliformes
Reino: Bacteria
Phyllum: Proteobacteria
Clase: Gamma Proteobacteria
Orden: Enterobacteriales
Familia: Enterobacteriaceae
El grupo coliforme est formado por los siguientes
gneros ms representativos:
Escherichia
Klebsiella
Enterobacter
Citrobacter
Nota: No todos los autores incluyen al gnero
Citrobacter dentro del grupo coliforme.
es.wikipedia.org/wiki/Coliforme
(2013); Gal, 2010;Merino y
Lssch, 2014.
4.1.3. Enterobacterias
Las enterobacterias forman parte de la familia
Enterobacteriaceae, bacterias Gram negativas que
contiene ms de 30 gneros (tabla 1) y ms de
100 especies. Los miembros de esta familia
presentan forma baciliar, recta o curva, con una
anchura que no excede los 0,5 m de
anchocolonizan habitualmente las diferentes
mucosas, especialmente las del tracto
gastrointestinal y urinario, formando parte de la
microbiota, tanto de animales como del ser humano, por lo que
tambin se
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conocen como coliformes fecales, (Stanier, R. y col., 1992; Gal,
2010;
http://es.wikipedia.org/wiki/Enterobacteriaceae, 2013).
4.1.4. Coliformes fecales
Los coliformes fecales son un grupo de bacilos con una
estructura parecida a la
de una bacteria comn que se llama Escherichia coli, de ah su
nombre: en
forma de coli. Este grupo incluyen bacterias en forma de bacilo
cortos, gram
negativos, aerbicos o anaerbicos facultativos (viven en
presencia del
oxgeno), son oxidasa negativo y tienen la capacidad de fermentar
lactosa con
produccin de gas y cido lctico en 48 horas a una temperatura
de
35C+2C,y dependiendo de la presencia de flagelos pueden ser
mviles,
adems cuentan con la capacidad de producir toxinas. (Gal,
2010;Merino y
Lssch,2014).
La presencia de coliformes fecales es un indicador de
contaminacin
bacteriana del agua y los alimentos, ya que se encuentran en
gran nmero en
el tracto intestinal de humanos y animales, y permanecen por ms
tiempo en el
agua y los alimentos que las bacterias patgenas (bacterias que
causan
enfermedad) como Salmonella y Shigella, por lo que su presencia
indica que
posiblemente tambin se encuentren organismos patgenos.
Aproximadamente el 95% del grupo de los coliformes presentes en
heces
fecales, estn formados por Escherichia coli y ciertas especies
de Klebsiella
(Cabrera y colaboradores, 2007).
4.1.5.Klebsiella
Klebsiella es una bacteria gram-negativa en forma de varilla y
no mviles de la
familia Enterobacteriaceae.Esta se encuentra en la flora natural
de los seres
humanos y animales,pero cuando estn fuera de su rea del
intestino pueden
causar infecciones importantes en los seres humanos.
Entre todas las especies de Klebsiella, K. pneumoniae es una
especie
ampliamente estudiada. Esta se puede encapsular, es decir, forma
una capa de
polisacrido en la pared celular de la bacteria, adems de que
puede sintetizar
ATP (trifosfato de adenosina) por respiracin aerbica, pero
tambin puede
obtenerlo a partir de la fermentacin anaerbica. Por lo tanto, es
un anaerobio
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facultativo, puede ser tanto aerbica como anaerbica, dependiendo
de la
situacin.
(http://microbiologia2a.blogspot.mx/2013/04/klebsiella-
pneumoniae.htmlMICROBIOOLOGIA Y PARACITOLOGIA, 2014).
4.1.6.Escherichia coli
La Escherichia coli o tambin llamada E. coli, es el principal
organismoque se
encuentra en el intestino del ser humano y de los animales, por
lo que, solo E.
coli tienen un origen especficamente fecal, pues estn siempre
presentes en
grandes cantidades en las heces de los seres vivos de sangre
caliente y rara
vez se encuentran en agua o suelo que no haya sufrido algn tipo
de
contaminacin fecal (Goez, Vzquez y Pea,
1999;http://es.wikipedia.org/?title=Escherichia_coli, 2014)
La E. coli se transmite a los seres humanos por medio del
consumo de
productos de carne picada cruda o poco cocida y alimentos
contaminados con
heces fecales. En condiciones normales no causan ningn tipo de
dao,
adems de ser necesaria para el funcionamiento correcto del
proceso
digestivo, debido a que, por ejemplo, aportan vitaminas del
complejo B para el
ser humano. Sin embargo, algunas cepas por intercambio de
material gentico,
han adquirido la capacidad de causar infecciones y provocar
diarreas(Goez,
Vzquez y Pea, 1999;Armora. y Gmes,2012).
4.1.7. Resistencia a los antibiticos en coliformes fecales
El concepto de resistencia, indica que un medicamento disminuye
su actividad
o efectividad en un individuo tras su uso prolongado. Cada vez
que se utiliza un
antibitico aumenta la probabilidad de que cualquier individuo
que no haya
tomado este antibitico, en el futuro pueda entrar en contacto
con alguna
bacteria que presente resistencia
El proceso de seleccin natural que se presenta en bacterias, y
especialmente
en Enterobacterias, es debido a que, estas al contener varios
genes de
resistencia llamados plsmidos, provocan que al usar cualquier
tipo de
antibitico, estos no puedan eliminar a los
organismos(Trptico-Veterinario,
2007).
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El problema de la contaminacin del agua y de los alimentos por
parte de las
coliformes fecales, es su capacidad para desarrollar rpidamente
resistencia a
los antibiticos. Se entiende por resistencia, el mecanismo
mediante el cual la
bacteria puede disminuir la accin de los agentes
antimicrobianos. Dicha
resistencia puede estar mediada por plsmidos o ser de origen
cromosmico
(Fernndez y colaboradores, 2003).
Figura 1. El material gentico bacteriano se encuentra en una
regin nucleoide, o
bien en segmentos cortos, que mutan con facilidad y altamente
replicativos llamados
plsmidos. Hay segmentos de resistencia a los antibiticos que se
conocen como R
Ciertas cepas de bacterias de una misma especie son resistentes
a algunas
familias de antibiticos, esta resistencia les permite tener
ventajas competitivas
con respecto a otras cepas,pudiendo sobrevivir en caso que se
emplee un
antibitico. La aparicin de la resistencia en una bacteria como
E. coli se
produce a travs de mutaciones (cambios en la secuencia de bases
de
cromosoma) y por la trasmisin de material gentico
extracromosmico
procedente de otras bacterias (Gal, 2010).
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En el primer caso, la resistencia se trasmite de forma vertical
de generacin en
generacin (reproduccin asexual, biparticin). En el segundo, la
trasferencia
de genes se realiza horizontalmente a travs de plsmidos
(reproduccin
parasexual. Ver figura No. 2). Los plsmidos son unidades de
ADN
extracromosmico que se
autorreplican y que transportan su
propia estructura de replicacin,los
plsmidos R tienen un papel
fundamental en la resistencia
antibitica de las enterobacterias
(Gal, 2010).esto ltimo no solo
permite la trasmisin a otras
generaciones, sino tambin a otras
especies bacterianas.
De esta forma una bacteria puede
adquirir la resistencia a uno o varios
antibiticos sin necesidad de haber
estado en contacto con estos (Fernndez y colaboradores,
2003;Gal, 2010).
4.2. Objetivo de la investigacin
4.2.1. General
Probar el grado de resistencia de E. coli y Klebsiellaaisladas
en los alimentos,a12
antibiticos para Gram negativo.
4.2.2. Particulares
Determinar la presencia de Coliformes fecales en muestra de
alimentos que se
expenden en la va pblica: sndwich, torta, cocktel y ensalada
Aislar E. coli y Klebsiella en cuatro muestras de alimentos:
sndwich, torta,
cocktel y ensalada.
Realizar prueba de resistencia y sensibilidad a las cepas de E.
coli y Klebsiella a
12 antibiticos, con base al dimetro del halo de inhibicin.
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Aplicar cinco distintas concentraciones de ampicilina a las
cepas de E. coli y
Klebsiella que presentaron resistencia a los antibiticos.
4.3. Problema
En la actualidad algunos antibiticos son utilizados de manera
indiscriminada
por dos causas principales: la automedicacin para combatir una
infeccin de
tipo gastrointestinal, y el suministro de estos medicamentos
para la engorda de
animales en las granjas. Los antibiticos no son retenidos por
mucho tiempo en
el cuerpo de personas y animales, sino que son desechados en las
heces
fecales, y estas a su vez, vertidas a las aguas residuales las
cuales sirven para
riego en los cultivos de frutas y hortalizas.
Debemos tomar en cuenta que la mitad del contenido de los
excrementos
contiene coliformes fecales, bacterias del coln que al estar en
contacto con los
antibiticos presentes en el ambiente, desarrollarn resistencia a
estos.
La problemtica radica en que las frutas y hortalizas regadas con
estas aguas
residuales y que contengan coliformes resistentes lleguen a los
mercados
locales, en nuestro caso, frutas y hortalizas compradas en el
mercado o en el
supermercado, con las cuales se preparan los alimentos que se
venden en los
puestos a las afueras de CCH-Naucalpan, y que estos contengan
coliformes
resistentes. Que si se ingieren en ciertas cantidades por los
alumnos pueden
provocar una infeccin, que al ser tratada con antibiticos, prdra
ser ineficaz o
muy lento, debido a la resistencia que presentan frente a
ciertos antibiticos,
por lo que, cantidad que antes se utilizaba de este medicamento,
no surtira
ningn efecto contra estas bacterias resistentes, y se requerirn
de mayores
concentraciones para eliminarlas y el tiempo para matarlas sera
mayor.
Por lo que es de nuestro inters aislar coliformes fecales
antibiticos en
alimentos que se consumen a las afueras de Colegio de Ciencias
y
Humanidades Plantel Naucalpan y determinar su resistencia frente
a ciertos
antibiticos.
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5. DESARROLLO
El material que se utiliz para el proyecto de investigacin fue
el siguiente:
Cristalera. Equipo Material Medios de cultivo.
-Agitadores
-Cajas Petri
-Campanas Durham
-Matraces
-Morteros
-Pipeta
-Probeta
-Tubos de ensaye
-Autoclave
-Basculas
-Incubadora
-Parrilla
-Estufa
-Asas
bacteriolgicas
-Bolsas
-Cubre bocas
-Cuchillo
-Esptulas
-Encendedor
-Hisopos
-Guantes
-Gradillas
-Mecheros
-Pinzas
-Tapones
-Agua Peptonada
-Caldo Lauril
-Caldo Bilis Verde Brillante
-Agar EMB
-Agar Mac Conkey
-Agar Muller Hilton
-Agar Nutritivo
La preparacin y las diluciones de muestras de alimento para su
anlisis
microbiolgico se realizaron de acuerdo a la Norma Oficial
Mexicana. NOM-
110-SSA1-1994. Diario Oficial de la Federacin DV 11,16 de
Octubre de 1995.
la cual consisti:
5.1. Obtencin de los diferentes tipos de alimentos.
La obtencin de las muestras de alimentos consisti en cuatro
productos los
cuales fueron: torta, sndwich, cctel y ensalada. Estos productos
se
compraron en los diversos puestos callejeros a las afueras del
CCH Naucalpan.
Los alimentos se guardaron en bolsas de plstico para evitar la
contaminacin
y para su traslado al SILADIN.
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5.2. Macerado de los alimentos y obtencin de las diluciones.
Ya en el laboratorio, se tom una muestra de 10 g de cada
alimento, tratando
de obtener la mayor cantidad de ingredientes
contenidos en los mismos. La muestra fue
colocada en un mortero y posteriormente
macerada a modo de que quedara lo ms
fragmentada posible.
El macerado se coloc en un matraz con 90 ml de agua peptonada,
obteniendo
la primera dilucin 1x10-1. De esta primera
dilucin se tom 1 ml y se deposit en un tubo
de ensaye que contena 10 ml de agua
peptonada para obtener la segunda dilucin
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1x10-2, de la cual se tom 1 ml y se agreg a otro tubo de ensaye
que
contena 10 ml de agua peptonada, quedando as la tercera y ltima
dilucin
1x10-3. Obtenidas las tres diluciones; 1x10-1, 1x10-2y
1x10-3,Estas fueron
introducidas a la incubadora por 48 horas a 37C.
5.3. Prueba presuntiva: Coliformes totales.
Tanto para la prueba presuntiva como para la prueba
confirmatoria la
investigacin tomo como base la Norma Oficial Mexicana.
NOM-112-SSA1-
1994. Determinacin de bacterias coliformes. Tcnica del nmero
ms
probable (NMP). Diario Oficial de la Federacin DV 14,19 de
Octubre de 1995.
La cual consisti en lo siguiente:
Despus del tiempo transcurrido, de cada dilucin se tom 1 ml
de muestra y se coloc en 10 ml de caldo Lauril que contenan
una campanilla Durham, la cual sirvi para atrapar los gases
que
se forman a partir de la actividad microbiana, siendo el
principal
gas H2S. Por cada dilucin se realizaron dos repeticiones,
obteniendo un total de 24 tubos, que se colocaron a incubar
por
24 horas a 37C.
Los tubos de caldo Lauril que presentaron formacin de gas (H2S),
dentro de la
campanilla, nos indicaron que la muestra era positiva, y por lo
tanto presentaba
coliformes totales.
5.4. Prueba confirmatoria: Coliformes fecales.
De los tubos que dieron positivo, se tomarontres asadas y se
depositaron en
un tubo ensaye que contena caldo Bilis Verde Brillante y una
campanilla de
Durham. Los tubos de ensaye fueron colocados en la incubadora
por 24 horas
a 37C. Aquellos tubos en los que se observaron cambios de color,
turbiedad y
formacin de gas H2S nos indicaron la presencia de coliformes
fecales.
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5.5. Aislamiento de enterobacterias: Klibsiellay E. coli.
Posteriormente,de las muestras positivas de coliformes fecales,
se tomaron dos
asadas y se sembraron por el mtodo de estriado, para el
aislamiento de
colonias en los agares EMB y Mac Conkey a 37C por 24 horas.
(Bioxon,
1996)
Transcurrido el tiempo, y teniendo el desarrollo colonial, se
procedi a su
identificacin por medio de las caractersticas morfolgicas y de
color que
presentaron las colonias aisladas (Ver tabla1 y 2).
Tabla 1. Caractersticas coloniales presentadas por Escherichia
coliy Klebsiella en
medio EMB (Eosin Metil Blue).
MICROORGANISMOS CARACTERISTICAS DE LAS COLONIAS
Escherichiacol Elevadas o ligeramente convexas. De 2 a 3 mm
de
dimetro. Presentando a la luz transmitida un centro azul-
negro, a la luz reflejada con brillo verde metlico. Algunas
cepas no muestran brillo metlico. Poca tendencia de
desarrollo confluente.
Klebsiellasp Colonias grandes de 4 a 6 mm de dimetro, elevadas
y
mucoides con tendencia a unirse. Usualmente no presentan
brillo metlico. A la luz transmitida muestran un centro
grisceo caf y bordes claros.
Tabla 2. Caractersticas coloniales presentadas por Escherichia
coli y Klebsiella en
medio Mac Conkey.
MICROORGANISMO CARACTERISTICAS DE LAS COLONIAS
Escherichia coli De rojas a rosadas. No son mucoides. Pueden
rodearse de
un precipitado opaco de sales biliares.
Klebsiellasp Grandes, rosadas, mucoides.
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Una vez que se identificaron las colonias de E. coli y
Klebsiella sp, se
preservaron en Agar Nutritivo para su posterior prueba de
resistencia a 12
antibiticos para bacterias Gram-negativas
5.6. Pruebas de resistencia a 12 antibioticos para Gram-
negativas
A las cepas de E. coli y Klibsiella sp que se preservaron en
agar nutritivo se les
aplico un antibiograma (multidiscos) para determinar su
resistencia o
sensibilidad a 12 antibiticos para bacterias Gram-negativas (ver
tabla No 3).
Tabla 3. Concentracin mnima inhibitoria en microgramos (g), de
12 antibiticos
que se aplic a las cepas aisladas de E. coli y Klebsiella
sp.
Antibitico Concentracin
g
Antibitico Concentracin
g
Amikacina (AK) 30 Gentamicina (GE) 10
Ampicilina (AM) 10 Netilmicina (NET) 30
Carbenicilina (CB) 100 Nitrofurantona (NF) 300
Cefalotina (CF) 30 Pefloxacina (PEF) 5
Cefotaxima (CTX) 30 Trimetoprim- (SXT)
Sulfametoxazol
25
Ceftriaxona (CROM) 30 Cloranfenicol (CL) 30
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6. RESULTADOS
Los resultados obtenidos fueron los siguientes.
6.3. Prueba presuntiva: Coliformes totales.
Al pasar 48 horas a una
temperatura 37 C se observ un
crecimiento bacteriano que nos
indica la presencia de coliformes
totales, el cual se pudo constatar
por el enturbiamiento de las tres
diluciones y formacin de una
burbuja de gas (H2S) producida por
la fermentacin bacteriana en caldo lauril.
De las muestras positivas se determin a continuacin las
coliformes fecales.
6.4. Prueba confirmatoria: Coliformes fecales.
A las coliformes totales se les
aplic pruebas con caldo Verde
Bilis Brillante para la confirmacin
de la presencia de coliformes
fecales a una temperatura de 37
por 48 horas.
Despus de este tiempo, aquellos
tubos que presentaron formacin
de gas en las campanas Durham, nos confirmaron la presencia de
coliformes
fecales en los alimentos.
Los resultados obtenidos de las pruebas de coliformes totales y
los coliformes
fecales, se vaciaron en una tabla para su fcil comprensin (ver
tabla 4).
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Tabla 4. de resultados que muestra los tubos positivos y
negativos de coliformes
totales y coliformes fecales.
Tubos positivos. Tubos negativos.
Caldo Lauril 26 3
Caldo Bilis Verde
Brillante
23 2
De acuerdo con los resultados que se muestran en la tabla de los
tres
muestreos, se puede observar que en Caldo Lauril 26 tubos fueron
positivos
para coliformes totales, y 3 tubos fueron negativos para estas
bacterias(Ver
tabla 4).
Con respecto al Caldo Bilis Verde Brillante, tenemos 23 tubos
dieron positivos a
coliformes fecales, mientras que 2 tubos no presentaron
coliformes fecales (Ver
tabla 4).
6.5. Aislamiento de enterobacterias: Klibsiella y E. coli.
A las pruebas positivas de coliformes fecales se les coloc en
Agar EMB y Mac
Conkey, con el fin de aislar a E. coli y a Klebsiella sp, las
bacterias ms
representativas de las heces fecales.
De las 23 muestras que se colocaron en dichos Agares, 10 dieron
para E.coli y
solamente 4 para Klebsiella sp, en Agar EMB y Mac Conkey, como
lo podemos
ver en las imgenes siguientes.
Imgenes obtenidas de los medios de cultivo, donde se pueden
observar las
colonias de E.coli y Klibsiella sp, en Agar EMB y Mac Conkey
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6.6. Pruebas de resistencia a 12 antibioticos para Gram-
negativas
A continuacin a los aislamientos de E.coli y Klebsiella sp, se
les aplic
pruebas de resistencia a 12 antibiticos, siendo los resultados
presentados en
la tabla nmero 5.
Colonias de E.coli aisladas en Agar EMB,
con su caracterstico brillo verde brillante
Aislamiento por estriado de colonias de
E. coli en Agar EMB
Colonias de Klibsiella sp aisladas en Agar
EMB con en donde se puede observar el
color vino de las colonias.
Aislamiento por estriado de colonias de
Klebsiella en Agar Mac Conkey en donde
se observa su color rosado en este
medio
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Tabla 5.Rresultados que muestran los promedios de las medidas en
centmetros (cm)
de los halos de inhibicin a 12 antibiticos para
Gram-negativas
AK AM CB CF CTX CRO CL GE NET NF PEF SXT
E. coli 1.91 R 0.58 R 2.17 2.51 2.37 1.66 2.01 2.22 2.18
1.80
Klebsiellasp 2.24 R 1.44 R 2.16 2.42 2.10 2.08 2.14 2.12 2.56
3.14
En el caso de E.coli, esta present halos de sensibilidad mnimos
de 0,58cm de
dimetro, siendo el halo de inhibicin mediano de 1,55 cm de
dimetro,
mientras la sensibilidad ms alta present un halo de inhibicin de
2.51cm de
dimetro de sensibilidad, siendo en su totalidad las cepas
resistentes a la
ampicilina y cefalotina ver imgenes.
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18
En el caso de Klibsiella sp, el halo de inhibicin mnima fue de
1,44 cm de
dimetro, seguido de un dimetro de 2,29cm para un halo de tamao
mediano.
Por ltimo, el halo en el que se obtuvo mayor sensibilidad fue de
3.14cm de
dimetro. Encontrando con esto, que E. coli present menores
dimetros de
halos de inhibicin en comparacin con Klibsiella sp.
Con los resultados obtenidos de la resistencia que presentaron,
tanto E. coli y
Klibsiella sp, a la ampicilina, se procedi a preparar
concentraciones de sta,
para determinar hasta qu punto son resistentes a dicho
antibitico. Tomando
en consideracin que la concentracin mnima inhibitoria es de
10g
(microgramos) y la mxima concentracin que se suministra a las
personas es
de 500 miligramos. A continuacin se detallan las concentraciones
que se
prepararon: 10g, 50 g, 100g, 250g, 500g
Es importante resaltar que la ampicilina vena en tabletas de 500
miligramos, por
ello, para hacer las diluciones, se coloc y se macer en un
mortero con 10ml de
agua destilada, y posteriormente se realizaron las diluciones
para obtener stas
concentraciones, tomando en cuenta la frmula c2=v1xc1/v2.
Los resultados obtenidos de esta prueba, se tiene que las cepas
de E. coli fueron
resistentes a todas las concentraciones del antibitico
ampicilina, mientras que slo
una cepa de Klibsiella sp present sensibilidad a 250 y 500g de
ampicilina,
siendo las otras cepas resistentes a este antibitico. Como se
puede ver en la imagen
inferior y en la tabla nmero 6.
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Tabla 6. Resultados que muestran los promedios de las medidas
(cm) de los halos de
inhibicin en las concentraciones de ampicilina.
No. de Muestra y
Gnero
Concentracin de ampicilina en
g (microgramos)
Dimetro de los halos en
cm (centmetros)
35.Klebsiella 250 1.2
35 Klebsiella 500 2.4
7. ANLISIS E INTERPRETACIN DE RESULTADOS
En las cuatro muestras de alimentos; Cocktel, sndwich, torta y
ensalada, se
encontraron coliformes fecales, lo cual, como habamos hecho
referencia en el
marco terico y problema, puede deberse a que estas hortalizas se
regaron
con aguas residuales, por ejemplo, en una investigacin realizada
por Vega y
colaboradores (2005), se encontraron altos niveles de
contaminacin por
bacterias fecales en distintas hortalizas regadas con aguas
residuales en la
delegacin de Xochimilco. Estos niveles sobrepasan los lmites
permitidos para
cada tipo de hortaliza. En otro estudio que se llevo a cabo por
Cabrera y
colaboradores en el 2007, en la presa Manuel Avila Camacho, se
utiliz esta
agua para riego de los cultivos en el valle de Tecamachalco
importante sitio
productor de verduras que surten al mercado poblano. En esta se
encontr una
gran cantidad de residuos fecales humanos y animales,
detectndose
coliformes fecales, siendo la Escherichia sp, la bacteria
dominante de estas
aguas residuales, que son fuente potencial de una amplia
variedad de
enfermedades gastrointestinales bacterianas, que pueden llegar a
impactar en
la salud de la poblacin consumidora de estos productos agrcolas
si no son
desinfectados eficientemente.
Las coliformes fecales que ms se aislaron en las muestras de
alimento, fueron
Escherichia coli y en menor cantidad Klebsiella sp., lo que
indica, y volvemos a
-
20
reiterarlo, contaminacin por heces fecales. El por qu, E. coli
se encontr en
mayor cantidad en los aislamientos es debido a que esta bacteria
tienen un
origen especficamente fecal, est se encuentra siempre presentes
en grandes
cantidades en las heces de los seres vivos de sangre caliente, y
por lo tanto
tambin es la bacteria ms importante presente en el coln, tal
como lo
mencionan tambin Lpez (1999) y Lsch (2006), por lo que se
considera que
la deteccin de esta coliforme fecal constituye una informacin
suficiente como
para estimar la naturaleza fecal de dicha contaminacin.
De acuerdo con nuestra investigacin las cepas aisladas de
Klebsiella sp y de
E. coli al aplicarles la prueba de resistencia a 12 antibiticos.
Estas dos
bacterias presentaron en todas las cepas aisladas resistencia a
la ampicilina
(AM) y a la cefalotina (CF), y solo algunas cepas de estos
organismos
presentaron resistencia a carbenicilina y
Trimetoprim-Sulfametoxazol (SXT).
Esto posiblemente se debe de acuerdo a Leggett (2014), a que la
membrana
exterior de esta bacteria resiste los efectos de muchos tipos de
antibiticos ya
que es impermeable a stos. Esta caracterstica es dada por
plsmidos, que
como se menciono en el marco terico, son unidades de ADN
extracromosmico que tienen una serie de genes (30 genes) que
se
denominan R, y que tienen un papel fundamental en la resistencia
antibitica
(Gal, 2010).
Las cepas de E. coli que presentaron resistencia a los
antibiticos puede
deberse, como se haba mencionado anteriormente, a que se
usan
indiscriminadamente en tratamientos de personas, y para la
engorda de
animales de granja. As lo observ Merino y colaboradores (2006),
quienes
sealaron que las bacterias resistentes se dan en aquellos pases
donde hay
una excesiva prescripcin y/o uso indiscriminado de estos
antibiticos por parte
del personal del Sistema de Salud Pblica, o bien, de los
antibiticos
suministrados en la medicina veterinaria con fines variados.
(Lsch, L.S.,
Merino, L. A., - Alonso, J. M., 2006). Es importante resaltar
que en
investigaciones realizadas en los ltimos aos, se ha demostrado
la posible
relacin entre el consumo de antibiticos por animales y la
aparicin de
bacterias resistentes. El uso veterinario de antibiticos,
especialmente los
empleados como promotores de crecimiento y engorda animal,
podran ser los
-
21
causantes directos del incremento de casos de resistencia a los
antibiticos, tal
como lo menciona Cancho y colaboradores en el 2000.
En resumen, los desechos de personas y animales de granja, que
contienen
grandes concentraciones de antibiticos, van a parar al drenaje y
stos a su
vez llegarn a los ros y por ende, sern contaminados los lagos y
las presas,
es decir es proceso lineal, que se demuestra en los aislamientos
de coliformes
fecales que se realizaron en los alimentos que se comercializan
a las afueras
del Colegio.
Aunado a lo anterior, debe resaltarse que E. coli y Klebsiella
sp presentaron
cien por ciento de resistencia a la ampicilina y cefalotina a
las concentraciones
mnimas inhibitorias. Resultados similares se obtuvieron en el
estudio realizado
por Tzoc y colaboradores en el 2004, en donde un 72 % presento
resistencia a
Cefalotina. Sin embargo en estudios realizados por Nuez y
colaboradores,2012, se encontr que la mayor prevalencia de
resistencia est
dada por los coliformes frente a ampicilina (34%) y cefalotina
(17%).
Por otra parte, al aplicar slo diferentes concentraciones de
Ampicilina (10, 50,
100, 250 y 500 g) a las cepas aisladas de Klebsiella, se comprob
que
nicamente una cepa fue sensible a dos concentraciones de este
antibitico
(250 y 500 g), no encontrndose ninguna referencia sobre la
resistencia de
Klebsiella a la ampicilina, por lo tanto se puede suponer que
las frutas y
hortalizas que sirvieron para la preparacin de los alimentos que
se
muestrearon posiblemente estn contaminados por Klibsiellas
resistentes a la
ampicilina.
Se debe sealar que para las cepas de E. coli aisladas, se
obtuvieron
resultados de resistencia en un 100% en la concentracin mnima
inhibitoria de
ampicilina (10 g) y cefalotina (30g) como en el estudio
elaborado por Lsch,
L.S., Merino, L. A., - Alonso, J. M., en el 2006, en el cual se
evidenci que el
mayor porcentaje de resistencia a los antibiticos ensayados fue
E. coli, la cual
present un porcentaje de resistencia hacia ampicilina del 44,1%,
no
encontrando datos de comparacin con respecto a la
Cefalotina.
-
22
8. CONCLUSIONES
Podemos concluir que los alimentos adquiridos por los alumnos en
los puestos
ubicados a las afueras del CCH-Naucalpan, presentan un alto
grado de
contaminacin por coliformes fecales, siendo las principales
coliformes fecales,
E.coli y Klebsiella sp.
Estas cepas presentaron resistencia a dos antibiticos;
Ampicilina y Cefalotina.
Esta resistencia pudo ser desarrollada por el uso indiscriminado
de estos,
producto de la automedicacin y la engorda de animales para
consumo
humano; las heces fecales de humanos y animales que son
desechadas
contienen coliformes fecales resistentes, los cuales van a parar
a las aguas
residuales y estas servirn para el riego de hortalizas con las
que se preparan
alimentos que son comercializados a las afueras del colegio
De las coliformes fecales aisladas de los alimentos, solo E.coli
fue la que
presento una gran resistencia a la ampicilina, lo que nos indica
que esta
bacteria puede ser un peligro potencial para la poblacin
estudiantil del colegio.
Es as que el inadecuado uso de los antibiticos provoca que
continuamente
aparezcan cepas, las cuales requieren concentraciones cada vez
mayores del
antibitico o nuevos antibiticos ms potentes para ser
eliminadas.
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